一种通路克隆入门载体的构建方法

摘要

本发明涉及一种通路克隆入门载体的构建方法，包括引物设计、ICS1pro片段的扩增与纯化、pCR8片段的获得和pCR8‑ICS1pro质粒的构建。本发明利用通路克隆入门载体pCR8‑AtS5H来获得入门载体片段，而且该入门克隆可以保存和反复使用，因此实验过程中不需要购买昂贵的入门载体，同时该方法所用的其它试剂成本也非常低，从而大大降低了构建入门克隆的实验成本，并且非常省时，两天内即可完成入门克隆的构建和验证；本发明利用的一步SLIC技术是一种不依赖序列和连接的克隆方法，连接效率非常高，同时不受酶切位点限制，也不存在TA连接的非定向克隆问题，是一种非常值得推广的构建入门克隆的新方法。