转录因子DREBIA的克隆与Gateway克隆技术构建植物表达载体

摘要

转录因子DREBIA参与渗透胁迫信号的转导及功能基因表达调控,在植物抗渗透胁迫反应中起关键作用。本研究根据GenBank中登录的DREB1A基因的全长mRNA序列设计引物,克隆了拟南芥的转录因子DREB1A。根据Gateway克隆技术要求,设计含有attB接头的引物,利用高保真的Platinum pfx DNA聚合酶,通过PCR的方法在克隆基因的两端加上B序列。通过BP反应将包含有attB接头的PCR产物克隆到含有attP的donor载体上以产生Entry克隆,通过LR反应将已经重组入Entry载体的DREB1A基因,再克隆到pH2GW7双元载体,构建了DREB1A基因的植物表达载体pH2GW7-DREB1A。