胆碱类低共熔溶剂、制备方法和在提取金莲花黄酮碳苷中的应用

摘要

本发明公开了胆碱类低共熔溶剂、制备方法和在提取金莲花黄酮碳苷中的应用。本发明提供了一种胆碱类低共熔溶剂，表达式为[N(CH

说明书

技术领域

本发明属于化学医药领域，涉及低共熔溶剂的制备和应用，具体涉及胆碱类低共熔溶剂、制备方法和在提取金莲花黄酮碳苷中的应用。

背景技术

2003年，Abbott等首次发现了一种由季铵盐和酰胺化合物形成的物理化学性质优良的溶剂—低共熔溶剂(Novel solvent properties ofcholine chloride/ureamixtures,Chem.Commun.,2003:70-71)。这种溶剂无毒性，可生物降解，且合成过程原子利用率达100％，是一种新型的绿色溶剂。低共熔溶剂通常是由一定化学计量比的季铵盐和氢键给体(如酰胺、羧酸和多元醇等化合物)组合而成的低共熔混合物。

金莲花为毛茛科植物金莲花Trollius chinensis Bge.的干燥花。金莲花主要分布于河北、山西、内蒙古东部、辽宁和吉林西部，生长在海拔1000-2200米的疏林或山地草坡。金莲花具有清热解毒之功效，用于上呼吸道感染、咽炎、扁桃体炎等的治疗。药理学研究表明，荭草苷等黄酮碳苷类化合物是其主要活性成分。

现阶段，金莲花中黄酮碳苷类成分的提取主要依靠传统有机溶剂，如甲醇、乙醇、乙酸乙酯等。不可忽视的是，大量有毒溶剂的消耗会对环境造成不可逆转的破坏。因此，寻找可替代的绿色提取溶剂迫在眉睫。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种胆碱类低共熔溶剂、制备方法和在提取金莲花黄酮碳苷中的应用，以高效、选择性提取金莲花中三种重要的黄酮碳苷：荭草苷、荭草素-2″-O-β-L-半乳糖苷和牡荆苷。

本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：

一种表达式为[N(CH₃)₃CH₂CH₂OH]⁺[X·zY]^－的胆碱类低共熔溶剂，其中：X为卤素，Y为配位剂，z为配位剂的数目；X＝Br时，Y为ZnCl₂或SnCl₂；X＝Cl时，Y为AlCl₃。

优选地，z＝1。

一种上述胆碱类低共熔溶剂的制备方法：将溴化胆碱或氯化胆碱与ZnCl₂或SnCl₂或AlCl₃按照摩尔比例1:z混合，加热搅拌直至形成均一的透明液体。

优选地，加热搅拌的温度为70-90℃。

优选地，形成均一的透明液体后密封干燥保存。

上述胆碱类低共熔溶剂在选择性提取金莲花中黄酮碳苷方面的应用，所述黄酮碳苷为荭草苷、荭草素-2″-O-β-L-半乳糖苷和牡荆苷。

优选地，所述提取步骤包括：将金莲花干燥后粉碎，取金莲花粉末，加入适量所述胆碱类低共熔溶剂与水的混合溶液，进行提取，提取后离心或过滤，取上清或滤液，用有机溶剂稀释使低共熔溶剂析出，离心或过滤去除，将上清或滤液浓缩得富含荭草苷、荭草素-2″-O-β-L-半乳糖苷和牡荆苷的金莲花提取物。

优选地，胆碱类低共熔溶剂与水的体积比为2-4:1。

优选地，所述提取方法为超声提取。

优选地，所述有机溶剂为乙醇。

本发明优点：

本发明提供了一种胆碱类低共熔溶剂，表达式为[N(CH₃)₃CH₂CH₂OH]⁺[X·zY]^－，由溴化胆碱或氯化胆碱与ZnCl₂或SnCl₂或AlCl₃按照一定的摩尔比例混合制备而成，X＝Br时，Y为ZnCl₂或SnCl₂；X＝Cl时，Y为AlCl₃。本发明提供的胆碱类低共熔溶剂可以高效、选择性提取金莲花中三种重要的黄酮碳苷：荭草苷、荭草素-2″-O-β-L-半乳糖苷和牡荆苷，与传统的甲醇溶剂提取相比，不仅能够提高荭草苷、荭草素-2″-O-β-L-半乳糖苷和牡荆苷的提取率，而且提取物中杂质少，以该提取物为原料制备荭草苷、荭草素-2″-O-β-L-半乳糖苷或牡荆苷单体时无需反复使用硅胶柱分离，可以大大减少分离纯化步骤、降低分离纯化成本。

附图说明

图1为对照品溶液(A)和甲醇提取供试品溶液(B)的HPLC检测色谱图；

图2为低共熔溶剂提取供试品溶液的HPLC检测色谱图，其中：C～H依次对应序号1-6胆碱类低共熔溶剂。

具体实施方式

下面结合附图和实施例具体介绍本发明实质性内容，但并不以此限定本发明的保护范围。

实施例1：胆碱类低共熔溶剂的制备

不同类型的胆碱低共熔溶剂及制备方法如下表：

实施例2：胆碱类低共熔溶剂在提取金莲花中黄酮碳苷方面的应用

一、实验方法

1、金莲花黄酮碳苷的提取

金莲花干燥后粉碎，过50目筛。精确称量金莲花粉末2g，加入40ml实施例1制备的序号1-6低共熔溶液-水混合溶液(3:1，v/v)，超声处理(功率250W，频率40kHz)20min，室温下冷却后13000rpm离心10min，取上清，上清液用水稀释10倍后放置于进样小瓶作为供试品溶液，待HPLC检测。剩余上清液加入5倍体积乙醇稀释使低共熔溶剂析出，0.45μm有机滤膜过滤，滤液浓缩得金莲花提取物，可作为原料制备荭草苷、荭草素-2″-O-β-L-半乳糖苷和牡荆苷单体。

同时设置甲醇对照组，提取溶剂为甲醇，其余提取参数同上。

2、HPLC检测条件和参数

液相分析采用安捷伦1290液相系统，含在线真空脱气机、二元泵、自动进样器、柱温箱及DAD检测器(Agilent Technologies，Santa Clara，CA,USA)。色谱分离采用ThermoBDS Hypersil C18柱(250mm×4.6mm,4.6μm)。流动相：0.1％甲酸水溶液(A)—乙腈(B)；梯度洗脱程序：0-4min，13-15％B；4-14min，15％B；14-18min，15-20％B；18-22min，20-35％B；柱后运行时间10min回到起始梯度；流速：0.8mL/min；柱温：25℃；检测波长：340nm；进样量：10μL。使用外标法计算各供试品溶液中荭草苷、荭草素-2″-O-β-L-半乳糖苷和牡荆苷的浓度，换算成每克金莲花药材中各黄酮碳苷的含量，作为黄酮碳苷提取率。

二、实验结果

1、胆碱类低共熔溶剂对金莲花中三种黄酮碳苷提取率的影响

胆碱类低共熔溶剂和常规的甲醇对金莲花中荭草苷、荭草素-2″-O-β-L-半乳糖苷、牡荆苷的提取率如下表所示：

上述结果表明，与现有技术常规的甲醇相比，序号1-6胆碱类低共熔溶剂可以显著提高对金莲花中荭草苷、荭草素-2″-O-β-L-半乳糖苷、牡荆苷三种黄酮碳苷的提取率。

2、胆碱类低共熔溶剂对金莲花中三种黄酮碳苷提取的选择性

图1为对照品溶液(A)和甲醇提取供试品溶液(B)的HPLC检测色谱图；图2为低共熔溶剂提取供试品溶液的HPLC检测色谱图，其中：C～H依次对应序号1-6胆碱低共熔溶剂。

图1、图2表明，序号1、2、6胆碱类低共熔溶剂对金莲花中荭草苷、荭草素-2″-O-β-L-半乳糖苷、牡荆苷三种黄酮碳苷具有较高的选择性，提取液中以荭草苷、荭草素-2″-O-β-L-半乳糖苷、牡荆苷为主，杂质少，显著优于甲醇以及序号3、4、5胆碱类低共熔溶剂。

综上，本发明提供了一种胆碱类低共熔溶剂，表达式为[N(CH₃)₃CH₂CH₂OH]⁺[X·zY]^－，由溴化胆碱或氯化胆碱与ZnCl₂或SnCl₂或AlCl₃按照一定的摩尔比例混合制备而成，X＝Br时，Y为ZnCl₂或SnCl₂；X＝Cl时，Y为AlCl₃。本发明提供的胆碱类低共熔溶剂可以高效、选择性提取金莲花中三种重要的黄酮碳苷：荭草苷、荭草素-2″-O-β-L-半乳糖苷和牡荆苷，与传统的甲醇溶剂提取相比，不仅能够提高荭草苷、荭草素-2″-O-β-L-半乳糖苷和牡荆苷的提取率，而且提取物中杂质少，以该提取物为原料制备荭草苷、荭草素-2″-O-β-L-半乳糖苷或牡荆苷单体时无需反复使用硅胶柱分离，可以大大减少分离纯化步骤、降低分离纯化成本。

上述实施例的作用在于具体介绍本发明的实质性内容，但本领域技术人员应当知道，不应将本发明的保护范围局限于该具体实施例。