一种利用单克隆细胞分选快速获得CRISPR/Cas9基因敲除稳定细胞株的方法

摘要

本发明涉及一种利用单克隆细胞分选快速获得CRISPR/Cas9基因敲除稳定细胞株的方法，属于基因工程和遗传修饰技术领域。本发明将CRISPR/Cas9系统、流式细胞仪单细胞分选和表达载体上的荧光蛋白筛选三者结合起来，可以在短时间内获得阳性单克隆，极大地提高细胞系基因敲除工作效率。与传统细胞系基因敲除方法相比，本发明使用流式细胞仪进行单细胞分选，一方面省去了抗生素筛选的繁琐从而可以在非常短时间内获得大量单细胞，另外一方面可以保证每一个培养孔中都是单细胞，减少假阳性率；本发明在细胞转染以后40‑80小时进行分选，此时间点可以保证细胞在分选以后具有最大存活率，进而提高筛选效率。