一种巴氏杆菌培养基及其制备鉴别方法

摘要

本发明提供了一种巴氏杆菌培养基，该巴氏杆菌培养基括动物肉粉、NaCl、血液、甘露醇以及水，还包括抑菌剂、指示剂以及显色剂。使用本发明提供的巴氏杆菌培养基，可以保证巴氏杆菌的良好生长，添加抑菌剂抑制了杂菌生长，添加指示剂与显色剂可以有效的鉴别巴氏杆菌，降低检测成本、提高检测速度。本发明还提供巴氏杆菌培养基的制备方法。

说明书

技术领域

本发明涉及兽医微生物领域，尤其涉及一种巴氏杆菌培养基及其制备方 法，以及利用此巴氏杆培养基进行巴氏杆菌的鉴别方法。

背景技术

巴氏杆菌为獭兔发病的主要病原菌之一，巴氏杆菌病是引起9周龄至6 月龄的兔死亡的最主要原因。巴氏杆菌病潜伏期长短不一，一般从几小时到 5天或更长。在獭兔养殖中，很难通过临床症状对巴氏杆菌病原菌导致的疾 病进行准确的诊断，导致用药不对症，造成獭兔的大量死亡。只有进行细菌 学检查，找出病原菌才能最后确诊是否是巴氏杆菌病原菌导致的疾病，因此 病原菌的快速分离与鉴别成为了解决上述问题的最优方法。

目前并没有一种针对巴氏杆菌分离及鉴定的标准方法，无法快速便捷的 对巴氏杆菌进行分离与鉴别。被相关技术人员广泛接受的方法有两种，一是 使用含血清血红素的普通肉汤培养基划线纯化，利用胆硫乳琼脂(DHL)培养 基和相关的生化管或PCR技术进行鉴别；二是使用加血的马丁肉汤培养基划 线纯化，利用DHL培养基和相关的生化管或PCR技术进行鉴别，但是这两种 方法存在以下弊端：

一方面，上述两种方法中使用的培养基，并不是针对巴氏杆菌分离及鉴 定使用的，其选择性较弱。

另一方面，针对培养基中的细菌分子进行的生化管或PCR等常规检测鉴 别技术步骤繁琐，耗时较长，成本过高。例如，目前常用的PCR鉴别技术是 一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，它可看作是生物体 外的特殊DNA复制，能将微量的DNA大幅增加。在细菌基因组中，编码 16S rRNA的rDNA基因具有良好的进化保守性，适宜分析的长度(约为 1540bp)，以及与进化距离相匹配的良好变异性，所以成为细菌分子鉴定的 标准标识序列。但是这种基于DNA片段分子进行的PCR鉴别技术价格昂贵， 操作过程复杂，大大降低检测速度。

因此，为了快速有效的分离鉴别巴氏杆菌，提供一种能够针对巴氏杆菌 进行快速分离及鉴定、且成本较低的培养基具有重要意义。

发明内容技术领域

本发明旨在解决上面描述的问题。本发明的目的是提供一种巴氏杆菌培 养基及其制备方法，以及利用此培养基进行巴氏杆菌的鉴别方法。该巴氏杆 菌培养基中加入动物肉粉为巴氏杆菌的生长提供营养物质，加入抑菌剂抑制 杂菌生长，通过指示剂与显色剂的联合使用更加快速准确的鉴别巴氏杆菌。 本发明中的巴氏杆菌培养基保证了巴氏杆菌的良好生长，抑制了杂菌的生 长，并且可以有效的鉴别巴氏杆菌，降低检测成本、提高检测速度。

本发明提供一种巴氏杆菌培养基，所述巴氏杆菌培养基包括动物肉粉、 NaCl、血液、甘露醇以及水；其中，各组分的含量为：

其中，所述巴氏杆菌培养基还包括抑菌剂，所述抑菌剂含量为0.005～ 0.015g。

其中，所述巴氏杆菌培养基还包括指示剂与显色剂，所述指示剂含量为 0.3～0.7g，所述显色剂含量为2～5ml。

其中，所述巴氏杆菌培养基包括动物肉粉、NaCl、血液、甘露醇、水、 抑菌剂、指示剂以及显色剂；其中，各组分的含量为：

其中，所述抑菌剂包括万古霉素，所述指示剂包括硫代硫酸钠与硫酸亚 铁，所述显色剂包括中性红；所述动物肉粉为兔肉粉，所述血液为兔鲜血。

其中，所述硫代硫酸钠与所述硫酸亚铁的比为3:2。

其中，所述巴氏杆菌培养基还包括琼脂，所述琼脂15～25g。

本发明还提供一种巴氏杆菌培养基制备方法，所述制备方法包括下述步 骤：

A1)取0.7～1.3L的水加入烧杯中，取动物肉粉25～35g，NaCl 3～7g， 甘露醇5～15g，溶解于水中并搅拌均匀，得到混合均匀的混合液；

A2)在混合液中加入pH调节剂，将混合液的pH值调节至6.8～7.5；

A3)将调节PH值后的混合溶液，分装于3～5个相同的容器中，将分装 到容器中的混合溶液在115℃～125℃，101～102KPa的条件下高温灭菌15～25 分钟，得到高温灭菌后的混合溶液；

A4)将高温灭菌后的混合溶液在44～55℃的无菌环境中进行冷却后，移至 超净工作台，在每个容器中均加入血液15～28.3ml，得到巴氏杆菌培养基。

或A5)将步骤A4)所得的巴氏杆菌培养基置于超净工作台中，在每个容 器中均加入过滤灭菌后的抑菌剂0.001～0.005g，指示剂0.06～0.23g，显色剂 0.4～1.67ml，得到含有抑菌剂、指示剂以及显色剂的巴氏杆菌培养基。

其中，所述制备方法还包括下述步骤：

在步骤A2)将混合液的pH值调节至6.8～7.5后，加入琼脂15～25g。

所述制备动物肉粉的步骤还包括：

B1)取生动物肉25～35g，加水煮沸8～12min去除动物肉油脂后，研磨成 肉糊；所得肉糊中添加蛋白酶0.2～0.4万U/g，搅拌均匀，将搅拌均匀的肉 糊置于55～65℃下保温11～13小时得到保温后的肉糊，对保温后的肉糊进行 加水煮沸12～17min使保温后的肉糊中的蛋白酶失活，并形成动物肉液；

B2)将步骤B1)获得的动物肉液进行离心处理，去掉残渣和油，获得 动物肉浆，将动物肉浆干燥形成动物肉粉。

根据本发明提供的巴氏杆菌培养基，主要的创新点是提供一种特定的针 对巴氏杆菌进行分离与鉴别的培养基，通过添加动物肉粉来为巴氏杆菌提供 营养物质，通过添加抑菌剂抑制其他杂菌的生长，通过指示剂、显色剂的联 合添加准确的鉴别巴氏杆菌，并研究其他各组分的含量配比，以制备可用于 分离与鉴别巴氏杆菌的培养基。

具体地，上述巴氏杆菌培养基由动物肉粉、NaCl、血液、甘露醇、水、 抑菌剂、指示剂以及显色剂制备而成，其中，所述抑菌剂包括万古霉素，所 述指示剂包括硫代硫酸钠与硫酸亚铁，所述显色剂包括中性红；所述动物肉 粉为兔肉粉，所述血液为兔鲜血。

该巴氏杆菌培养基的制备组分，各组分的作用及含量说明如下：

动物肉粉是制备本发明中巴氏杆菌培养基的重要组分。动物肉粉为微生 物的生长提供所需的氮源和碳源等主要营养物质。本发明使用动物肉粉来源 相对纯净，杂质含量少，可以有效避免不合格产品抑制细菌生长的弊端。本 发明中的动物肉粉优选为兔肉粉，而巴氏杆菌又为獭兔发病的主要病原菌之 一，兔肉粉对于兔场来说，容易获得且质量有保障，其蛋白高且含脂率低的 特点，不仅完全可以代替常用的蛋白胨、牛肉膏等药品，并且兔肉粉做的培 养基其营养成分更加接近病菌的原始生活环境，有利于病菌的生长。

抑菌剂的主要作用是抑制杂菌的生长，以利于目的菌落的生长。本发明 优选万古霉素作为本发明抑菌剂，可以有效的抑制金黄色葡萄球菌、化脓链 球菌、肺炎链球菌等杂菌的生长，而不对巴氏杆菌的生长造成影响。本发明 中的抑菌剂含量为0.005～0.015g，优选含量为0.01g，此时对杂菌的抑制效 果最佳，而又不会对巴氏杆菌的生长产生影响。

甘露醇为微生物提供营养物质，兔鲜血为微生物的生长提供微量元素， 甘露醇与兔鲜血改善巴氏杆菌的生长的状况，促进巴氏杆菌的良好生长。

本发明配方中包含指示剂与显色剂，培养过程中，不同种类的细菌具有 不同的代谢产物，通过指示剂、显色剂与细菌代谢产物的作用现象可以鉴别 细菌的种类。本发明中的指示剂优选硫代硫酸钠与硫酸亚铁，显色剂优选中 性红。巴氏杆菌的可以发酵甘露醇产生硫化氢，当有硫化氢产生时，硫代硫 酸钠、硫酸亚铁与硫化氢作用产生黑色物质使巴氏杆菌落呈黑色，同时，硫 化氢为酸性气体，中性红显色剂遇酸变红使巴氏杆菌落呈红色。将指示剂与 显色剂联合使用，通过观察固体培养基上生长的菌落的颜色鉴别巴氏杆菌， 即菌落整体呈现黑色、菌落整体呈红色、菌落同时含有黑色与红色两种颜色 可以认为存在或者存在巴氏杆菌。这样指示剂与显色剂的联合使用可以更加 全面准确的鉴别巴氏杆菌，避免单独使用其中之一的试剂造成的巴氏杆菌的 漏检。

琼脂的主要作用是使液体培养基变为固体培养基，本发明中的培养基可 以为液体培养基，也可以通过在组分中添加琼脂，使其成为固体培养基。

通过大量的研究试验，上述成分的相互配合，制得的该巴氏杆菌培养基 能够有效的分离与鉴别巴氏杆菌，并且这大大降低了检测成本、提高了检测 速度。

作为本发明的优选示例，所述巴氏杆菌培养基包括动物肉粉、NaCl、兔 鲜血、甘露醇、水、抑菌剂、指示剂以及显色剂；其中，各组分的含量为：

根据本发明的另一个方面，本发明提供一种巴氏杆菌培养基制备方法， 所述制备方法包括下述步骤：

A1)取0.7～1.3L的水加入烧杯中，取动物肉粉25～35g，NaCl 3～7g， 甘露醇5～15g，溶解于水中并搅拌均匀，得到混合均匀的混合液；

A2)在混合液中加入pH调节剂，将混合液的pH值调节至6.8～7.5；

A3)将调节PH值后的混合溶液，分装于3～5个相同的容器中，将分装 到容器中的混合溶液在115℃～125℃，101～102KPa的条件下高温灭菌15～25 分钟，得到高温灭菌后的混合溶液；

A4)将高温灭菌后的混合溶液在44～55℃的无菌环境中进行冷却后，移至 超净工作台，在每个容器中均加入血液15～28.3ml，得到巴氏杆菌培养基。

或A5)将步骤A4)所得的巴氏杆菌培养基置于超净工作台中，在每个容 器中均加入过滤灭菌后的抑菌剂0.001～0.005g，指示剂0.06～0.23g，显色剂 0.4～1.67ml，得到含有抑菌剂、指示剂以及显色剂的巴氏杆菌培养基。

所述制备方法还包括下述步骤：

在步骤A2)将混合液的pH值调节至6.8～7.5后，加入琼脂15～25g。

也就是说，当配制固体培养基时，培养基配方中添加琼脂这一组分，即 在步骤A2)将混合液的pH值调节至6.8～7.5后，向调节PH之后混合溶液 中加入琼脂15～25g，然后进行后续的A3)这一步骤。

步骤A4中每个容器中添加的血液含量与步骤A5中的每个容器中添加 的抑菌剂、指示剂以及显色剂的含量需结合相应的容器个数，计入本发明提 供的巴氏杆菌培养基制备的总配方组分关系中。

以上制备过程中各组分的用量需满足本发明所述的比例关系，本领域技 术人员可以根据实际情况基于上述制备方法进行适应性调整。

本发明与现有技术相比，其有益效果体现在：

第一，本发明提供的巴氏杆菌培养基，促进了巴氏杆菌的良好生长，尤 其是加入了抑菌剂的巴氏杆菌培养基有效的抑制了其他杂菌的生长，起到了 良好的筛选效果，达到了选择培养基的作用。

第二，本发明提供的巴氏杆菌培养基，通过观察最终培养基上生长的菌 落的颜色，可以有效快捷的鉴别巴氏杆菌，鉴别准确率达到80％-90％。避免 了常规的PCR检测技术步骤繁琐、耗时较长，成本过高的弊端。

第三，本发明提供的巴氏杆菌培养基，动物肉粉和甘露醇提供主要营养 物质，动物肉粉使巴氏杆菌生长状况较好，甘露醇进一步改善巴氏杆菌的生 长状况；血液为巴氏杆菌的生长提供微量元素；抑菌剂抑制杂菌生长；指示 剂与显色剂与细菌代谢产物作用，达到通过菌落的颜色判别巴氏杆菌的目 的。

第四，本发明提供的巴氏杆菌培养基，优选使用的主要原料为兔肉粉和 兔鲜血，对于兔场而言取材方便，且成本较低，有利于降低兔子疾病快速诊 断时的成本。

本发明制备的巴氏杆菌培养基的各组分及其含量的选择、巴氏杆菌培养 基的制备方法，以及巴氏杆菌培养基鉴别巴氏杆菌方法的有益效果将通过实 施例给出的具体实验数据进行说明。

具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，对本发明实施例 中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部 分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术 人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明 保护的范围。需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请中的实施例及实施 例中的特征可以相互任意组合。

实施例1

A1)取1L的水加入烧杯中，取兔肉粉30g，NaCl 5g，甘露醇10g，溶 解于水中并搅拌均匀，得到混合均匀的混合液，其中，兔肉粉的制备过程为： 取生兔肉35g，加水煮沸12min去除兔肉油脂后，研磨成肉糊；所得肉糊中 添加蛋白酶0.4万U/g，搅拌均匀，将搅拌均匀的肉糊置于65℃下保温11小 时得到保温后的肉糊，对保温后的肉糊进行加水煮沸17min使保温后的肉糊 中的蛋白酶失活，并形成兔肉液；将获得的兔肉液进行离心处理，去掉残渣 和油，获得兔肉浆，将兔肉浆干燥形成兔肉粉；

A2)在混合液中加入pH调节剂，将混合液的pH值调节至6.8；

A3)将调节PH值后的混合溶液，分装于3个相同的试管中，将分装到 试管中的混合溶液在115℃，101KPa的条件下高温灭菌20分钟，得到高温 灭菌后的混合溶液；

A4)将高温灭菌后的混合溶液在45℃的无菌环境中进行冷却后，移至超 净工作台，在每个试管中均加入兔鲜血25ml，得到巴氏杆菌培养基

实施例2：

A1)取1.3L的水加入烧杯中，取兔肉粉25g，NaCl 3g，甘露醇5g，溶 解于水中并搅拌均匀，得到混合均匀的混合液，其中，兔肉粉的制备过程为： 取生兔肉25g，加水煮沸8min去除兔肉油脂后，研磨成肉糊；所得肉糊中 添加蛋白酶0.2万U/g，搅拌均匀，将搅拌均匀的肉糊置于55℃下保温11小 时得到保温后的肉糊，对保温后的肉糊进行加水煮沸12min使保温后的肉糊 中的蛋白酶失活，并形成兔肉液，将获得的兔肉液进行离心处理，去掉残渣 和油，获得兔肉浆，将兔肉浆干燥形成兔肉粉；

A2)在混合液中加入pH调节剂，将混合液的pH值调节至7.0；

A3)将调节PH值后的混合溶液，分装于5个相同的试管中，将分装到 试管中的混合溶液在125℃，101KPa的条件下高温灭菌15分钟，得到高温 灭菌后的混合溶液；

A4)将高温灭菌后的混合溶液在44℃的无菌环境中进行冷却后，移至超 净工作台，在每个试管中均加入兔鲜血17ml，得到巴氏杆菌培养基。

A5)将步骤A4)所得的巴氏杆菌培养基置于超净工作台中，在每个试管 中均加入过滤灭菌后的万古霉素0.001g，得到含有万古霉素的巴氏杆菌培养 基。

实施例3：

A1)取1.0L的水加入烧杯中，取兔肉粉30g，NaCl 5g，甘露醇15g，溶 解于水中并搅拌均匀，得到混合均匀的混合液；

A2)在混合液中加入pH调节剂，将混合液的pH值调节至7.2；

A3)将调节PH值后的混合溶液，分装于4个相同的试管中，将分装到 试管中的混合溶液在121℃，102KPa的条件下高温灭菌18分钟，得到高温 灭菌后的混合溶液；

A4)将高温灭菌后的混合溶液在55℃的无菌环境中进行冷却后，移至超 净工作台，在每个试管中均加入兔鲜血19ml，得到巴氏杆菌培养基。

A5)将步骤A4)所得的巴氏杆菌培养基置于超净工作台中，在每个试管 中均加入过滤灭菌后的万古霉素0.0025g，硫代硫酸钠0.045g，硫酸亚铁 0.030g，中性红1.25ml，得到含有万古霉素、硫代硫酸钠、硫酸亚铁、中性 红的巴氏杆菌培养基。

实施例4

A1)取1.0L的水加入烧杯中，取兔肉粉30g，NaCl 5g，甘露醇13g，溶 解于水中并搅拌均匀，得到混合均匀的混合液；

A2)在混合液中加入pH调节剂，将混合液的pH值调节至7.5，在混合 溶液中加入琼脂15g；

A3)将调节PH值后的混合溶液，分装于3个相同的锥形瓶中，将分装 到锥形瓶中的混合溶液在121℃，101KPa的条件下高温灭菌20分钟，得到 高温灭菌后的混合溶液；

A4)将高温灭菌后的混合溶液在55℃的无菌环境中进行冷却后，移至超 净工作台，在每个锥形瓶中均加入兔鲜血28ml，得到巴氏杆菌培养基。

实施例5

A1)取0.9L的水加入烧杯中，取兔肉粉29g，NaCl 6g，甘露醇13g，溶 解于水中并搅拌均匀，得到混合均匀的混合液；

A2)在混合液中加入pH调节剂，将混合液的pH值调节至7.2，在混合 溶液中加入琼脂22g；

A3)将调节PH值后的混合溶液，分装于5个相同的锥形瓶中，将分装 到锥形瓶中的混合溶液在122℃，101KPa的条件下高温灭菌22分钟，得到 高温灭菌后的混合溶液；

A4)将高温灭菌后的混合溶液在44℃的无菌环境中进行冷却后，移至超 净工作台，在每个锥形瓶中均加入兔鲜血16ml，得到巴氏杆菌培养基。

A5)将步骤A4)所得的巴氏杆菌培养基置于超净工作台中，在每个锥形 瓶中均加入过滤灭菌后的万古霉素0.002g，得到含有万古霉素的巴氏杆菌培 养基

实施例6

A1)取1.0L的水加入烧杯中，取兔肉粉30g，NaCl 5g，甘露醇10g，溶 解于水中并搅拌均匀，得到混合均匀的混合液；

A2)在混合液中加入pH调节剂，将混合液的pH值调节至7.2，在混合 溶液中加入琼脂20g；

A3)将调节PH值后的混合溶液，分装于5个相同的锥形瓶中，将分装 到锥形瓶中的混合溶液在121℃，101KPa的条件下高温灭菌20分钟，得到 高温灭菌后的混合溶液；

A4)将高温灭菌后的混合溶液在47℃的无菌环境中进行冷却后，移至超 净工作台，在每个锥形瓶中均加入兔鲜血16ml，得到巴氏杆菌培养基。

A5)将步骤A4)所得的巴氏杆菌培养基置于超净工作台中，在每个锥形 瓶中均加入过滤灭菌后的万古霉素0.002g，硫代硫酸钠0.06g，硫酸亚铁0.04， 显色剂0.6ml，得到含有万古霉素、硫代硫酸钠、硫酸亚铁、中性红的巴氏 杆菌培养基。

实施例7～实施例9参考实施例6的制备过程，各组分的用量需满足本发 明所述的比例关系，本领域技术人员可以根据实际情况基于上述制备方法进 行适应性调整。具体实施例情况如表1所示。

表1巴氏杆菌培养基具体实施例列表

对比例

为了进一步说明本发明的有益效果，选择目前较为常用的兔鲜血培养基 配方作为对比实施例，制备该兔鲜血培养基培养基各组分的含量如表2所示：

表2对比例组分含量列表

组分牛肉膏蛋白胨NaCl兔鲜血水琼脂含量3g10g5g80ml1L20g

测试例1

需要说明的是，为了更直观的统计菌落数及观察菌落的生长状况，将对 比例配制为固体培养基，并且选取实施例中的固体培养基(即实施例4～实施 例9)进行测试，对于实施1～实施例3的液体培养基不再进行测试。将上述 实施例4～实施例9与对比例应用于巴氏杆菌进行接种培养，具体过程如下：

巴氏杆菌菌液制备：取巴氏杆菌标准菌株1株，接种于固体兔鲜血培养 基中进行复苏处理后，挑取固体兔鲜血培养基生长的一个巴氏杆菌菌落接种 于4ml液体兔鲜血培养基中，在36～38℃富集(即培养)46～50h后得到含有 巴氏杆菌的兔鲜血培养基溶液(即巴氏杆菌菌液)。

实施例应用于巴氏杆菌的接种培养，具体培养过程如下：取六个相同规 格的培养皿，每个培养皿中依次加入实施例4～实施例9中的巴氏杆菌培养基 3ml(倒平板)，在上述6个培养皿中均涂布接种500μl巴氏杆菌菌液并于 37℃下培养48h。

对比例应用于巴氏杆菌的接种培养，具体培养过程如下：取与实施例相 同规格的一个培养皿，在培养皿中加入对比例中的兔鲜血培养基3ml(倒平 板)，在培养皿中涂布接种500μl巴氏杆菌菌液并于37℃下培养48h。

对上述实施例与对比例应用于巴氏杆菌的培养结果进行测试，具体测试 结果如表3所示：

表3实施例与对比例应用于巴氏杆菌培养的实验测试结果

需要说明的是：阳性菌落数是指菌落中的目标菌落数，即本发明中的巴 氏杆菌的落数；阴性菌落数是指菌落中的杂菌落数，即本发明中的除巴氏杆 菌以外的全部菌落数；筛选率＝(阳性菌落数÷菌落总数)×100％，显色准确 率＝(与PCR检测结果相同的菌落数÷菌落总数)×100％。

筛选率：体现了培养基对杂菌的抑制效果以及对目标菌落的培养效果。

显色判定：培养基培养22～26小时后，(1)菌落整体呈现黑色(2)菌 落整体呈红色(3)菌落同时含有黑色与红色两种颜色，上述三种情况均可 以认为是巴氏杆菌菌落，若菌落不显色或者显色不是上述三种情况，则不是 巴氏杆菌菌落。

测试例2

将实施例6应用于疑似巴氏杆菌感染死亡獭兔器官进行培养测试，具体 过程如下：

取病兔肺、兔肝脏、兔脾脏各25g，分别置于4ml液体兔鲜血培养基中 于36～38℃富集(即培养)46～50h后，得到与兔肺、兔肝脏以及兔脾脏相对 应的细菌菌液。

取三个同规格的培养皿，每个培养皿中分别加入实施例6的巴氏杆菌培 养基3ml(倒平板)，在上述3个培养皿中分别涂布接种500μl与兔肺、兔 肝脏以及兔脾脏相对应的细菌菌液，于37℃下培养48h。

将实施例6应用于疑似巴氏杆菌感染死亡獭兔器官的实验具体测试结果 如表4所示：

表4实施例6应用于疑似巴氏杆菌感染死亡獭兔器官的实验测试结果

由上述实施例与对比例培养结果与测试结果列表可知，本发明的培养基 对巴氏杆菌具有具有良好的培养与鉴别效果：

与对比例相比，本发明中实施例中的菌落总数均等于或高于对比例，菌 落直径均大于对比例。由此可见本发明中的巴氏杆菌培养基中的菌落生长状 况良好。

与对比例相比，本发明实施例的对于阳性菌落的筛选率远高于对比例， 尤其是实施5到实施例9中的包含有万古霉素的巴氏杆菌培养基其筛选率均 高达80％以上，对比例中的筛选率为45.4％，实施5到实施例9中巴氏杆菌 培养基其筛选率远远高于对比例，由此可见本发明中的巴氏杆菌培养基可以 有效的抑制杂菌的生长，相对的促进目标菌落即巴氏杆菌的生长。

与对比例相比，包含有组分硫代硫酸钠、硫酸亚铁以及中性红的实施例 6到实施例9的巴氏杆菌培养基，能够在不使用生化管以及PCR技术情况下， 通过巴氏杆菌培养基中的菌落的颜色进行巴氏杆菌鉴别，其鉴别准确率平均 为88.8％。这保证了对于巴氏杆菌快速有效的分离鉴别，大大缩短了獭兔巴 氏杆菌病的初步诊断时间和步骤，提高巴氏杆菌的初步诊断效率。对比例 无法通过培养基中的菌落颜色鉴别出巴氏杆菌，需借助生化管以及PCR检测 技术才能鉴别巴氏杆菌，操作过程复杂，检测速度较低。

另外，取实施例6的巴氏杆菌培养基，取疑似巴氏杆菌感染死亡动物器 官加入到实施例6的巴氏杆菌培养基进行培养，其鉴别准确率平均为 87.4％。。其培养基结果也再次证明本发明中的巴氏杆菌培养基，可以有效 的鉴别巴氏杆菌，能够快速有效的诊断兔子的是否患有巴氏杆菌病。

综上所述，本发明具有下述有益效果：

第一，本发明提供的巴氏杆菌培养基，促进了巴氏杆菌的良好生长，尤 其是加入了抑菌剂的巴氏杆菌培养基有效的抑制了其他菌类的生长，起到了 良好的筛选效果，达到了选择培养基的作用。

第二，本发明提供的巴氏杆菌培养基，通过观察最终培养基上生长的菌 落的颜色，可以有效快捷的鉴别巴氏杆菌，鉴别准确率达到81％-93％。避免 了常规的PCR检测技术步骤繁琐、耗时较长，成本过高的弊端。

第三，本发明提供的巴氏杆菌培养基，动物肉粉和甘露醇提供主要营养 物质，动物肉粉使巴氏杆菌生长状况最好，甘露醇进一步改善巴氏杆菌的生 长状况；鲜血为巴氏杆菌的生长提供微量元素；抑菌剂抑制杂菌生长；指示 剂与显色剂的联合与细菌代谢产物作用，达到通过菌落的颜色判别巴氏杆菌 的目的。

第四，本发明提供的巴氏杆菌培养基中，使用的主要原料为兔肉粉和兔 鲜血，对于兔场而言取材方便，且成本较低，有利于降低兔子疾病快速诊断 时的成本。

最后应说明的是：在本文中，术语“包括”、“包含”或者其任何其他 变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包含一系列要素的过程、方法、物 品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者 是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。在没有更多限制 的情况下，由语句“包括一个…”限定的要素，并不排除在包括所述要素的 过程、方法、物品或者设备中还存在另外的相同要素。

以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制。尽管参照前 述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其 依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术 特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离 本发明各实施例技术方案的精神和范围。