永生化原代绵羊肺细胞系的构建及其应用

摘要

本发明公开了一种永生化原代绵羊肺细胞系的构建及其应用；所述构建包括以下步骤：用Dispase‑胶原酶灌流法获得高活率的新鲜原代绵羊肺成纤维细胞，经过24h培养后，在浓度为5ug/ml的聚凝胺存在下，用浓缩纯化的含有hTERT基因的重组慢病毒的细胞上清液对原代绵羊肺成纤维细胞进行感染，1周后用2ug/ml的嘌呤霉素进行药物压力筛选，在含有浓度为5ug/ml的聚凝胺存在下，重复感染一次，一周后，用1ug/ml嘌呤霉素维持液培养直至单克隆出现并生长至2.0cm左右时，挑取单克隆的细胞扩大培养，获得能够传代的永生化绵羊肺成纤维细胞。