植物内生细菌多样性16SrDNA扩增子制备方法

摘要

本发明提供了一套用于高通量测序的引物，所述引物由针对植物内生细菌16S rDNA V5～V7可变区片段的引物对799F/1193R和连接在所述引物对799F/1193R的5'端的Barcode序列组成，其中，所述799F的序列为SEQ ID NO：1，所述1193R的序列为SEQ ID NO：4，与所述799F的5'端连接的Barcode序列选自SEQ ID NO：5‑28中的序列，与所述1193R的5'端连接的Barcode序列选自SEQ ID NO：29‑52中的序列。本发明通过两轮的巢式PCR特异地扩增植物内生细菌16S rDNA V5～V7可变区，获得5'端带有Barcode序列的适用于目前二代高通量测序平台的扩增子。采用本发明提供的方法进行植物内生细菌多样性研究，可显著提高植物内生细菌16S rDNA的扩增效率，极大地减少测序数据中宿主数据的占比，降低研究成本。