一种基于数字PCR的蛋白质活性浓度测定基准方法

摘要

本发明公开了一种基于数字PCR的蛋白质活性浓度测定基准方法，包括如下步骤(1)准备待测目标蛋白质的抗体；(2)将获得的抗体用生物素进行标记；(3)合成三段单链寡聚核苷酸；(4)分别将两段寡聚核苷酸的5’端和3’端用亲和素进行标记；(5)设计Taqman探针和对应的引物；(6)利用生物素‑亲和素之间的放大亲和反应，用寡聚核苷酸标记抗体。(6)将待测目标蛋白用缓冲溶液稀释至5000分子/μL以下的浓度，并在其中加入寡聚核酸标记的两种抗体、第三条寡聚核酸片段及DNA连接酶，形成抗原‑抗体复合物。然后进行数字PCR扩增反应，得到的拷贝数记为浓度c0；(7)再次进行数字PCR扩增反应，得到的拷贝数记为c1；(8)待测目标蛋白的浓度为c0‑c1。