重组EcoRV限制性内切酶的制备方法

摘要

本发明公开了一种重组EcoR V限制性内切酶的制备方法，包括以下步骤：(1)表达质粒pCreat Duet‑EcoR V‑甲基化酶的构建；(2)EcoR V与甲基化酶蛋白的诱导表达与鉴定；(3)EcoR V与甲基化酶蛋白的纯化与鉴定。本发明通过重组方式将EcoR V限制性内切酶与甲基化酶克隆到含His标签的pCreat Duet共表达载体中，在低温条件下表达量达到30％。通过Ni柱亲和层析、Superdex200凝胶过滤层析得到高活力的重组EcoR V限制性内切酶，比活与商业化酶相似。