一种灵芝液体菌种培养基配方及灵芝液体菌种培养方法

摘要

本发明公开了一种灵芝液体菌种培养基配方，包括：蛋白胨6g、葡萄糖15g、硫酸镁0.5g、磷酸二氢钾0.5g、马铃薯淀粉1g、玉米、木薯淀粉3g、维生素B

说明书

技术领域

本发明涉及食用菌栽培技术领域，尤其涉及一种灵芝液体菌种培养基配方及灵芝液体菌种培养方法。

背景技术

目前灵芝菌种的培养方式主要是固体培养这种传统的栽培方式上，采用传统的栽培方式生产的灵芝在质量和产量方面已经难以满足国内外市场的需求。固体菌种生产培养的灵芝存在发菌慢且菌龄不一致，抗病力弱，生命力不强，易受到杂菌感染等缺点。

发明内容

本发明需提供一种灵芝液体菌种培养基配方及灵芝液体菌种培养方法，解决固体菌种生产培养的灵芝存在发菌慢且菌龄不一致，抗病力弱，生命力不强，易受到杂菌感染等技术问题。

为解决上述技术问题，本发明提供一种灵芝液体菌种培养基配方，包括：蛋白胨6g、葡萄糖15g、硫酸镁0.5g、磷酸二氢钾0.5g、马铃薯淀粉1g、玉米、木薯淀粉3g、维生素B₁10mg、琼脂1g、纯净水1000ml。

本发明提供另一种灵芝液体菌种培养基配方，蛋白胨250g、葡萄糖1000g、硫酸镁40g、磷酸二氢钾20g、马铃薯淀粉100g、玉米、木薯淀粉200g、维生素B₁600mg、琼脂100g、消泡剂5g、纯净水60L。

本发明还提供一种灵芝液体菌种培养方法，包括以下步骤：

(1)准备多个500ml容量的三角瓶，在多个三角瓶中分别装入200ml/瓶由权利要求1或2所述的灵芝液体菌种培养基配方制得的培养基，将多个三角瓶放在高压蒸汽锅灭菌，然后取出冷却；

(2)取灵芝斜面试管母种一支，挑取蚕豆大小1块或2块菌种接入每个三角瓶中，然后静至24小时；

(3)24小时后，将多个三角瓶放入旋转式摇床，在摇床上培养，摇床培养6天，制得小瓶液体菌种。

作为本发明所述一种灵芝液体菌种培养方法的一种优选方案，步骤(1)中所述高压蒸汽锅灭菌具体为在120℃—126℃条件下高温灭菌30分钟。

作为本发明所述一种灵芝液体菌种培养方法的一种优选方案，步骤(3)中所述摇床的旋转速度在120—130r/min，温度为25℃—30℃。

作为本发明所述一种灵芝液体菌种培养方法的一种优选方案，步骤(3)后还包括以下步骤：

(4)准备大容量的三角瓶，将步骤(3)制得的小瓶液体菌种接入大三角瓶，装量4升/瓶液体菌种培养基，将所述大容量的三角瓶放入旋转式摇床，在摇床上培养36小时；

(5)将装量4升/瓶液体菌种接入60升的不锈钢通气发酵罐，在所述通气发酵罐内培养36小时，制得灵芝液体菌种；

(6)将发酵罐内的灵芝液体菌种，用注射器注射接入灵芝固体袋料栽培菌种的袋口部位，进行规模化生产。

作为本发明所述一种灵芝液体菌种培养方法的一种优选方案，步骤(5)中，供给通气发酵罐的空气为通过空气除菌过滤系统一系列净化处理后的无菌空气。

本发明所述的一种灵芝液体菌种培养基配方及灵芝液体菌种培养方法的有益效果在于：灵芝液体菌种高效、方便、安全、无污染，灵芝菌种质量稳定，生产周期短，发菌快，生产不受季节的影响，出芝快，抗病力强，产量高，可进行规模化、工厂化生产。根据灵芝的适宜生长条件，采用最优的环境控制模式，工厂化进行大规模大批量栽培生产，使灵芝不受季节和环境的影响，实现全年可控，稳定的高效生产目标。

具体实施方式

为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。

实施例1

制作1000ml液体菌种配方：蛋白胨6g、葡萄糖15g、硫酸镁0.5g、磷酸二氢钾0.5g、马铃薯淀粉1g、玉米、木薯淀粉3g、维生素B₁1片(10毫克)、琼脂1g、纯净水1000ml。

小瓶液体菌种培养方法：

准备500ml容量的三角瓶，将三角瓶分装入200ml/瓶液体菌种培养基，将三角瓶放在高压蒸汽锅灭菌，在120℃—126℃高温灭菌30分钟，然后取出冷却，取灵芝斜面试管母种一支，挑取蚕豆大小1块或2块接入三角瓶中，静至24小时。24小时后，将三角瓶放入旋转式摇床，在摇床上培养，摇床的特性会影响氧气的质传效应，进而影响菌丝生长，因此要控制旋转速度，控制在120—130r/min，温度为25℃—30℃最适宜，摇床培养6天。

实施例2

制作60升液体菌种配方：蛋白胨250g、葡萄糖1000g、硫酸镁40g、磷酸二氢钾20g、马铃薯淀粉100g、玉米、木薯淀粉200g、维生素B₁60片、琼脂100g、消泡剂1勺(5克)、纯净水60L。

接入发酵罐的培养方法：

1.准备500ml容量的三角瓶，将三角瓶分装入200ml/瓶液体菌种培养基，将三角瓶放在高压蒸汽锅灭菌，在120℃—126℃高温灭菌30分钟，然后取出冷却，取灵芝斜面试管母种一支，挑取蚕豆大小1块或2块接入三角瓶中，静至24小时。24小时后，将三角瓶放入旋转式摇床，在摇床上培养，摇床的特性会影响氧气的质传效应，进而影响菌丝生长，因此要控制回转速度，控制在120—130r/min，温度为25℃—30℃最适宜，摇床培养6天。

2.准备大容量的三角瓶，将小瓶液体菌种接入大三角瓶，装量4升/瓶液体菌种培养基，将三角瓶放入旋转式摇床，在摇床上培养36小时。

3.将装量4升/瓶液体菌种接入60升的不锈钢发酵罐，在通气发酵罐内培养36小时，整个培养过程中，要求供给的空气是无菌的，通过空气除菌过滤系统一系列净化处理，空气净化成无菌的空气进入发酵罐内。无菌空气在发酵培养中的作用是，提供氧气，促使培养液翻动，菌丝体在培养基中不断混合，提高对营养物质吸收与作用，维持代谢产物的均匀扩散，防止发酵过程中染菌。在培养过程中，观察温度、压力、搅拌速度、气体和液体流量、液体粘度、浊度、通气排气、灵芝菌球状态，随时注意灵芝液体培养液的外观，如澄清、混浊、絮状等，同时还要注意颜色、气味等，如灵芝液体菌种有特殊的清香味，霉菌有酒味、细菌酸味、异味或无味。

4.将发酵罐内的灵芝液体菌种，用注射器注射接入灵芝固体袋料栽培菌种的袋口部位，进行规模化生产。

在上述实施例中，灵芝的菌丝在液体培养基中生长，在液体培养基中吸收水分和营养，培养出菌丝体，菌丝体为二次菌丝，它比孢子萌发形成的一次菌丝粗壮，生长速度快。在外观上观察液体培养出的菌丝有两种形态：一种是普通丝状体，另一种是球状体。由于菌丝的生长是辐射状地向四周扩展，在液体培养基中通气或搅拌作用下，菌丝在原有的培养基中逐渐生长，或长出分枝并纵横交错、相互缠绕而近球形，称为菌丝球。菌丝球形态多样，一般呈放射状，带有毛刺，直径多在4-8MM左右。有的菌球表面光滑，有的表面粗糙，有的似刺毛球。培养基(液)是菌丝赖以生存、物质交换和代谢产物的场所，培养基的组成对于菌丝的生长繁殖、代谢产物的合成都具有重要的影响，关系到发酵产品的产量和质量。要想获得好的灵芝收成，其菌丝球的繁殖犹为重要，凡是形成大量菌丝球的，其培养液较清，相反未形成菌丝球或少量形成菌丝球的，则是培养液较浑浊的。由此可知，培养液越是浑浊，越不有利于菌丝的生长。

灵芝的菌丝球形态还受到培养基成分和PH酸碱度及其培养条件的影响：

首先，培养基含有淀粉成分，其粘度越大，菌球越小，刺毛就越短，灵芝菌丝在马铃薯淀粉、玉米木薯淀粉等可溶性淀粉中生长最快，其它则较差，虽然现有的技术中，有些科研单位在试着利用马铃薯和玉米等农作物产品作为培养基淀粉的来源，但是，其制成的培养基非常的浑浊，且培养基成分不均匀，阻碍菌丝球的生长，培养基也容易发生变性。

其次，在不同PH值下，菌丝体可以是丝状，也可以是球状；本方案中的培养基配方的PH值在5.0-6.0，为灵芝菌丝最适宜生长的PH范围如在培养基中磷酸盐浓度为0.1％，生长较慢，菌球大，如果浓度降低，菌球就小。

再者，在培养过程中接种量和通气量大小，搅拌速度快慢对菌体形态变化也产生影响。接种量大时，通常可呈分散型生长，而接种量小时，则有利于菌球的形成。一般说接种量越大，菌球直径就越小，接种量越小，菌球直径就越大。在一般的摇床使用过程中，运用的是振荡的方法，而其缺点是上下翻转，达到上下的均匀，但达不到同一水平面的均匀，所以，本技术方案中，将摇床作一改进，加入一搅拌轴，对其进行水平的搅动，搅拌速度快或通气量大时，菌球直径就小，搅拌速度慢或通气量小时，菌球直径就大。所以，摇床的搅拌速度控制在120—130r/min转速，这样在摇床液体动态培养上层为菌液，下层为菌丝球，更有利于菌种的生长。

另外，培养基中糖的浓度一般为2％，培养基中糖过量时，常阻碍空气中养的溶解，不利于沉没菌丝体的生长，因此，在本技术方案中，着重控制糖的浓度，现有的一些试验室，作出的糖份含量高于2％，实际是只能运用于实验室条件下的试验培养，不适于量产化的农业大规模生产，也不具有实际操作前景。

还有，灵芝菌丝的生长需要一些微量的生长因子的作用，生长因子是一种在菌丝生长过程中自身不能合成，必须从外界获取的一类有益菌丝生长繁殖的物质，实践证明，在灵芝液体培养基中添加维生素B1能显著促进菌丝的生长。

最后，灵芝液体培养基中含有蛋白质类物质，在通气和搅拌下易形成泡沫，致使培育液上升，若不加以控制会造成大量的逃液，增加了染菌的机会。同时，由于泡沫过多，还会影响通气和搅拌的正常进行，从而影响灵芝液体菌种的成功培育，因此，只有加入了消泡剂，才能保证培育。

运用本技术方案的种植场，具有规模化、工厂化生产，发酵罐容积每增加10倍，生产成本将下降37％-60％。

还需说明的是，本技术方案中的发酵罐还配备有空气除菌过滤系统(空气净化系统)，对需氧液体灵芝菌种培养纯种发酵来说，空气是要求净化成无菌的条件，自然界空气含有无数的灰尘和微生物，都必须经过一系列净化处理，成为无菌空气才能进入发酵罐。无菌空气在发酵生产中的作用：一是提供氧气，二是促使培育液体翻动，菌丝体在培养基中不断混合，提高对营养物质的吸收与作业，三是维持代谢产物的均匀扩散，四是保持发酵过程的正压操作，防止染菌。

经过空气除菌过滤系统处理的空气达到：无菌、无灰尘、无杂质、无水、无油、压力等几项指标。

经实验研究，采用固体培养基和本发明灵芝液体菌种培养基配方(实施例1-2)的使用效果见表1。

综上所述，本发明减少了培养步骤、缩短了发菌周期、缩短了生长周期、染菌率低、成本低，产量高。

应说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。