一种测定琥珀酸索利那新中立体异构体和中间体的分析方法

摘要

本发明是一种采用高效液相色谱法测定琥珀酸索利那新中立体异构体和中间体的分析方法。其特征在于：采用高效液相色谱法，在直链淀粉‑三(3,5‑二甲苯基氨基甲酸酯)键合硅胶手性色谱柱上进行等度洗脱；流动相为正己烷‑无水乙醇‑异丙醇‑二乙胺溶液(65:15:20:0.1)(体积比)；样品采用流动相溶解。本方法可以同时测定琥珀酸索利那新的对映异构体、非对映异构体和两个互为对映异构体的中间体，为琥珀酸索利那新的合成工艺路线研究和质量控制提供更为可靠的保证。

说明书

技术领域

本发明涉及一种测定琥珀酸索利那新中立体异构体和中间体的分析方法，特别是用高效液相色谱法对琥珀酸索利那新的对映异构体、非对映异构体和两个互为对映异构体的中间体进行分离和定量测定的方法。

背景技术

琥珀酸索利那新化学名为(3R)-1-氮杂双环[2,2,2]辛烷-3-基(1S)-1-苯基-3,4-二氢异喹啉-2-(1H)-甲酸酯丁二酸盐，是高度选择性膀胱M受体拮抗药，其主体结构为索利那新。

琥珀酸索利那新结构中有2个手性中心，存在3种光学异构体；中间体结构中含有1个手性中心，存在2种光学异构体。按照《化学药物杂质研究的技术指导原则》要求，立体异构体应作为目标产物的杂质进行控制。另外，琥珀酸索利那新不同的光学异构体对M受体具有不同的选择性和亲和力，因此考虑对索利那新的3个立体异构体及2个中间体进行控制。

至今，各国药典并未收录琥珀酸索利那新立体异构体、中间体的检测方法。经检索，文献和专利中涉及到的琥珀酸索利那新有关物质和立体异构体的分离方法并未包含其3个立体异构体和互为对映异构体的2个中间体成分的检测。因此，建立一种利用高效液相色谱准确快速测定琥珀酸索利那新中立体异构体和中间体的简便方法具有重要意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种测定琥珀酸索利那新中立体异构体和中间体的高效液相色谱分析方法，使主峰和立体异构体峰、中间体峰能够有效分离，为琥珀酸索利那新的合成工艺研究和质量控制提供更为可靠的依据。

为实现上述目的，本发明的技术方案是：

一种测定琥珀酸索利那新立体异构体和中间体的分析方法，采用高效液相色谱法，用流动相溶解样品，用直链淀粉-三(3,5-二甲苯基氨基甲酸酯)键合硅胶手性色谱柱，进行等度洗脱。

所述琥珀酸索利那新(A)，及其立体异构体及中间体是杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质F(见表1)。

表1 琥珀酸索利那新及其立体异构体、中间体的化学结构式

所述方法中，用流动相溶解样品，制成分析溶液。

所述方法中，色谱柱优选为直链淀粉-三(3,5-二甲苯基氨基甲酸酯)键合硅胶手性色谱柱，型号为CHIRALPAK IA，4.6mm×250mm，5μm。

所述流动相组成为正己烷占总体积的50％～80％，无水乙醇占总体积的10％～25％，异丙醇占总体积的10％～25％，二乙胺占总体积的0.05％～0.2％。，优选为正己烷-无水乙醇-异丙醇-二乙胺溶液(65:15:20:0.1)(体积比)。

所述方法中，色谱条件为：检测波长为210～230nm，优选为220nm；流动相洗脱速率为0.8～1.2mL/min，优选为1.0mL/min；色谱柱温度为20～35℃，优选为30℃；样品进样量为5～20μL，优选为10μL。

本发明的有益效果是：可在较短时间内同时有效测定琥珀酸索利那新的立体异构体和中间体，完善了琥珀酸索利那新有关物质检测方法，节约了时间，降低了检测成本，可用于琥珀酸索利那新合成研究和生产过程的质量控制，使琥珀酸索利那新及其制剂的产品质量得到保证。

附图说明

图1色谱柱1的高效液相色谱图。

图2流动相条件1的高效液相色谱图。

图3流动相条件2的高效液相色谱图。

图4实施例4的高效液相色谱图。

图5实施例5的高效液相色谱图。

图中：1-琥珀酸索利那新；2-杂质B；3-杂质C；4-杂质D；5-杂质E；6-杂质F。

具体实施方式

通过以下具体实施方式解释本发明的内容，但不限制本发明。

以下为本发明所述的琥珀酸索利那新中立体异构体和中间体分析方法的色谱条件筛选实验。

1.色谱柱的选择

(1)仪器与色谱条件

高效液相色谱仪：Agilent 1260高效液相色谱系统及工作站。

色谱柱：分别选择不同填料的手性色谱柱进行试验，具体填料及型号见表2。

流动相为正己烷-异丙醇-二乙胺(80:20:0.1)，设置流速为1.0mL/min，检测波长为220nm，柱温为30℃。

(2)实验步骤

分别取琥珀酸索利那新样品、杂质B、C、D、E、F对照品适量，用流动相溶解并稀释制成每1mL中约含琥珀酸索利那新1mg、各杂质约5μg的混合溶液，作为测试溶液。

(3)测定方法及结果

取上述溶液各10μL按(1)色谱条件进样，记录色谱图，考察琥珀酸索利那新与各杂质及各杂质之间的分离度。具体分离结果见表2。

通过该实验确定色谱柱为直链淀粉-三(3,5-二甲苯基氨基甲酸酯)键合硅胶色谱柱(CHIRALPAK IA，4.6mm×250mm，5μm)。

表2 色谱柱选择结果

2.流动相的选择

(1)仪器与色谱条件

高效液相色谱仪：Agilent 1260高效液相色谱系统及工作站。

色谱柱：直链淀粉-三(3,5-二甲苯基氨基甲酸酯)键合硅胶色谱柱(CHIRALPAKIA，4.6mm×250mm，5μm)。

先后选用不同的正相流动相，设置流速为1.0mL/min，检测波长为220nm，柱温为30℃，进行试验，各流动相的具体组成见表3。

(2)实验步骤

分别取琥珀酸索利那新样品、杂质B、C、D、E、F对照品适量，用流动相溶解并稀释制成每1mL中约含琥珀酸索利那新1mg、各杂质约5μg的混合溶液，作为测试溶液。

(3)测定方法及结果

取上述溶液各10μL按(1)色谱条件分别进样，记录色谱图，考察琥珀酸索利那新与各杂质及各杂质之间的分离度，不同流动相的分离结果见表3。

通过该实验发现正己烷-异丙醇-二乙胺和正己烷-无水乙醇-二乙胺的流动相组成均不能满足现有杂质B、C、D、E、F的分离。

表3 流动相的选择结果

以下结合具体实施例进一步描述本发明的技术方案，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。

实施例1

琥珀酸索利那新中立体异构体和中间体的测定

(1)仪器与色谱条件

高效液相色谱仪：Agilent 1260高效液相色谱系统及工作站。

色谱柱：直链淀粉-三(3,5-二甲苯基氨基甲酸酯)键合硅胶色谱柱(CHIRALPAKIA，4.6mm×250mm，5μm)。

流动相为正己烷-无水乙醇-异丙醇-二乙胺(80:10:10:0.1)(体积比)，设置流速为1.0mL/min，检测波长为220nm，柱温为25℃。

(2)实验步骤

分别取琥珀酸索利那新样品、杂质B、C、D、E、F对照品适量，用流动相溶解并稀释制成每1mL中约含琥珀酸索利那新1mg、各杂质约5μg的混合溶液，作为测试溶液。

(3)测定方法及结果

取上述溶液10μL按(1)色谱条件进样，记录色谱图，考察琥珀酸索利那新与各杂质及各杂质之间的分离度。结果表明，杂质C与杂质D，杂质E与杂质F分离度明显改善。

实施例2

琥珀酸索利那新中立体异构体和中间体的测定

(1)仪器与色谱条件

高效液相色谱仪：Agilent 1260高效液相色谱系统及工作站。

色谱柱：直链淀粉-三(3,5-二甲苯基氨基甲酸酯)键合硅胶色谱柱(CHIRALPAKIA，4.6mm×250mm，5μm)。

流动相为正己烷-无水乙醇-异丙醇-二乙胺(50:25:25:0.1)(体积比)，设置流速为1.0mL/min，检测波长为220nm，柱温为25℃。

(2)实验步骤

分别取琥珀酸索利那新样品、杂质B、C、D、E、F对照品适量，用流动相溶解并稀释制成每1mL中约含琥珀酸索利那新1mg、各杂质约5μg的混合溶液，作为测试溶液。

(3)测定方法及结果

取上述溶液10μL按(1)色谱条件进样，记录色谱图，考察琥珀酸索利那新与各杂质及各杂质之间的分离度。结果表明，杂质B、C、D可达基线分离。

实施例3

琥珀酸索利那新中立体异构体和中间体的测定

(1)仪器与色谱条件

高效液相色谱仪：Agilent 1260高效液相色谱系统及工作站。

色谱柱：直链淀粉-三(3,5-二甲苯基氨基甲酸酯)键合硅胶色谱柱(CHIRALPAKIA，4.6mm×250mm，5μm)。

流动相为正己烷-无水乙醇-异丙醇-二乙胺(65:15:20:0.1)(体积比)，设置流速为1.0mL/min，检测波长为220nm，柱温为20℃。

(2)实验步骤

分别取琥珀酸索利那新样品、杂质B、C、D、E、F对照品适量，用流动相溶解并稀释制成每1mL中约含琥珀酸索利那新1mg、各杂质约5μg的混合溶液，作为测试溶液。

(3)测定方法及结果

取上述溶液10μL按(1)色谱条件进样，记录色谱图，考察琥珀酸索利那新与各杂质及各杂质之间的分离度。结果表明，琥珀酸索利那新与各杂质及各杂质之间的分离度良好，各色谱峰峰形良好。进一步优化色谱条件如实施例4，在不影响色谱柱使用寿命的前提下尽量缩短分析时间。

实施例4

琥珀酸索利那新中立体异构体和中间体的测定

(1)仪器与色谱条件

高效液相色谱仪：Agilent 1260高效液相色谱系统及工作站。

色谱柱：直链淀粉-三(3,5-二甲苯基氨基甲酸酯)键合硅胶色谱柱(CHIRALPAKIA，4.6mm×250mm，5μm)。

流动相为正己烷-无水乙醇-异丙醇-二乙胺(65:15:20:0.1)(体积比)，设置流速为1.0mL/min，检测波长为220nm，柱温为30℃。

(2)实验步骤

分别取琥珀酸索利那新样品、杂质B、C、D、E、F对照品适量，用流动相溶解并稀释制成每1mL中约含琥珀酸索利那新1mg、各杂质约5μg的混合溶液，作为测试溶液。

(3)测定方法及结果

取上述溶液10μL按(1)色谱条件进样，记录色谱图，考察琥珀酸索利那新与各杂质及各杂质之间的分离度。结果表明，在较短的分析时间内，琥珀酸索利那新与各杂质及各杂质之间的分离度良好，各色谱峰峰形良好(见附图4)。

实施例5

琥珀酸索利那新原料立体异构体和中间体的测定

(1)仪器与色谱条件

高效液相色谱仪：Agilent 1260高效液相色谱系统及工作站。

色谱柱：直链淀粉-三(3,5-二甲苯基氨基甲酸酯)键合硅胶色谱柱(CHIRALPAKIA，4.6mm×250mm，5μm)。

流动相为正己烷-无水乙醇-异丙醇-二乙胺(65:15:20:0.1)(体积比)，设置流速为1.0mL/min，检测波长为220nm，柱温为30℃。

(2)实验步骤

取琥珀酸索利那新原料药适量，用流动相溶解并稀释制成每1mL中约含琥珀酸索利那新1mg的溶液，作为供试品溶液。

精密量取供试品溶液适量，加流动相定量稀释制成每1mL中约含2μg的溶液，作为对照溶液。分别取杂质B、C、D对照品适量，用流动相溶解并稀释制成每1mL中约含琥珀酸索利那新杂质B、C、D各约2μg的混合溶液，作为杂质对照品溶液。

(3)测定方法及结果

取琥珀酸索利那新杂质对照品溶液10μL注入液相色谱仪，记录色谱图，琥珀酸索利那新杂质B、杂质C和杂质D依次流出，各峰之间的分离度应符合规定。分别取供试品溶液和对照溶液各10μL按(1)色谱条件进样，记录色谱图，供试品溶液的色谱图中如有与杂质B、C、D保留时间一致的色谱峰，其峰面积不得大于对照溶液主峰的面积(0.2％)，其它各杂质不得大于对照溶液主峰面积的一半(0.1％)，杂质总和不得过(0.5％)。

3批琥珀酸索利那新的异构体检测结果见表4，琥珀酸索利那新原料的色谱图(见附图5)。

表4 琥珀酸索利那新异构体杂质检测结果