一种从纤毛婆婆纳中分离纯化总环烯醚萜苷的方法

摘要

本发明公开了一种从纤毛婆婆纳中分离纯化总环烯醚萜苷的方法，步骤如下：(1)取纤毛婆婆纳粉末，采用水饱和正丁醇提取，得提取液；(2)水洗，减压回收正丁醇相，得总环烯醚萜苷粗提物，溶于水，得水溶液；(3)采用乙酸乙酯萃取，得萃取后的水溶液，减压回收水相，得总环烯醚萜苷。本发明方法可以制备得到高纯度的总环烯醚萜苷，并且方法的得率高，操作简便，能耗低，产品纯度高，产量大，适于工业化生产。

说明书

技术领域

本发明属于一种从纤毛婆婆纳中分离纯化有效成分的方法，具体是分离纯化总环烯醚萜苷的方法。

背景技术

纤毛婆婆纳(Veronica ciliata Fisch.)是玄参科草本植物长果婆婆纳属一年生草本植物，藏语学名“帕夏嘎”，广泛用于藏药处方中，目前分布于中国、蒙古、中亚和西伯利亚等地区，其全草可入药，具有清热解毒、祛风利湿等功效，主治肝炎、胆囊炎、风湿痛、荨麻疹等。

研究表明纤毛婆婆纳含有大量环烯醚萜苷类化合物，环烯醚萜苷具有广泛的生物活性，如抗菌、抗炎、抗肿瘤、保肝利胆、抗氧化、对心血管系统和神经系统都有作用，其中，梓苷、verproside和胡黄连苷等在体外抗癌实验对HepG2肝癌细胞展现出良好的抗癌活性，总环烯醚萜苷对CCL4致小鼠急性肝损伤和醋氨酚致小鼠肝损伤具有良好的保肝活性，因此制备高纯度的环烯醚萜苷类成分显得尤为重要。

目前只有少数文献关于纤毛婆婆纳环烯醚萜苷类成分的提取分离纯化研究，但是由于其提取工艺路线复杂，不适合快速分离和制备出高含量的环烯醚萜苷类成分。

发明内容

为了解决前述问题，本发明提供了一种新的纤毛婆婆纳中环烯醚萜苷类化合物的分离纯化方法，该方法操作简便，能耗低，产品纯度高，适于工业化生产。

本发明提供了一种从纤毛婆婆纳中分离纯化总环烯醚萜苷的方法，包括以下步骤：

(1)取纤毛婆婆纳粉末，采用水饱和正丁醇提取，得提取液；

(2)水洗，减压回收正丁醇相，得总环烯醚萜苷粗提物，溶于水，得水溶液；

(3)采用乙酸乙酯萃取，得萃取后的水溶液，减压回收水相，得总环烯醚萜苷。

步骤(1)中，所述纤毛婆婆纳为玄参科草本植物长果婆婆纳属纤毛婆婆纳(Veronica ciliata Fisch.)的干燥全草。

步骤(1)中，所述纤毛婆婆纳干燥全草经粉碎过40目筛。

步骤(1)中，所述水饱和正丁醇的用量为纤毛婆婆纳粉末的6～10倍v/w。

步骤(1)中，提取的次数为3次，每次12～48h。

步骤(2)中，水洗采用的水的量为步骤(1)所得提取液的1/5～5倍；水洗的次数为2-5次。

步骤(3)中，乙酸乙酯的用量为步骤(2)所得水溶液的1/5～5倍；萃取的次数为2-8次。

本发明还提供了前述方法制备得到的总环烯醚萜苷。

其中，所述总环烯醚萜苷的纯度不低于95％。优选地，其纯度为95.26～98.07％。

在实验中，当采用乙酸乙酯进行环烯醚萜苷提取时，效果不佳，杂质过多，色素含量高，需要进行多次水洗和乙酸乙酯萃取以去除杂质和色素，从而降低了总环烯醚萜苷的得率。而水饱和正丁醇不但能保证提取物杂质含量较少，而且对环烯醚萜苷提取效率高。因此，为达到上述目的，本发明中采用水饱和正丁醇进行提取。

本发明方法可以制备得到高纯度的总环烯醚萜苷，并且制备方法的得率高，操作简便，能耗低，适于工业化生产，应用前景优良。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

具体实施方式

本实施例所用纤毛婆婆纳产地为中国西藏，由西藏藏药厂提供。药品与试剂均购自成都科龙化工试剂厂。

总环烯醚萜苷的纯度由UPLC-PDA检测，色谱条件为：

色谱分析采用Waters ACQUITY UPLCTM系统，配备有柱温箱、四元溶剂管理器、自动进样器、PDA检测器。色谱柱为HSS T3column(100×2.1mm,1.7μm)，柱温为40℃，样品温度为25℃，流速为0.5mL/min，进样量设置为1μL，PDA检测器波长设置为260nm，Empower软件用于数据分析。流动相A为0.1％甲酸加0.25mmol甲酸铵水溶液，B为乙腈，梯度设置为：0-0.8min，10％–25％B；0.8-2.4min，25％–35％B；2.4-2.8min，35％–95％B；2.8-4.8min，95％B；4.81-8min 10％B。

实施例1：一种从纤毛婆婆纳中分离纯化总环烯醚萜苷的方法

1、制备方法

(1)取干燥粉碎的纤毛婆婆纳粉末(过40目筛的粉末)，水饱和正丁醇作为提取溶剂，料液比为1:8，室温浸提，每次24h，一共三次，合并提取液，得水饱和正丁醇提取液；

(2)进行水洗，水与步骤(1)所得提取液的体积比为1:1，水洗次数为3次，减压回收正丁醇相，得固体残留物(为总环烯醚萜苷粗提物)，溶于80倍水(每1g固体残留物溶于80ml得水中)中，得水溶液；

(3)进行乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯与步骤(2)所得水溶液的体积比为1:1，萃取次数为5次，减压回收水相，得到总环烯醚萜苷。

2、检测

经过检测，本发明方法的总环烯醚萜苷得率为4.5％，经UPLC-PDA分析总环烯醚萜苷的纯度达98.07％。

实施例2：一种从纤毛婆婆纳中分离纯化总环烯醚萜苷的方法

1、制备方法

(1)取干燥粉碎的纤毛婆婆纳粉末(过40目筛的粉末)，水饱和正丁醇作为提取溶剂，料液比为1:6，室温浸提，每次48h，一共三次，合并提取液，得水饱和正丁醇提取液；

(2)进行水洗，水与步骤(1)所得提取液的体积比为1:5，水洗次数为5次，减压回收正丁醇相，得固体残留物(为总环烯醚萜苷粗提物)，溶于80倍水(每1g固体残留物溶于80ml得水中)中，得水溶液；

(3)进行乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯与步骤(2)所得水溶液的体积比为1:5，萃取次数为8次，减压回收水相，得到总环烯醚萜苷。

2、检测

经过检测，本发明方法的总环烯醚萜苷得率为5.3％，经UPLC-PDA分析纯度达95.26％。

实施例3：一种从纤毛婆婆纳中分离纯化总环烯醚萜苷的方法

1、制备方法

(1)取干燥粉碎的纤毛婆婆纳粉末(过40目筛的粉末)，水饱和正丁醇作为提取溶剂，料液比为1:10，室温浸提，每次12h，一共三次，合并提取液，得水饱和正丁醇提取液；

(2)进行水洗，水与步骤(1)所得提取液的体积比为5:1，水洗次数为2次，减压回收正丁醇相，得固体残留物(为总环烯醚萜苷粗提物)，溶于80倍水(每1g固体残留物溶于80ml得水中)中，得水溶液；

(3)进行乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯与步骤(2)所得水溶液的体积比为5:1，萃取次数为2次，减压回收水相，得到总环烯醚萜苷。

2、检测

经过检测，本发明方法的总环烯醚萜苷得率为4.9％，经UPLC-PDA分析纯度达96.74％。

对比例：一种从纤毛婆婆纳中分离纯化总环烯醚萜苷的方法

1、制备方法

(1)取干燥粉碎的纤毛婆婆纳粉末(过40目筛的粉末)，乙酸乙酯作为提取溶剂，料液比为1:8，室温浸提，每次24h，一共三次，合并提取液，得水饱和正丁醇提取液；

(2)进行水洗，水与步骤(1)所得提取液的体积比为1:1，水洗次数为6次，减压回收正丁醇相，得固体残留物(为总环烯醚萜苷粗提物)，溶于80倍水(每1g固体残留物溶于80ml得水中)中，得水溶液；

(3)进行乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯与步骤(2)所得水溶液的体积比为1:1，萃取次数为10次，减压回收水相，得到总环烯醚萜苷。

2、检测

经过检测，本发明方法的总环烯醚萜苷得率为2.8％。

综上，本发明方法可以制备得到高纯度的总环烯醚萜苷，并且得率高，操作简便，能耗低，适于工业化生产，应用前景优良。