基于CRISPR/Cas9多基因敲除低转染效率细胞系的新方法

摘要

本发明公开了一种基于慢病毒表达CRISPR/Cas9高效敲除低转染率细胞的新方法。该方法涉及两种慢病毒，一种是表达sgRNA及Cas9的慢病毒，另一种是表达Cre蛋白的慢病毒。将多基因的sgRNA及Cas9同时克隆至慢病毒载体的两个同向loxp之间，在低转染效率的细胞内实现多基因同时敲除，再利用表达Cre的慢病毒，对基因组中整合的Cas9及sgRNA进行有效去除，防止过度表达Cas9及sgRNA造成脱靶效应。本发明结合了慢病毒具备的能够高效感染分裂与非分裂细胞以及loxp‑Cre系统高效去除反应的特点，该系统具有毒性小、基因敲除效率高、准确性高，周期短等特点，对于在低转染效率的细胞系中实现多基因敲除意义重大。