用黑色素及其类似物、前体和衍生物治疗和预防眼部疾病、障碍和病症的方法

摘要

描述了黑色素及其衍生物、其类似物、和其前体在治疗和预防眼部疾病、障碍和病症的应用。将黑色素、或其衍生物、其类似物、或其前体，比如合成黑色素或天然黑色素，通过局部施用或注射的方式施用于所述眼部。可用本文所述方法治疗或预防的眼部疾病、障碍和病症的例子包括充血、黏膜白斑病、角膜血管生成、和圆锥形角膜。

说明书

发明领域

本发明涉及治疗和预防眼部疾病、障碍和病症的方法。

发明背景

黑色素在自然界普遍存在，并且由氮、氧、氢和碳组成。许多年来，黑色素除了被认为是简单的防晒品之外，其本身没有生物或生理功能。由于黑色素能够吸收所有波长的电磁能量，但是它似乎并不释放任何能量，它被认为是最黑暗的分子。该特征是黑色素所独有的，其与热力学定律相矛盾，因为其他能够吸收能量的化合物(尤其是色素)能够释放至少一部分的吸收能。因此，黑色素的电子性能由此成为相当长一段时间关注的焦点。然而，黑色素为人们已知的最为稳定的化合物之一，并且长期以来，似乎黑色素并不能催化任何化学反应、或具有其他的生物或生理功能。

近年来，黑色素通过吸收电磁能(比如，光能)将水裂解为氢和氧的这种固有特性在先前已在美国专利第8,455,145号中报道过。据信，吸收电磁能(比如，可见或不可见的光能)后，黑色素催化水裂解为双原子氢(H₂)、双原子氧(O₂)和电子。虽然水裂解为氢和氧会消耗能量，然而该反应是可逆的，并且在逆向反应中，氧原子在双原子氢的还原下，重新形成为水分子，释放能量。

近来已经证明，尼古丁可以增加个体中α-促黑素细胞激素(α-MSH)的释放或活性，据信，通过在个体中诱导“人工光合作用”，可以有效地治疗不同的疾病(参见，例如，美国专利申请公开号为US 2012/0270907的专利申请)。虽然机制尚未完全了解，但推测α-MSH的释放或活性的增加会增加黑色素的合成。

尽管关于黑色素的生物学功能的认识在日益增长，但是仅在一个有限的能力范围内探索直接施用黑色素的治疗效果。例如，已显示，黑色素是等同于2％的硫酸铜溶液的具有低保护因子的简单防晒品。将黑色素溶液直接注射到兔子的眼前房，显示出增加了眼前房积血的清除期和再出血的发生率，这表明将黑色素注射到眼睛中会对眼前房积血的治疗有负面影响。Lai等.黑色素对兔的外伤性前房积血的作用Arch.Ophthalmol.(1999)177,789-93(Lai et al.“Effect of Melanin on Traumatic Hyphema in Rabbits”Arch.Ophthalmol.(1999)177,789-93.)。然而，据发明人所知，尚未充分研究将黑色素作为治疗剂进行直接施用的效果。

发明概述

目前发现，向个体的眼睛中施用黑色素、或其类似物、其衍生物、或其前体，在治疗和预防眼部疾病、障碍、和病症方面具有有益的治疗效果。

本发明涉及一种通过向个体的眼部施用一组合物来治疗和预防眼部疾病、障碍、和病症的方法，所述组合物包括治疗有效量的黑色素、或其衍生物、其类似物、或其前体。

在一实施方式中，本发明提供了一种治疗或预防个体的眼部疾病、障碍、和病症的方法，所述方法包括向所述个体的眼部施用一组合物来治疗或预防所述眼部疾病、障碍或病症，所述组合物包括治疗有效量的黑色素、或其衍生物、其类似物、或其前体。

在另一实施方式中，本发明提供了一种治疗个体的眼部疾病、障碍或病症的方法，包括向需要治疗的所述个体的眼部局部施用一组合物来治疗所述眼部疾病、障碍或病症，所述组合物包括治疗有效量的黑色素、或其类似物、其衍生物、或其前体。

在另一实施方式中，本发明提供了一种治疗人个体的黏膜白斑病或充血的方法，包括向需要治疗的所述个体的眼部局部施用一水性组合物，所述水性组合物包括治疗有效量的黑色素。

在本发明的优选实施方式中，所述组合物以滴眼剂的形式施用。

在本发明的另一优选实施方式中，向所述个体的所述眼部施用的组合物含有1.5％-10％(w/v)的黑色素、或其衍生物、其类似物、或其前体。

在本发明的另一优选实施方式中，向所述个体的所述眼部施用的组合物含有合成黑色素或天然黑色素。

附图的几个视图的简要说明

当结合附图阅读时，将更好地理解前述发明内容以及本发明的以下详细描述。为了说明本发明的目的，在附图中示出了目前优选的实施例。然而，应当理解，本发明不限于所示的精确排列和手段。在附图中：

图1A和1B显示了在用黑色素治疗之前和之后，在眼睛表面上生长有小白斑(黏膜白斑病)和具有充血(发红)的男性患者(年龄30)的右眼的摄影图像；从上到下示出的图像是以增加放大率的相同视图拍摄的照片，箭头表示所观察到的小白斑生长的位置；图1A：用黑色素治疗之前的眼睛的摄影图像；图1B：用3％黑色素水溶液局部处理后三个半月的眼睛的摄影图像。

发明详述

在背景和整个说明书中引用或描述了各种出版物、文章和专利；这些参考文献各自通过引用的方式并入本文。为了提供本发明的背景，本说明书中包括对文件、行为、材料、装置、文章等的讨论。对于披露或请求保护的任何发明，这种讨论不是承认任何或所有的这些事项构成了现有技术的一部分。

除非另有定义，否则本文所用的所有技术性和科学性术语是本发明相关领域技术人员普遍理解的相同含义。否则，本文所用的某些术语具有如说明书中所阐述的含义。

需注意，如本文和附属的权利要求所用，单数形式的“一”、“一个”、以及“该”包括复数引用，除非上下文另有明确的说明。

本发明涉及一种治疗和预防个体中眼部疾病、障碍和病症的方法。根据本发明的实施方式，所述方法包括向所述个体的眼睛施用一组合物来治疗眼部疾病、障碍或病症，所述组合物包括治疗有效量的黑色素、或其衍生物、其类似物、或其前体。

根据本发明的实施方式，用在本文所述方法中的组合物包括黑色素、或其类似物、其前体、或其衍生物。所述组合物还任选地包括一种或多种药学上可接受的赋形剂。在一优选实施方式中，所述组合物的pH接近生理pH，为约pH7.0-pH7.4。

用在本发明所述方法中的黑色素衍生物和类似物分别包括衍生自黑色素的化合物和与黑色素结构相似的化合物。黑色素的衍生物和类似物的非限制性的例子包括真黑素、褪黑素、神经黑色素、红细胞凝集素和褐色素；芳香族化合物，比如多巴胺、吲哚、多羟基吲哚、腐殖酸、聚吲哚醌、吡咯黑、吲哚黑、苯黑、噻吩黑、苯胺黑、眼色素黑；水合形式的聚醌、多巴黑、肾上腺素黑，儿茶酚黑、4-胺儿茶酚黑。黑色素的前体包括可以通过化学，酶或代谢反应转化为黑色素的化合物，包括(但并不限于)：酚类、氨基酚、或联苯酚，吲哚多酚、醌类、半醌或对苯二酚、L-酪氨酸、L-多巴胺、吗啉、邻苯醌，二吗啉、卟啉黑和蝶呤黑；线性含碳化合物，比如乙炔黑；和碳结构单元，比如富勒烯和石墨。

根据本发明的优选实施方式，用在本发明所述方法中的所述组合物包括黑色素。所用的黑色素可以是天然黑色素或合成黑色素。“天然黑色素”意指分离自天然来源(例如植物或动物)的黑色素。“合成黑色素”意指化学合成的黑色素。

如本文所用，术语“个体”指已经或将要向其施用黑色素、或其类似物、其衍生物、或其前体的任何动物，优选哺乳动物，最优选人。哺乳动物的例子包括人、牛、狗、猫、马、猪、猴，羊和啮齿动物。啮齿动物的例子包括大鼠、小鼠、兔和豚鼠。较佳地，所述个体是人。

如本文所用，术语“眼部疾病、障碍、或病症”意指任何影响眼部的疾病、障碍或病症。眼部疾病、障碍或病症可影响眼的任何部位，包括(但并不限于)：角膜、结膜、眼睑、巩膜(眼白)、视网膜、形成眼表面的上皮组织、或任何可以被认为是眼表面的结构，包括泪膜、蔡氏腺、莫尔氏腺、睑板腺等。所述角膜是在眼睛前面的透明组织，其覆盖虹膜、瞳孔和前房。所述角膜是无血管的，意味着其通常没有血管。所述角膜通常也具有圆形形状。

根据本发明的优选实施方式，待治疗或预防的眼部疾病、障碍或病症可影响眼睛或眼睑的表面。

要用本发明的方法所治疗或预防的眼部疾病、障碍或病症的病因不受限制，并且可以源自感染、过敏或过敏反应、退行性病症、炎性疾病、创伤、外科手术、辐射、刺激(例如，来自药物或隐形眼镜的刺激)、自身免疫疾病或增殖性疾病。所述眼部疾病，障碍或病症可以是急性或慢性的。

根据本发明的实施方式，待治疗或预防的所述眼部疾病、障碍、或病症可导致受影响眼睛的萎缩性变化或营养不良性变化。萎缩性变化倾向于更广泛，由此使得受影响的组织显著丧失其正常能力。营养不良性变化倾向于更局部化，由此使得受影响的组织可具有更正常的外观，只有组织的一些部分受到显著影响。例如，萎缩性疾病，障碍或病症可以影响整个结膜组织、整个角膜和/或整个眼睑，而营养不良性疾病，障碍或病症仅影响一部分结膜组织、一部分角膜和/或一部分眼睑。萎缩性变化倾向于具有最少的炎性成分，而营养不良性变化通常至少在受影响的组织区域中具有显著的炎性成分。

影响所述角膜的眼部疾病、障碍或病症的非限制性例子包括角膜血管生成或新血管形成；角膜炎(角膜的炎症)；和角膜扩张疾病(比如，圆锥形角膜)。影响结膜的眼部疾病、障碍或病症的非限制性例子包括结膜炎。眼部疾病，障碍和病症的其它例子包括(但并不限于)：充血；化学灼伤(比如，通过酸性或碱性试剂)、毒物(天然或合成的)、和昆虫叮咬眼部；伴随泪膜改变的疾病；溃疡(比如，角膜溃疡)；斯耶格伦综合征；眼部被碱和其他化学药品烧伤；角膜移植排斥；结膜和眼睑的过敏反应；眼部手术；炎症，比如结膜炎或眼睑炎；眼部感染，包括真菌、病毒和细菌感染；自身免疫性疾病；增殖性疾病；黏膜白斑病(形成白斑)、血管疾病(例如，视网膜血管疾病)和钙化。

如本文所用，术语“充血”通常指流向组织的血流增加，导致血流增加的组织发红。根据本发明的实施方式，充血是指以慢性和急性形式增加流向眼睛的血流量，导致增强眼睛发红的程度。眼部充血可以自行(原发性)发生，或者其可以是伴随一种或多种其它眼部疾病、障碍或病症(继发性)的症状。充血也可以是急性或慢性的。

本文所用的“血管生成”和“新血管形成”是指新血管从预先存在的血管形成的生理过程。本文所用的术语“角膜血管生成”和“角膜新血管形成”是指角膜中一个或多个新血管的生长。因为角膜是无血管的，即，不包含任何血管，因此角膜中的任何新血管通常产生于血管从眼睛的角膜缘血管丛区(limbal vascular plexus area)生长到角膜中。

如本文所用，术语“角膜扩张”和“角膜扩张疾病”指角膜的非炎性疾病，其特征在于，角膜的不规则性导致散光引起的视力障碍。角膜扩张指包括圆锥形角膜、透明边缘变性、球形角膜和后圆锥形角膜的一组病症，尤其在人类中最普遍的是圆锥形角膜。根据本发明的一个优选实施方式，角膜扩张疾病是圆锥形角膜或圆锥形角膜的变体，比如球形角膜、不规则散光、顿挫型圆锥角膜(forme frustre keratoconus)、高度散光、瘢痕性不规则散光、原发性扩张和继发性扩张。角膜扩张可以是炎性或非炎性的。术语“圆锥形角膜”是指影响角膜结构的疾病。在圆锥形角膜中，角膜的形状从圆形缓慢变化为向外凸出的圆锥形，逐渐形成突出物。也可将圆锥形角膜描述为“形状丧失”的角膜。

如本文所用，术语“结膜炎”指例如，由于感染或过敏反应导致的结膜炎症。结膜炎更常被称为“红眼病”。

如本文所用，术语“黏膜白斑病”指在黏膜表面出现小白斑或斑块的黏膜疾病。黏膜白斑病通常与增殖性疾病(例如癌症)或受影响区域中不受控制的细胞或组织生长的风险增加相关。白斑病最常发生在眼部，其中一种类型的上皮组织转变成另一种类型的上皮组织，例如在结膜转变为角膜上皮的区域，称为角膜－巩膜缘。

如本文所用，术语“治疗有效量”指引发所需的生物或临床效应所需的有疗效的活性成分的量。在本发明的一个实施方式中，“治疗有效量”是治疗眼部疾病、障碍或病症所需的黑色素、或其类似物、其前体或其衍生物的量。在本发明的另一实施方式中，“治疗有效量”是预防眼部疾病、障碍或病症所需的黑色素、或其类似物、其前体、或其衍生物的量。

如本文所用，术语“治疗”、“治疗的”和“治疗性”指施用治疗有效量的黑色素、或其类似物、或其前体、或其衍生物，从而减少、减轻或减缓眼部疾病、障碍或病症的进展或发展。在另一实施方式中，“治疗”、“治疗的”和“治疗性”指减轻、减缓眼部疾病、障碍或病症的进程，或改善眼部疾病、障碍或病症的一种或多种体征或症状。在本发明的具体实施方式中，“治疗”、“治疗的”和“治疗性”指减少或抑制角膜中新血管的生长；减缓角膜结构变形的进展；减轻眼部的发红和/或炎症；和减轻或消除黏膜白斑病相关的白斑。

如本文所用，术语“预防”、“预防的”、和“预防性”指在眼部疾病、障碍、病症发作之前施用治疗有效量的黑色素、或其类似物、或其前体、或其衍生物，从而使得所述眼部疾病、障碍或病症一并被预防，发生时间延迟、或仍然发生，但是比不施用黑色素、或其类似物、或其前体、或其衍生物的程度减轻。在本发明的具体实施方式中，“预防”、“预防的”、和“预防性”指抑制或减缓角膜血管生产或角膜扩张疾病的发展和进程。

在一实施方式中，本发明提供了一种治疗或预防个体眼部疾病、障碍或病症的方法，包括向所述个体的眼睛施用一组合物来治疗或预防所述眼部疾病、障碍或病症，所述组合物包括治疗有效量的黑色素、或其衍生物、其类似物、或其前体。

鉴于本发明公开的内容，可用本发明的方法治疗或预防任何眼部疾病、障碍或病症。根据本发明的优选实施方式，所需治疗或预防的眼部疾病、障碍或病症影响形成眼睛前部(眼前)的结构，比如眼角膜，包括(但并不限于)：角膜血管生成和角膜扩张疾病，比如圆锥形角膜；以及影响眼睑的具有炎症、感染、毒性或变性病因的角膜疾病和其他疾病。其它优选的需治疗或预防的眼部疾病、障碍和病症包括那些影响结膜的病症，尤其是结膜炎；充血；和黏膜白斑病。

根据本发明的实施方式，可用本领域已知的任何方法向个体的眼睛施用组合物，包括(但并不限于)：局部施用和注射。注射可以是结膜下注射(即，在结膜下)或眼内注射。在一优选实施方式中，所述组合物通过，例如，滴眼剂或擦拭的方式局部施用。

本发明的方法中所用的组合物可以以任何合适的形式施用眼睛。适于注射的组合物包括(但并不限于)：液体组合物，比如溶液和悬浮液。适于局部施用的组合物包括(但并不限于)：溶液、悬浮液、滴眼剂、喷雾制剂、凝胶剂、软膏剂、霜剂和乳剂。在本发明的一优选实施方式中，所述组合物为溶液，并且较佳地，水溶液。本发明的方法中所用的水溶液可通过，例如，将黑色素与水混合的方式进行制备。黑色素和水可混合在一起从而形成均匀的水溶液。在某些实施方式中，在本发明的方法中所用的水溶液仅包含黑色素和水。

在本发明的一优选实施方式中，所述组合物被制备用于眼睛的局部施用。在本发明的一特别优选的实施方式中，所述组合物为水溶液，以滴眼剂的形式进行局部施用。

根据本发明的实施方式，所述组合物可施用到眼部的任何部分，并且优选施用到受影响的眼部，例如，角膜、结膜、眼睑等。例如，为了治疗角膜疾病，所述组合物优选施用于角膜。作为另一说明性的例子，在影响眼部的毒物或其他毒素深入渗透到眼部的例子中，所述组合物可以以眼内注射的方式施用，比如，施用到眼部的前房或玻璃体腔。

在本发明的方法中，施用于个体眼部的组合物中的黑色素、或其类似物、其前体、或其衍生物的浓度在约1.5％到约10％(w/v)的范围内变化，比如，约1.5％,2.0％、3.0％、4.0％、5.0％、6.0％、7.0％、8.0％、9.0％或10.0％(w/v)。在一优选实施方式中，黑色素、或其类似物、其衍生物、或其前体的浓度为3％(w/v)。

根据本发明的实施方式，含有治疗有效量的黑色素的组合物可施用一次，或可施用不止一次。例如，所述组合物可以每日施用一次，每日施用两次，每周施用一次或每月施用一次。在严重的情况下，所述组合物可以每十五分钟施用一次，并且一旦有改善，施用的间隔时间可以根据需要增加到每半小时、每小时或每两小时等。还根据本发明的实施方式，组合物可以在眼部疾病、障碍或病症发作之前施用，以便预防眼部疾病、障碍或病症，或在眼部疾病、障碍或病症发作之后施用，以便治疗所述眼部疾病、障碍或病症。黑色素通常耐受性好。然而，可能产生一些副作用，比如眼睑肿胀、刺激或炎症，结膜或角膜或结膜下出血。

根据本发明的实施方式，组合物中的黑色素、或其类似物、其前体、或其衍生物的治疗有效量，组合物的施用量，以及施用频率都可以根据多种因素而变化，比如，需治疗或预防的眼部疾病、障碍或病症，眼部疾病、障碍或病症的严重性、组合物施用个体的年龄和健康状况等。其完全在本领域普通技术人员的能力范围内优化每个参数，以便根据本发明公开的内容获得预期的临床结果。

例如，在本发明的某个实施方式中，每次施用约50μL至500μL，优选50μL至200μL，更优选150μL至200μL的包含1.5％(w/v)至10％w/v)的黑色素或其类似物、其衍生物、或其前体。在本发明的具体实施方式中，每次施用1－5滴(每滴约50μL)的组合物，比如，一滴、两滴、三滴、四滴或五滴。

作为在本发明的方法中可以遵循用于治疗个体的急性眼部疾病、障碍或病症的给药方案的说明性和非限制性例子，在治疗开始时，每三十分钟施用约50μL至100μL的3％黑色素水溶液。根据病症的严重程度，黑色素水溶液的施用频率可调整为每小时一次，每两小时一次等。作为另一说明性的例子，可每日施用四至六次约50μL至100μL的3％的黑色素水溶液，从而治疗慢性眼部疾病、障碍或病症。可根据病症的严重程度再次调整施用频率。

在一具体的实施方式中，本发明提供了一种治疗个体眼部疾病、障碍或病症的方法，包括向需要治疗的个体的眼部局部施用一组合物来治疗所述眼部疾病、障碍或病症，所述组合物包括治疗有效量的黑色素或其类似物、其衍生物、或其前体。

在另一具体的实施方式中，本发明提供了一种治疗人的黏膜白斑病或充血的方法，包括向需要治疗的所述个体的眼部局部施用一水性组合物，所述组合物包括治疗有效量的黑色素。根据本发明的实施方式，所述充血可以是原发性或继发性的充血。

不希望束缚于理论，黑色素及其衍生物、其类似物和其前体有效治疗眼部疾病、障碍或病症的的一种可能的解释是，向所述眼部施用黑色素增强了眼部的“人工光合作用”。如上所述，通常认为，黑色素可将光能转化为化学能，类似于植物在光合作用期间使用色素叶绿素将光能转化为化学能的过程。类似地，通过黑色素将光能转化为化学能被称为“人工光合作用”。因此认为，直接向眼部施用黑色素也诱导了眼部的“人工光合作用”，从而增加了水分子的裂解和重构，进而增加了能量的释放。所增加的能量使得周围细胞燃烧许多重要的细胞内发生的生物反应变得可能，比如细胞修复所需的那些生物反应等。

再次不希望束缚于任何理论，黑色素是相对大的生物分子，从而在某些情况下使得其起到螯合剂的功能。因此，还认为黑色素螯合或灭活常常存在于患病组织中的某些生物分子和外源分子的能力增加了组织的纯度，并提高了黑色素的解离水的效率。这具有进一步增强了由增加的“人工光合作用”所带来的任何有益的治疗效果的效果。

通过参考下述非限制性的实施例来更好的理解本发明，但是本领域技术人员将容易理解，实施例仅用来描述本发明，不应以任何方式来限制本发明。

实施例

实施例1用黑色素局部治疗眼部的黏膜白斑病和充血

男性患者，年龄30，在其右眼(黏膜白斑病)的表面长有小白斑，还具有充血(发红)(见图1A)。假定黏膜白斑病是过量暴露于太阳和化学品的结果。患者最初用局部可的松滴剂治疗，可的松治疗持续两个月。然而，用局部可的松滴剂没有观察到改善，因此由于缺乏改善而停止可的松治疗。

在停止可的松治疗后一个月，以滴眼剂的形式向患者局部施用3％黑色素水溶液(w/v)进行治疗。通过混合水和化学合成的黑色素(合成黑色素)来制备水溶液。水溶液不含任何其它成分。每次施用3至4滴(每滴约50μL)的3％黑色素水溶液，并且以约6小时的间隔每天施用溶液四次。在局部用黑色素溶液治疗约三个半月后，观察到显著改善。在整个治疗过程中使用相同的给药方案。尤其显著减轻由充血引起的发红，并且肉眼再也没有观察到指征黏膜白斑病的小白斑(见图1B)。

上述实验结果表明，向眼部局部施用黑色素可有效治疗眼部充血，尤其是人的眼部充血。上述实验结果还表明，向眼部局部施用黑色素可有效治疗影响眼部表面的疾病，比如，结膜疾病，包括黏膜白斑病，尤其是人的黏膜白斑病。

实施例2局部施用黑色素以预防角膜血管生成和角膜扩张

使用角膜血管生成和角膜转移性疾病的大鼠模型(例如圆锥形角膜)来证明黑色素在预防眼部疾病、障碍和病症中的功效。在大鼠模型中，将不同浓度的苯酚施用于大鼠的角膜以诱导角膜血管生成和/或角膜扩张疾病。通常，与诱导角膜扩张疾病(尤其是，圆锥形角膜)所需的浓度相比，较低浓度的苯酚诱导角膜血管生成。参见国际申请号为PCT/IB2015/000822的专利申请，其公开了角膜血管生成和角膜扩张疾病的动物模型，以及制备这种动物模型的方法。

更具体地，如国际申请号为PCT/IB2015/000822的专利申请中所述，通过混合苯酚和水从而制备浓度为0.1M、0.5M、1.0M、3.0M、5.6M或8.5M的苯酚水溶液。然后将溶液加热至100℃灭菌15分钟。然后，将10μL的无菌苯酚溶液局部施用于两个月大的Wistar大鼠的右眼角膜中心。用每种测试浓度的苯酚处理五只大鼠，使得苯酚溶液吸收到眼中，并仅施用一次。在施用苯酚溶液之前，角膜中没有可见的血管。然而，在施用苯酚水溶液一周后，用各种测试浓度的苯酚溶液处理每组的至少一只大鼠，在角膜中开始形成新的血管。在所测试的较高浓度的苯酚(例如，3.0M、5.6M和8.5M)作用下，在一些大鼠中也观察到了与角膜扩张相关的变化，特别是圆锥形角膜。结果总结在如下表1中。

表1在大鼠中用苯酚诱导角膜血管生成和圆锥形角膜

随后基于上述向眼部施用苯酚来诱导角膜血管生成和/或角膜扩张疾病的观察结果设计额外实验来测试黑色素在预防眼部疾病、障碍或病症的效果。通过混合苯酚和水从而制备浓度为0.1M至8.5M苯酚的苯酚水溶液，包括0.1M、0.5M、1.0M、3.0M、6.5M和8.5M。然后将溶液加热至100℃灭菌15分钟。然后，将10μL的预期浓度的苯酚溶液仅局部施用于五只雄性Wistar大鼠(两个月大)的右眼角膜中心，从而诱导角膜血管生成和/或圆锥形角膜。由此苯酚溶液吸收到眼中，并仅施用一次。施用苯酚后5分钟，将20μL的3％(w/v)黑色素水溶液(由混合水和黑色素制得)仅局部施用于每只大鼠的右眼。仅施用一次黑色素水溶液。用苯酚处理右眼的所有大鼠，也同样在右眼接受黑色素水溶液的处理。因此将每只大鼠的左眼当作对照，用于诱导自发的角膜血管生成和/或圆锥形角膜。

在施用苯酚溶液和黑色素水溶液之前，在大鼠的任一只眼睛的角膜中均无可见的血管。施用后一周，即使右眼用苯酚处理，在任何大鼠的右眼中均没有观察到施用苯酚后通常会观察到的变化，例如，伴随角膜血管生成和圆锥形角膜的角膜新血管和角膜变形。鉴于如上所述的表明将苯酚施用于大鼠的眼睛可诱导角膜血管生成和/或角膜扩张疾病的之前实验，这是出乎意料的。

上述实验结果表明，向眼部局部施用黑色素可用于预防眼部疾病、障碍和病症，比如，角膜血管生成和角膜扩张疾病，尤其是哺乳动物的角膜血管生成和角膜扩张疾病。

实施例3结膜下注射黑色素

测试结膜下注射黑色素到健康大鼠的眼中的效果。将大鼠全身麻醉，通过腹腔内注射巴比妥类药物。在研究中使用5只大鼠。然后，将500μL的3％黑色素水溶液通过结膜下注射的方式施用于每只大鼠的右眼，左眼未处理。

在注射后，处理的眼睛立即表现出由于注射溶液而产生的尺寸增加和一些变形。然而，在注射后二十四小时，注射部位的眼组织上没有观察到可见的标记，也没有观察到任何明显的炎症、刺激或结膜下出血的迹象。除了由注射引起的初始变形外，这些观察到的效果类似于将黑色素局部施用到健康大鼠的角膜后所观察到的效果。

上述实验的这些结果表明，结膜对黑色素注射的反应类似于角膜对局部施用黑色素的反应，这表明局部施用黑色素可有效治疗结膜疾病。

应理解，本领域技术人员可以在不背离宽广的本发明概念的情况下，对上述实施例进行改动。因此，应理解，本发明并不受所公开的这些具体实施例的限制，而应覆盖落于由所附权利要求限定的本发明的主旨和范围之内的这些改动形式。