一种银杏达莫注射液及其制备方法

摘要

本发明属于化药技术领域，具体涉及一种银杏达莫注射液及其制备方法，该注射液由下述原料制备而成：银杏叶提取物(以银杏总黄酮计)10重量份，双嘧达莫20重量份，聚山梨酯‑80，维生素C，1，2‑丙二醇1040重量份，其中聚山梨酯‑80与双嘧达莫的重量比为0.02‑0.03:1，维生素C与双嘧达莫重量比为1‑2：1，pH调节剂40‑60重量份。该银杏达莫注射液中吐温‑80用量范围为0.004％‑0.006％，显著低于吐温‑80在注射剂的合理用量范围(0.1％～0.2％)；同时，本发明银杏达莫注射液中银杏酸含量小于0.5ng/ml；稳定性研究表明，本发明银杏达莫注射液具有更好的稳定性，具有更加优秀的产品质量。

说明书

技术领域

本发明属于化学药物领域，具体涉及一种活性成分为银杏叶提取物和双嘧达莫的注射液及其制备方法。

背景技术

银杏达莫注射液是由银杏叶提取物和双嘧达莫组成的复方制剂，其中银杏总黄酮具有扩张冠脉血管、脑血管，增加脑血流量，促进血液循环，改善脑缺血缺氧产生的症状和提高记忆功能的作用，而双嘧达莫可以抑制血小板第一相和第二相聚集，高浓度(50μg/mL)可抑制血小板释放，因而具有抗血栓形成的功效，双嘧达莫与银杏叶提取物联合应用能协调改善脑组织血流量。随着医药科技的发展和对传统医药的创新应用，具有活血化瘀功效的银杏达莫注射液目前已广泛用于预防和治疗冠心病、血栓栓塞性疾病(脑梗死、心肌梗死等)，是神经内、外科和心血管内科临床诊疗方案中的常见药物。近年来又有研究发现银杏达莫注射液治疗糖尿病周围神经病变、椎-基底动脉供血不足、原发性肾病综合征等其他作用，其适用范围不断扩大。

随着该药物临床应用范围不断扩大，其不良反应率也随着增加，银杏达莫注射液是一种复方注射剂，其不良反应具有多发性和普遍性；因此，提高银杏达莫注射液的质量标准，从药学研究方面，提高其稳定性，同时，医护人员对用药的各环节引起重视，遵规操作，加强监护，共同努力，才能在达到临床治疗效果的同时最大程度降低不良反应的发生几率，保证银杏达莫注射液的安全、有效、合理应用。

现有临床应用的银杏达莫注射液，由银杏叶提取物、双嘧达莫和辅料制备而成，该制剂在临床应用多年，是一种安全、有效、质量可控的注射制剂；中国专利CN 104887722 A，该专利认为：吐温-80较高的的溶血性、刺激性和组胺释放性给人体带来了较高的安全隐患，从而采用低组胺释放、低溶血作用、较高的生理耐受性的聚乙二醇-12-羟基硬脂酸酯代替吐温80，但该注射制剂中聚乙二醇-12-羟基硬脂酸酯的用量为0.05-2g/100ml，在注射制剂中用量较大，并且没有进行更为深入的质量研究，这种替换是否符合质量要求有待商榷(进一步，在药学领域，新的药用辅料的替换，需要若干试验证明可行性)。专利文献CN1676160A 的制备工艺中加入5％乙醇和11％丙二醇溶解药物及辅料，不但生产环境防爆防燃，并且加入乙醇，增加心脏病患者的心脏负担。专利文献CN1102670670A中添加多种辅料，增加影响产品安全性的因素。

发明内容

基于上述原因，申请人经过多年的研究，得到一种新的银杏达莫注射液，该银杏达莫注射液中聚山梨酯-80用量范围为0.004％-0.006％，显著低于聚山梨酯-80在注射剂的合理用量范围(0.1％-0.2％)；同时，本发明银杏达莫注射液中银杏酸含量小于0.5ng/ml；稳定性研究表明，本发明银杏达莫注射液具有更好的稳定性，具有更加优秀的产品质量。

本发明通过下述技术方案实现的：

一种银杏达莫注射液，该注射液由下述原辅料制备而成：

银杏叶提取物(以银杏总黄酮计)10重量份，双嘧达莫20重量份，聚山梨酯-80，维生素C，1，2-丙二醇1040重量份，其中聚山梨酯-80与双嘧达莫的重量比为0.02-0.03:1，维生素C与双嘧达莫重量比为1-2：1，pH调节剂40-60重量份。

优选的银杏达莫注射液由下述原辅料制备而成：

银杏叶提取物(以银杏总黄酮计)10重量份，双嘧达莫20重量份，聚山梨酯-80，维生素C，1，2-丙二醇1040重量份，其中聚山梨酯-80与双嘧达莫的重量比为0.025:1，维生素C与双嘧达莫重量比为1.5：1，pH调节剂40-60重量份。

其中所述pH调节剂为碳酸钠和L-组氨酸。

其中所述的pH调节剂为碳酸钠与L-组氨酸的重量比为1:0.055-0.085。

其中所述的pH调节剂为碳酸钠与L-组氨酸的重量比为1:0.070。

其中该注射液由下述原料制备而成：

银杏叶提取物(以银杏总黄酮计)10重量份，双嘧达莫20重量份，聚山梨酯-80，维生素C，1，2-丙二醇1040重量份，其中聚山梨酯-80与双嘧达莫的重量比为0.02-0.03:1，维生素C与双嘧达莫重量比为1-2：1，pH调节剂为碳酸钠和L-组氨酸40-60重量份，其中碳酸钠与L-组氨酸的重量比为1:0.055-0.085。

该注射液制备方法为：

(1)取1，2-丙二醇和注射用水，加入双嘧达莫，溶解完全，得到溶液Ⅰ；再取注射用水，加入聚山梨酯-80、维生素C，溶解完全，得到溶液Ⅱ；将溶液Ⅰ、溶液Ⅱ合并后，加入三分之二重量的L-组氨酸，加入注射用水混合均匀，得到溶液Ⅲ；

(2)将溶液Ⅲ中加入g/ml的浓度为0.1％的活性炭，加热到80℃，保温30分钟，降至60℃，经0.45μm微孔滤膜脱炭过滤，得到溶液Ⅳ；

(3)取银杏叶提取物，加入溶液Ⅳ中，加注射用水，先加入剩余的三分之一的L-组氨酸，再加入碳酸钠，加热75-85℃保温25-35分钟，降温至55-65℃，经0.22μm微孔滤膜过滤，加注射用水，灌装，于115℃灭菌30分钟或45分钟，即得。

该注射液制备方法为：

(1)取1，2-丙二醇和注射用水，加入双嘧达莫，溶解完全，得到溶液Ⅰ；再取注射用水，加入聚山梨酯-80、维生素C，溶解完全，得到溶液Ⅱ；将溶液Ⅰ、溶液Ⅱ合并后，加入三分之二重量的L-组氨酸，加入注射用水混合均匀，得到溶液Ⅲ；

(2)将溶液Ⅲ中加入g/ml的浓度为0.1％的活性炭，加热到80℃，保温30分钟，降至60℃，经0.45μm微孔滤膜脱炭过滤，得到溶液Ⅳ；

(3)取银杏叶提取物，加入溶液Ⅳ中，加注射用水，先加入剩余的三分之一的L-组氨酸，再加入碳酸钠，加热80℃保温30分钟，降温至60℃，经0.22μm微孔滤膜过滤，加注射用水，灌装，于115℃灭菌30分钟或45分钟，即得。

所述银杏达莫注射液在制备治疗预防和治疗冠心病、血栓栓塞性疾病的药物中应用。

其中银杏达莫注射液中银杏酸含量小于0.5ng/ml。

上述原料、辅料来源见表1：

表1原辅料来源

上述所述银杏叶提取物的质量标准见表2：

表2银杏叶提取物质量标准

以下以具体实施例来说明本发明的技术方案，但本发明的保护范围不限于此。

本说明书实施例所述的内容仅仅是对发明构思的实现形式的列举，本发明的保护范围不应当被视为仅限于实施例所陈述的具体形式，本发明的保护范围也及于本领域技术人员根据本发明构思所能够想到的等同技术手段。尽管以下本发明的实施方案进行了描述，但本发明并不局限于上述的具体实施方案和应用领域，下述的具体实施方案仅仅是示意性的、指导性的，而不是限制性的。本领域的普通技术人员在本说明书的启示下和在不脱离本发明权利要求所保护的范围的情况下，还可以做出很多种的形式，这些均属于本发明保护之列。

本发明下述试验，是在多次创造性试验的基础上，以本发明所要保护的技术方案为基础，总结的研发人员的结论性试验。

制备实施例

实施例1

制剂处方为：银杏叶提取物(以银杏总黄酮计)10g，双嘧达莫20g，聚山梨酯-800.4g，维生素C 20g，1，2-丙二醇1040g，pH调节剂为碳酸钠和L-组氨酸40g，其中碳酸钠37.91g，L-组氨酸2.09g。

该注射液制备方法为：

(1)取1，2-丙二醇和注射用水，加入双嘧达莫，溶解完全，得到溶液Ⅰ；再取注射用水，加入聚山梨酯-80、维生素C，溶解完全，得到溶液Ⅱ；将溶液Ⅰ、溶液Ⅱ合并后，加入1.394g的L-组氨酸，加入注射用水混合均匀，得到溶液Ⅲ；

(2)将溶液Ⅲ中加入g/ml的浓度为0.1％的活性炭，加热到80℃，保温30分钟，降至60℃，经0.45μm微孔滤膜脱炭过滤，得到溶液Ⅳ；

(3)取银杏叶提取物，加入溶液Ⅳ中，加注射用水，先加入0.696g的L-组氨酸，再加入碳酸钠，加热75℃保温35分钟，降温至55℃，经0.22μm微孔滤膜过滤，加注射用水至10000ml，灌装1000支，于115℃灭菌45分钟，即得银杏达莫注射液。

实施例2

制剂处方为：银杏叶提取物(以银杏总黄酮计)10g，双嘧达莫20g，聚山梨酯-800.6g，维生素C 40g，1，2-丙二醇1040g，pH调节剂为碳酸钠和L-组氨酸60g，其中碳酸钠55.3g与L-组氨酸4.7g。

该注射液制备方法为：

(1)取1，2-丙二醇和注射用水，加入双嘧达莫，溶解完全，得到溶液Ⅰ；再取注射用水，加入聚山梨酯-80、维生素C，溶解完全，得到溶液Ⅱ；将溶液Ⅰ、溶液Ⅱ合并后，加入3.13gL-组氨酸，加入注射用水混合均匀，得到溶液Ⅲ；

(2)将溶液Ⅲ中加入g/ml的浓度为0.1％的活性炭，加热到80℃，保温30分钟，降至60℃，经0.45μm微孔滤膜脱炭过滤，得到溶液Ⅳ；

(3)取银杏叶提取物，加入溶液Ⅳ中，加注射用水，先加入1.57gL-组氨酸，再加入碳酸钠，加热85℃保温25分钟，降温至65℃，经0.22μm微孔滤膜过滤，加注射用水10000ml，灌装1000支，于115℃灭菌45分钟，即得银杏达莫注射液。

实施例3

制剂处方为：银杏叶提取物(以银杏总黄酮计)10g，双嘧达莫20g，聚山梨酯-800.5g，维生素C 30g，1，2-丙二醇1040g，pH调节剂为碳酸钠和L-组氨酸50g，其中碳酸钠46.73g，L-组氨酸3.27g。

该注射液制备方法为：

(1)取1，2-丙二醇和注射用水，加入双嘧达莫，溶解完全，得到溶液Ⅰ；再取注射用水，加入聚山梨酯-80、维生素C，溶解完全，得到溶液Ⅱ；将溶液Ⅰ、溶液Ⅱ合并后，加入2.18gL-组氨酸，加入注射用水混合均匀，得到溶液Ⅲ；

(2)将溶液Ⅲ中加入g/ml的浓度为0.1％的活性炭，加热到80℃，保温30分钟，降至60℃，经0.45μm微孔滤膜脱炭过滤，得到溶液Ⅳ；

(3)取银杏叶提取物，加入溶液Ⅳ中，加注射用水，先加入1.09gL-组氨酸，再加入碳酸钠，加热80℃保温30分钟，降温至60℃，经0.22μm微孔滤膜过滤，加注射用水，灌装1000支，于115℃灭菌45分钟，即得银杏达莫注射液。

实施例4

制剂处方为：银杏叶提取物(以银杏总黄酮计)10g，双嘧达莫20g，聚山梨酯-800.5g，维生素C 30g，1，2-丙二醇1040g，pH调节剂为碳酸钠和L-组氨酸50g，其中碳酸钠46.73g，L-组氨酸3.27g。

该注射液制备方法为：

(1)取1，2-丙二醇和注射用水，加入双嘧达莫，溶解完全，得到溶液Ⅰ；再取注射用水，加入聚山梨酯-80、维生素C，溶解完全，得到溶液Ⅱ；将溶液Ⅰ、溶液Ⅱ合并后，加入2.18gL-组氨酸，加入注射用水混合均匀，得到溶液Ⅲ；

(2)将溶液Ⅲ中加入g/ml的浓度为0.1％的活性炭，加热到80℃，保温30分钟，降至60℃，经0.45μm微孔滤膜脱炭过滤，得到溶液Ⅳ；

(3)取银杏叶提取物，加入溶液Ⅳ中，加注射用水，先加入1.09gL-组氨酸，再加入碳酸钠，加热80℃保温30分钟，降温至60℃，经0.22μm微孔滤膜过滤，加注射用水，灌装2000支，于115℃灭菌30分钟，即得银杏达莫注射液。

实施例5

制剂处方为：银杏叶提取物(以银杏总黄酮计)10g，双嘧达莫20g，聚山梨酯-800.44g，维生素C 24g，1，2-丙二醇1040重量份，pH调节剂为碳酸钠和L-组氨酸45g，其中碳酸钠42.45g，L-组氨酸2.55g。

注射液的制备方法为：

(1)取1，2-丙二醇和注射用水，加入双嘧达莫，溶解完全，得到溶液Ⅰ；再取注射用水，加入聚山梨酯-80、维生素C，溶解完全，得到溶液Ⅱ；将溶液Ⅰ、溶液Ⅱ合并后，加入1.70g的L-组氨酸，加入注射用水混合均匀，得到溶液Ⅲ；

(2)将溶液Ⅲ中加入g/ml的浓度为0.1％的活性炭，加热到80℃，保温30分钟，降至60℃，经0.45μm微孔滤膜脱炭过滤，得到溶液Ⅳ；

(3)取银杏叶提取物，加入溶液Ⅳ中，加注射用水，先加入0.85g的L-组氨酸，再加入碳酸钠，加热80℃保温30分钟，降温至60℃，经0.22μm微孔滤膜过滤，加注射用水，灌装2000支，于115℃灭菌30分钟，即得银杏达莫注射液。

实施例6

银杏叶提取物(以银杏总黄酮计)10g，双嘧达莫20g，聚山梨酯-80 0.56g，维生素C36g，1，2-丙二醇1040g，pH调节剂为碳酸钠和L-组氨酸55g，其中碳酸钠50.93g，L-组氨酸4.07g。

注射液的制备方法为：

(1)取1，2-丙二醇和注射用水，加入双嘧达莫，溶解完全，得到溶液Ⅰ；再取注射用水，加入聚山梨酯-80、维生素C，溶解完全，得到溶液Ⅱ；将溶液Ⅰ、溶液Ⅱ合并后，加入2.713g的L-组氨酸，加入注射用水混合均匀，得到溶液Ⅲ；

(2)将溶液Ⅲ中加入g/ml的浓度为0.1％的活性炭，加热到80℃，保温30分钟，降至60℃，经0.45μm微孔滤膜脱炭过滤，得到溶液Ⅳ；

(3)取银杏叶提取物，加入溶液Ⅳ中，加注射用水，先加入1.357g的L-组氨酸，再加入碳酸钠，加热80℃保温30分钟，降温至60℃，经0.22μm微孔滤膜过滤，加注射用水，灌装2000支，于115℃灭菌30分钟，即得银杏达莫注射液。

制备实施例包括但不限于上述。

一、对比试验：

低温循环：取不同银杏达莫注射液10支，1～10℃放置2天，再于40℃放置两天为1次循环，循环三次。

对比例1：制剂处方为：银杏叶提取物(以银杏总黄酮计)10g，双嘧达莫20g，聚山梨酯-80 20g，维生素C50g，1，2-丙二醇1040g，pH调节剂氢氧化钠。

(1)取1，2-丙二醇和注射用水，加入双嘧达莫，溶解完全，得到溶液Ⅰ；再取注射用水，加入聚山梨酯-80、维生素C，溶解完全，得到溶液Ⅱ；将溶液Ⅰ、溶液Ⅱ合并后，加入注射用水混合均匀，得到溶液Ⅲ；

(2)将溶液Ⅲ中加入g/ml的浓度为0.1％的活性炭，加热到80℃，保温30分钟，降至60℃，经0.45μm微孔滤膜脱炭过滤，得到溶液Ⅳ；

(3)取银杏叶提取物，加入溶液Ⅳ中，加注射用水至8000ml，用6mol/L氢氧化钠溶液调pH至4.1-4.5，加热80℃保温30分钟，降温至60℃，经0.22μm微孔滤膜过滤，加注射用水至10000ml，灌装1000支，于115℃灭菌45分钟，即得银杏达莫注射液。

对比例2：制剂处方为：银杏叶提取物(以银杏总黄酮计)10g，双嘧达莫20g，聚山梨酯-80 20g，维生素C50g，1，2-丙二醇1040g，pH调节剂碳酸钠和L-精氨酸(重量比1:1)。

注：上述试验以及本发明实施例银杏叶提取物和双嘧达莫为同一批次原料。

【含量测定】

银杏总黄酮

色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为充填剂：以0.4％磷酸溶液-甲醇(50：50)为流动相：流速为1.2ml/min：检测波长为360nm，理论板数按槲皮素峰计算应不低于1500，重复进样5次，相对标准偏差(RSD)不大于2.0％。

对照品溶液的制备精密称取槲皮素对照品约12mg，置200ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。

供试品溶液的制备精密量取本品25ml，加入硫酸溶液(5→100)15ml，加甲醇20ml，置水浴上回流4小时，放冷，移入100ml容量瓶中，加甲醇冲洗并至刻度，摇匀，经滤膜(孔径不得大于0.45μm)滤过。

测定法精密量取对照品溶液及供试品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，其中最大的三个峰，按保留时间依次为槲皮素(Q)、山奈酚(K)、异鼠李素(I)，以外标法计算Q、K、I,以下式计算总黄酮的含量。

Q×2.50+K×2.59+I×2.44

萜类内酯

色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：甲醇-水系统(28:72)；流速：0.80ml/min；温度：35℃；示差折光检测器(RID)，进样体积10μL。采用外标法计算样品浓度。

对照品溶液的制备分别精密称定对照品银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C及白果内酯适量，加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液，作为对照品贮备溶液，稀释10倍为待测液。

供试品溶液的制备精密量取银杏达莫注射液3ml，加入已装好酸性氧化铝(200～300目、1.5g)干柱(用0.8cm直径漏斗装柱，径高比为1:8，下端以脱脂棉塞柱底)，待样液滴干，收集过柱液进行微滤，取续滤液，即得。

测定法分别精密吸取对照品供试品溶液10μL，上机测定，用外标法分别计算四种银杏内酯的含量。

双嘧达莫

色谱条件与系统适应性试验十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.1％磷酸二氢钠溶液(磷酸调节pH值至4.6)-甲醇(25:75)为流动相，流速：1.0ml/min；波长λ＝290nm；温度：30℃；进样体积20μL。采用外标法计算样品浓度，理论板数按双嘧达莫峰计算应不低于2000。

对照品溶液的制备精密称取双嘧达莫对照品适量，80％甲醇稀释，制得每1ml中含有15μg的溶液。供试品溶液的制备取1ml银杏达莫注射液，置于25ml的容量瓶，80％甲醇定容至刻度，摇匀，过滤，即得。

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，上机测定，计算双嘧达莫含量。

总银杏酸

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(4.6×150mm，5μm)；流动相A：0.1％三氟乙酸的乙腈，流动相B：0.1％三氟乙酸的水溶液，梯度洗脱；波长λ＝310nm。理论板数按白果新酸峰计算应不低于4000。

表3梯度流动相

时间(分钟)流动相A(％)流动相B(％)0-3075→9025→1030-35901035-3690→7510→2536-457525

对照品溶液的制备精密称定白果新酸对照品适量，加入甲醇配制成含1μg/ml的溶液；另精密称定总银杏酸对照品适量，甲醇溶解，作定位用。

供试品溶液的制备量取银杏达莫注射液约100ml置于500ml圆底烧瓶中，60℃以下水浴加热真空浓缩去水至小体积，甲醇反复洗涤并转移置10ml量瓶中，甲醇定容，滤过，即得。

测定法分别精密吸取供试品溶液、对照品溶液及定位用对照溶液各20μL，上机测定，以白果新酸为对照品，外标法计算总银杏酸含量，即得。

不溶性微粒检测

检测方法：《中国药典》(2015版四部0903显微计数法)。

检测结果：见表4、表5。

表4不同银杏达莫注射液含量比较

表5不同银杏达莫注射液不溶性微粒比较

试验结论：(1)对比例1和对比例2的银杏达莫注射液经过低温循环试验后，其有效成分含量(黄酮苷含量、萜类内酯含量、双嘧达莫含量)均有所下降，银杏酸含量大于1ng/ml；而本发明银杏达莫注射液有效成分含量、银杏酸含量几乎没有发生变化；(2)对比例1和对比例2的银杏达莫注射液经过低温循环试验，其不溶性微粒已经不符合药典要求；而本发明银杏达莫注射液的不溶性微粒个数远远低于药典要求。上述试验表明，本发明银杏达莫制剂有效成分含量稳定、银杏酸含量稳定，不溶性微粒符合质量要求，充分说明，本发明制剂具有更好的稳定性，这可能与pH调节剂的种类有关系，不同pH调节剂，对于注射液中有着不同作用，对比例1使用的pH调节剂为氢氧化钠，对比文件2使用的碳酸钠和L-精氨酸，充分说明不同pH调节剂对于银杏达莫注射液有着至关重要的影响，而本发明采用碳酸钠和L-组氨酸复合pH调节剂，不仅降低了吐温-80用量，并且能够进一步保证产品的稳定性。

二、影响因素试验

1、光照试验

将实施例3的银杏达莫注射液，放在在光照强度为4500Lx条件下进行光照稳定性试验，放置10天，分别于0天、第5和第10天随机取样测定。

试验结果见表6。

表6银杏达莫注射液强光照射试验结果

2、高温试验

将实施例3的银杏达莫注射液，将其分别放入60℃干燥烘箱中10天，随机抽取于0天、第5、第10样品进行测定。

试验结果见表7。

表7银杏达莫注射液高温(60℃)试验结果

试验结论：上述试验进一步表明，本发明银杏达莫注射液稳定性非常好，具有更加优秀的产品质量。