一种琥珀酸多西拉敏中有关物质的分析方法

摘要

本发明公开了一种琥珀酸多西拉敏中有关物质的分析方法，采用高效液相色谱法，其色谱条件包括：色谱柱为极性乙醚连接苯基键合硅胶色谱柱，以三乙胺‑磷酸盐缓冲水溶液和乙腈的混合溶液为流动相，检测波长为255‑265nm，进行等度洗脱。本发明稳定性好，操作简便，能快速、有效、准确监控琥珀酸多西拉敏中的有关物质，本发明具有良好的专属性，灵敏度高，通过外标法对杂质进行定量分析，增加本发明有关物质检测的准确性。

说明书

技术领域

本发明涉及化学药物分析方法技术领域，尤其涉及一种琥珀酸多西拉敏中有关物质的分析方法。

背景技术

琥珀酸多西拉敏(Doxylamine succinate)，化学名为N，N-二甲基-2-[1-苯基-1-(2-吡啶)乙氧基]乙胺琥珀酸盐，其分子式为C₂₁H₂₈N₂O₅，分子量为388.46，CAS号为562-10-7，其结构式如下：

琥珀酸多西拉敏为组胺I类抑制剂，为人工合成的小分子化合物，具有抗组胺作用、抗胆碱作用和显著的镇静作用，适用于多种过敏性皮肤病、枯草热、过敏性鼻炎、哮喘性支气管炎等；由于其可通过抑制中枢神经系统来产生睡意，因此也被用来作为安眠药针对失眠的短期性治疗。

为了保证药物的安全有效，需要对药物中的有关物质进行研究、检测和监控。有关物质(Related substances)是指在原料药生产中带入的起始物料、试剂、中间体、副产物和异构体等物质，也可能是制剂在生产、储藏和运输过程中产生的降解产物、聚合物或晶型转变等特殊杂质。有关物质的种类与药物的合成路线和和生产工艺密切相关，不同的合成路线和生产工艺，药品的杂质谱也会发生变化，因此需要根据不同的合成路线和生产工艺建立合适的分析方法，达到对琥珀酸多西拉敏有关物质准确、有效的检测和监控。

发明内容

基本背景技术存在的技术问题，本发明提出了一种琥珀酸多西拉敏中有关物质的分析方法，本发明稳定性好，操作简便，能快速、有效、准确监控琥珀酸多西拉敏中的有关物质，本发明具有良好的专属性，灵敏度高，通过外标法对杂质进行定量分析，增加本发明有关物质检测的准确性。

本发明提出的一种琥珀酸多西拉敏中有关物质的分析方法，采用高效液相色谱法，其色谱条件包括：色谱柱为极性乙醚连接苯基键合硅胶色谱柱，以三乙胺-磷酸盐缓冲水溶液和乙腈的混合溶液为流动相，检测波长为255-265nm，进行等度洗脱。

优选地，色谱柱的长度为250mm，直径为4.6mm，填料粒径为5μm。

优选地，色谱柱为Sepax Polar-phenyl色谱柱(250×4.6mm，5μm)。

优选地，三乙胺-磷酸盐缓冲水溶液和乙腈的体积比为75-85：15-25。

优选地，三乙胺-磷酸盐缓冲水溶液和乙腈的体积比可以为75.5：24.5、76：24、76.5：23.5、77：23、77.5：22.5、78：22、78.5：21.5、79：21、79.5：20.5、80：20、80.5：19.5、81：19、81.5：18.5、82：18、82.5：17.5、83：17、83.5：16.5、84：16、84.5：15.5。

优选地，三乙胺-磷酸盐缓冲水溶液的pH为5.5-6.5。

优选地，三乙胺-磷酸盐缓冲水溶液的pH可以为5.55、5.6、5.65、5.7、5.75、5.8、5.85、5.9、5.95、6、6.05、6.1、6.15、6.2、6.25、6.3、6.35、6.4或6.45。

优选地，三乙胺-磷酸盐缓冲水溶液中，用磷酸调节pH为5.5-6.5。

优选地，三乙胺-磷酸盐缓冲水溶液中，磷酸盐的浓度为0.005-0.015mol/L。

优选地，三乙胺-磷酸盐缓冲水溶液中，磷酸盐的浓度可以为0.0055、0.006、0.0065、0.007、0.0075、0.0085、0.009、0.0095、0.01、0.0105、0.011、0.0115、0.012、0.0125、0.013、0.0135、0.014或0.0145mol/L。

优选地，三乙胺-磷酸盐缓冲水溶液中，磷酸盐为磷酸二氢钾。

优选地，三乙胺-磷酸盐缓冲水溶液中，三乙胺和水的体积比为2-4：1000。

优选地，三乙胺-磷酸盐缓冲水溶液中，三乙胺和水的体积比可以为2.05：1000、2.1：1000、2.15：1000、2.2：1000、2.25：1000、2.3：1000、2.35：1000、2.4：1000、2.45：1000、2.5：1000、2.55：1000、2.6：1000、2.65：1000、2.7：1000、2.75：1000、2.8：1000、2.85：1000、2.9：1000、2.95：1000、3：1000、3.05：1000、3.1：1000、3.15：1000、3.2：1000、3.25：1000、3.3：1000、3.35：1000、3.4：1000、3.45：1000、3.5：1000、3.55：1000、3.6：1000、3.65：1000、3.7：1000、3.75：1000、3.8：1000、3.85：1000、3.9：1000或3.95：1000。

优选地，流速为0.8-1.2ml/min。

优选地，流速可以为0.85、0.9、0.95、1.0、1.05、1.1或1.15ml/min。

优选地，柱温为30-40℃。

优选地，柱温可以为31、32、33、34、35、36、37、38或39℃。

优选地，进样量为5-50μl。

优选地，进样量可以为6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48或49μl。

优选地，所述有关物质为：

上述杂质中，杂质A、B、C、E为工艺杂质，杂质D为降解杂质。

本发明的具体步骤为：分别配制系统适用性溶液、混合对照品溶液、供试品溶液并进样，通过杂质对照品外标法计算杂质A、B、C、D、E的含量，以主成分外标法计算未知杂质的含量。

上述混合对照品溶液为：取杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E对照品各约25mg，精密称定，置同一25ml量瓶中，加流动相溶解并定容，摇匀得到溶液A；精密量取1.0ml溶液A，置20ml量瓶中，加流动相定容，摇匀，作为混合杂质对照品贮备液；取琥珀酸多西拉敏对照品约25mg，精密称定，置25ml量瓶中，加流动相溶解并定容，摇匀得到溶液B，精密量取1.0ml溶液B，置20ml量瓶中，加流动相定容，摇匀，作为琥珀酸多西拉敏对照品贮备液；精密量取混合杂质对照品贮备液与琥珀酸多西拉敏对照品贮备液各1.0ml，置同一25ml量瓶中，加流动相定容，摇匀，作为混合对照品溶液。

上述系统适用性溶液为：取琥珀酸多西拉敏对照品约50mg，精密称定，置25ml量瓶中，再精密量取混合杂质对照品储备溶液1.0ml，置同一25ml量瓶中，加流动相溶解并定容，摇匀，制成每1ml中分别含杂质A、B、C、D、E均为2μg，含琥珀酸多西拉敏为2mg的混合溶液，作为系统适用性试验溶液。

上述供试品溶液为：取琥珀酸多西拉敏供试品约50mg，精密称定，置25ml量瓶中，加流动相溶解并定容，摇匀，作为供试品溶液。

本发明人对琥珀酸多西拉敏、杂质A、B、C、D、E分别进行紫外吸收光谱扫描，结果见表1：

表1琥珀酸多西拉敏和各杂质的紫外吸收波长

物质名称最大吸收波长nm杂质A260.0杂质B260.0杂质C260.0杂质D260.0杂质E260.5琥珀酸多西拉敏260.0

由表1可以看出，各杂质和琥珀酸多西拉敏均在260nm左右有最大吸收，故选择260nm为检测波长。

本发明人通过筛选合适流动相并优化流动相中各组分比例，以及筛选合适的其他色谱条件，对琥珀酸多西拉敏以及上述5个杂质进行色谱分析，确定了本发明分析方法，通过对各杂质和琥珀酸多西拉敏的峰定位试验，干扰性试验和琥珀酸多西拉敏的降解试验对本发明进行专属性验证，结果见表2和图1：

表2专属性验证结果

由表2和图1可以看出，各杂质峰之间、琥珀酸多西拉敏主峰及其相邻杂质峰之间的分离度均大于1.5，峰纯度均较好，本发明的专属性好。

本发明人还选用市场上常用的制备琥珀酸多西拉敏制剂的药用辅料和空白溶剂即流动相对本发明进行了研究，发现常用的药用辅料和空白溶剂对本发明没有干扰。

本发明人对琥珀酸多西拉敏和各杂质的检测限、定量限、线性进行检测，结果见表3：

表3琥珀酸多西拉敏和各杂质的检测限、定量限、线性试验结果

由表3可以看出，本发明琥珀酸多西拉敏和各杂质检测灵敏度均较高，其检测限和定量限均较小，并且各杂质在较低浓度范围内线性关系良好。

本发明人取琥珀酸多西拉敏配制供试品溶液，进样并记录图谱，按杂质对照品外标法计算供试品中杂质A、B、C、D、E的含量，以主成分外标法计算供试品中未知杂质的含量，结果见表4和图2。

表4琥珀酸多西拉敏中各杂质的含量测定结果

名称含量％杂质A未检出杂质B未检出杂质C未检出杂质D0.030杂质E0.012最大未知单杂0.023总杂0.088

由表4和图2可以看出，琥珀酸多西拉敏供试品中杂质A、B、C均未检出，杂质D、E含量分别为0.030％、0.012％，最大未知单杂的含量为0.023％，总杂为0.088％。

本发明为等度洗脱，稳定性好，操作简便，能快速、有效、准确监控琥珀酸多西拉敏中的有关物质；本发明具有良好的专属性，各杂质峰之间、琥珀酸多西拉敏主峰及其相邻杂质峰之间的分离度均大于1.5，峰纯度较好，杂质和主峰可以有效分离；本发明检测限、定量限均较小，本发明的灵敏度高；本发明通过外标法对杂质进行定量分析，增加本发明有关物质检测的准确性。

附图说明

图1为系统适用性溶液色谱图。

图2为琥珀酸多西拉敏原料药有关物质色谱图。

图3为琥珀酸多西拉敏制剂有关物质色谱图。

具体实施方式

下面，通过具体实施例对本发明的技术方案进行详细说明。

实施例1

高效液相色谱条件：

Sepax Polar-phenyl色谱柱(250×4.6mm，5μm)，以磷酸调节pH＝6.0的三乙胺-磷酸二氢钾缓冲水溶液和乙腈的体积比为80：20为流动相，检测波长为260nm，流速为1.0ml/min，柱温为35℃，进行等度洗脱，其中，三乙胺-磷酸二氢钾缓冲水溶液中，磷酸二氢钾的浓度为0.01mol/L，三乙胺和水的体积比为3：1000。

样品配制：

系统适用性溶液：取琥珀酸多西拉敏对照品约50mg，精密称定，置25ml量瓶中，再精密量取混合杂质对照品储备溶液1.0ml，置同一25ml量瓶中，加流动相溶解并定容，摇匀，制成每1ml中分别含杂质A、B、C、D、E均为2μg，含琥珀酸多西拉敏为2mg的混合溶液，作为系统适用性试验溶液。

试验操作：取系统适用性溶液20μl进样，记录色谱图。

典型色谱图见图1。

实施例2

高效液相色谱条件：

Sepax Polar-phenyl色谱柱(250×4.6mm，5μm)，以磷酸调节pH＝5.5的三乙胺-磷酸二氢钾缓冲水溶液和乙腈的体积比为75：25为流动相，检测波长为265nm，流速为1.2ml/min，柱温为30℃，进行等度洗脱，其中，三乙胺-磷酸二氢钾缓冲水溶液中，磷酸二氢钾的浓度为0.015mol/L，三乙胺和水的体积比为2：1000。

样品配制：

系统适用性溶液：同实施例1。

混合对照品溶液：取杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E对照品各约25mg，精密称定，置同一25ml量瓶中，加流动相溶解并定容，摇匀得到溶液A；精密量取1.0ml溶液A，置20ml量瓶中，加流动相定容，摇匀，作为混合杂质对照品贮备液；取琥珀酸多西拉敏对照品约25mg，精密称定，置25ml量瓶中，加流动相溶解并定容，摇匀得到溶液B，精密量取1.0ml溶液B，置20ml量瓶中，加流动相定容，摇匀，作为琥珀酸多西拉敏对照品贮备液；精密量取混合杂质对照品贮备液与琥珀酸多西拉敏对照品贮备液各1.0ml，置同一25ml量瓶中，加流动相定容，摇匀，作为混合对照品溶液。

供试品溶液：取琥珀酸多西拉敏供试品约50mg，精密称定，置25ml量瓶中，加流动相溶解并定容，摇匀，作为供试品溶液。

试验操作：取系统适用性溶液、混合对照品溶液、供试品溶液各50μl进样，记录色谱图。

实施例3

高效液相色谱条件：

Sepax Polar-phenyl色谱柱(250×4.6mm，5μm)，以磷酸调节pH＝6.5的三乙胺-磷酸二氢钾缓冲水溶液和乙腈的体积比为85：15为流动相，检测波长为255nm，流速为0.8ml/min，柱温为40℃，进行等度洗脱，其中，三乙胺-磷酸二氢钾缓冲水溶液中，磷酸二氢钾的浓度为0.005mol/L，三乙胺和水的体积比为4：1000。

样品配制：

系统适用性溶液：同实施例1。

混合对照品溶液：同实施例2。

供试品溶液：同实施例2。

试验操作：取系统适用性溶液、混合对照品溶液、供试品溶液各5μl进样，记录色谱图。

实施例4

高效液相色谱条件：同实施例1。

样品配制：

系统适用性溶液：同实施例1。

混合对照品溶液：同实施例2。

供试品溶液：同实施例2。

试验操作：取系统适用性溶液、混合对照品溶液、供试品溶液各20μl进样，记录色谱图。

典型色谱图见图2。

实施例5

高效液相色谱条件：同实施例1。

样品配制：

系统适用性溶液：同实施例1。

混合对照品溶液：同实施例2。

供试品溶液：取规格为25mg的琥珀酸多西拉敏片10片，研碎混匀，取细粉适量(约相当于含琥珀酸多西拉敏50mg)，精密称定，置25ml量瓶中，用流动相溶解并定容，摇匀，过滤得到供试品溶液。

试验操作：取系统适用性溶液、混合对照品溶液、供试品溶液各20μl进样，记录色谱图。

典型色谱图见图3。

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。