水稻花粉萌发孔发育及花粉育性基因OsAOM、突变基因及其重组表达载体和应用

摘要

本发明涉及一种水稻花粉萌发孔发育及花粉育性基因OsAOM、突变基因及其重组表达载体和应用，该基因编码的蛋白为SEQ ID NO.1所示氨基酸序列，或经过取代、缺失或添加至少一个氨基酸且具有与OsAOM功能相同的蛋白质；SEQ ID NO.1所示氨基酸序列组成的蛋白质，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，还公开了OsAOM基因的重组表达载体，本发明公开的OsAOM基因编码一个GDSL脂肪酶，具有调控花粉萌发孔生长，小孢子细胞膜扩张及花粉内壁和细胞质发育的功能，是小孢子发育成可育花粉的必须基因，该基因功能的缺失会导致萌发孔结构紊乱，小孢子细胞膜及细胞质降解，花粉内壁不能形成，产生水稻雄性不育。

说明书

技术领域

本发明属于基因工程领域，特别涉及水稻花粉萌发孔发育及花粉育性基因OsAOM，水稻花粉萌发孔发育及花粉育性基因OsAOM的突变基因，还涉及水稻花粉萌发孔发育及花粉育性基因OsAOM在调控花粉育性中的应用。

背景技术

水稻(Oryza sativa)是主要粮食作物之一，全世界约有一半人口以稻米为主食。杂种优势的成功应用在我国水稻品种改良中起了重要作用。水稻为自交结实作物，其杂种优势的利用依赖于不育系的选育。

目前，人们主要通过质核互作不育系(三系法)和温光敏不育系(两系法)来实现水稻的杂种优势。然而，由于质核互作不育系配组不自由，可利用的亲本有限，种子生产比两系法复杂，温光敏不育系的育性受自然温光条件影响，大面积制种风险大等原因，使得水稻的杂种优势无法通过这两种不育系得到充分体现。而普通隐性核不育系具有育性不受温光等环境因素影响，其育性稳定，而且其育性能被所有正常可育的材料恢复，配组杂交稻极为自由。大力研究这类不育系的不育机理与调控，对水稻杂种优势的充分利用具有重要意义。

花粉萌发孔是花粉外壁一种特化结构，对花粉在柱头和的快速吸收和萌发，完成授精具有重要作用。萌发孔的发育受到复杂而精细的遗传机制调控。任何同花粉孔发育途径相关的基因发生突变均可能产生普通核不育材料。发掘和研究萌发孔发育相关的不育突变体，克隆、验证和调控相关基因，培育新型不育系，为充分利用杂种优势奠定基础。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的之一在于提供水稻花粉萌发孔发育及花粉育性基因OsAOM，编码GDSL脂肪酶，具有调控萌发孔结构，小孢子细胞膜，细胞质以及内壁正常发育的功能，是小孢子发育成可育花粉的必须基因，该基因功能缺失会导致雄性不育，产生新的水稻雄性不育系，可以用于杂交种子生产，技术方案为：

水稻花粉萌发孔发育及花粉育性基因OsAOM，所述水稻花粉萌发孔发育及花粉育性基因OsAOM的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；或者SEQ ID NO.1所示氨基酸序列经取代、缺失或添加至少一个氨基酸且具有与OsAOM蛋白功能相同的氨基酸序列。

进一步，所述水稻花粉萌发孔发育及花粉育性基因OsAOM的核苷酸序列如SEQ IDNO.2所示；或SEQ ID NO.2所示序列经取代、缺失或添加至少一个核苷酸且具有与水稻花粉萌发孔发育及花粉育性基因OsAOM功能相同的核苷酸序列。

进一步，编码所述水稻花粉萌发孔发育及花粉育性基因OsAOM的基因组序列如SEQIDNO.3所示；或SEQ ID NO.3所示序列经取代、缺失或添加至少一个核苷酸且具有编码水稻花粉萌发孔发育及花粉育性基因OsAOM功能的核苷酸序列。

本发明的目的之二在于提供水稻花粉萌发孔发育及花粉育性基因OsAOM的重组表达载体，技术方案为：

含有所述水稻花粉萌发孔发育及花粉育性基因OsAOM的重组表达载体。

进一步，所述重组表达载体为将SEQ ID NO.25所示序列连入pCAMBIA1301载体KpnI和SbfI酶切位点处。

本发明的目的之三在于提供水稻花粉萌发孔发育及花粉育性基因OsAOM恢复突变体花粉不育性状中的应用，技术方案为：

所述水稻花粉萌发孔发育及花粉育性基因OsAOM恢复突变体花粉育性中的应用，所述突变体为OsAOM基因变异产生的花粉不育突变体。

本发明的目的之四在于提供水稻花粉萌发孔发育及花粉育性基因OsAOM的突变基因，技术方案为：

所述突变基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，为SEQ ID NO.2所示核苷酸序列的775位由T突变为C，或SEQ ID NO.3所示核苷酸序列的5084位由T突变为C，突变导致雄性不育。

本发明目的之五在于提供水稻花粉萌发孔发育及花粉育性基因OsAOM的突变基因在制备水稻育种中的应用，技术方案为：

所述水稻花粉萌发孔发育及花粉育性基因OsAOM的突变基因在水稻育种中的应用。

进一步，所述水稻花粉萌发孔发育及花粉育性基因OsAOM的突变基因在制备水稻雄性不育系中的应用。

本发明的有益效果在于：本发明公开了水稻花粉萌发孔发育及花粉育性基因OsAOM，该基因主要影响水稻花粉发育中的花粉孔，细胞膜，细胞质和花粉内壁的发育，进而影响花粉育性等方面。OsAOM基因的突变、敲除或抑制表达等使其丧失功能后，导致花粉萌发孔结构紊乱，花粉细胞质，细胞膜降解，花粉内壁不能形成，从而获得新的水稻雄性不育系，再用具有正常OsAOM基因的材料给所述不育系授粉，使其杂种一代育性恢复，因此可以用来生产杂交种子，在农业生产上具有十分重要的应用；本发明还公开了OsAOM基因的重组表达载体，该重组表达载体能够将水稻雄性不育系恢复为可育系，具有广泛的应用前景。

附图说明

为了使本发明的目的、技术方案和有益效果更加清楚，本发明提供如下附图进行说明：

图l为本发明OsAOM基因正常的明恢63及其突变体植株、花药和花粉形态学观察图(A：明恢63稻穗；B：osaom突变体稻穗；C：明恢63花药；D：osaom突变体花药；E：明恢63花粉碘染结果；F：osaom突变体花粉碘染结果；G：明恢63花粉扫描电镜图；H：osaom突变体花粉扫描电镜图)。

图2为本发明OsAOM基因定位和突变位点示意图(A：OsAOM基因定位；B：OsAOM基因的突变位点)。

图3为本发明OsAOM互补植株的花药形态和花粉碘染图(A：明恢63花药形态B：osaom突变体花药形态；C：OsAOM互补植株花药形态；D：明恢63花粉碘染结果；E：osaom突变体花粉碘染结果；F：OsAOM互补植株花粉碘染结果)。

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等分子克隆实验室手册(New York：Cold Spring Harbor Laboratory Press，1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。

术语“花粉萌发孔发育及花粉育性基因”指编码具有调控花粉萌发孔，细胞膜，细胞质及花粉内壁正常发育，最终能使花粉育性正常的GDSL脂肪酶蛋白的核酸序列，碱基序列如SEQID NO.2中第1-1200位所示的核苷酸序列及其简并序列。简并序列是指，位于SEQID NO.2序列的编码框第1-1200位核苷酸中，有一个或多个密码子被编码相同氨基酸的简并密码子所取代后而产生的序列。由于密码子的简并性，所以与SEQ ID NO.2中第1-1200位核苷酸序列同源性低至约70％的简并序列也能编码出SEQ ID NO.1所述的序列。该术语还包括能在中度严谨条件下，更佳的在高度严谨条件下与SEQ ID NO.2中从核苷酸第1-1200位的核苷酸序列杂交的核苷酸序列。该术语还包括与SEQ ID NO.2中从核苷酸第1-1200位的核苷酸序列的同源性至少70％，较佳地至少80％，更佳地至少90％，最佳地至少95％的核苷酸序列。该术语还包括能编码具有与天然的调控花粉萌发孔，细胞膜，细胞质及花粉内壁的相同功能的蛋白的SEQ ID NO.2中开放阅读框序列的变异形式。这些变异形式包括(但并不限于)：若干个(通常为1-90个，较佳地1-60个，更佳地1-20个，最佳地1-10个)核苷酸的缺失、插入和/或取代，以及在5’和/或3’端添加数个(通常为60个以内，较佳地为30个以内，更佳地为10个以内，最佳地为5个以内)核苷酸。

实施例中，可选用本领域已知的各种载体，如市售的载体，包括质粒，粘粒等。在生产本实施例的调控水稻花粉萌发孔发育的GDSL脂肪酶时，可以将该蛋白的编码序列可操作地连于表达调控序列，从而形成调控水稻花粉萌发孔、花粉细胞质、细胞膜及花粉内壁发育相关蛋白的表达载体。

相关核苷酸全长序列或其片段通常可以用PCR扩增法、重组法或人工合成的方法获得。对于PCR扩增法，可根据本实施例所公开的有关核苷酸序列来设计引物，并用市售的cDNA库或按本领域技术人员已知的常规方法所制备的cDNA库，或基因组DNA作为模板，扩增而得有关序列。当序列较长时，常常需要进行两次或多次PCR扩增，然后再将各次扩增出的片段按正确次序拼接在一起。一旦获得了有关的序列，就可以用重组法来大批量地获得有关序列。这通常是将其克隆入载体，再转入细胞，然后通过常规方法从增殖后的宿主细胞中分离得到有关序列。

实施例1、osaom突变体植株的获得和形态学的观察

osaom突变体来源于籼稻明恢63的突变，用正常的明恢63作父本，与osaom突变体杂交，将突变基因保存在杂合体中，需要突变体时让杂合体自交繁殖，后代即可分离出突变体osaom。osaom突变体与明恢63杂交，F_l代全部为可育，自交F₂代中出现分离，其中正常植株为293，突变株为120，比例符合表明该雄性不育突变体表型由一个核基因突变造成。对osaom突变体植株的形态学观察：明恢63稻穗结实后下垂(图1，A)，而osaom突变体小穗不结实呈直立状(图1，B)；明恢63花药粗壮饱满(图1，C)，osaom突变体花药较细(图1，D)；明恢63花粉碘染为黑色(图1，E)，osaom突变体花粉碘染后着色浅，花粉小而畸形(图1，F)；明恢63花粉在扫描电镜下，花粉孔处有一明显塞子状孔盖(图1，G)，而突变体osaom的孔盖缺失，使得萌发孔处形成空洞(图1，H)。

实施例2、OsAOM基因的定位和克隆

一、定位群体

将OsAOM突变体与粳稻日本晴杂交，自交获得F₂代，选择雄性不育植株为定位群体。

二、提取水稻DNA

亲本采用改进的CTAB法进行提取，包括如下步骤：取叶片0.1-0.2克(约半片)放到小研钵中，加入适量的液氮，立刻研磨至粉状，装入2m1离心管，加入700μL 100℃预热的1.5×CTAB溶液于离心管中，小心混匀后放入65℃水浴，20分钟后取出离心管，加入等体积氯仿/异戊醇，猛烈混匀，13000rpm离心10分钟，取上清于新管中，加入900μL无水乙醇混匀后-20℃放半小时以上。将析出的DNA离心，14000rpm离心10分钟。去掉上清，将沉淀用1mL体积分数为70％乙醇清洗一次，离心干燥，溶于200μL TE溶液中，4℃冰箱保存。定位群体的单株DNA采用改进的碱煮法提取，包括如下步骤：剪碎嫩叶片1-2cm²放入0.5m1离心管，加入100μL浓度为0.125M的NaOH溶液，沸水浴30秒，然后加入50μL浓度为1.0M的Tris-HCl(pH8.0)，最后加入100μL浓度为0.125M的HCl，沸水浴2分钟后4℃冰箱保存备用。

三、群体分离分析初定位

设计137对多态性标记，其中包括42对SSR引物和95对InDel分子标记引物。其中SSR引物根据已发表的序列合成(具体参见http://www.gramene.org.microsat/ssr.html)，其他InDel分子标记设计是根据比较粳稻日本晴和籼稻9311两品系的已公布的核酸序列，对差异的部分设计引物，验证2个亲本粳稻日本晴和籼稻OsAOM突变体之间的多态性。用所设计的137对InDel引物同时对亲本和基因池进行扩增，PCR扩增程序为：10μL体系中，lμL模板，lμL>2十)，lμL>

四、精细定位

为了进一步缩小候选基因的筛选范围，我们后来做了精细定位，构建了突变体osaom×JH1的F₂代群体，共获取了2688株不育单株。在初步定位的引物R02004与RM300之间，设计合成了34对引物，利用不育亲本、可育亲本和F₁筛选有差异的引物，共选出5对具有明显差异并与该基因连锁的的引物R02004、RM1106、RM13010、RM13013和R02013，隐性单株的基因型分析结果表明，R02004共有单交换株187株，遗传距离为3.48cM,RM13013共有单交换株100株，遗传距离为1.86cM，两者的单交换株互不包含，RM1106共有单交换株1株，遗传距离为0.02cM,RM13010共有单交换株11株，遗传距离为0.20cM，R02013有单交换株2株，遗传距离为0.04cM，其中，RM1106的交换株被包含在R02004的交换株中，RM02013的单交换株被包含在RM13010的交换株中，RM13010的交换株被包含在RM13013的交换株中,而R02004的交换株与RM13013的交换株互不包含，说明OsAOM在RM1106与R02013两个标记之间(图2，A)。在http://www.gramene.org/网站水稻日本晴第2染色体上，这两个标记的物理位置分别为10997625和11045788(版本号：Oryza_sativa.IRGSP-1.0.21)，两者相距大约48Kb，其预测在这个范围内只有七个基因位点。通过BAR(http://bar.utoronto.ca/efprice/cgi-bin/efpWeb.cgi)分析发现其中Loc_Os02g18870在花序中后期表达，在七个基因中最有可能是候选基因OsAOM。通过对明恢63和突变体osaom中Loc_Os02g18870基因的测序比对发现：osaom突变体中Loc_Os02g18870基因的第四外显子中发生了一个T→C碱基突变，导致编码的氨基酸由半胱氨酸酸(Cys)变成精氨酸(Arg)。因此，初步确定Loc_Os02g18870是目标基因OsAOM(图2，B)。该基因编码GDSL脂肪酶蛋白，编码该蛋白质的氨基酸序列如SEQ>

表1、基因定位与功能验证引物序列

实施例3、OsAOM基因的功能分析

为了进一步确定OsAOM基因是引起本雄性不育突变体表型的基因，从含有OsAOM基因的水稻BAC(细菌人工染色体)OSJNBb0062H16r中扩出OsAOM基因及表达调控区(包含5603bp的外显子和内含子，1254bp上游启动子和1589bp下游终止子)，核苷酸序列如SEQ IDNO.25所示。具体操作时是分段扩增和连入pCAMBIA1301载体的：利用编码区中间存在单一的酶切位点XbaI，在前半段上游引物CF1末端添加酶切位点KpnI,前半段下游引物CR1位于XbaI位点后，后半段上游引物CF2位于XbaI位点前，后半段下游引物CR2末端添加酶切位点SbfI，所述克隆引物序列如表1；先用KpnI和XbaI将前半段扩出并连入pCAMBIA1301获得中间载体，然后再用XbaI和SbfI将后半段扩出并连入中间载体，经测序确保序列正确，最后获得OsAOM基因的互补载体pCAMBIA1301-OsAOM，将所得重组表达载体采用冻融法转化根癌农杆菌LBA4404，得含重组表达载体pCAMBIA1301-OsAOM的根癌农杆菌LBA4404，命名为LBA4404-OsAOM。

将所得LBA4404-OsAOM转化水稻OsAOM突变体，以观察其花粉育性是否得到恢复。结果如图3所示，结果显示T₀代获得互补植株，T₀代互补植株花粉育性恢复，花药中含成熟花粉而变成正常黄色，碘染花粉成黑色。由此可见所克隆的OsAOM基因能够恢复突变体的花粉育性，是本发明的目的基因，该目的基因突变产生雄性不育表型。结合前面突变体和野生型明恢63的花粉育性比较，说明OsAOM基因是调控水稻花粉发育的基因，对花粉萌发孔结构，花粉细胞膜，细胞质及花粉内壁发育具有调控作用。

最后说明的是，以上优选实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管通过上述优选实施例已经对本发明进行了详细的描述，但本领域技术人员应当理解，可以在形式上和细节上对其作出各种各样的改变，而不偏离本发明权利要求书所限定的范围。

<110> 西南大学；

<120> 水稻花粉萌发孔发育及花粉育性基因OsAOM、突变基因及其重组表达载体和应用

<160> 29

<210> 1

<211> 399

<212> PTR

<213> 水稻（Oryza sativa）

<220>

<223> 花粉萌发孔发育及花粉育性基因OsAOM氨基酸序列

<400> 1

Met Ala Leu Pro Phe Leu Leu Leu Leu Ala Phe Ala Leu Leu Phe

1 5 1015

Pro Leu Ser Ala Pro Pro Arg Cys Cys Ser Ala Ala Pro Ala Ser

202530

Ser Pro Pro Pro Ser Pro Pro Pro Ser Pro Ala Ala Ala Ala Ala

354045

Ala Pro Arg Arg Thr Pro Leu Val Pro Ala Leu Phe Val Ile Gly

505560

Asp Ser Thr Ala Asp Val Gly Thr Asn Asn Tyr Leu Gly Thr Leu

657075

Ala Arg Ala Asp Arg Glu Pro Tyr Gly Arg Asp Phe Asp Thr Arg

808590

Arg Pro Thr Gly Arg Phe Ser Asn Gly Arg Ile Pro Val Asp Tyr

95100 105

Ile Ala Glu Lys Leu Gly Leu Pro Phe Val Pro Pro Tyr Leu Glu

110 115 120

Gln Asn Met Arg Met Gly Val Gly Ser Val Asp Leu Ser Asn Ile

125 130 135

Asp Gly Met Ile Gln Gly Val Asn Tyr Ala Ser Ala Ala Ala Gly

140 145 150

Ile Leu Ser Ser Ser Gly Ser Glu Leu Gly Met His Val Ser Leu

155 160 165

Ser Gln Gln Val Gln Gln Val Glu Asp Thr Tyr Glu Gln Leu Ser

170 175 180

Leu Ala Leu Gly Glu Ala Ala Thr Thr Asp Leu Phe Arg Lys Ser

185 190 195

Val Phe Phe Phe Ser Ile Gly Ser Asn Asp Phe Ile His Tyr Tyr

200 205 210

Leu Arg Asn Val Ser Gly Val Gln Met Arg Tyr Leu Pro Trp Glu

215 220 225

Phe Asn Gln Leu Leu Val Asn Ala Met Arg Gln Glu Ile Lys Asn

230 235 240

Leu Tyr Asn Ile Asn Val Arg Lys Val Val Met Met Gly Leu Pro

245 250 255

Pro Val Gly Cys Ala Pro His Phe Leu Trp Glu Tyr Gly Ser Gln

260 265 270

Asp Gly Glu Cys Ile Asp Tyr Ile Asn Asn Val Val Ile Gln Phe

275 280 285

Asn Tyr Ala Leu Arg Tyr Met Ser Ser Glu Phe Ile Arg Gln His

290 295 300

Pro Gly Ser Met Ile Ser Tyr Cys Asp Thr Phe Glu Gly Ser Val

305 310 315

Asp Ile Leu Lys Asn Arg Asp Arg Tyr Gly Phe Leu Thr Thr Thr

320 325 330

Asp Ala Cys Cys Gly Leu Gly Lys Tyr Gly Gly Leu Phe Met Cys

335 340 345

Val Leu Pro Gln Met Ala Cys Ser Asp Ala Ser Ser His Val Trp

350 355 360

Trp Asp Glu Phe His Pro Thr Asp Ala Val Asn Arg Ile Leu Ala

365 370 375

Asp Asn Val Trp Ser Gly Glu His Thr Lys Met Cys Tyr Pro Val

380 385 390

Asp Leu Gln Gln Met Val Lys Leu Lys

395 399

<210> 2

<211> 1200

<212> DNA

<213> 水稻（Oryza sativa）

<220>

<223> 花粉萌发孔发育及花粉育性基因OsAOM序列

<400> 2

atggcgctcc ccttcctcct cctcctcgcc ttcgccctgc tcttcccgct ctccgctccc 60

ccgcgctgct gctccgcggc ccccgcctcc tcgccgcccc cgtccccgcc cccttcccct 120

gcggcggcgg cggcggcccc gcgccgcacg ccgctcgtcc cggcgctctt cgtgatcggc 180

gactccacgg cggacgtcgg caccaacaac tacctcggca cgctcgcccg cgccgaccgc 240

gagccgtacg gccgcgactt cgacacccgc cgccccacgg ggcgcttctc caacggccgc 300

atccccgtcg actacatcgc agagaagctg gggcttcctt ttgtgcctcc ataccttgaa 360

cagaacatgc gcatgggtgt cggcagtgtc gacctcagca acattgatgg gatgatacaa 420

ggtgtcaact atgcatccgc ggcagctggc attctctcca gcagtggttc tgagctggga 480

atgcatgtgt cgctgagcca gcaggtgcag caggttgagg acacatatga gcagctctct 540

ctggctctcg gggaggcagc aacaactgac cttttcagaa agtccgtgtt ctttttctca 600

atcgggagca acgacttcat ccactattac ctgcgcaatg tgtctggcgt ccagatgcgt 660

tacctcccat gggagttcaa ccagcttctt gtcaatgcaa tgaggcagga aatcaagaat 720

ttgtacaata tcaatgttcg gaaggtcgtc atgatgggcc tccctcctgt tggctgcgca 780

cctcactttc tctgggagta cggcagtcaa gacggggaat gcatcgacta catcaataac 840

gtcgtgattc agttcaacta tgccctgaga tacatgtcta gtgaattcat ccgccagcac 900

ccaggctcta tgatcagtta ctgtgatact tttgaggggt ctgtggacat actgaagaat 960

cgtgaccgct acggttttct gaccaccact gatgcctgct gtgggctggg gaagtatggg 1021

ggcctgttca tgtgtgttct tccacagatg gcgtgcagcg acgcgtcgag ccatgtctgg 1081

tgggacgagt tccaccccac ggatgctgtg aaccgaatcc tggctgataa tgtgtggtct 1141

ggtgagcata ccaagatgtg ctatcctgtg gatttgcagc agatggtaaa actcaagtag 1200

<210> 3

<211> 5603

<212> DNA

<213> 水稻（Oryza sativa）

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<223> 花粉萌发孔发育及花粉育性基因OsAOM基因组序列

<400> 3

atggcgctcc ccttcctcct cctcctcgcc ttcgccctgc tcttcccgct ctccgctccc 60

ccgcgctgct gctccgcggc ccccgcctcc tcgccgcccc cgtccccgcc cccttcccct 120

gcggcggcgg cggcggcccc gcgccgcacg ccgctcgtcc cggcgctctt cgtgatcggc 180

gactccacgg cggacgtcgg caccaacaac tacctcggca cgctcgcccg cgccgaccgc 240

gagccgtacg gccgcgactt cgacacccgc cgccccacgg ggcgcttctc caacggccgc 300

atccccgtcg actacatcgg tacgcgcccc ccaccttctc gatcggcggc gccatggctg 360

tggccccttt gctctctcgt gaatcctccc ccccccgctt caaaggttgc aggtggttct 420

ggaatcgtcg atccgatgct gctttgcctc tcgtacgcct atggatgcag catgttgtgg 480

gtttagtgta atctgggttt tgggtttctg gtatacgaag gttttgctta gttgttggtt 540

cctatgaatt tggggcatct gatctcatac atcgggggta tgtggatttt tgcccaacaa 600

ttgctgaagc tgaagagtaa tcagttcata gcactctcct acacagctga ccacctggat 660

ctcacataca tagactcctg cggcttcctc tccttgatct cacatagcaa tgttgtgggt 720

ttagtgtaat ctgggtattt gggtttctcg catgcgaggg gcttgctcag ttgttggttc 780

gtctgtgggt ttctgccgaa caattgctga agctgaagag taaccagttt tgcagcacaa 840

ccaccacagt ctgggcatca tttgatcctg ctgttcttag cactcctgca gagctgacca 900

cctggatctc acgtatctat atagaatcct gcggcttcct ctccaaatca gtatccagta 960

tccaccaccg ttatcagccg ttgaggcaat gcattggcag aatgccagaa cattaagaag 1020

tgccatcata atgtacacca ttagtccatg catccagaaa acattgccag aatcctgcaa 1080

tgtatccatt tgatagtcct gagtcccgac cagttgtcta catgctccag tctctttgcc 1140

accacacact gttaaatctc tcttgtccaa tgtccaccac attctggaca gtttcaaggt 1200

cctcacagga agcacagctg cacaaccttt gttaatgttg ctttaagaaa gtcatatcta 1260

ctcattagtt tctttgggag agtaaggagg gaaaaggcat aggaaagaaa catttaacta 1320

gggctactgg ctcactatgt gaaagatgtt tcccttcaat ttcatttagc tggtgttctt 1380

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ctttcttctg tttttaaatt attttttccg tgatttctta atcttagact tttttgtgca 1500

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ctagaggacg aatcagaagg agggtgtttc aacaacagac tagaagcaat gactcttctc 1800

atagtgtcta catcctctct agttaggaag aatacttgct caaccatttg aactaatgct 1860

gaaagattct cctgttcggc tgctcccttc cttccatgtg ttccaactag tgtggattat 1920

cagggcatca aattcccttc ttagttccta ggaattcatg acttatatat gcttcctacc 1980

agatgtgaga ttgtctacac gagacgattg atatgctggt gctgatgggg ggtttattta 2040

tgctgctggc cttgtccaag tttgcttgtg aagctacagt gctataagtt gtatggttgt 2100

tttattttcc tgcacgcata aagcaaaagg agatatatgt agccatctac tcaaagctaa 2160

tttatcataa tttttttatt gtctgaaact aaaaaactgc atttgttcta tactatggct 2220

tttgggatga tcaaggagtt agtaagaatc actgatccgg caccaatgtg atgaaattga 2280

tgtatatcat cctgaacatt ccattttcat atcaatcttt attcctgctt atgttgttga 2340

atctccaatc tttgtgccca aaacaacaaa aacttgtgga gctgcaaatg ctaattttgt 2400

catttcaata aaacatcatg gtggtgtcta aagaggagaa atgtttacgt atgaacattg 2460

ctgcaaagtt ttcctttatg tggctatatg ttttaacttt ctataaagga ttggagcctc 2520

ttggttagag tcaagcttgt tgatttgcat accttttcat tattcttaaa tgtacttgaa 2580

actaaatcga catgatcatt aactatataa caccagtcta aagaacacca atctaaagaa 2640

cacacttaat gcttctctat gaaggtttct cttttggtat gtaatacttg ctcatcggat 2700

gtatcctttt ttgttactat tttgtctcgt gaactataca tttgaagatt attttgtggt 2760

ggtattcttt actactgcgg cattccagca gctgtaaaag tatgtgcaat tatactgtta 2820

aaaaatctcc aacattggca gtcccctagc ttggaatctg tcgatatttt ctgtgtttat 2880

gttatgattt cttgcaaaca tattttagat tcttaaattt taatggcgtg gttgttctag 2940

cttaaatatg tttagaacaa gggatgtgac acctttactt tgtgcagaat aaaccttcat 3000

gctgatctct tgtgtatcaa gccttcaggc taggggtgta agtggctaac ccgcgaaacc 3060

cacttatagg ctaaaataag ccgcgaaccc gtttattttg acctataagt gggttcgcgg 3120

ctgacccact tacagcccta cttcaggcac atgaggatca atcatttcat agtgtgacta 3180

tttgtagtta tctgtatggc cgtaaataat ggcctctata ttgttctgta ttggagtatc 3240

tctctactat ttttttctct gaagaagagc attcttttac ctatttttgg ttttcataat 3300

tcaatgtgat gcataatttg attctgttct tttttagata aaggaggcta atttgattct 3360

gttcttgcaa ttgtggatgc actgcaggga atgcatgtgt cgctgagcca gcaggtgcag 3420

caggttgagg acacatatga gcagctctct ctggctctcg gggaggcagc aacaactgac 3480

cttttcagaa agtccgtgtt ctttttctca atcgggagca acgacttcat ccactattac 3540

ctgcgcaatg tgtctggcgt ccagatgcgt tacctcccat gggagttcaa ccagcttctt 3600

gtcaatgcaa tgaggcagga aatcaaggtg tggttattgt tctccagttt attctctctg 3660

tgcaacattt cttgcctcct tatgattcca gttttagttt tttgatcagt gtgttgcata 3720

ttgcccaaag gctgtagtat cgtgcttagc agtggccaat gttgtgagta tgaatttgat 3780

ccgtaattta cggcccgtaa atattctgtg cttgaaaggt atctgctctc agttccacca 3840

cccagatgtg aatagttctt tgtactcctg gttaggaata tgtttgagaa aaggaggagt 3900

gtggacctct ggggactgca gatacatgaa ttatggaaaa ctagctatga acattaattt 3960

ttatgtttca agggctagaa aattttcaaa tgtttataga gaaacctgat atagtacact 4020

ttttctgtag gttaaagttt tcaaatggtg gatgagttta aaaccgtgta cagttttgga 4080

ctgaagcttc tttgagttac tgaaatcctc aggctgtaca gtttttctgt agttatgaat 4140

taggttaaaa ggataggagg gtatttcatc tgtacatttg taatatggga aagttaactg 4200

ataaatacat ggaattgatt aactcaatgg atatttatat cgttggctgt tagcagttct 4260

gtggtgttat gtactttaca ttctccgtct accgtacctt agtttcagat ttgaggtagt 4320

acgttgcaac gttgctcaac aaggacatac ttgtttttta tatgttcatt ttgaattctt 4380

aacattttga tcagataagg cggccccaaa tctgataggg actgatgtaa agtcgatact 4440

gaatattgtc ttggactgaa tactgtgttt gagtccctta gttcttggtc tgcgcatact 4500

tccagagtgg attgtacttt gtactgcctc ccatttggaa gtgcaagcta aatgcgtgtt 4560

acttttgctc aacttgtagg acaccatgca cactaccaat atgcccatga tcttaccatg 4620

atacaaacat aattctcaca tcatgcataa atgcataatg cacaatttga ttttctccct 4680

aatttatccc ctttcctttt ttgaacggat aattttaatt tgcaaaagaa ttggtaaaaa 4740

tggccccaaa tttctattca gtaaatcttt ggcagagcat gcgatgcaca ttgattgagg 4800

ctgcatgcgc catgagttta tttgtactgt ccaacatttg agagcagaaa tttctgttac 4860

cattgtactc atccaagttg acttgagatg ttgctttctt gtttcttaac cttagtaaat 4920

cagttacaat gatgcatttt tttattattt agccatatgc agttcttgtc agattagatt 4980

attaagctat ttatatctat atataagagt tctgtacttc ctgcagaatt tgtacaatat 5040

caatgttcgg aaggtcgtca tgatgggcct ccctcctgtt ggctgcgcac ctcactttct 5100

ctgggagtac ggcagtcaag acggggaatg catcgactac atcaataacg tcgtgattca 5160

gttcaactat gccctgagat acatgtctag tgaattcatc cgccagcacc caggctctat 5220

gatcagttac tgtgatactt ttgaggggtc tgtggacata ctgaagaatc gtgaccgcta 5280

cggtgagcag atgtatcatt gttactactg tcagattgcc tttctgtcct tagggaagaa 5340

ctcacattac gatggaatca cattgtgcag gttttctgac caccactgat gcctgctgtg 5400

ggctggggaa gtatgggggc ctgttcatgt gtgttcttcc acagatggcg tgcagcgacg 5460

cgtcgagcca tgtctggtgg gacgagttcc accccacgga tgctgtgaac cgaatcctgg 5520

ctgataatgt gtggtctggt gagcatacca agatgtgcta tcctgtggat ttgcagcaga 5580

tggtaaaact caagtagaac tga 5603

<210> 4

<211> 1200

<212> DNA

<213> 水稻（Oryza sativa）

<220>

<223> 花粉萌发孔发育及花粉育性基因OsAOM的突变基因序列

<400> 4

atggcgctcc ccttcctcct cctcctcgcc ttcgccctgc tcttcccgct ctccgctccc 60

ccgcgctgct gctccgcggc ccccgcctcc tcgccgcccc cgtccccgcc cccttcccct 120

gcggcggcgg cggcggcccc gcgccgcacg ccgctcgtcc cggcgctctt cgtgatcggc 180

gactccacgg cggacgtcgg caccaacaac tacctcggca cgctcgcccg cgccgaccgc 240

gagccgtacg gccgcgactt cgacacccgc cgccccacgg ggcgcttctc caacggccgc 300

atccccgtcg actacatcgc agagaagctg gggcttcctt ttgtgcctcc ataccttgaa 360

cagaacatgc gcatgggtgt cggcagtgtc gacctcagca acattgatgg gatgatacaa 420

ggtgtcaact atgcatccgc ggcagctggc attctctcca gcagtggttc tgagctggga 480

atgcatgtgt cgctgagcca gcaggtgcag caggttgagg acacatatga gcagctctct 540

ctggctctcg gggaggcagc aacaactgac cttttcagaa agtccgtgtt ctttttctca 600

atcgggagca acgacttcat ccactattac ctgcgcaatg tgtctggcgt ccagatgcgt 660

tacctcccat gggagttcaa ccagcttctt gtcaatgcaa tgaggcagga aatcaagaat 720

ttgtacaata tcaatgttcg gaaggtcgtc atgatgggcc tccctcctgt tggccgcgca 780

cctcactttc tctgggagta cggcagtcaa gacggggaat gcatcgacta catcaataac 840

gtcgtgattc agttcaacta tgccctgaga tacatgtcta gtgaattcat ccgccagcac 900

ccaggctcta tgatcagtta ctgtgatact tttgaggggt ctgtggacat actgaagaat 960

cgtgaccgct acggttttct gaccaccact gatgcctgct gtgggctggg gaagtatggg 1021

ggcctgttca tgtgtgttct tccacagatg gcgtgcagcg acgcgtcgag ccatgtctgg 1081

tgggacgagt tccaccccac ggatgctgtg aaccgaatcc tggctgataa tgtgtggtct 1141

ggtgagcata ccaagatgtg ctatcctgtg gatttgcagc agatggtaaa actcaagtag 1200

<210> 5

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> R02001上游引物

<400> 5

cgataggcaa ctaaaacatt 20

<210> 6

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> R02001下游引物

<400> 6

cttgtcctcc tgctctgta 19

<210> 7

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> R02004 上游引物

<400> 7

gcaatttaac ccttattcct g 21

<210> 8

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> R02004 下游引物

<400> 8

gggaagaaga aagccattag 20

<210> 9

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> RM1106 上游引物

<400> 9

cggaaagtga atcggagaac 20

<210> 10

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> RM1106 下游引物

<400> 10

gcaccacgct aagctaaacc 20

<210> 11

<211> 16

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> R02013 上游引物

<400> 11

tgcctataat ctcaac 16

<210> 12

<211> 16

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> R02013 下游引物

<400> 12

ttctacactg cctgtg 16

<210> 13

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> RM13010 上游引物

<400> 13

cagtatggtc acaggaaaca acc 23

<210> 14

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> RM13010 下游引物

<400> 14

ctttgtgatc ctctaatggt ctgc 24

<210> 15

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> RM13013 上游引物

<400> 15

ccgttaggag cctttcact 19

<210> 16

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> RM13013 下游引物

<400> 16

ctgagatgtt tatgcctttc c 21

<210> 17

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> RM300 上游引物

<400> 17

gcttaaggac ttctgcgaac c 21

<210> 18

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> RM300 下游引物

<400> 18

caacagcgat ccacatcatc 20

<210> 19

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> RM8254 上游引物

<400> 19

aaagggaccc acttgtcagc 20

<210> 20

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> RM8254 下游引物

<400> 20

gtcgaggatg gatcgatgg 19

<210> 21

<211> 31

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CF1 上游引物

<400> 21

accggtaccg ctctcgcacc aatcttgatc a 31

<210> 22

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CR1 下游引物

<400> 22

gccagcagca taaataaacc c 21

<210> 23

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CF2 上游引物

<400> 23

tgatgggatg atacaagg 18

<210> 24

<211> 33

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CR2 下游引物

<400> 24

cagcctgcag gtccatgcat agctagcctt cag 33

<210> 25

<211> 8441

<212> DNA

<213> 水稻（Oryza sativa）

<220>

<223> OsAOM基因及表达调控区

<400> 25

gctctcgcac caatcttgat caagacaaca tcatgaccgc atattatgga gagttgttga 60

aaactgatcg ccaggtgttt gagactcaac ttgaagaatt gcttcaaaag atggcttcgt 120

actaccgtaa gacgaggcaa ggcatcatca agcaacaaaa attcatgtta cccatccatg 180

caaaatcaaa ggtaacaacg attctagcag tgcctattct aacatatgaa gttgtgatgg 240

tgatgttatt tctagtttaa ataatcggtt tacttctttg aatactacct ttgagaaaac 300

ctttagtact accttggaaa gccctagatg atcacatgag tgagttagag aatcgactaa 360

atagccggtt ccttggtggt gcatgtattt catgcaacaa cgagcatatg catggtattc 420

cttcatattt tcatatacca aaattttctg tacaacaaga ttggccgatg aaaaataccc 480

acaattccct cgatacaata gatcctagat tcactcctac gatactgtat gctggtccga 540

ccgatgtgtt attgctggtc agaccggacg catcgatcgg accgacgggt gtaataccac 600

cagtccgact agaggcagca gccgatccga ttggagggac atcaccggtc agactacgct 660

cggcatgttt cgtagaatca gctcatgtct ggtgctcctc taaaagacat tgacatgtgg 720

ggtccacggg ctgactcaac aagattggat aaactgcctc ctaaaccgtt caaggagtca 780

atttgtaatg gttttgtgag ttggaggata ggttataggg atgcgattca accatgggca 840

tgagttgagg gaagcaaagt agacttaggg cctgttcact ttgatgaaaa aaaaaacctt 900

accaaatttt ggtaggcaac ttgccaaaat tttggcagga tttcttatat agttatcaaa 960

atttggcagc aaattaaata tagtcacttt tttggcaaat ttactaaaat ttggtaaggt 1020

tgaaaatgac atcaaagtaa acaggccctt attacccacg ggaatggtgt ggggtgggct 1080

ggtaatataa gcccagaaac caatccatcc agcccagcaa ctgcgaggtc ggctgctagt 1140

ctaacgtgca cccaagccat caccccacac gtgaaaaatc cccgctccac ccgcgccgcg 1200

ccgcgcccag gtagttcagc cgcgcgccaa cccaagctcg ctcgccggcc ggaaatggcg 1260

ctccccttcc tcctcctcct cgccttcgcc ctgctcttcc cgctctccgc tcccccgcgc 1320

tgctgctccg cggcccccgc ctcctcgccg cccccgtccc cgcccccttc ccctgcggcg 1380

gcggcggcgg ccccgcgccg cacgccgctc gtcccggcgc tcttcgtgat cggcgactcc 1440

acggcggacg tcggcaccaa caactacctc ggcacgctcg cccgcgccga ccgcgagccg 1500

tacggccgcg acttcgacac ccgccgcccc acggggcgct tctccaacgg ccgcatcccc 1560

gtcgactaca tcggtacgcg ccccccacct tctcgatcgg cggcgccatg gctgtggccc 1620

ctttgctctc tcgtgaatcc tccccccccc cgcttcaaag gttgcaggtg gttctggaat 1680

cgtcgatccg atgctgcttt gcctctcgta cgcctatgga tgcagcatgt tgtgggttta 1740

gtgtaatctg ggttttgggt ttctggtata cgaaggtttt gcttagttgt tggttcctat 1800

gaatttgggg catctgatct catacatcgg gggtatgtgg atttttgccc aacaattgct 1860

gaagctgaag agtaatcagt tcatagcact ctcctacaca gctgaccacc tggatctcac 1920

atacatagac tcctgcggct tcctctcctt gatctcacat agcaatgttg tgggtttagt 1980

gtaatctggg tatttgggtt tctcgcatgc gaggggcttg ctcagttgtt ggttcgtctg 2040

tgggtttctg ccgaacaatt gctgaagctg aagagtaacc agttttgcag cacaaccacc 2100

acagtctggg catcatttga tcctgctgtt cttagcactc ctgcagagct gaccacctgg 2160

atctcacgta tctatataga atcctgcggc ttcctctcca aatcagtatc cagtatccac 2220

caccgttatc agccgttgag gcaatgcatt ggcagaatgc cagaacatta agaagtgcca 2280

tcataatgta caccattagt ccatgcatcc agaaaacatt gccagaatcc tgcaatgtat 2340

ccatttgata gtcctgagtc ccgaccagtt gtctacatgc tccagtctct ttgccaccac 2400

acactgttaa atctctcttg tccaatgtcc accacattct ggacagtttc aaggtcctca 2460

caggaagcac agctgcacaa cctttgttaa tgttgcttta agaaagtcat atctactcat 2520

tagtttcttt gggagagtaa ggagggaaaa ggcataggaa agaaacattt aactagggct 2580

actggctcac tatgtgaaag atgtttccct tcaatttcat ttagctggtg ttctttatct 2640

cttttgcccg tctctgtcag tacttatgtt tttcatgaat caatagtatc ttgttctttc 2700

ttctgttttt aaattatttt ttccgtgatt tcttaatctt agactttttt gtgcatttgc 2760

agcagagaag ctggggcttc cttttgtgcc tccatacctt gaacagaaca tgcgcatggg 2820

tgtcggcagt gtcgacctca gcaacattga tgggatgata caaggtgtca actatgcatc 2880

cgcggcagct ggcattctct ccagcagtgg ttctgagctg gtttgtcctc ctaacttccc 2940

aacaactcta tttcacgctt ataatctagc aggaatgtct ttgtgagacc cttctctaga 3000

ggacgaatca gaaggagggt gtttcaacaa cagactagaa gcaatgactc ttctcatagt 3060

gtctacatcc tctctagtta ggaagaatac ttgctcaacc atttgaacta atgctgaaag 3120

attctcctgt tcggctgctc ccttccttcc atgtgttcca actagtgtgg attatcaggg 3180

catcaaattc ccttcttagt tcctaggaat tcatgactta tatatgcttc ctaccagatg 3240

tgagattgtc tacacgagac gattgatatg ctggtgctga tggggggttt atttatgctg 3300

ctggccttgt ccaagtttgc ttgtgaagct acagtgctat aagttgtatg gttgttttat 3360

tttcctgcac gcataaagca aaaggagata tatgtagcca tctactcaaa gctaatttat 3420

cataattttt ttattgtctg aaactaaaaa actgcatttg ttctatacta tggcttttgg 3480

gatgatcaag gagttagtaa gaatcactga tccggcacca atgtgatgaa attgatgtat 3540

atcatcctga acattccatt ttcatatcaa tctttattcc tgcttatgtt gttgaatctc 3600

caatctttgt gcccaaaaca acaaaaactt gtggagctgc aaatgctaat tttgtcattt 3660

caataaaaca tcatggtggt gtctaaagag gagaaatgtt tacgtatgaa cattgctgca 3720

aagttttcct ttatgtggct atatgtttta actttctata aaggattgga gcctcttggt 3780

tagagtcaag cttgttgatt tgcatacctt ttcattattc ttaaatgtac ttgaaactaa 3840

atcgacatga tcattaacta tataacacca gtctaaagaa caccaatcta aagaacacac 3900

ttaatgcttc tctatgaagg tttctctttt ggtatgtaat acttgctcat cggatgtatc 3960

cttttttgtt actattttgt ctcgtgaact atacatttga agattatttt gtggtggtat 4020

tctttactac tgcggcattc cagcagctgt aaaagtatgt gcaattatac tgttaaaaaa 4080

tctccaacat tggcagtccc ctagcttgga atctgtcgat attttctgtg tttatgttat 4140

gatttcttgc aaacatattt tagattctta aattttaatg gcgtggttgt tctagcttaa 4200

atatgtttag aacaagggat gtgacacctt tactttgtgc agaataaacc ttcatgctga 4260

tctcttgtgt atcaagcctt caggctaggg gtgtaagtgg ctaacccgcg aaacccactt 4320

ataggctaaa ataagccgcg aacccgttta ttttgaccta taagtgggtt cgcggctgac 4380

ccacttacag ccctacttca ggcacatgag gatcaatcat ttcatagtgt gactatttgt 4440

agttatctgt atggccgtaa ataatggcct ctatattgtt ctgtattgga gtatctctct 4500

actatttttt tctctgaaga agagcattct tttacctatt tttggttttc ataatttaat 4560

gtgatgcata atttgattct gttctttttt agataaagga ggctaatttg attctgttct 4620

tgcaattgtg gatgcactgc agggaatgca tgtgtcgctg agccagcagg tgcagcaggt 4680

tgaggacaca tatgagcagc tctctctggc tctcggggag gcagcaacaa ctgacctttt 4740

cagaaagtcc gtgttctttt tctcaatcgg gagcaacgac ttcatccact attacctgcg 4800

caatgtgtct ggcgtccaga tgcgttacct cccatgggag ttcaaccagc ttcttgtcaa 4860

tgcaatgagg caggaaatca aggtgtggtt attgttctcc agtttattct ctctgtgcaa 4920

catttcttgc ctccttatga ttccagtttt agttttttga tcagtgtgtt gcatattgcc 4980

caaaggctgt agtatcgtgc ttagcagtgg ccaatgttgt gagtatgaat ttgatccgta 5040

atttacggcc cgtaaatatt ctgtgcttga aaggtatctg ctctcagttc caccacccag 5100

atgtgaatag ttctttgtac tcctggttag gaatatgttt gagaaaagga ggagtgtgga 5160

cctctgggga ctgcagatac atgaattatg gaaaactagc tatgaacatt aatttttatg 5220

tttcaagggc tagaaaattt tcaaatgttt atagagaaac ctgatatagt acactttttc 5280

tgtaggttaa agttttcaaa tggtggatga gtttaaaacc gtgtacagtt ttggactgaa 5340

gcttctttga gttactgaaa tcctcaggct gtacagtttt tctgtagtta tgaattaggt 5400

taaaaggata ggagggtatt tcatctgtac atttgtaata tgggaaagtt aactgataaa 5460

tacatggaat tgattaactc aatggatatt tatatcgttg gctgttagca gttctgtggt 5520

gttatgtact ttacattctc cgtctaccgt accttagttt cagatttgag gtagtacgtt 5580

gcaacgttgc tcaacaagga catacttgtt ttttatatgt tcattttgaa ttcttaacat 5640

tttgatcaga taaggcggcc ccaaatctga tagggactga tgtaaagtcg atactgaata 5700

ttgtcttgga ctgaatactg tgtttgagtc ccttagttct tggtctgcgc atacttccag 5760

agtggattgt actttgtact gcctcccatt tggaagtgca agctaaatgc gtgttacttt 5820

tgctcaactt gtaggacacc atgcacacta ccaatatgcc catgatctta ccatgataca 5880

aacataattc tcacatcatg cataaatgca taatgcacaa tttgattttc tccctaattt 5940

atcccctttc cttttttgaa cggataattt taatttgcaa aagaattggt aaaaatggcc 6000

ccaaatttct attcagtaaa tctttggcag agcatgcgat gcacattgat tgaggctgca 6060

tgcgccatga gtttatttgt actgtccaac atttgagagc agaaatttct gttaccattg 6120

tactcatcca agttgacttg agatgttgct ttcttgtttc ttaaccttag taaatcagtt 6180

acaatgatgc atttttttat tatttagcca tatgcagttc ttgtcagatt agattattaa 6240

gctatttata tctatatata agagttctgt acttcctgca gaatttgtac aatatcaatg 6300

ttcggaaggt cgtcatgatg ggcctccctc ctgttggctg cgcacctcac tttctctggg 6360

agtacggcag tcaagacggg gaatgcatcg actacatcaa taacgtcgtg attcagttca 6420

actatgccct gagatacatg tctagtgaat tcatccgcca gcacccaggc tctatgatca 6480

gttactgtga tacttttgag gggtctgtgg acatactgaa gaatcgtgac cgctacggtg 6540

agcagatgta tcattgttac tactgtcaga ttgcctttct gtccttaggg aagaactcac 6600

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