一种七味黄芩解毒颗粒及其制备方法和产品质量控制方法

摘要

本发明属于兽用药技术领域，公开一种七味黄芩解毒颗粒及其制备方法和产品质量控制方法。由下原料药制成：黄芩、黄连、白头翁、石榴皮、五味子、石膏、陈皮。取各原料药，分别制成粗粉；将黄芩粗粉加乙醇提取，滤过，回收乙醇并浓缩至稠膏，干燥成黄芩干浸膏粉；将黄连粗粉加水煎煮，滤过，经膜分离后浓缩至稠膏，喷雾干燥成黄连干浸膏粉；剩余其它原料药粗粉加水在沸腾状态下连续逆流式提取，滤过，滤液经膜分离后得澄清液，浓缩成稠膏，喷雾干燥成干浸膏粉；将上述干浸膏粉合并，加入辅料，混匀，制成颗粒，干燥，即得。本发明颗粒剂组方合理、吸收率高，可以通过混饮或混饲添加，使用方便，有利于集约化、规模化养殖。

说明书

技术领域

本发明属于兽用药技术领域，具体涉及一种七味黄芩解毒颗粒及其制备方法和产品质量控制方法。

背景技术

仔猪腹泻，表现多样，原因复杂，临床上必须辨证分析、综合治疗，才能取得理想的效果；如果只是针对腹泻进行施治，很可能会贻误病情，导致严重的后果。该疾病给畜牧业带来巨大危害。

腹泻不是一个单独的疾病，而是全身性疾病或胃肠道疾病综合症候群的症状之一。只有透过这个症状，进行仔细的推断和分析，我们才能够看到引起腹泻的种种因素。

引起腹泻的因素非常复杂，临床常见的有微生物性因素、中毒性因素、寄生虫性因素、内科疾病性因素、营养性因素、应激性因素、神经性因素、功能性因素等多种。微生物性因素是由细菌、病毒和其他病原微生物感染引起，其中冠状病毒、大肠杆菌、沙门氏杆菌、魏氏梭菌感染引起的腹泻最为多见；中毒性因素包括兽药中毒、农药中毒、食盐中毒、饲料中毒；寄生虫性因素多为线虫、蛔虫、球虫、弓形体在体内寄生引起；内科疾病性因素有胃肠炎、肝炎等；其他因素有蛋白质过高、过度惊吓、胃酸分泌不足、气温过低、饮用冷水以及转群不当引起应激等。

仔猪腹泻是造成养猪经济损失的重要原因之一，若治疗不及时，将对仔猪的成活率和生长发育有很大影响。目前，国内养猪场普遍采用抗生素进行治疗，造成猪体内抗生素大量残留。

发明内容

为克服现有技术中存在的不足之处，本发明的目的旨在提供一种七味黄芩解毒颗粒及其制备方法和产品质量控制方法。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案如下：

一种七味黄芩解毒颗粒，由下述重量百分比的原料药制成：黄芩20-40%、黄连10-30%、白头翁10-30%、石榴皮10-20%、五味子10-20%、石膏10-20%、陈皮10-20%。

本发明处方机理：方中黄芩性寒，味苦，具有清热燥湿以及凉血安胎和解毒的功效，治壮热烦渴、肺热咳嗽、湿热泻痢，故为君药；黄连、白头翁性味苦寒，为臣药，以加强君药清热解毒、利咽消肿之功；石榴皮性酸涩，涩肠，止血，驱虫，治久泻，久痢；五味子虽五味俱全，但以酸咸为主，其性虽温，但非温燥可比，长于收敛肺气、滋肾阴、涩精止泻、生津敛汗等作用，石榴皮和五味子合用增强止泻功效，石膏与之配伍，借石膏清气分热、阻睾透气机作用，可使里热及半表半里之热尽透发而解；陈皮温、辛、苦，具有健脾和胃、行气宽中、降逆化痰的功效。诸药合用，共奏清热燥湿解毒、抗菌消炎、敛肺涩肠，调节脾胃功能从而扭转病机，截断病势。本产品可从抗病毒、抗菌、消炎、解热、调脾胃等多方位调节和治疗，从而使热清、邪散、脾胃失和等诸病得以缓解。

根据中兽药理论进行组方后，本发明处方主要是对微生物因素引起的仔猪腹泻的预防和治疗，具有更强的清热解毒，抗菌消炎能力，临床使用更有效。本发明七味黄芩解毒颗粒呈黄褐色至棕褐色的颗粒；味微甜、苦，主要用于治疗和预防微生物因素引起的仔猪腹泻，颗粒剂使用方便，利于吸收。用法用量：混饲，每kg饲料拌药60-180g，连用3-5天。

制备方法：按比例取各原料药，分别制成粗粉；将黄芩粗粉加6-8重量倍的60-70%乙醇提取数次，每次1-2h，滤过，合并滤液，回收乙醇并浓缩至60℃相对密度1.20-1.25的稠膏，喷雾干燥成黄芩干浸膏粉，备用；将黄连粗粉加6-8重量倍的水煎煮数次，每次1-2h，滤过，合并滤液，滤液经膜分离后浓缩至60℃相对密度1.20-1.25的稠膏，喷雾干燥成黄连干浸膏粉，备用；剩余其它原料药粗粉加6-8重量倍的水在沸腾状态下连续逆流式提取0.5-1.5小时，滤过，滤液经膜分离后得澄清液，浓缩成60℃相对密度1.20-1.25的稠膏，喷雾干燥成干浸膏粉，备用；将上述干浸膏粉合并，加入2-4倍干浸膏粉总重量的辅料，混匀，用乙醇做粘合剂，制成颗粒，干燥，即得七味黄芩解毒颗粒。

所述连续逆流式提取为药材与溶剂在浸出容器中沿相反方向运动，连续而充分地进行接触提取的一种方法。正向进料、反向进溶剂，物料与溶剂的流动为逆向连续动态流动，使药材和溶媒能保持相对运动，使料液浓度扩散更新持续作用，进而保证了料液浸出速度快。

较好地，两处所述膜分离为超滤分离，材质为聚丙烯或聚砜，截留分子量为6万-10万。

较好地，所述辅料的重量百分比组成为：乳糖50-70%、可溶性淀粉30-50%。

产品质量控制方法：采用TLC法对所得七味黄芩解毒颗粒中的黄芩、黄连、白头翁、石榴皮、五味子和陈皮进行鉴别；水分、粒度、溶化性、装量和微生物限度检查均符合《中华人民共和国兽药典》2015年版二部附录颗粒剂项下；采用HPLC法测定黄芩苷和橙皮苷的含量。

有益效果：本发明方法中，将原料药破碎成粗粉，有利于有效成分的溶出，比饮片提取缩短提取时间；连续逆流式提取有诸多优点：提取速度快、有效成分提取充分、提取收得率高、溶剂耗量少、药液浓度高、减少了蒸发浓缩等后续处理艺、滚筒内药材粗粉移动速度可调节，从而可根据药材特点调节提取时间的长短、药材在温和的动态环境下进行提取，加热温度较低、有效成分破坏较少，使药液中杂质含量少，属于连续式生产，处理能力大。总体上，七味黄芩解毒颗粒，符合国家发布的新兽药范畴；通过技术改造，去除了不必要的杂质，增加了有效成分含量，利于仔猪的吸收，从而提高治疗疗效。此外，本发明颗粒剂组方合理、吸收率高，可以通过混饮或混饲添加，使用方便，有利于集约化、规模化养殖。

具体实施方式

实施例1

一种七味黄芩解毒颗粒，其由下述重量百分比原料药制成：黄芩20%、黄连20%、白头翁20%、石榴皮10%、五味子10%、石膏10%、陈皮10%。

制备方法：按比例取各原料药，分别制成粗粉；将黄芩粗粉加7重量倍的60v%乙醇先提取2h，滤过，药渣再加7重量倍的60v%乙醇提取1h，滤过，合并两次提取滤液，回收乙醇并浓缩至60℃相对密度1.23的稠膏，喷雾干燥成黄芩干浸膏粉，备用；将黄连粗粉加7重量倍的水先煎煮1.5h，滤过，药渣再加7重量倍的水煎煮1h，合并两次煎煮滤液，滤液经膜分离后浓缩至60℃相对密度1.23的稠膏，喷雾干燥成黄连干浸膏粉，备用；剩余其它原料药粗粉加7重量倍的水在沸腾状态下连续逆流式提取1h，滤过，滤液经膜分离后得澄清液，浓缩成60℃相对密度1.23的稠膏，喷雾干燥成干浸膏粉，备用；将上述干浸膏粉合并，加入3倍干浸膏粉总重量的辅料，混匀，用85v%乙醇做粘合剂，制成颗粒，干燥，即得七味黄芩解毒颗粒；其中，两处所述膜分离均为超滤分离，材质为聚丙烯，截留分子量为8万；所述辅料的重量百分比组成为：乳糖60%、可溶性淀粉40%。

实施例2

一种七味黄芩解毒颗粒，其由下述重量百分比原料药制成：黄芩30%、黄连10%、白头翁10%、石榴皮20%、五味子10%、石膏10%、陈皮10%。

制备方法：按比例取各原料药，分别制成粗粉；将黄芩粗粉加6重量倍的70v%乙醇先提取2h，滤过，药渣再加6重量倍的70v%乙醇提取1h，滤过，合并两次提取滤液，回收乙醇并浓缩至60℃相对密度1.20的稠膏，喷雾干燥成黄芩干浸膏粉，备用；将黄连粗粉加6重量倍的水先煎煮2h，滤过，药渣再加6重量倍的水煎煮1h，合并两次煎煮滤液，滤液经膜分离后浓缩至60℃相对密度1.20的稠膏，喷雾干燥成黄连干浸膏粉，备用；剩余其它原料药粗粉加6重量倍的水在沸腾状态下连续逆流式提取0.5h，滤过，滤液经膜分离后得澄清液，浓缩成60℃相对密度1.20的稠膏，喷雾干燥成干浸膏粉，备用；将上述干浸膏粉合并，加入2倍干浸膏粉总重量的辅料，混匀，用80v%乙醇做粘合剂，制成颗粒，干燥，即得七味黄芩解毒颗粒；其中，两处所述膜分离均为超滤分离，材质为聚丙烯，截留分子量为6万；所述辅料的重量百分比组成为：乳糖50%、可溶性淀粉50%。

实施例3

一种七味黄芩解毒颗粒，其由下述重量百分比原料药制成：黄芩30%、黄连10%、白头翁10%、石榴皮10%、五味子10%、石膏10%、陈皮20%。

制备方法：按比例取各原料药，分别制成粗粉；将黄芩粗粉加8重量倍的70v%乙醇先提取2h，滤过，药渣再加8重量倍的70v%乙醇提取1h，滤过，合并两次提取滤液，回收乙醇并浓缩至60℃相对密度1.25的稠膏，喷雾干燥成黄芩干浸膏粉，备用；将黄连粗粉加8重量倍的水先煎煮2h，滤过，药渣再加8重量倍的水煎煮1h，合并两次煎煮滤液，滤液经膜分离后浓缩至60℃相对密度1.25的稠膏，喷雾干燥成黄连干浸膏粉，备用；剩余其它原料药粗粉加8重量倍的水在沸腾状态下连续逆流式提取1.5h，滤过，滤液经膜分离后得澄清液，浓缩成60℃相对密度1.25的稠膏，喷雾干燥成干浸膏粉，备用；将上述干浸膏粉合并，加入4倍干浸膏粉总重量的辅料，混匀，用80v%乙醇做粘合剂，制成颗粒，干燥，即得七味黄芩解毒颗粒；其中，两处所述膜分离均为超滤分离，材质为聚丙烯，截留分子量为6万；所述辅料的重量百分比组成为：乳糖70%、可溶性淀粉30%。

产品质量控制例1：

性状本品为呈黄褐色至棕褐色的颗粒；味微甜、苦。

鉴别

（1）为方中黄芩的薄层色谱鉴别：

供试品溶液的制备：取本品5.0g，研细，加甲醇20mL及浓盐酸1～2滴，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。

对照品溶液的制备：取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。

阴性溶液的制备：按照处方药材比例与制法，制备缺黄芩药材的阴性样品，同供试品溶液制法操作，作为阴性对照溶液。

固定相：硅胶G薄层板。

展开剂：乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（5∶3∶1∶1，体积比）。

点样量：5-10μL。

展开距离：8-10cm。

检视：展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铁乙醇溶液，置日光下检视。

结论：实施例1~3供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，缺黄芩阴性样品色谱在相应的位置上无干扰。

（2）为方中黄连的薄层色谱鉴别：

供试品溶液的制备：取本品5.0g，加硅藻土2 g，研细，加甲醇50mL，加热回流1小时，滤过，滤液，滤液浓缩至2ml使溶解，作为供试品溶液。

对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。

缺黄连阴性溶液的制备：按照处方药材比例与制法，制备缺黄连的阴性对照样品，取缺黄连的阴性样品5.0g，按供试品溶液制备方法，制得缺黄连阴性溶液。

展开条件的选择：吸取上述三种溶液各2-5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-异丙醇-浓氨试液-甲醇（6∶3∶1.5∶1.5∶0.5，体积比）为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸内，预饱和30分钟，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。

结论：实施例1~3供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，缺黄连阴性样品色谱在相应的位置上无干扰。

（3）为方中白头翁的薄层色谱鉴别：

供试品溶液的制备：取本品10g，研细，加甲醇20mL，超声处理10分钟，滤过，滤液，滤液浓缩至2mL使溶解，作为供试品溶液。

对照品溶液的制备：另取白头翁对照药材1g，同法制成对照药材溶液。

缺白头翁阴性溶液的制备：按照处方药材比例与制法，制备缺白头翁阴性对照样品，按供试品溶液制备方法，制得阴性溶液。

展开条件的选择：吸取上述三种溶液各5-10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，正丁醇-醋酸-水(4∶1∶2，体积比)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至班点显色清晰。

结论：实施例1~3供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，缺白头翁阴性样品色谱在相应的位置上无干扰。

（4）为方中石榴皮的薄层色谱鉴别：

供试品溶液的制备：取本品20g，研细，加无水乙醇80mL，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20mL使溶解，滤过，滤液用石油醚(60-90℃)振摇提取2次，每次20mL，弃去石油醚液，水液再用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。

对照品溶液的制备：另取没食子酸对照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。

阴性溶液的制备：按照处方药材比例与制法，制备缺石榴皮药材的阴性样品，同供试品溶液制法操作，作为阴性对照溶液。

固定相：聚酰胺薄膜。

展开剂：乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(10∶1∶1∶1，体积比)。

点样量：5-10μl。

展开距离：8-10cm。

检视：展开，取出，晾干，喷以1％三氯化铁乙醇溶液，日光下检视。

结论：实施例1~3供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，缺石榴皮阴性样品色谱在相应的位置上无干扰。

（5）为方中五味子的薄层研究

供试品溶液的制备：取本品10g，研细，加三氯甲烷50mL，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1mL使溶解，作为供试品溶液。

对照品溶液的制备：另取五味子对照药材1g，同法制成对照药材溶液。

阴性溶液的制备：按照处方药材比例与制法，制备缺五味子药材的阴性样品，同供试品溶液制法操作，作为阴性对照溶液。

固定相：硅胶GF₂₅₄薄层板.

展开剂：石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1，体积比)的上层溶液为展开剂。

点样量：5-10μL。

展开距离：8-10cm。

检视：展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。

结果：实施例1~3供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照样品在相应的位置上无干扰。

（6）为方中陈皮的薄层色谱鉴别：

供试品溶液的制备：取本品5g，研细，加甲醇20mL，加热回流30分钟，滤过，滤液，滤液浓缩至2mL使溶解，作为供试品溶液。

对照品溶液的制备：另取橙皮苷对照品，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液。

缺陈皮阴性溶液的制备：按照处方药材比例与制法，制备缺陈皮阴性对照样品，按供试品溶液制备方法，制得阴性溶液。

展开条件的选择：吸取上述三种溶液各2-5μL，分别点于同一用0.5％氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，乙酸乙酯-甲醇-水(100∶17∶13，体积比)为展开剂，展至约3cm，取出，晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水(20∶10∶1∶1，体积比)的上层溶液为展开剂，展至约8cm，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯(365nm)下检视。

结论：实施例1~3供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，缺陈皮阴性样品色谱在相应的位置上无干扰。

产品质量控制例2

按《中国兽药典》2015版二部附录颗粒剂要求及质量标准草案，对产品进行了性状、粒度、水分、溶化性、装量、微生物限度及装量检查。结果见表1。

产品质量控制例3--测定黄芩苷的含量

测定方法定为：

【仪器与试药】高效液相色谱仪：Agilent Technologies 1260，安捷伦色谱数据工作站，紫外可变波长检测器（安捷伦科技有限公司）。

对照品：黄芩苷，批号：110715-201318，含量为93.3%，购自中国食品药品检定研究院。

七味黄芩解毒颗粒：实施例1、实施例2、实施例3的产品。

甲醇、乙腈为色谱纯，其它试剂都采用分析纯。

【色谱条件与系统适用性试验】用十八烷基硅烷键合硅胶为填料；流动性A为甲醇，流动性B为0.2%磷酸溶液，按表2程序进行梯度洗脱；检测波长为278nm。理论板数按黄芩苷峰计应不低于2000。

【对照品溶液的制备】 取黄芩苷对照品（批号：110715-201318，含量为93.3%，购自中国食品药品检定研究院）适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含60µg的溶液，即得。

【供试品溶液的制备】本品研细，取约5g，精密称定，加70v%乙醇40 mL，加热回流3h，放冷，滤过，滤液置100 mL量瓶中，用少量70v%乙醇分次洗涤容器和残渣，洗液滤入同一量瓶中，加70v%乙醇至刻度，摇匀。精密量取1 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

【测定法】 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10µL，注入液相色谱仪，测定，即得。

产品含量测定结果见表3。

产品质量控制对照例4--测定橙皮苷的含量

测定方法定为：

【仪器与试药】高效液相色谱仪：Agilent Technologies 1260，安捷伦色谱数据工作站，紫外可变波长检测器（安捷伦科技有限公司）。

对照品：橙皮苷，批号：110571-201405，含量为93.2%，购自中国食品药品检定研究院。

七味黄芩解毒颗粒：实施例1、实施例2、实施例3的产品。

甲醇、乙腈为色谱纯，其它试剂都采用分析纯。

【色谱条件与系统适用性试验】以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-醋酸-水(35∶4∶61，体积比)为流动相；检测波长为283nm。理论板数按橙皮苷峰计算应不低于2000。

【对照品溶液的制备】取橙皮苷对照品（批号：110571-201405，含量为93.2%，购自中国食品药品检定研究院）适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液，即得。

【供试品溶液的制备】本品研细，取约10g，精密称定，置索氏提取器中，加石油醚(60～90℃)80mL，加热回流2～3小时，弃去石油醚，药渣挥干，加甲醇80mL，再加热回流至提取液无色，放冷，滤过，滤液置100mL量瓶中，用少量甲醇分数次洗涤容器，洗液滤入同一量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

【测定法】分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μL，注入液相色谱仪，测定，即得。

产品含量测定结果见表4。

动物实验例

1 材料与方法

1.1 试验药物

试验第1组～试验第3组：实施例3七味黄芩解毒颗粒高、中、低剂量三个组。

试验第4组为药物对照组：硫酸庆大霉素注射液，规格：10mL∶0.2g(20万单位) 。

1.2 试验动物

温县养猪场7日龄仔猪，突发腹泻（自然发病），腹泻波及全群，病仔猪主要表现为精神萎靡，食欲减退，仔猪出现拉稀现象。所有试验用猪均采用仔猪全价料，自由采食、自由饮水。

1.3试验方法

1.3.1 试验动物分组及处理

采用随机原则分组，每组10只。其中试验第1～3组为实施例3七味黄芩解毒颗粒高、中、低剂量三个组；试验第4组为硫酸庆大霉素注射液药物对照组。

1.3.2临床疗效的观察

（1）观察时间：首次用药开始观察，停止给药后继续观察5天；

（2）临床症状及记录：试验期间，每天观察并记录猪的临床表现，如精神、食欲、饮水量、腹泻次数、天数，各粪便形态变化等。

1.3.3疗效评价标准

治愈：经用药后临床症状消失，精神及采食情况恢复正常，腹泻停止，粪便形态正常判为治愈。每组治愈仔猪数占每组试验仔猪数的百分率为治愈率。

有效：经用药后临床症状减轻，精神及采食情况改善，腹泻次数减少，粪便形态改善判为有效。每组有效仔猪数占每组试验仔猪数的百分率为有效率。

1.4数据分析与处理

采用SPSS17.0统计软件进行数据分析与处理。计数资料采用X²检验；计量资料采用t检验或方差分析，P>

2 结果与分析

停止给药后第5天，统计七味黄芩解毒颗粒各剂量组的疗效，结果见表6。

由表6可知：各组均无仔猪死亡；通过给予不同剂量的七味黄芩解毒颗粒5天后，腹泻停止或减轻，精神以及食欲好转，其中以七味黄芩解毒颗粒高剂量组最佳；硫酸庆大霉素注射液组，治疗效果不理想，分析原因可能是产生了耐药性。

试验结果表明：七味黄芩解毒颗粒使用方便，利于吸收，具有治疗仔猪腹泻的作用，其效果明显地好于普通硫酸庆大霉素抗生素药物。

上述实施例为本发明优选的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明所作的改变均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。