过表达尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶基因及其重组大肠杆菌的构建方法和纯化方法

摘要

本发明公开了过表达尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶基因及其重组大肠杆菌PLY127‑2的构建方法和纯化方法，特点是通过克隆嗜酸乳杆菌ATCC4356的UGPase基因LBA0625片段连接到pET‑28a表达载体上，转化至大肠杆菌BL21（DE3）中，通过红霉素抗性筛选并鉴定获得带有目的基因的重组菌，即过表达尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶基因的重组大肠杆菌，对重组大肠杆菌进行诱导后，并利用Ni‑NTA琼脂糖亲和层析成功纯化出UGPase，优点是诱导后的UGPase酶活为456.14IU/L，是对照组的2.34倍，获得的UGPase的活性回收率为53.55%，蛋白纯化倍数为12.96倍。