法律状态公告日
法律状态信息
法律状态
2018-09-25
授权
授权
2017-05-24
实质审查的生效 IPC(主分类):G01N30/89 申请日:20161215
实质审查的生效
2017-04-26
公开
公开
技术领域
本发明属于药物分析技术领域,具体涉及一种甲磺酸沙芬酰胺有关物质的检测方法。
背景技术
帕金森是仅次于阿尔茨海默症的第二大常见老年慢性神经退化疾病,好发于中老年人。65岁以上人群的发病率为1~2%。临床主要以静止性震颤、肌强直、运动迟缓、姿势步态异常为特征。主要病理特征为黑质多巴胺能神经元变性缺失及路易小体形成。左旋多巴虽然是治疗帕金森病有效的金标准,但长期服用L-dopa会导致许多不良反应,比如运动波动、异动症、精神症状等,并且L-dopa并不能延缓疾病的进展。因此,开发既能改善PD症状,又能延缓疾病进展的药物被提上了日程。单胺氧化酶B(MAO-B)抑制剂正是在这样的研究背景下诞生了。MAO-B抑制剂通常作为单药治疗早期的PD患者,或者被添加到晚期PD患者的治疗方案中以能更好地控制症状并减少所需的其他帕金森病药物的剂量。甲磺酸沙芬酰胺的活性成分沙芬酰胺是一种α-氨基酰胺衍生物,本品具有多种作用机制,不仅可高选择性及可逆性地抑制MAO-B,还可以抑制多巴胺再摄取,阻断电压依赖的钠通道、调节钙通道,从而抑制谷氨酸释放,而对MAO-A没有作用。2012年5月完成了针对早期和晚期病人的四个关键性III期临床试验,从超过2000位PD患者中得到长期和短期数据,证明沙芬酰胺具有很好的安全谱以及类似于同类其他药物的疗效。甲磺酸沙芬酰胺的化学名称为(S)-2-[4-(3-氟苄氧基)苄氨基]丙酰胺甲磺酸盐,结构式如下:
经检索,目前针对甲磺酸沙芬酰胺有关物质分析方法的相关专利(CN101896456B)无法有效分离沙芬酰胺的邻氟异构体(杂质E)和脱氟杂质(杂质D)。因此,开发可以对多种甲磺酸沙芬酰胺有关物质进行检测的方法,对其质量控制具有重要意义。
发明内容
本申请的发明人开发了一种甲磺酸沙芬酰胺有关物质的分析检测方法,该方法专属性好,能将可能的工艺杂质、降解杂质和可能的残留中间体与主成分有效分开,该方法灵敏度高、重复性好、准确度高,可应用于甲磺酸沙芬酰胺有关物质的质量控制。
本发明的目的是提供一种甲磺酸沙芬酰胺有关物质的检测方法。
在本发明的实施方案中,本发明提供了一种甲磺酸沙芬酰胺有关物质的检测方法,其中,所述甲磺酸沙芬酰胺有关物质包括甲磺酸沙芬酰胺合成工艺及降解情况产生的杂质,优选地为下列5个杂质:杂质C、杂质D(脱氟杂质)、杂质E(邻氟异构体)、杂质I和杂质M,杂质化学结构如下:
在本发明的实施方案中,本发明提供了一种甲磺酸沙芬酰胺有关物质的检测方法,包括如下步骤:
采用反相高效液相色谱法,以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱填料,采用紫外检测器,选用含有辛烷磺酸钠的流动相进行洗脱,分为两次测定甲磺酸沙芬酰胺中的有关物质,即有关物质Ⅰ和有关物质Ⅱ,总杂质含量为有关物质Ⅰ和有关物质Ⅱ项下杂质含量之和;
测定所述有关物质Ⅰ和有关物质Ⅱ的流动相均为乙腈、甲醇、磷酸二氢钾水溶液与辛烷磺酸钠所得的混合溶液;
色谱柱规格为4.6*100mm,3.5μm,优选品牌和型号为Waters Symmetry Shield RP18;
检测波长为210nm~230nm,优选为220nm;
流速为0.6~0.9ml/min,优选为0.7ml/min;
进样量为5~20μl,优选为10μl;
磷酸二氢钾水溶液的浓度为0.05mol/L。
在本发明的实施方案中,本发明提供的一种甲磺酸沙芬酰胺有关物质的检测方法,其中,有关物质Ⅰ的测定条件为:
流动相A的配制方法为:取0.05mol/L的磷酸二氢钾水溶液、乙腈和甲醇,按照体积比为600:150:250混合后,每1000ml混合液中加入1g~3g的辛烷磺酸钠,优选为2g,混匀;
流动相B的配制方法为:取0.05mol/L的磷酸二氢钾水溶液、乙腈和甲醇,按照体积比为400:300:300混合后,每1000ml混合液中加入1g的辛烷磺酸钠,混匀;
洗脱程序为:
有关物质Ⅱ的测定条件为:流动相的配制方法为:取0.05mol/L的磷酸二氢钾水溶液、乙腈和甲醇,按照体积比475:175:350混合后,每1000ml混合液中加入1g的辛烷磺酸钠,混匀;运行时间为沙芬酰胺峰保留时间的8倍。
在本发明的实施方案中,本发明提供的一种甲磺酸沙芬酰胺有关物质的检测方法,还包括如下操作:
有关物质Ⅰ和有关物质Ⅱ的样品配制:称取甲磺酸沙芬酰胺适量,用稀释剂(有关物质Ⅰ项下的流动相A)溶解并稀释制成每1ml约含甲磺酸沙芬酰胺1.5mg的溶液作为供试品溶液;精密量取供试品溶液适量,用稀释剂定量稀释制成每1ml约含甲磺酸沙芬酰胺1.5μg的溶液作为对照溶液。
在本发明的实施方案中,本发明提供的一种甲磺酸沙芬酰胺有关物质的检测方法,其中,在计算总杂质含量时,有关物质Ⅰ项下沙芬酰胺峰后的杂质不进行计算和统计;有关物质Ⅱ项下沙芬酰胺峰前的杂质不进行计算和统计,即总杂质含量为有关物质Ⅰ项下沙芬酰胺峰前杂质和有关物质Ⅱ项下沙芬酰胺峰后杂质含量之和。
经有关物质定位试验、专属性破坏试验、定量限检测限试验、线性试验和准确度试验对本发明的方法进行了方法学验证,证明本发明提供的一种甲磺酸沙芬酰胺有关物质的检测方法具有下述优点:
(1)甲磺酸沙芬酰胺中的沙芬酰胺与各有关物质以及各有关物质之间均能达到良好分离。
(2)本方法专属性良好。
(3)本方法灵敏度高,能够有效检测的杂质浓度均低于报告限。
(4)甲磺酸沙芬酰胺和5个有关物质在一定浓度范围内,均呈现良好线性关系。
(5)本方法准确度良好。
附图说明
图1表示的是专利CN101896456B实施例25A的甲磺酸沙芬酰胺的报道方法检测色谱图。
图2表示的是甲磺酸沙芬酰胺有关物质的混合溶液色谱图。
图3表示的是甲磺酸沙芬酰胺有关物质的未破坏色谱图。
图4表示的是甲磺酸沙芬酰胺有关物质溶液的光照破坏色谱图。
图5表示的是甲磺酸沙芬酰胺有关物质固体的光照破坏色谱图。
图6表示的是甲磺酸沙芬酰胺有关物质溶液的高温破坏色谱图。
图7表示的是甲磺酸沙芬酰胺有关物质固体的高温破坏色谱图。
图8表示的是甲磺酸沙芬酰胺有关物质的酸破坏色谱图。
图9表示的是甲磺酸沙芬酰胺有关物质的碱破坏色谱图。
图10表示的是甲磺酸沙芬酰胺有关物质的氧化破坏色谱图。
具体实施方式
以下实施例用于进一步理解本发明,但本发明的保护范围不限于本实施例。
实施例1
三批甲磺酸沙芬酰胺原料药及其有关物质检测
仪器及色谱条件:
采用安捷伦1260高效液相色谱仪,以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(Waters Symmetry RP18,4.6×100mm,3.5μm),柱温为30℃;流速为0.7ml/min;检测波长为220nm;
有关物质Ⅰ 取辛烷磺酸钠2.0g,加入0.05mol/L的磷酸二氢钾水溶液600ml,乙腈150ml和甲醇250ml,混匀,作为流动相A;取辛烷磺酸钠1.0g,加入0.05mol/L的磷酸二氢钾水溶液400ml,乙腈300ml和甲醇300ml,混匀,作为流动相B;按下表进行梯度洗脱:
精密量取系统适用性溶液、供试品溶液和对照溶液各10μl,分别注入液相色谱仪,记录色谱图;
有关物质Ⅱ 取辛烷磺酸钠1.0g,加入0.05mol/L的磷酸二氢钾水溶液475ml,乙腈175ml和甲醇350ml,混匀,作为流动相;精密量取系统适用性溶液、供试品溶液和对照溶液各10μl,分别注入液相色谱仪,记录色谱图至主成分峰保留时间的8倍;
总杂质的含量为有关物质Ⅰ和有关物质Ⅱ项下各杂质含量之和;
实验步骤:
取甲磺酸沙芬酰胺原料药适量,用稀释剂(有关物质Ⅰ项下的流动相A)溶解并稀释制成每1ml中约含甲磺酸沙芬酰胺1.5mg的溶液,作为供试品溶液;精密量取供试品溶液适量,用稀释剂定量稀释制成每1ml中约含甲磺酸沙芬酰胺1.5μg的溶液,作为对照溶液。
另精密称定甲磺酸沙芬酰胺、杂质C、杂质D、杂质E、杂质I、杂质M对照品各适量,用稀释剂溶解并稀释制成每1ml中含甲磺酸沙芬酰胺约1.5mg、杂质C、杂质D、杂质E和杂质I均约1.5μg、杂质M约0.45μg的溶液,作为系统适用性溶液。
系统适用性中沙芬酰胺及各杂质保留时间及分离度结果见下表:
系统适用性溶液在两种测定条件下,主峰与相邻杂质分离度均大于2.0,有关物质Ⅰ条件下,沙芬酰胺峰前各已知杂质与相邻杂质分离度均大于2.0,有关物质Ⅱ条件下,沙芬酰胺峰后各已知杂质与相邻杂质分离度均大于2.0,系统适用性良好。
三批甲磺酸沙芬酰胺原料药有关物质检测结果见下表:
实施例2
有关物质定位试验
仪器及色谱条件同实施例1
实验步骤:
分别称取杂质C、杂质D、杂质E、杂质I和杂质M的对照品适量,分别用稀释剂溶解并定量稀释制成每1ml约含杂质C、杂质D、杂质E、杂质I为150μg、杂质M为45μg的溶液作为各杂质的定位溶液;混合溶液的配制方法同实施例1的系统适用性溶液,取上述各杂质的定位溶液和混合溶液分别注入液相色谱仪,记录色谱图。沙芬酰胺与各杂质的分离度结果见下表,图谱见图2:
结果显示:甲磺酸沙芬酰胺中的沙芬酰胺与各有关物质以及各有关物质之间均能达到良好分离。
实施例3
专属性破坏试验
仪器及色谱条件同实施例1
实验步骤:
精密称取甲磺酸沙芬酰胺适量,在1mol/L盐酸溶液、1mol/L氢氧化钠溶液、60℃高温、4500Lx白光和紫外光的混合光照、3%过氧化氢溶液等条件下分别对其进行强制破坏试验,各破坏样品配制方法见下表,图谱见图3~图10:
分别按下表配制各专属性破坏样品溶液:
取上述溶液分别进样并记录色谱图,破坏结果见下表:
质量平衡结果见下表:
结果表明:各破坏条件下沙芬酰胺与相邻杂质的峰的分离度符合要求,降解杂质不干扰已知杂质的检测。采用DAD检测器检测,进行峰纯度检查,结果显示各强制降解试验条件下,沙芬酰胺峰的纯度因子均大于990,峰纯度符合要求。各降解条件下,质量平衡均在90%~110%之间,说明本申请的检测方法专属性良好。
实施例4
定量限、检测限试验
仪器及色谱条件同实施例1
实验步骤:
采用信噪比法测定甲磺酸沙芬酰胺及其各有关物质的检测限和定量限。分别配制甲磺酸沙芬酰胺和各有关物质的贮备液,稀释至一定浓度并进样,计算峰高和噪音的比值(信噪比),当信噪比(S/N)约为10的样品检测量即为定量限,信噪比(S/N)约为3的样品检测量即为检测限,具体配制方法如下:
有关物质Ⅰ 精密称取甲磺酸沙芬酰胺、杂质C、杂质D和杂质E对照品适量,用稀释剂溶解并稀释制成每1ml约含甲磺酸沙芬酰胺为0.06μg、杂质C为0.03μg、杂质D为0.06μg和杂质E为0.06μg的溶液,作为有关物质Ⅰ的定量限溶液;另用稀释剂稀释制成每1ml约含甲磺酸沙芬酰胺为0.03μg、杂质C为0.006μg、杂质D为0.03μg和杂质E为0.03μg的溶液,作为有关物质Ⅰ的检测限溶液;取上述溶液分别进样,定量限溶液中各成分的信噪比(S/N)约为10,检测限溶液信噪比(S/N)约为3。
有关物质Ⅱ 精密称取甲磺酸沙芬酰胺、杂质I和杂质M对照品适量,用稀释剂溶解并稀释制成每1ml约含甲磺酸沙芬酰胺为0.03μg、杂质I为0.06μg和杂质M为0.14μg的溶液,作为有关物质Ⅱ的定量限溶液;另用稀释剂稀释制成每1ml约含甲磺酸沙芬酰胺为0.009μg、杂质I为0.01μg和杂质M为0.05μg的溶液,作为有关物质Ⅱ的检测限溶液;取上述溶液分别进样,定量限溶液中各成分的信噪比(S/N)约为10,检测限溶液信噪比(S/N)约为3。
有关物质Ⅰ和有关物质Ⅱ各成分的定量限、检测限具体结果见下表:
结果显示:甲磺酸沙芬酰胺及各有关物质的定量限浓度均小于供试品浓度的0.02%,能够准确控制各有关物质的含量。
实施例5
线性试验
仪器和色谱条件同实施例1
实验步骤:
精密称取甲磺酸沙芬酰胺及各有关物质适量,用稀释剂溶解,配制不同浓度的溶液,具体配制方法如下:
有关物质Ⅰ 精密称取甲磺酸沙芬酰胺、杂质C、杂质D和杂质E对照品适量,用稀释剂溶解并稀释制成含甲磺酸沙芬酰胺、杂质C、杂质D和杂质E浓度均约为6μg/ml,作为线性贮备液。
按下表配制各线性测试溶液,用于有关物质Ⅰ线性试验:
取上述溶液分别进样并记录色谱图,以浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,分别得到甲磺酸沙芬酰胺与杂质C、杂质D和杂质E(6各不同浓度)的线性回归方程;
有关物质Ⅱ 精密称取甲磺酸沙芬酰胺、杂质I和杂质M对照品适量,用稀释剂溶解并稀释制成含甲磺酸沙芬酰胺和杂质I浓度均约为6μg/ml、杂质M浓度约1.8μg/ml,作为线性贮备液。
按下表配制线性测试溶液,用于有关物质Ⅱ线性试验:
取上述溶液分别进样并记录色谱图,以浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,分别得到甲磺酸沙芬酰胺与杂质I和杂质M(5各不同浓度)的线性回归方程;
有关物质Ⅰ和有关物质Ⅱ的线性结果见下表:
结果显示:甲磺酸沙芬酰胺和5个有关物质在一定浓度范围内,均呈现良好线性关系。
实施例6
准确度试验
仪器和色谱条件同实施例1
实验步骤:
分别精密称取甲磺酸沙芬酰胺及各有关物质适量,用稀释剂配制成含有甲磺酸沙芬酰胺浓度为1.5mg/ml及杂质C、杂质D和杂质E浓度分别为0.15μg/ml(相当于限度的10%)、1.5μg/ml(相当于限度的100%)、2.25μg/ml(相当于限度的150%)的溶液用于有关物质Ⅰ的准确度试验,每个浓度三份;含有甲磺酸沙芬酰胺浓度为1.5mg/ml及杂质I和杂质M浓度分别为0.06μg/ml和0.15μg/ml(定量限浓度)、1.5μg/ml和0.45μg/ml(相当于限度的100%)、2.25μg/ml和0.675μg/ml(相当于限度的150%)的溶液,用于有关物质Ⅱ的准确度试验,每个浓度三份;分别进样并记录色谱图,计算回收率,结果见下表:
结果表明:各有关物质在定量限或10%限度水平~150%限度水平范围内,回收均在85%~110%之间,说明本方法的准确度良好。
机译: (54)标题:杀虫剂混合物(57)摘要:本发明涉及一种用于提高植物健康的农药混合物,其包含作为活性成分的1)除草化合物(I),所述除草化合物(I)选自:(i)苯甲酸,选自苯甲酰胺,麦草畏和2,3,6-TBA; (ii)吡啶羧酸,选自氯吡咯烷酮,氟草烟,吡咯烷和三氯吡喃; (iii)喹喹啉羧酸,选自喹克洛拉和喹美拉克; (iv)苯那唑啉-乙基; 2)选自N-(3″,4″,5″-三氟联苯-2-基)-3-二氟甲基H-memyi-1H-吡唑-4-甲酰胺的杀真菌化合物(II)(俗称:fluxapyroxad),N- [2-(4“-三氟甲硫基)-联苯菲基] -3-二氟甲基-1-甲基-1 H-吡唑-4-羧酰胺,-N-(3”,4“-二氯-5-氟联苯基-2-基)-3-二氟甲基-1-甲基吡唑基-4-羧酰胺(通用名称:比沙芬),N- [2-(1,3-丁乙基丁基)-苯基] -1,3-二甲基-5-氟-l H-吡唑-4-羧酰胺(通用名称:penflu
机译: 一种生产大量连续法沙芬的方法以及大量连续法沙芬的方法
机译: 包含环丙氨酰胺和比沙芬或吡沙酰胺和任选的邻苯二唑的活性化合物组合