补骨脂酚在制备用于预防和/或治疗良性前列腺增生的药物中的用途

摘要

本发明实施例公开了补骨脂酚在制备用于预防和/或治疗良性前列腺增生的药物中的用途。由于补骨脂酚通过促进上皮细胞中ERβ的表达，抑制间质细胞中芳香化酶的表达，可以抑制BPH进程，从而能够预防和/或治疗良性前列腺增生，用于制备预防和/或治疗良性前列腺增生的药物。进一步地，本发明所提供的药物提取物，同样能够预防和/或治疗良性前列腺增生。

说明书

技术领域

本发明涉及医药技术领域，特别涉及补骨脂酚在制备用于预防和/或治疗良性前列腺增生的药物中的用途。

背景技术

良性前列腺增生症(Benign Prostatic Hyperplasia，BPH)属中老年男性泌尿外科的常见疾病类型。流行病学数据表明BPH的发生率随年龄的增长而增加，近年来，随着人口老龄速度的加快，BPH患者的数量和比例呈现进一步增长的趋势。通常最初发生在40岁以后，到60岁时发病率大于50％，80岁时发病率可高达83％，成为广泛影响老龄男性生活质量和身体健康的最常见泌尿系统疾病。随着前列腺体积不断增大，从而压迫前列腺部尿道，引起膀胱出口梗阻，导致患者出现不同程度的排尿困难等症状，严重者可出现双侧上尿路积水并导致肾功能不全，如果治疗不及时极易导致血尿、急性尿潴留、膀胱结石、肾功能衰竭和前列腺癌等严重并发症，严重影响老年男性的生活质量。

BPH是一个复杂的，包括腺体和间质组织增生的组织学变化过程。在正常前列腺中，上皮主要表达AR(雄激素受体)和ER(雌激素受体)的β亚型(简称ERβ)，间质主要表达ER的α亚型(简称ERα)和芳香化酶；增生时上皮可见少量芳香化酶和ERα，间质也可检测到AR和ERβ，提示AR、ERα/β和芳香化酶与前列腺增生的发展密切相关。雄激素(如：睾酮testosterone，双氢睾酮DHT)或雌激素(17β-雌二醇，E2)特异性地与AR或ER结合，并且激活AR或ER而进入细胞核，与靶基因上DNA序列ARE或ERE结合，在多种辅助调节因子(cofactor)和RNA聚合酶的作用下，激活靶基因转录，发挥经典的“基因组效应”；此外，激活的AR或ER还可以不入核而快速激活下游激酶的级联反应发挥“非基因组效应”。通过调节靶基因的转录，雄/雌激素参与细胞内多种通路，而调控细胞增殖、分化等行为。

前列腺为雄激素依赖器官，研究显示，正常的前列腺上皮中AR是细胞增殖的抑制因子，而增生的上皮细胞或前列腺癌细胞中AR则促进上皮增殖。同时AR还是上皮间质化的促进因子，具有抑制上皮细胞特异的N-cadherin(神经型钙黏蛋白)、Snail表达，促进间质细胞特异的Vimentin(波形蛋白)表达的作用。在生长因子调控方面，IL-6、EGF、IGF-1、TGFβ等可以明显上调AR的转录活性；而一些生长因子(如IGF-1)的启动子还含有多个雄激素应答元件(ARE)序列。

近年来，雌激素在前列腺增生中的作用越来越受到关注和重视。和雄激素类似，雌激素通过特异性结合雌激素受体ER发挥作用。对雌激素诱导的大鼠BPH模型的研究显示，增生早期前列腺组织中去分化标记分子SMemb表达增加，基底细胞呈Vimentin阳性染色；提示ER参与了可塑性细胞去分化和EMT(上皮间质转化)。除了直接效应，ER还参与介导了上皮-间质的相互作用，间接调控细胞的增殖和相关基因的表达。例如，雌二醇可以激活上皮中ERα，促进其转化生长因子TGFβ的合成和旁分泌作用，进而促进间质中平滑肌细胞的分化。

另外，体内的雄激素可以通过芳香化酶转化生成雌激素的活性形式雌二醇。芳香化酶活性的提高或表达的增加可以使雌激素浓度升高，进而增强雌激素在靶器官的作用效果。在前列腺中，芳香化酶主要在间质细胞中表达，发生BPH时芳香化酶表达明显增加。

由于BPH是一种老年男性的高发疾病，患者不具备手术指征的较多，药物成为BPH治疗的首选。

发明内容

本发明人通过广泛研究发现，补骨脂酚通过促进上皮细胞中ERβ的表达，抑制间质细胞中芳香化酶的表达，可以抑制BPH进程，并基于此完成了本发明。

本发明的第一方面提供了补骨脂酚在制备用于预防和/或治疗良性前列腺增生的药物中的用途。其中，补骨脂酚的化学结构式如下：

在本发明的第一方面的一种具体实施方式中，所述补骨脂酚通过上调上皮细胞ERβ表达和/或下调间质细胞芳香化酶表达抑制前列腺细胞的增殖。

在本发明的第一方面的另一种具体实施方式中，其中所述药物给予有需要的对象的每日剂量以补骨脂酚计为0.01-1000mg/kg体重，优选为0.1-100mg/kg体重，更优选为1-100mg/kg体重。

在本发明的第一方面的再一种具体实施方式中，其中所述补骨脂酚是以补骨脂酚单体的形式提供的，或者是以包含补骨脂酚的植物提取物的形式提供的。

优选地，所述补骨脂酚是以包含补骨脂酚的补骨脂提取物的形式提供的。

本文中，所说的“补骨脂”是指中药补骨脂，中药补骨脂为豆科植物补骨脂Psoralea colrylifolia L.的果实，始载于《雷公炮炙论》，性温，味辛、苦，归肾、脾经，具有补肾助阳，纳气止泻的功效。多用于治疗腰膝冷痛，滑精，遗尿，尿频，五更泄泻，虚寒咳嗽等症。补骨脂酚(Bakuchiol)是补骨脂的主要脂溶性成分之一，其在补骨脂中含量一般在11.2-51.4mg/g。另外，补骨脂提取物的提取方式现有技术中多有报道，本文在此不进行赘述，本领域技术人员可以通过现有的任意方式获取补骨脂提取物。

本发明的第二方面提供了一种用于预防和/或治疗良性前列腺增生的药物组合物，其包含补骨脂酚和药学上可接受的载体或赋形剂。

在本发明的第二方面的一种具体实施方式中，基于所述药物组合物的总重量，所述补骨脂酚的含量为1-99％，优选为20-80％，更优选为40-60％。

在本发明的第二方面的另一种具体实施方式中，所述药学上可接受的载体或赋形剂选自溶剂、稀释剂、分散剂、助悬剂、表面活性剂、等渗剂、增稠剂、乳化剂、防腐剂、粘合剂、润滑剂、稳定剂、水合剂、乳化加速剂、缓冲剂、吸收剂、着色剂、香味剂、甜味剂、离子交换剂、脱模剂、涂布剂、矫味剂、和抗氧化剂。

在本发明的第二方面的再一种具体实施方式中，所述药物组合物配制为散剂、片剂、粉剂、胶囊剂、丸剂、滴丸剂、注射剂、乳剂、混悬剂或酊剂中的任意一种剂型。上述各种剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备。

本文中，术语“治疗”具有其一般含义，并且在本文特别地是指对已经罹患本发明所述良性前列腺增生疾病的哺乳动物个体(优选为人)采用本发明的药物进行处理，以期对所述疾病产生治疗、治愈、缓解、减轻等作用。类似地，如本文使用的，术语“预防”具有其一般含义，并且在本文特别地是指对可能罹患本发明所述良性前列腺增生疾病或者对本发明所述良性前列腺增生疾病具有罹患风险的哺乳动物个体采用本发明的药物进行处理，以期对所述疾病产生防止、预防、阻止、隔断等作用。

本文中，“药学上可接受的”表示当以通常用药剂量使用时没有实质的毒性作用，从而可被政府或与其相当的国际组织批准或者已被批准用于动物，更特别地用于人，或者被登录在药典上。

本发明药物组合物中可用的“药学上可接受的载体或赋形剂”可以是药物制剂领域中任何常规的载体，特定载体的选择将取决于用于治疗特定患者的给药方式或疾病类型和状态。用于特定给药模式的合适药物组合物的制备方法完全在药物领域技术人员的知识范围内。

如本文使用的，术语“药物组合物”具有其一般含义。此外，本发明的“药物组合物”还可以以保健品、功能性食品、食品、食品添加剂等形式存在或提供。可采用制药领域特别是制剂领域中的常规技术，通过药品生产中常用的提取分离纯化手段得到本发明的药物组合物的原料的有效成分，任选地与一种或更多种药学可接受的载体或赋形剂混合，然后形成所需的剂型，来制备本发明的药物组合物。根据本发明的药物组合物，其为可以适用于口服给药、胃肠外给药或局部给药、外用给药的药物制剂，尤其适用于口服给药。用于口服施用的剂型可包括例如片剂、丸剂、硬或软胶囊剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、糖浆剂、散剂、粉剂、细粒剂、颗粒剂、小丸剂、酏剂等，并不限于此。除了活性成分外，这些制剂还可包含稀释剂(例如乳糖、右旋糖、蔗糖、甘露糖醇、山梨糖醇、纤维素和甘氨酸)、润滑剂(例如二氧化硅、滑石、硬脂酸或其镁盐、钙盐和聚乙二醇)。片剂还可包含粘合剂，例如硅酸镁铝、淀粉糊、明胶、黄芪胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和聚乙烯吡咯烷。必要时，其还可包含药用添加剂，例如崩解剂(如淀粉、琼脂、海藻酸或其钠盐)、吸收剂、着色剂、香味剂、甜味剂等。片剂可根据常用的混合、造粒或包衣的方法制备。

可见，补骨脂酚通过促进上皮细胞中ERβ的表达，抑制间质细胞中芳香化酶的表达，可以抑制BPH进程，从而能够预防和/或治疗良性前列腺增生，用于制备预防和/或治疗良性前列腺增生的药物。进一步地，本发明所提供的药物提取物，同样能够预防和/或治疗良性前列腺增生。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1所表达的是补骨脂酚对BPH-1和WPMY-1细胞增殖的影响。其中，A为补骨脂酚抑制BPH-1细胞增殖的结果；B为补骨脂酚抑制WPMY-1细胞增殖的结果；C为补骨脂酚抑制BPH-1细胞PCNA在蛋白和基因水平的表达的结果；D为补骨脂酚抑制WPMY-1细胞PCNA在蛋白和基因水平的表达的结果。

图2所表达的是补骨脂酚对AR和ER蛋白表达的影响。其中，A为补骨脂酚对BPH-1细胞中AR在蛋白和基因水平表达的影响；B为补骨脂酚对WPMY-1细胞中AR在蛋白和基因水平表达的影响；C为补骨脂酚对BPH-1细胞中ERβ在蛋白和基因水平表达的影响；D为补骨脂酚对WPMY-1细胞中ERα在蛋白和基因水平表达的影响；E为补骨脂酚对LNCaP细胞AR核转位的影响(左)及定量结果(右)。

图3所表达的是补骨脂酚对BPH-1细胞中ERβ表达和转录活性的影响。其中，A为补骨脂酚以浓度依赖方式促进BPH-1细胞中ERβmRNA水平表达；B为补骨脂酚以时间依赖方式促进BPH-1细胞中ERβmRNA水平的表达；C为补骨脂酚促进BPH-1细胞中ERβ蛋白水平的表达；D为siERβ抑制BPH-1细胞中ERβ表达；E为siERα抑制BPH-1细胞中ERα表达；F为补骨脂酚对BPH-1细胞中ERE转录活性的影响；G为抑制ERα或Erβ的表达时，补骨脂酚对BPH-1细胞中ERE转录活性的影响；其中，与对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与E2比较，#P＜0.05。

图4所表达的是补骨脂酚对WPMY-1细胞中芳香化酶的表达和转录活性的影响。其中，A为补骨脂酚对芳香化酶蛋白水平表达的影响；B为补骨脂酚以浓度依赖方式抑制WPMY-1细胞中芳香化酶基因水平的表达的影响；C为补骨脂酚以时间依赖方式抑制WPMY-1细胞中芳香化酶在蛋白水平表达；D为不同浓度的补骨脂酚对WPMY-1细胞中芳香化酶在基因水平表达的抑制作用。

图5所表达的是补骨脂酚对雌雄激素诱导的BPH大鼠前列腺的影响。其中，A为各组大鼠前列腺形态图；B为补骨脂酚对BPH大鼠前列腺指数(PI)的影响；C为补骨脂酚对BPH大鼠前列腺组织病理形态的影响图；D为前列腺组织中PCNA、AR、芳香化酶、ERβ蛋白表达的结果；E为α-SMA在前列腺组织中的表达与分布的影响；F为PCNA在前列腺组织中的表达与分布的影响。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1、MTT法检测补骨脂酚对前列腺上皮细胞和前列腺间质细胞增殖的影响

以5×10³/孔的密度分别将前列腺上皮细胞(BPH-1)和前列腺间质细胞(WPMY-1)铺于96孔板中，37℃培养过夜后分别加入100μL浓度为1nmol/L、10nmol/L、100nmol/L、1μmol/L、10μmol/L浓度的补骨脂酚(bakuchiol,ba)，设置未加补骨脂酚的对照组，继续培养72h。每孔加10μL>

实施例2、PCR和western blot法分别检测补骨脂酚对PCNA表达的影响

以2×10⁶/孔的密度分别将前列腺上皮细胞(BPH-1)和前列腺间质细胞(WPMY-1)铺于6孔板中，37℃培养过夜后加入1.5mL浓度为1nmol/L、10nmol/L、100nmol/L、1μmol/L、10μmol/L的补骨脂酚，设置未加补骨脂酚的对照组，培养24小时后提取细胞总RNA，然后反转录，PCR检测PCNA相对GAPDH的表达量(引物序列参见表1)。培养48小时，用RIPA>

结果显示，补骨脂酚抑制BPH-1细胞中PCNA在蛋白和基因水平的表达(图1中C)，补骨脂酚抑制WPMY-1细胞中PCNA在蛋白和基因水平的表达(图1中D)。

表1引物序列

表2抗体信息

实施例3、补骨脂酚对前列腺上皮细胞和前列腺间质细胞中ER和AR的表达和活性的调节作用

(1)PCR和western blot法分别检测补骨脂酚对ER和AR表达的影响

BPH-1细胞主要表达的类固醇激素受体有AR和ERβ，而WPMY-1细胞主要表达AR和ERα。发明人分别检测补骨脂酚对这两种细胞中的AR和ER表达的影响。

以2×10⁶/孔的密度分别将前列腺上皮细胞(BPH-1)和前列腺间质细胞(WPMY-1)铺于6孔板中，37℃培养过夜后加入1.5mL浓度为1nmol/L、10nmol/L、100nmol/L、1μmol/L、10μmol/L浓度的的补骨脂酚，设置未加补骨脂酚的空白组，培养24小时后提取细胞总RNA，然后反转录，PCR检测BPH-1细胞中AR和ERβ在mRNA水平的表达量，WPMY-1细胞中AR和ERα在mRNA水平的表达量(引物序列参见表1)。培养48小时，用RIPA>

结果显示，补骨脂酚对BPH-1细胞中AR的表达没有明显作用(图2中A)，对WPMY-1细胞中AR蛋白水平的表达具有轻微促进作用(图2中B)，但对mRNA水平的表达没有明显上调。ER方面，补骨脂酚可以上调BPH-1细胞中mRNA和蛋白水平上ERβ的表达(图2中C)，但对WPMY细胞中ERα的作用不明显(图2中D)。

(2)检测补骨脂酚对LNCaP细胞AR核转位的影响

10％FBS RPMI 1640培养LNCaP细胞(一种前列腺癌细胞系)，用含10％活性炭处理血清的RPMI 1640将LNCaP细胞接种到96孔黑色酶标板上，种板后细胞贴壁24小时。设置未加药的对照组、DHT的阳性对照组和补骨脂酚实验组，加药细胞种板24小时贴壁后换液，分别加入100μL浓度为10μmol/L的补骨脂酚，100μL浓度为1μmol/L的DHT。弃去培基，加4％多聚甲醛200μL/孔固定。吸弃多聚甲醛，用PBS洗细胞。用含0.5％Triton X-100的PBS透化细胞，1％BSA 200μL/孔封闭60分钟。用抗体稀释液稀释一抗，置于4℃冰箱孵育过夜。吸弃一抗，用PBST洗细胞三次。用抗体稀释液稀释二抗和Hoechst 33342(二抗稀释比例1：1000，Hoechst 33342稀释比例1:10000)，室温避光2小时。吸弃二抗和染料，HCS检测AR和Hoechst 33342荧光强度(抗体信息参见表2)。结果见图2中E。

从图2中E可以看出，补骨脂酚可以促进LNCaP细胞AR从胞质转位至细胞核，与双清睾酮一致。体现出补骨脂酚的雄激素活性。

(3)补骨脂酚对BPH-1细胞中ERβ表达和活性调节的浓度和时间依赖效应

基于图2中C补骨脂酚促进ERβ表达的结果，发明人进一步研究其浓度和时间依赖效应。以2×10⁶/孔的密度分别将前列腺上皮细胞(BPH-1)铺于6孔板中，37℃培养过夜后分别加入1.5mL浓度为1nmol/L、10nmol/L、100nmol/L、1μmol/L、10μmol/L的补骨脂酚，设置未加补骨脂酚的对照组，培养24小时后提取细胞总RNA，然后反转录，PCR检测BPH-1细胞中ERβ在mRNA水平的表达量(引物序列参见表1)。

以2×10⁶/孔的密度分别将前列腺上皮细胞(BPH-1)铺于6孔板中，37℃培养过夜后加入1.5mL浓度为10μmol/L的补骨脂酚，设置未加补骨脂酚的空白组，分别在培养0小时、6小时、12小时、24小时后提取细胞总RNA，然后反转录，PCR检测BPH-1细胞中ERβ在mRNA水平的表达量(引物序列参见表1)。

以2×10⁶/孔的密度分别将前列腺上皮细胞(BPH-1)铺于6孔板中，37℃培养过夜后分别加入1.5mL浓度为10nmol/L、100nmol/L、1μmol/L的补骨脂酚，设置未加补骨脂酚的对照组，培养48小时，用RIPA>

结果表明，补骨脂酚以浓度依赖和时间依赖方式抑制BPH-1细胞中ERβmRNA水平的表达(图3中A和图3中B)，蛋白水平上，10nM至1μM的补骨脂酚均可明显促进ERβ的表达(图3中C)。

(4)启动子活性的检测

发明人进一步分析了补骨脂酚对BPH-1中雌激素应答元件(ERE)活性的调控是否特异性地由ERβ介导。

(i)用含1％FBS的RPMI培养液将BPH-1细胞，90％密度接种24孔板，细胞贴壁后，按照Lipofectamine2000(invitrogen)说明书分别转染siERβ或siERα，6h后换液培养24h，PCR检测BPH-1中ERβ或ERα在mRNA水平的表达，western blot法检测BPH-1中ERβ或ERα相对GAPDH的表达。

结果显示，siERβ、siERα特异性抑制BPH-1细胞中本底水平的ERβ、ERα表达(图3中D和图3中E)。

(ii)用含1％FBS的RPMI培养液将BPH-1细胞，90％密度接种24孔板，细胞贴壁后，按照Lipofectamine2000(invitrogen)说明书转染ERE-luceferase reporter质粒(0.15μg/孔)、ERα/β(0.075g/孔)、siERα/β(10pM/孔)和Renilla(0.075μg/孔)6h后分别加入500μL浓度为10nmol/L、100nmol/L、1μmol/L的补骨脂酚和浓度为10nmol/L、100nmol/L的雌二醇(E2)进行处理。孵育24h后加入裂解液，分别检测Firefly luciferase和Renillar luciferase荧光数值数值，计算不同条件下的相对荧光值。全部测定值至少重复3次，统计每孔数据进行数据分析。

结果显示，单独添加E2或1μmol/L补骨脂酚可以促进ERE的活性(图3中F)。抑制ERα的表达，E2或1μmol/L补骨脂酚对ERE转录活性依然具有促进作用，同时两者加入时，补骨脂酚和E2竞争ERβ，ERE的转录活性相比单独E2处理时明显下调(图3中G)。与此相反，抑制ERβ的表达，E2可以促进ERE转录活性，但1μmol/L补骨脂酚失去了对ERE转录活性的促进作用，同时两者加入时，补骨脂酚不与E2竞争ERα，ERE的转录活性相比单独E2处理时无差异性变化(图3中G)。

实施例4、补骨脂酚对WPMY-1细胞中芳香化酶表达的影响

以2×10⁶/孔的密度将WPMY-1细胞铺于6孔板中，37℃培养过夜后加入1.5mL浓度为10nmol/L、100nmol/L、1μmol/L、10μmol/L的补骨脂酚，设置未加补骨脂酚的对照组，培养48小时，用RIPA>

以2×10⁶/孔的密度将WPMY-1细胞铺于6孔板中，37℃培养过夜后分别加入1.5mL浓度为10nmol/L、100nmol/L、1μmol/L、10μmol/L的补骨脂酚，设置未加补骨脂酚的对照组，培养24小时后提取细胞总RNA，然后反转录，PCR检测WPMY-1细胞中芳香化酶在mRNA水平的表达量(引物序列参见表1)。培养48小时，用RIPA>

以2×10⁶/孔的密度将WPMY-1细胞铺于6孔板中，37℃培养过夜后加入1.5mL浓度为10μmol/L的补骨脂酚，设置未加补骨脂酚的对照组，分别在培养0小时、24小时、48小时后用RIPA>

实施例5、补骨脂酚抑制雌雄激素诱导的大鼠BPH进程

(1)BPH大鼠模型的建立

8周龄SPF级Wistar雄性大鼠，体重在270±20g，实验动物适应性饲养一周后开始去势手术。随机选取6只实验动物作为正常对照组，对其实行假手术，作为假手术组(shame)。随机选取12只大鼠均做去势手术，完全摘除双侧睾丸及其附睾，并注射青霉素1.2万个单位/只。

(2)计算实验动物的前列腺增生指数

12只经去势手术后的大鼠随机分为2组，分别为模型组、补骨脂酚组，术后21天开始给药，假手术组腹腔注射0.1mL/天玉米油，假手术组腹腔注射0.1mL雌二醇/睾酮(E₂/T，1:100，E2浓度为100μg/ml)造模，补骨脂酚组腹腔注射0.1ml>2/T(1:100，E2浓度为100μg/ml)和补骨脂酚5mg/kg。连续给药28天，末次给药后24小时完成取材。取出前列腺组织，各组大鼠前列腺形态图参见图5中A；用电子天平精确称量前列腺的湿重，用来计算各组实验动物的前列腺指数，按照公式：前列腺的湿重/大鼠体重×100％，计算前列腺前列腺指数(PI)。如图5中A和B所示，和假手术组相比，模型组前列腺体积增大，PI指数明显增加；给药补骨脂酚后前列腺体积和PI均明显下降，接近假手术组；切取两侧前列腺组织的冻于液氮中，用于后期的western>

(3)补骨脂酚对BPH大鼠前列腺组织病理形态的影响

用切片机将石蜡包埋的前列腺组织蜡块切至4μm/片。二甲苯使石蜡切片脱蜡，经各级乙醇后至水洗，苏木素染色5min，大量自来水冲洗。盐酸乙醇分化30秒。自来水浸泡15min。置伊红液染色2min。脱水，透明，中性树脂封片。显微镜下镜检结果参见图5中C。对照组(假手术组)腺泡扩张不明显，腺泡上皮细胞多呈现高柱状，且间质成分较少，平滑肌细胞未见增生。模型组与对照组比较，间质成分明显增多，腺泡体积增大，腺上皮细胞排列紊乱，结缔组织增生较为明显，腺泡内出现了复层上皮，提示腺上皮和结缔组织的大量增生是BPH的主要特征之一。补骨脂酚给药组与模型组相比，间质成分有所减少，腺上皮细胞排列紊乱的现象均得到不同程度的缓解，局部腺泡排列较为密集，接近正常对照组。

(4)补骨脂酚对BPH大鼠前列腺组织中PCNA、AR、芳香化酶、ERβ蛋白表达的影响

从液氮中取出本实施例步骤(2)中BPH大鼠前列腺组织样品，用加入150μLRIPA Buffer裂解液，超声破碎后提取组织总蛋白，BCA法测定蛋白浓度，电泳分离不同分子量的蛋白，转至PVDF膜，然后加入一抗(抗体信息参见表2)，4℃孵育过夜，用TBST洗膜。二抗孵育1小时，免疫反应及化学发光、显影、定影均严格参照试剂盒，按实验步骤操作，检测BPH大鼠前列腺组织中PCNA、AR、芳香化酶、ERβ在蛋白水平相对GAPDH的表达量。结果显示，与模型组比较，补骨脂酚能够抑制PCNA、AR、芳香化酶的蛋白水平表达，并能促进ERβ的蛋白水平表达(图5中D)。

(5)前列腺组织中α-SMA和PCNA的表达和分布

α-SMA是平滑肌细胞的标记蛋白，PCNA是细胞增殖的标记蛋白。进一步通过免疫组织化学方法检测两者的表达和分布情况。经石蜡包埋后切取的前列腺组织切片在60℃的电热恒温箱中干烤1小时，依次浸入二甲苯脱蜡、各级乙醇后至水洗，3％过氧化氢溶液中10min，放柠檬酸抗原修复液中100℃反应10min，使其自然冷却15分钟，再次加热100℃10min，用10％牛血清封闭30min。将稀释好的一抗(见表3)滴加至组织的表面，4℃孵育过夜。滴加稀释好的二抗(见表4)，37℃孵育30min。将稀释好三抗滴加到组织上(表5)，37℃孵育20min。DAB显色、苏木素复染。经过各级醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。结果显示，BPH的模型组α-SMA阳性染色的平滑肌细胞层厚度与假手术组相比明显增加，补骨脂酚组的平滑肌细胞层厚度与模型组相比较均明显减少(图5中E)；模型组的PCNA在上皮和间质中均可见表达，其阳性率与对照组相比明显上调；给药补骨脂酚后，间质和上皮中PCNA的阳性率明显降低(图5中F)。

表3IHC一抗稀释比例

表4IHC二抗稀释比例

表5IHC三抗稀释比例

以上对本发明所提供的补骨脂酚在制备用于预防和/或治疗良性前列腺增生的药物中的用途进行了详细介绍。本文中应用了具体实施例对本发明的原理及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其中心思想。应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护。