具黑色素产生抑制作用、胶原蛋白产生促进作用、以及促进伤口愈合速度的化合物

摘要

本发明是提供一种具黑色素产生抑制作用以及胶原蛋白产生促进作用的化合物，实验结果证实该化合物具有高度的抑制活性，特别是作用于人类皮肤纤维母细胞中的MMP‑9的基因表达量以及MITF的基因表达量。再者，该化合物可显着地抑制MMP‑9基因表达量与MITF基因表达量，人类皮肤纤维母细胞中的胶原蛋白生成量同时被提升，且人类皮肤纤维母细胞中的黑色素同时被抑制。

说明书

技术领域

本发明是关于一种化合物，尤指可萃取自天山雪莲中具黑色素产生抑制作用以及胶原蛋白产生促进作用的化合物。

背景技术

黑色素是透过存在于皮肤的黑色素细胞(melanocyte)之中的酪氨酸酶(tyrosinase)作用，由酪氨酸(tyrosine)经由多巴(dopa，中文全名:3,4-二羟苯丙胺酸，英文全名:3,4-dihydroxyphenylalanine)透过酵素性反应(enzymatic reaction)或者非酵素性氧化反应(non-enzymatic oxidation reaction)而产生。考虑皮肤的色斑、雀斑等的色素沉着(pigmentation)，可以发现荷尔蒙分泌的异常或过度暴露于紫外线之下容易使得黑色素过量产生并沉积于皮肤内。

为了达到皮肤美白(skin whitening)的目的，美白医学人员以美白剂或者美白化妆料配合(matching)L-抗坏血酸(L-ascorbic acid)、L-抗坏血酸的衍生物、曲酸(kojic acid)、熊果苷(arbutin)、或对苯二酚(hydroquinone)作为治疗配方，用以治疗或减缓因黑色素过量沉积所导致的色斑或雀斑。然而，在临床的治疗过程中，美白医学人员发现上述治疗配方存在有稳定性或溶解度(solubility)差的缺点。此外，上述治疗配方在淡化或去除黑色素上的效果仍不尽理想，若通过提升配方中L-抗坏血酸(或曲酸)的浓度以加强美白效果，又担心会衍生安全性问题。

鉴于上述原由，本案的发明人极力加以研究发明，终于研发完成本发明的一种具黑色素产生抑制作用以及胶原蛋白产生促进作用的化合物。

发明内容

本发明的主要目的，在于提供一种使用式I化合物来制备抑制黑色素产生、促进胶原蛋白产生、以及促进伤口愈合速度的组合物的用途：

不同于萃取自绵头雪莲(Saussurea laniceps)的酪氨酸酶抑制剂(tyrosinase inhibitor)或黑色素产生抑制剂(melanogenesis inhibitor)，本发明是提供一种具黑色素产生抑制作用、胶原蛋白产生促进作用、以及促进伤口愈合速度的式I化合物。并且，本发明的实施例证实，该式I化合物是具有高度活性，特别是指在人类皮肤纤维母细胞中抑制黑色素细胞主调节因子(microphthalmia-associated transcription factor，MITF)的基因表达量、抑制基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9，MMP-9)的基因表达量、胶原蛋白生成量的促进活性、以及黑色素的抑制活性。

根据本发明的较佳实施例，剂量8ng/mL～18ng/mL的该式I化合物能使人类皮肤纤维母细胞(human normal skin fibroblasts)中的MMP-9的基因表达量平均下降达50％以上。

根据本发明的较佳实施例，剂量8ng/mL～18ng/mL的该式I化合物能使人类皮肤纤维母细胞中的胶原蛋白分泌量增加至少20％。

根据本发明的较佳实施例，剂量8ng/mL～18ng/mL的该式I化合物能使人类皮肤纤维母细胞中的MITF的基因表达量平均下降40％以上。

根据本发明的较佳实施例，剂量8ng/mL～18ng/mL的该式I化合物是能够使得小鼠黑色素瘤细胞(mouse melanoma cells)中的黑色素(melanin)下降至少20％。

根据本发明的较佳实施例，剂量8ng/mL～18ng/mL的该式I化合物能使人类皮肤纤维母细胞中的损伤区域的填补/修补百分比增加达1.21～1.4倍。

本发明的另一方面是提供一种具黑色素产生抑制作用、胶原蛋白产生促进作用、以及促进伤口愈合速度的组合物，包含药学上可接受的载剂及有效量的式I化合物。

根据本发明的实施例，所述组合物中的所述式I化合物的剂量为8 ng/ml～18ng/ml。所述组合物的形式为选自由下列所组成的群组：悬浮液、溶液、乳胶、软膏、乳液、乳霜、胶状物、胶囊、及粉末；所述组合物进一步包含对苯二酚、水杨酸、果酸、玻尿酸或其任意组合；并且所述组合物的使用为局部施用或口服。

本发明的另一方面是提供一种式I化合物的制备方法，包含以下步骤：

(S1)制备天山雪莲的外植体；

(S2)将步骤(S1)的所述外植体制备为愈伤组织，以进一步制得所述愈伤组织的液体培养基；

(S3)对所述液体培养基进行加工以获得所述愈伤组织的生物质，并进一步制备生物质研磨物；

(S4)对所述生物质研磨物进行萃取，以获得至少一种上清液；以及

(S5)利用管柱层析法自所述上清液中分离出所述式I化合物。

根据本发明的较佳实施例，步骤(S1)的所述天山雪莲的外植体是通过培养天山雪莲植株的幼叶而制得，并且步骤(S4)的所述萃取是使用50％-100％乙醇。

本发明的式I化合物能抑制黑色素产生、促进胶原蛋白产生、以及促进伤口愈合。因此，该化合物可应用于制备美白、抗老、以及促进伤口愈合的保养品、化妆品、伤口敷料、药剂或食品的用途，以改善个人的皮肤健康。

附图说明

图1显示一种具黑色素产生抑制作用以及胶原蛋白产生促进作用的化合物的制造方法流程图；

图2显示利用管柱层析法自该上清液中分离出天山雪莲萃取物的流程图；

图3A显示萃取物D的¹H-NMR光谱图；

图3B显示萃取物D的¹³C-NMR光谱图；

图3C显示萃取物D的DEPT图；

图3D显示萃取物D的NOESY图；

图3E显示萃取物D的COSY图；

图3F显示萃取物D的HSQC图；

图3G显示萃取物D的HMBC图；

图4是显示各组别的MMP-9基因表达量的统计直方图；

图5是显示各组别的胶原蛋白分泌量的统计直方图；

图6是显示各组别的MITF基因表达量的统计直方图；

图7是显示各组别的黑色素定量分析的统计直方图；

图8是各组别的人类皮肤纤维母细胞的显微镜影像图(100X)；

图9是各组别的损伤区域的填补/修补百分比统计直方图。

具体实施方式

为了能够更清楚地描述本发明所提出的一种具黑色素产生抑制作用、胶原蛋白产生促进作用、以及促进伤口愈合速度的化合物，以下将配合图式，详尽说明本发明的较佳实施例。

天山雪莲(Saussurea involucrata)主要生长于中国新疆、青海、甘肃、云南和西藏等高寒地区，一般可于海拔2400～4100公尺的雪线附近的岩石缝和悬崖峭壁之间发现其踪迹。由于天山雪莲含有丰富的生物活性成分、营养成分和矿质元素，使得国内外学者开展了对野生天山雪莲全面的研究。

本发明的具黑色素产生抑制作用、胶原蛋白产生促进作用、以及促进伤口愈合速度的化合物可萃取自天山雪莲，且该化合物由下列式I所表示；其中，式I所表示的化学结构为倍半萜衍生物(Sesquiterpenoid derivative)。

为了使得相关技术人员能够依循特定制程或方法以获取本发明所述的化合物，以下将进一步说明该化合物的制造方法。请参阅图1，是一种具黑色素产生抑制作用、胶原蛋白产生促进作用、以及促进伤口愈合速度的化合物的制造方法流程图。如图1所示，该化合物的制造方法主要包括以下5个主要方法步骤:

(S1)制备天山雪莲(Saussurea involucrata)的外植体；

(S2)将该外植体培养基制备为愈伤组织(Callus tissue)培养基，以进一步制得液体培养基；

(S3)对该液体培养基进行加工以获得该愈伤组织的生物质(biomass)，并进一步地完成生物质研磨物的制备；

(S4)对该生物质研磨物进行萃取，以获得至少一种上清液(supernatant)；以及

(S5)利用管柱层析法(Column Chromatography)自该上清液中分离出所述的倍半萜衍生物。

必须进一步说明的是，上述步骤(S1)包括以下所列的详细步骤：

(S11)自雪莲植株(plant of S.involucrata)取得其至少一幼叶(young leaf)，并将该至少一幼叶切成复数个叶段(leaf segments)；

(S12)以漂白剂(bleach，1.5-2％次氯酸钠)对该复数个叶段进行漂洗(rinsing)，历时10分钟；进一步地，以无菌水(sterile water)冲洗该复数个叶段，历时3分钟；

(S13)将该复数个叶段接种于固态培养基(solid culture medium)之上；其中，所述的固态培养基为MS培养基；

(S14)将所述的固态培养基置于无光环境(dark environment)中，并以18℃至30℃的培养温度对该固态培养基进行避光培养，历时5周；

并且，上述步骤(S2)包括以下所列的详细步骤：

(S21)自前述步骤(S14)所获得的该固态培养基中取出该复数个叶段，并进一步自该复数个叶段中取出至少一愈伤组织(Callus tissue)；

(S22)将所获得的愈伤组织捣碎，并以消毒镊子(sterilized forceps)将其转移至烧瓶(flask)内；其中，该烧瓶中预先置放有100mL的液体MS培养基；

(S23)将该烧瓶置于无光环境中，并以25℃、150rpm的培养条件对该烧瓶进行振荡培养制程(shaking culture)，历时48小时，进而获得该愈伤组织的液体培养物。

此外，上述步骤(S3)包括以下所列的详细步骤：

(S31)自前述步骤(S23)所获得的该液体培养物转移至生物反应器系统(bioreactor system，BTF-A10L，顶生，中国台湾)以进行试产试验制程(productiontest process)，藉此获得该愈伤组织的生物质(biomass)；

(S32)将所获得的生物质进行冷冻干燥制程；

(S33)将冷冻干燥的该生物质进行研磨制程，以获得生物质研磨物。

再者，上述步骤(S4)包括以下所列的详细步骤：

(S41)以50％-100％或最佳地70％食品级醇水溶液(EtOH，乙醇)作为萃取液，并于70℃的水浴下，透过该生物质研磨物与醇水溶液特定的重量体积比(1:10,w/v)对该生物质研磨物进行萃取，历时30分钟；

(S42)以4800rpm的离心条件对前述步骤(12)的产物进行离心，历时10分钟；进一步地，收集至少一种上清液(supernatant)。

完成上述的步骤(S42)之后，便可利用管柱层析法(Column Chromatography)，例如一配备Luna 5m C18管柱(Phenomenex，美国)的高效液相层析系统(High Performance Liquid Chromatography，HPLC)配合水及乙腈作为冲提溶剂，自所获得的上清液中分离出所述的倍半萜衍生物。图2是显示利用管柱层析法自该上清液中分离出天山雪莲萃取物的流程图。如图2所示，完成上述步骤(S5)之后，可获得16种萃取物(A-P)。其中，萃取物D即为式I所表示的倍半萜衍生物，编号为SE2。透过减压浓缩仪移除溶剂可获得干燥纯化的式I化合物，该化合物在常温下避光保存。

为了证实萃取物D即为式I所表示的倍半萜衍生物，本案的发明人是利用核磁共振光谱法(Nuclear Magnetic Resonance spectroscopy，NMR spectroscopy或NMR)加以分析萃取物D的分子结构中的化学官能团的数目和种类；其中，所完成的核磁共振分析包括：¹H-NMR(¹H核磁共振光谱)、¹³C-NMR(¹³C核磁共振光谱)、DEPT(Distortionless>

上述萃取物D的¹H-NMR光谱图、¹³C-NMR光谱图、DEPT图、NOESY图、COSY图、HSQC图、以及HMBC图分别显示于图3A、图3B、图3C、图3D、图3E、图3F、以及图3G之中。并且，经由上述的多种核磁共振光谱>

继续地，为了证实由式I所表示的化合物的确具有抑制黑色素产生的功效，本案的发明人进行了多组实验加以证明。

实验一:人类皮肤纤维母细胞的培养

CCD-966SK为一种附着性人类皮肤纤维母细胞(human normal skin fibroblasts)，将其培养于MEM(minimum essential medium)培养液，其中含10％(v/v)的胎牛血清(fetal calf serum，FBS)、0.37％(w/v)的NaHCO₃、100units/ml的盘尼西林(penicillin)、100units/ml的链霉素(streptomycin)、0.1mM的NEAA(non-essential>2和相对湿度80％的恒温培养箱中，两天更换一次培养液，以倒立式显微镜观察，当细胞长满(confluent)达一定密度时，会形成一单层(monolayer)薄膜状，此时即可进行继代培养(subculture)。

实验二:MMP-9基因表达量

MMP-9基因属于基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases，MMPs)家族，其主要功能是降解和重塑细胞外基质(extracellular matrix)的动态平衡。目前已分离出廿八种MMPs，包括:胶原蛋白酶(collagenase)、胶质酶(gelatinase)、基质酶(stromelycin)、基酶(matrilysin)、与膜型MMP(transmembrane type-MMP)。MMP-9是属于胶质酶，亦称为明胶蛋白酶。

细胞外基质(Extracellular Matrix)主要由胶原蛋白、弹性蛋白、糖蛋白和蛋白多糖4种组成分子组成，不同组织器官，各种组成成分比例不同。较为人知的是，若皮肤少了胶原蛋白的支撑，则皮肤外观会变得松弛且缺乏弹性。UVA照射或发炎反应都会促使MMPs过度表现，在这种情况下，MMPs几乎可分解所有细胞外间质、降解结缔组织中的蛋白质结构；其中，细胞外间质中的胶原蛋白便是由MMP-9所分解、破坏。

因此，本案的发明人是通过实验二来研究由式I化合物对于MMP-9基因表达量的抑制效果。实验二包括以下5个组别:

(1)控制组(CTL group):在一预设时间内培养具有人类皮肤纤维母细胞的培养基；

(2)1倍剂量-24小时组(1X-24group):将本发明的化合物加入至人类皮肤纤维母细胞的培养基中，并作用观察24小时；其中，所谓1倍剂量的化合物指的是8.75ng/mL的SE2(溶解于二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide，DMSO))；

(3)1倍剂量-48小时组(1X-48group):将本发明的化合物(式I)加入至人类皮肤纤维母细胞的培养基中，并作用观察48小时；

(4)2倍剂量-24小时组(2X-24group):将本发明的化合物加入至人类皮肤纤维母细胞的培养基中，并作用观察24小时；其中，所谓2倍剂量的化合物指的是17.5ng/mL的SE2；以及

(5)2倍剂量-48小时组(2X-48group):将本发明的化合物(式I)加入至人类皮肤纤维母细胞的培养基之上，并作用观察48小时。

于实验二中，是透过实时聚合酶链锁反应(Real-time polymerase chain reaction，RT-PCR,ABI StepOnePlus^TM系统)观察侦测目标物(即，MMP-9基因表达量)在反应前以及PCR后产物的量化关系，以2^-ΔΔCt法计算得MMP-9基因表达量的倍率变化，其中Ct表示循环阈值。请参阅图4，是各组别的MMP-9基因表达量的统计直方图，显示基因表达量的倍率变化由图4，可以发现，相较于控制组，1倍剂量-24小时组显示出约为80％的MMP-9基因表达量的抑制效果，效果最佳。同时，根据实验结果所得到的结论是，剂量8ng/mL～18ng/mL的该化合物能够使得人类皮肤纤维母细胞中的MMP-9胶质酶(gelatinase)的基因表达量平均下降50％以上，例如本实施例中下降达58.5％。

进一步地，利用胶原蛋白分泌分析(Collagen Secretion Assay)检测本发明化合物添加后人类皮肤纤维母细胞的胶原蛋白含量变化。胶原蛋白含量是依据制造商使用手册(Sircol^TMCollagen>

实验三:MITF基因表达量黑色素的生物合成是一个非常复杂的过程，主要是通过黑色素细胞内的酪氨酸酶催化反应形成的。在这个过程中，有很多基因参与了调控。其中，被称为“黑色素细胞主调节因子(Microphthalmia-associated transcription factor)”的MITF基因发挥了至关重要的作用。MITF是在黑色素细胞中所发现，用以促进酪氨酸酶(黑色素生成的关键酶)的活性，藉此方式调控黑色素的合成。因此，抑制MITF基因表达量便能够降低酪氨酸酶的活性，才能抑制黑色素的合成，达到美白的效果。

因此，本案的发明人是通过实验三来研究由式I化合物对于MITF基因表达量的抑制效果。实验三包括以下5个组别:

(1)控制组(CTL group):在一预设时间内培养具有人类皮肤纤维母细胞的培养基；

(2)1倍剂量-24小时组(1X-24group):将本发明的化合物加入至人类皮肤纤维母细胞的培养基中，并作用观察24小时；其中，所谓1倍剂量的化合物指的是8.75ng/mL的SE2(溶解于DMSO)；

(3)1倍剂量-48小时组(1X-48group):将本发明的化合物加入至人类皮肤纤维母细胞的培养基中，并作用观察48小时；

(4)2倍剂量-24小时组(2X-24group):将本发明的化合物加入至人类皮肤纤维母细胞的培养基中，并作用观察24小时；其中，所谓2倍剂量的化合物指的是17.5ng/mL的SE2；以及

(5)2倍剂量-48小时组(2X-48group):将本发明的化合物(式I)加入至人类皮肤纤维母细胞的培养基中，并作用观察48小时。

同样地，实验三也是透过实时聚合酶链锁反应观察侦测目标物(即，MITF基因表达量)在反应前以及反应后产物的量化关系。请参阅图6，是各组别的MITF基因表达量的统计直方图，显示基因表达量的倍率变化。由图6，可以发现，相较于控制组，2倍剂量-48小时组显示出约为50％的MITF基因表达量的抑制效果，效果最佳。同时，根据实验结果所得到的结论是，剂量8ng/mL～18ng/mL的该化合物能够使得人类皮肤纤维母细胞中的MITF的基因表达量平均下降40％以上。

进一步地，利用黑色素定量分析(melanin quantification assay)检测本发明化 合物添加后小鼠黑色素瘤细胞株B16F10(ATCC CRL-6475)的黑色素含量变化。该细胞经过前述方法处理后，其黑色素含量的测定是先收集B16F10细胞溶解产物(冻融破碎法)的沉淀物，将该沉淀物与1N氢氧化钠在60℃混和1小时，然后侦测该混合物在405nm的吸光值。请参阅图7，是各组别的黑色素定量分析的统计直方图，显示各组别相对控制组的标准化数据。由图7的黑色素定量分析数据，可以发现，相较于控制组，1倍剂量-48小时组(1X-48)降低了小鼠黑色素瘤细胞中的黑色素达20％；并且，相较于控制组，2倍剂量-48小时组(2X-48)降低了小鼠黑色素瘤细胞中的黑色素达40％。因此，根据实验结果所得到的结论是，剂量8ng/mL～18ng/mL的该化合物能够使得小鼠黑色素瘤细胞中的黑色素下降至少20％。

实验四:皮肤伤口愈合

根据狭义性的定义，伤口是指皮肤组织受到损伤。皮肤伤口愈合(Wound healing)是一个动态且复杂的生理过程，其中关系到许多不同细胞和组织的合作，目的是为了使伤口复原。人体的皮肤组织的愈合生理机制分为:凝血期、炎症期、增生期、与成熟期。于增生期阶段，纤维母细胞会不断产生纤维细胞(fibrocyte)，并制造出胶原蛋白。于成熟期阶段，新的胶原蛋白会取代旧的胶原蛋白，完成胶原蛋白重组(Collagen remolding)，使皮肤组织的外型和功能接近原先的正常状态。

因此，本案的发明人是通过实验四来研究由式I化合物对于皮肤伤口愈合的辅助效果。实验四包括以下4个组别:

(1)控制组(CTL group):于人类皮肤纤维母细胞之上切割出一损伤区域，并观察18小时；

(2)1倍剂量-18小时组(1X-18group):于人类皮肤纤维母细胞之上切割出一损伤区域，并将本发明的化合物加入至人类皮肤纤维母细胞中；接着，于化合物作用18小时之后，观察该人类皮肤纤维母细胞的损伤区域的变化；于此，所谓1倍剂量的化合物指的是8.75ng/mL的SE2(溶解于DMSO)；

(3)2倍剂量-18小时组(2X-18group):于人类皮肤纤维母细胞之上切割出一损伤区域，并将本发明的化合物加入至人类皮肤纤维母细胞中；接着，于化合物作用18小时之后，观察该人类皮肤纤维母细胞的损伤区域的变化；于此， 所谓2倍剂量的化合物指的是17.5ng/mL的SE2；以及

(4)4倍剂量-18小时组(4X-18group):于人类皮肤纤维母细胞之上切割出一损伤区域，并将本发明的化合物加入至人类皮肤纤维母细胞中；接着，于化合物作用18小时之后，观察该人類皮肤纤维母细胞的损伤区域的变化；于此，所谓4倍剂量的化合物指的是35ng/mL的SE2。

请参阅图8，是各组别的人类皮肤纤维母细胞的显微镜影像图(100X)。由图8，我们可以观察到控制组、1倍剂量-18小时组、2倍剂量-18小时组、与4倍剂量-18小时组的人类皮肤纤维母细胞，皆在损伤区域形成之后的18小时，制造出一定量的纤维细胞(fibrocyte，约1-2x10⁵个细胞)以填补/修补该损伤区域。然而，由图8，我们亦可发现的是，相较于控制组，1倍剂量-18小时组、2倍剂量-18小时组、与4倍剂量-18小时组明显地显现出较高程度的损伤区域填补/修补作用。

进一步地，利用图像处理软件ImageJ分析图8中人类皮肤纤维母细胞的损伤区域的表面积变化，以计算各组别的损伤区域的填补/修补百分比。请参阅图9，是各组别的损伤区域的填补/修补百分比统计直方图。由图9的实验统计数据，可以发现，1倍剂量-18小时组的损伤区域的填补/修补百分比高于控制组的损伤区域的填补/修补百分比约1.21倍；并且，2倍剂量-18小时组的损伤区域的填补/修补百分比高于控制组的损伤区域的填补/修补百分比约1.4倍；再者，4倍剂量-18小时组的损伤区域的填补/修补百分比高于控制组的损伤区域的填补/修补百分比约1.5倍。因此，根据实验结果所得到的结论是，剂量8ng/mL～18ng/mL的该化合物能够使得人类皮肤纤维母细胞的损伤区域的填补/修补百分比增加达1.21～1.4倍。

综上，发明人已完整且清楚地揭露本发明的具黑色素产生抑制作用以及胶原蛋白产生促进作用的化合物的萃取方式、化学结构、及其功效；可证明本发明的具黑色素产生抑制作用以及胶原蛋白产生促进作用的化合物具有以下优点：

(1)不同于萃取自绵头雪莲的酪氨酸酶抑制剂或黑色素产生抑制剂，本发明提供一种具黑色素产生抑制作用以及胶原蛋白产生促进作用的化合物。并且，实验结果证实该化合物具有高度的抑制活性，特别是作用于人类皮肤纤维母细 胞中的MMP-9的基因表达量以及MITF的基因表达量。

(2)承上述第(1)点，基于本发明的化合物能够显着地抑制MMP-9基因表达量与MITF基因表达量，本发明的化合物提升了人类纤维母细胞中的胶原蛋白生成量，并同时抑制小鼠黑色素瘤细胞中的黑色素。

(3)承上述第(1)点与第(2)点，根据实验一至实验四的结果均可证明本发明的化合物确具黑色素产生抑制作用、胶原蛋白产生促进作用、以及促进伤口愈合速度的作用，可应用于制造美白、抗老、以及促进伤口愈合的保养品、化妆品、伤口敷料、药剂或食品等组合物的用途。因此，该组合物可包含该式I化合物与药学上可接受的载剂。该组合物可以是用于美白、抗老、及伤口修复的悬浮液、溶液、乳胶、软膏、乳液、乳霜、胶状物、胶囊、及粉末。该组合物还能进一步包含对苯二酚、水杨酸、果酸、玻尿酸等成分。该组合物在使用方式上可以是局部施用或口服。进一步地，基于本发明的化合物能够显着地抑制MMP-9基因表达量与MITF基因表达量，本发明的化合物提升了人类皮肤纤维母细胞中的胶原蛋白生成量，并同时抑制小鼠黑色素瘤细胞中的黑色素。

必须加以强调的是，上述的详细说明是针对本发明可行实施例的具体说明，惟该实施例并非用以限制本发明的专利范围，凡未脱离本发明技艺精神所为的等效实施或变更，均应包含于本案的专利范围中。