一种分子印迹固相萃取‑液相色谱同时检测敌百虫和久效磷方法

摘要

本发明涉及一种分子印迹固相萃取‑液相色谱同时检测敌百虫和久效磷方法，先制备高吸附性能分子印迹聚合物MIL@MIP；再将高吸附性能MIL@MIP填充到空的分子印迹固相萃取柱中，进液相色谱进行分析；以敌百虫和久效磷溶液浓度为横坐标，以色谱峰面积为纵坐标，分别绘制敌百虫和久效磷标准曲线。根据绘制的标准曲线计算出分析物中敌百虫和久效磷含量。本发明将多孔性及大的比表面积的新型金属框架材料MIL‑101作为支持载体，大大提高了制备聚合物的吸附性能，而且对敌百虫和久效磷均具有较高的选择性，可以代替单一聚合物在固相萃取中的应用；本发明制备的分子印迹聚合物可以重复使用20次左右，成本大大降低。

说明书

技术领域

本发明涉及一种基于分子印迹固相萃取技术的敌百虫和久效磷同时分离检测的方法，属于食品安全检测技术领域，特别是一种敌百虫和久效磷的快速灵敏检测方法。

背景技术

敌百虫(trichlorphon，O,O-二甲基-(2,2,2-三氯-1-羟基乙基)磷酸酯)是一种有机磷光谱杀虫剂，久效磷(Monocrotophos，O,O-二甲基-2-甲基氨基甲酰基-1-甲基乙烯基磷酸酯)一种高效内吸性有机磷杀虫剂。

这两种农药均具有高效、低毒、低残留、水溶性好等特点，因此被广泛应用于农林、园艺、畜牧、卫生等方面。也正因为其应用广泛，滥用现象日趋严重，其对动物神经系统的损害以及致癌性和致突变性也越来越引起人们的重视。GB 16319-1996规定食品中敌百虫最大残留量不得高于0.1mg>-1，久效磷最大残留量不得高于0.03mg>-1。

高效液相色谱法具有分离效能好、灵敏度高、检测速度快及重现性好等特点，与气相色谱比较，尤其适用于热分解农药和水溶性农药的检测。但高效液相色谱检测限较高，所以在进行液相色谱分析之前通常对样品进行富集，从而达到痕量检测的要求。商品化的固相萃取材料通常为C₁₈键合硅胶，选择性较差，容易造成基质干扰，因此制备具有高选择性样品前处理材料称谓当务之急。我们的前期研究表明，将印迹聚合物作为固相萃取填充剂可以实现对敌百虫和久效磷的特异性吸附，改善富集效果进而降低检出限。因此将分子印迹技术的敌百虫和久效磷检测方法用于检测农产品及食品中的敌百虫和久效磷，具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于克服传统的单一聚合物只能对一种农药具有特异吸附性能以及选择吸附性能低的缺陷，合成了混合模板的分子印迹聚合物并提高了聚合物的选择吸附性能，提供了一种同时检测敌百虫和久效磷的新方法。

本发明采取的技术方案是：

一种分子印迹固相萃取-液相色谱同时检测敌百虫和久效磷方法，是按以下步骤完成的：

1.高吸附性能分子印迹聚合物MIL@MIP的制备

在3-10mL氯仿溶液中加入0.5-2.0mmol敌百虫、0.75-2.0mmol久效磷和2-4mmol甲基丙烯酸(MAA)充分搅拌5-30min，再加入5-20.0mg金属有机骨架材料MIL-101充分反应30-60min，然后加入5-10mmol乙二醇二甲基丙烯酸酯(EDMA)和50-100mg偶氮二异丁腈(AIBN)引发热聚合24h。待洗脱后得分子印迹聚合物MIL@MIP。

2.分子印迹固相萃取-高效液相色谱流程

取100-200mg步骤1)制备的高吸附性能MIL@MIP填充到空的分子印迹固相萃取柱中，活化后将100mL含有敌百虫和久效磷的混合标准水溶液以1.5-2.5mL min^-1的速度通过分子印迹固相萃取柱，再用1.0-5.0mL甲醇冰乙酸混合溶液(甲醇：冰乙酸＝98：2，体积比)进行洗脱，洗脱液氮吹后用1.0mL超纯水复溶，经0.22μm水相滤膜过滤后，进液相色谱进行分析。

3.配制含有不同浓度的敌百虫和久效磷混合标准溶液并重复步骤2)操作；以敌百虫和久效磷溶液浓度为横坐标，以色谱峰面积为纵坐标，分别绘制敌百虫和久效磷标准曲线。

4.将待测物5.0g切碎，用30mL超纯水超声提取三次，合并三次提取液并定容至100mL，将定容后的提取液替换步骤2)中敌百虫和久效磷混合标准溶液并按照步骤2)的流程进行检测。带入步骤3)绘制的标准曲线计算出分析物中敌百虫和久效磷含量。

本发明的优点和积极效果是：

1.本发明与以前的检测方法相比，使用合成的材料不同，吸附性能更强。本发明将多孔性及大的比表面积的新型金属框架材料MIL-101作为支持载体，大大提高了制备聚合物的吸附性能，而且对敌百虫和久效磷均具有较高的选择性，可以代替单一聚合物在固相萃取中的应用，提高分离富集效果。

2.该吸附功能材料由化学方法制备，具有较高的稳定性、较长的使用寿命和较强的抗恶劣环境的能力。

3.本发明将分子印迹技术与高效液相色谱技术联用，建立对敌百虫和久效磷具有高灵敏度的检测方法。该方法对敌百虫和久效磷最低检出限分别为1.14μg>-1和1.47μg>-1，能够满足检测需要，与以往检测方法相比，效果非常显著。

4.本发明制备的分子印迹聚合物可以重复使用20次左右，成本大大降低；实验操作简单，适用于各种食品中敌百虫和久效磷的快速检测。

本发明与现有其他检测方法的比较：

具体实施方式

下面结合实施例，对本发明进一步说明；下述实施例是说明性的，不是限定性的，不能以下述实施例来限定本发明的保护范围。

本发明使用混合模板分子印迹聚合物作为固相萃取吸附剂与高效液相色谱技术联用，从而建立对敌百虫和久效磷具有高灵敏度的快速检测方法。

实施例1：

1.高吸附性能的分子印迹聚合物MIL@MIP的制备

在100mL带塞的圆底烧瓶中加入3mL氯仿溶液、0.5mmol敌百虫、0.75mmol久效磷和4mmol甲基丙烯酸(MAA)充分搅拌30min；再加入10.0mg MIL-101充分反应60min，然后加入10mmol乙二醇二甲基丙烯酸酯(EDMA)和50mg偶氮二异丁腈(AIBN)引发热聚合24h。待用120mL甲醇和40mL冰乙酸混合溶液作为萃取溶剂，连续洗脱48h后后得分子印迹聚合物MIL@MIP。

2.分子印迹固相萃取-高效液相色谱流程

准确称取步骤1)制备的分子印迹聚合物MIL@MIP 200mg装入一个空的固相萃取柱中。分别用甲醇和超纯水润洗、活化装好的萃取柱。将100mL 0.05mg>-1敌百虫和久效磷混合标准水溶液通过固相萃取柱，敌百虫和久效磷被选择性吸附到MIL@MIP上。富集结束，用2.0mL甲醇/冰乙酸(98/2,V/V)混合溶液进行洗脱，并且将洗脱液收集，氮气吹干，然后用1.0mL超纯水复溶，用0.22μm水相滤膜进行过滤后，进HPLC进行分析。

3.分别配制浓度为0.05mg>-1、0.5mg>-1、1.0mg>-1、2.0mg>-1、5.0mg>-1、10mg>-1、20mg>-1敌百虫和久效磷混合标准溶液并重复步骤2操作；以敌百虫和久效磷溶液浓度为横坐标，以色谱峰面积为纵坐标，分别绘制敌百虫和久效磷标准曲线。

4.准确称取草莓5.0g切碎，用30mL超纯水超声提取三次，合并三次提取液并定容至100mL，定容后的提取液替换步骤2)中敌百虫和久效磷混合标准溶液并按照步骤2)的流程进行检测。带入步骤3)绘制的标准曲线计算出草莓中敌百虫含量为1.4mg kg^-1，久效磷未检出。