根癌农杆菌和CRISPR‑Cas9介导的基因定点插入失活方法及其应用

摘要

本发明公开了一种根癌农杆菌和CRISPR‑Cas9介导的基因定点插入失活方法，使用甘蔗鞭黑穗菌内源snRNA启动子(甘蔗鞭黑穗菌u6基因启动子)驱动sgRNA表达盒，将CRISPR‑Cas9系统与根癌农杆菌T‑质粒整合，构建以潮霉素为抗性筛选标记的根癌农杆菌介导的甘蔗鞭黑穗菌基因定点插入载体失活系统；将目标基因的特异识别序列克隆入sgRNA表达盒，用于转化甘蔗鞭黑穗菌担孢子，从而将载体系统的可跳动DNA片段准确插入甘蔗鞭黑穗菌目标基因靶标序列，达到破坏基因功能的目的。本发明为研究甘蔗鞭黑穗菌的功能基因组学提供了重要工具，该系统具有高效性和准确性，方便在甘蔗鞭黑穗菌中进行基因功能的研究。