具有抗肿瘤活性的番荔枝果皮挥发油提取物及其制备方法和应用

摘要

本发明公开了一种具有抗肿瘤活性的番荔枝果皮挥发油提取物，本发明以番荔枝果实的果皮为原料，采用挥发油提取器提取得到含有斯巴醇(32.51％)，棕榈酸(9.41％)等成分的挥发油。本发明通过大量实验筛选，变废为宝，以番荔枝果皮为原料，筛选出具有抗肿瘤活性的挥发油成分，经过体外MTT实验表明，本发明制备得到的番荔枝果皮挥发油对肝癌等肿瘤细胞具有很好的杀灭活性，具有重要的社会效益和经济效应。

说明书

技术领域

本发明涉及一种植物提取物，具体是涉及一种具有抗肿瘤活性的番荔枝果皮挥发油提取物及其制备方法和应用。

背景技术

恶性肿瘤是严重危害人类健康和生命的多发病和常见病，早在2000～3000年前埃及和我国已有关于肿瘤的记载。其中，在我国发病率最高的肝癌，因其隐匿性高，临床治疗效果差，已成为第二大致死癌种。在不同的治疗手段中，化疗，尤其是介入疗法(局部化疗)是治疗中晚期肝癌的重要手段，但是化疗药的心毒性和肾毒性严重危害了患者的健康，因此，天然产物在抗肝癌中的作用越来越被人类重视。

番荔枝为番荔枝科的重要植物，其果实为热带著名水果，又名释迦、佛头果。其种子作为广东省地方中药，广泛用于肿瘤的治疗。有文献报道，番荔枝种子提取物番荔枝内脂具有很好的抗肿瘤活性。但是，目前还没有番荔枝果实的果皮抗肿瘤活性成分的报道。

番荔枝果实果皮为番荔枝果肉食用后丢弃的废弃物，为了使废弃物变废为宝，本发明对番荔枝果实果皮挥发油进行了系统研究，并筛选出其抗肿瘤活性。

发明内容

发明目的：本发明的目的是在番荔枝现有活性成分的基础之上，充分利用废弃的番荔枝果实果皮，并筛选其功效，扩大药源，提供一种抗肿瘤活性强的番荔枝果皮挥发油提取物。

技术方案：为了实现以上目的，本发明采取的技术方案为：

一种具有抗肿瘤活性的番荔枝果皮挥发油提取物，它包括下列重量百分比的原料

斯巴醇32.51％，棕榈酸9.41％，乙酸-1,7,7-三甲基-二环[2.2.1]庚-2-酯3.7％，(6,8-顺-羟甲基-4-异丙基-7-亚甲基-二环[3.2.1]八-1-基)-甲醇3.2％，(1S-内)-1,7,7-三甲基-二环[2.2.1]庚-2-醇3.17％，(1α,4aβ,5α,8aα)-十氢-5-(羟甲基)-5,8a-二甲基-2-顺(亚甲基)-1-萘戊醇2.9％，8-异丙基-4a,5,5,8-四甲基-2-亚甲基-1a-丙基-1,1a,2,3,4,4a,5,8-十氢环丙基甲酰乙酸乙酯[d]萘2.67％，2,4-二氯-5-三氟甲苯2.31％，2-亚甲基-6,8,8-三甲基-三环[5.2.2.0(1,6)]十一烷基-3-醇2.22％，9-十八炔1.86％，长松香芹醇1.73％，羟甲唑啉1.71％，氧化马兜铃烯1.68％，(1S-顺)-1,2,3,5,6,8a-六氢-4,7-二甲基-1-(1-异丙基)-萘1.55％，2-异丙基-5-甲基-9-亚甲基-双环[4.4.0]十-1-烯1.45％，1,3,4,6,7,8a-六氢-1,1,5,5-四甲基-2H-2,4a-甲氧基萘乙酰胺-8(5H)-酮1.28％，5-烯-3β-甾醇1.21％，(3β,5α,11β)-3,11-二甾醇1.18％，6,6-二甲基-二环[3.1.1]-2-酮-2-联苯1.11％，[1S-(1α,7α,8aα)]-1,2,3,5,6,7,8,8a-八氢-1,8a-二甲基-7-(1-异丙烯基)-萘1.07％，3,7,11,15-四甲基-2-十六烯酸-1-醇1.04％，2,6,6,10,11-五甲基-14-氧杂三环[9..2.1.0(1,10)]十四烷1.03％，[1S-(1α,3α.,5α)]-6,6-二甲基-2-亚甲基-双环[3.1.1]庚-3-醇1.02％，7-十四炔1.02％。

本发明所述的具有抗肿瘤活性的番荔枝果皮挥发油提取物的制备方法，它包括以下步骤：

(1)取番荔枝果皮，加入果皮重量5～10倍体积量的水，采用挥发油提取器，水蒸气蒸馏法提取3-8小时，分去水层，得番荔枝果皮挥发油粗提物；

(2)用乙醚清洗挥发油提取器1-2次，合并乙醚层和挥发油层，常温挥去乙醚即得番荔枝果皮挥发油提取物。

作为优选方案，以上所述的具有抗肿瘤活性的番荔枝果皮挥发油提取物在制备抗癌药物中的应用。

作为优选方案，以上所述的具有抗肿瘤活性的番荔枝果皮挥发油提取物在制备抗癌药物中的应用，把番荔枝果皮挥发油提取物和药学上可接受的载体制成片剂、胶囊剂、脂肪乳剂、栓剂、微囊、滴丸或软膏剂的药物。

作为优选方案，以上所述的具有抗肿瘤活性的番荔枝果皮挥发油提取物在制备抗肝癌、肺癌、乳腺癌、直肠癌药物中的应用。

作为优选方案，以上所述的具有抗肿瘤活性的番荔枝果皮挥发油提取物在制备抗肝癌、肺癌、乳腺癌、直肠癌药物中的应用，把番荔枝果皮挥发油提取物和药学上可接受的载体制成片剂、胶囊剂、脂肪乳剂、栓剂、微囊、滴丸、软膏剂剂型的药物。

有益效果：本发明提供的具有抗肿瘤活性的番荔枝果皮挥发油提取物与现有技术相比的优点有：

现有技术中番荔枝果皮作为废物扔弃，不仅浪费资源，污染环境，本发明通过大量实验筛选，变废为宝，以现有资源开出番荔枝果皮挥发油抗肿瘤成分，经过体外MTT实验表明，本发明制备得到的番荔枝果皮挥发油对肝癌等肿瘤细胞具有很好的杀灭活性，并且流式细胞实验表明，番荔枝果皮挥发油能阻滞细胞分裂于G1期并诱导细胞凋亡。本发明可以充分利用番荔枝丢弃果皮，可形成产业化，具有重要的社会效益和经济效应。

附图说明

图1为番荔枝果皮挥发油提取物GC-MS总离子流图；

图2为不同浓度的番荔枝果皮挥发油提取物对SMMC-7721细胞抑制作用的柱状图。

具体实施方式

根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的具体的物料配比、工艺条件及其结果仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。

实施例1

1、番荔枝果皮挥发油的制备

取干燥番荔枝果皮20g，粉碎后至500mL磨口烧瓶，加200mL蒸馏水，连接挥发油提取装置，采用水蒸气蒸馏法加热提取5-8h，收集所得挥发油至离心管，乙醚荡洗挥发油提取器2次，合并乙醚层和挥发油，常温通风橱下挥干乙醚，加入无水硫酸钠，至-20℃保存。

2、番荔枝果皮挥发油成分分析

GC-MS分析条件为：氦气流速1.0mL/min，柱温设置为60℃维持4分钟，以5℃/min的速度升至170℃，170℃维持4min，然后以5℃/min的速度升至250℃，250℃维持5min，进样1μL，荔枝果皮挥发油GC-MS总离子流图如图1；共鉴定出49个化合物，见表1。

表1番荔枝果皮挥发油中化学成分

实施例2番荔枝果皮挥发油体外对人肿瘤细胞的抑制作用

1、采用MTT法测试挥发油对SMMC-7721细胞的杀伤作用：在96孔板中每孔种8000个细胞，24h后，加入实施例1制备得到的不同浓度的挥发油，分别为3.1μg/mL，6.2μg/mL，12.5μg/mL，25μg/mL，50μg/mL，100μg/mL和200μg/mL，48h后，每孔加20μL的MTT，孵育4h，除去培养液，加150μLDMSO，与酶标仪上490nm下检测吸光度值，计算IC50值抗肿瘤结果如图2所示，以上实验重复三次，得IC50为54.81μg/mL。

2、将SMMC-7721细胞接种于6孔板中，每孔2*10⁵个细胞，12h后，给药不同浓度的挥发油(20μg/mL、40μg/mL)。24h后，收集细胞，部分染色凋亡试剂，部分染色周期试剂，采用流式细胞仪测试。结果显示，番荔枝果皮挥发油能阻断细胞分裂于G1期，同时诱导细胞凋亡，对细胞凋亡的诱导呈剂量依赖性。

由以上抗肿瘤试验结果表明，本发明提供的番荔枝果皮挥发油对肝癌细胞具有很好的抑制作用，并且实验过程中，未见有明显毒副作用，临床应用安全。有望开发成抗肿瘤药物，并且番荔枝果皮资源广泛，可实现产业化发展，成本较低，临床上易推广应用。