一种利用T4噬菌体DNA拓扑异构酶I连接DNA片段的方法

摘要

本发明公开了一种利用T4噬菌体DNA拓扑异构酶I连接DNA片段的方法，步骤一，设计引物：对至少两个待连接的DNA片段分别设计引物；步骤二，片段扩增：将相应的待连接DNA片段为模板，以各自的引物进行PCR扩增，得到扩增产物，然后对扩增产物进行纯化；步骤三，片段连接。本发明提供的DNA片段连接方法利用了T4噬菌体DNA拓扑异构酶I同时实现酶切与连接的功能，传统的方法需要先利用限制性内切酶使DNA片段产生相匹配的末端，纯化后利用T4连接酶连接片段，因此具有更快捷高效的特点，本发明的方法中待连接片段内部的序列不会对连接产生影响，消除了传统方法中酶切步骤的缺陷。