一种含有厄洛替尼和熊果酸的药物组合物及其在制备抗肿瘤药物中的应用

摘要

一种含有厄洛替尼和熊果酸的药物组合物及其在制备抗肿瘤药物中的应用。本发明提供一种药物组合物，其中包含物质的量比为10‑20:1‑50的熊果酸与厄洛替尼。该药物组合物具有良好的抗肿瘤活性，通过将EGFR小分子酪氨酸激酶抑制剂厄洛替尼与高效低毒的抗肿瘤天然产物熊果酸进行联合用药，其可降低组合物中药物的毒副作用，同时具备良好的抗增殖作用，最终提高治疗癌症的效果，可应用于制备抗肿瘤的药物领域。

说明书

技术领域

本发明属于抗癌药物领域，具体地，本发明涉及厄洛替尼和熊果酸联合用于癌症的治疗，特别是在抗肺癌中用途。

背景技术

熊果酸即3β-羟基-熊果-12-烯-28-酸(3β-hydroxy-urs-12-en-28-oic acid，UA)，又名乌索酸、属于a-香树脂醇(a-amyrin)型五环三萜类化合物，其相对分子量为456.68，分子式为C₃₀H₄₈O₃，结果如式Ⅰ所示，是自然界中分布较广的天然活性化合物，主要以游离或糖苷的形式存在其广泛分布于枇杷叶、熊果、山楂、白花蛇舌草等多种天然植物中，也是许多传统中药的主要活性成分之一,>

厄洛替尼（Erlotinb，简El），结构如式Ⅱ所示，是近年来才上市的治疗晚期非小细胞肺癌药物，在国际及国内肺癌指引中厄洛替尼均被列为晚期非小细胞肺癌二线治疗药物之一，它是通过口服治疗非小细胞肺癌的靶向药物，厄洛替尼作为EGFR小分子酪氨酸激酶抑制剂，因其有口服简便、副作用小、易于被患者接受而临床应用广泛。结构如图2所示。专利N201510360703.X公开了苦鬼臼毒和厄洛替尼联合用药用于肺癌的治疗，两者联合使用后会产生协同抗肺癌作用；专利N 200680041064.X公开了将N-辛二酰苯胺异羟肟酸和厄洛替尼联合使用用于肺癌、乳腺癌、胰腺癌等多种癌症的治疗。

以不同类型肿瘤细胞作为研究对象，通过熊果酸和厄洛替尼进行联合用药，对不同肿瘤细胞进行体外抗癌活性测试，结果表明，熊果酸和厄洛替尼的联合使用对癌细胞特别是对非小细胞肺癌具有显著的增殖抑制作用。

发明内容

本发明的目的就是提供厄洛替尼和熊果酸联合抗肿瘤细胞增殖的用途，通过将EGFR小分子酪氨酸激酶抑制剂厄洛替尼与高效低毒的抗肿瘤天然产物熊果酸进行联合用药，考察其联合用药后对癌细胞的抗增殖作用，从而降低药物的毒副作用，最终提高治疗癌症的效果，可应用于制备抗肿瘤的药物领域。

一种药物组合物及其在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于包含物质的量比为10-20:1-50的熊果酸与厄洛替尼。

附图说明

图1.熊果酸和厄洛替尼单独使用及联合使用24h后对A549细胞增殖的抑制结果；

图2.熊果酸和厄洛替尼单独使用及联合使用48h后对A549细胞增殖的抑制结果；

图3.熊果酸和厄洛替尼单独使用及联合使用72h后对A549细胞增殖的抑制结果；

图4.熊果酸和厄洛替尼单独使用及联合使用24h后对H1975细胞增殖的抑制结果；

图5.熊果酸和厄洛替尼单独使用及联合使用48h后对H1975细胞增殖的抑制结果；

图6.熊果酸和厄洛替尼单独使用及联合使用72h后对H1975细胞增殖的抑制结果；

图7.熊果酸和厄洛替尼单独使用及联合使用24h后对H1299细胞增殖的抑制结果；

图8.熊果酸和厄洛替尼单独使用及联合使用48h后对H1299细胞增殖的抑制结果；

图9.熊果酸和厄洛替尼单独使用及联合使用72h后对H1299细胞增殖的抑制结果。

具体实施方式

为了使本发明所述的内容更加便于理解，下面结合具体实施方式对本发明所述的技术方案做进一步的说明，但是本发明不仅限于此。

实施例1

熊果酸和厄洛替尼单独使用及联合使用24、48、72 h对A549细胞的增殖抑制作用：采用标准MTT比色法测定了熊果酸和厄洛替尼不同联合比例对A549细胞株的增殖抑制活性。

将对数期的细胞，用胰酶消化后，细胞计数，配成8×10⁴/ml的细胞浓度，将制得的细胞悬液，每孔100>2培养箱中；弃掉旧的培养基，每孔加入100>2培养箱中培养24、48和72>

如图1所示，当药物作用24 h之后，熊果酸在10 μM的条件下，它抑制A549细胞增殖的效果不明显；单用El在≥50 μM的条件下，能表现出明显的抑制A549细胞的增殖；但当两者联合用药时，当El≥10 μM时就能表现出明显的抑制A549细胞增殖，且随着El浓度的增大抑制细胞的增殖越明显。如图2所示，当药物作用48 h之后，熊果酸在10 μM的条件细胞存活率大约在70%左右；El在≥10 μM的条件下，能有效的抑制A549细胞的增殖；但联合给药的时候当El浓度≥5 μM的条件下就能够明显的抑制细胞的增殖，两者联用可以起到协同的抑制细胞的增殖；如图3所示，当药物作用72 h之后，熊果酸在10 μM的条件下细胞细胞死伤一半；厄洛替尼≥10 μM的条件下能够抑制A549细胞的增殖；但两者联用之后厄洛替尼在≥2 μM的条件就能够表现出明显的抑制细胞的增殖。综上结果可以发现，两者联合给药能够明显降低El的给药剂量，可以起到协同的抑制A549细胞的增殖，且随着El浓度的增大和作用时间的延长抑制A549细胞的增殖越明显。

实施例2

采用金氏修正式计算熊果酸和厄洛替尼两者联合给药在不同配比下作用24、48、72 h对A549细胞的协同作用，筛选出最佳的药物配比，结果如表1-3所示。计算出UA=10 μM的条件下对A549细胞的抑制率为EA，计算出不同厄洛替尼浓度对A549细胞的抑制率为EB1、EB2、EB3等，再计算出两者联合给药在不同配比下对A549细胞的抑制率分别为EC1、EC2、EC3等，通过以下公式计算联合用药指数q值，q=EC/(EB+EA-EB*EA)，当q值>1.15为协同效应，0.85<q<1.15为相加效应，q<0.85为拮抗效应。通过上述联合用药指数的计算进一步判断两种药物联合用药的最终药效。

如表1-3所示，熊果酸和厄洛替尼两者联合给药在不同配比下作用24、48、72 h对A549细胞当厄洛替尼在低浓度的条件下两者联药效基本为相加效应；当厄洛替尼在高浓度的条件下两者联药效基本为协同效应，可以协同的抑制A549细胞的增殖，药物浓度越大，抑制越明显。

实施例3

熊果酸和厄洛替尼单独使用及联合使用24、48、72 h对H1975细胞的增殖抑制作用，步骤同实施例1，结果如图4-6所示。

如图4所示，当药物作用24 h之后，UA在10 μM的条件下，它抑制H1975细胞增殖的效果不明显；厄洛替尼在≥50 μM的条件下，才能表现出明显的抑制H1975细胞的增殖；当两者联合给药时厄洛替尼≥10 μM的条件下就可以明显的抑制细胞的增殖；如图5所示，当药物作用48 h之后，UA在10 μM的条件下能够有效的抑制细胞的增殖；单用厄洛替尼在≥25 μM条件下，可以有效的抑制细胞的增殖；但联合给药的时候，当厄洛替尼≥5 μM的条件下就能够明显的抑制细胞的增殖；如图6所示，当药物作用72 h之后，熊果酸在10 μM的条件下就死伤过半；厄洛替尼≥10 μM的条件下能够抑制H1975细胞的增殖；但联合给药时，抑制H1975细胞的杀伤比单用厄洛替尼来的强。综上结果可以发现，UA和El联用能够明显降低厄洛替尼的给药剂量，可以起到协同的抑制H1975细胞的增殖，且呈浓度依赖性和时间依赖性的抑制H1975细胞的增殖。

实施例4

采用金氏修正式计算UA和厄洛替尼两者联合给药在不同配比下作用24、48、72 h对H1975细胞的协同作用，筛选出最佳的药物配比，方法同实施例2，结果如表4-6所示。

如表4-6所示，熊果酸和厄洛替尼两者联合给药在不同配比下作用24、48、72 h对H1975细胞当厄洛替尼在低浓度的条件下两者联药效基本为相加效应；当厄洛替尼在高浓度的条件下两者联药效基本为协同效应，可以协同的抑制H1975细胞的增殖，药物浓度越大，抑制越明显。

实施例5

熊果酸和厄洛替尼单独使用及联合使用24、48、72 h对H1299细胞的增殖抑制作用，步骤同实施例1，结果如图7-9所示。

如图4所示，当药物作用24 h之后，UA在10 μM的条件下，它抑制H1299细胞增殖的效果不明显；厄洛替尼在≥50 μM的条件下，才能表现出明显的抑制H1299细胞的增殖；当两者联合给药时厄洛替尼≥5 μM的条件下就可以明显的抑制细胞的增殖；如图5所示，当药物作用48 h之后，UA在10 μM的条件下能够有效的抑制细胞的增殖；单用厄洛替尼在≥25 μM条件下，可以有效的抑制细胞的增殖；但联合给药的时候，当厄洛替尼≥2 μM的条件下就能够明显的抑制细胞的增殖；如图6所示，当药物作用72 h之后，熊果酸在10 μM的条件下就死伤过半；厄洛替尼≥10 μM的条件下能够抑制H1299细胞的增殖；但联合给药时，厄洛替尼≥1 μM的条件下能够有效的抑制H1299细胞的增殖。综上结果可以发现，UA和EL联用能够明显降低厄洛替尼的给药剂量，可以起到协同的抑制H1299细胞的增殖，且呈浓度依赖性和时间依赖性的抑制H1299细胞的增殖。

实施例6

采用金氏修正式计算UA和厄洛替尼两者联合给药在不同配比下作用24、48、72 h对H1299细胞的协同作用，筛选出最佳的药物配方法同实施例3，结果如表7-9所示。

如表7-9示，熊果酸和厄洛替尼两者联合给药在不同配比下作用24、48、72 h对H1299细胞当厄洛替尼在低浓度的条件下两者联药效基本为相加效应；当厄洛替尼在高浓度的条件下两者联药效基本为协同效应，可以协同的抑制H1299细胞的增殖，药物浓度越大，抑制越明显。