高分辨四级杆飞行时间质谱仪质量轴用校正液及其使用方法

摘要

本发明公开了一种高分辨四级杆飞行时间质谱仪质量轴用校正液，将羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸乙酯、木犀草苷、绿原酸、甘草次酸、芍药苷、苯甲酰芍药苷和三七皂苷R

说明书

技术领域

本发明涉及质谱分析的技术领域，尤其涉及一种高分辨四级杆飞行时间质谱仪质量轴用校正液及其使用方法。

背景技术

高分辨四级杆飞行时间质谱仪(QTOF)是一类能获取精确分子量的质谱仪，能推断出化学结构式，比低分辨质谱的定性能力更加强，已广泛应用于有机小分子结构分析、天然药物成分鉴定、药物代谢物鉴定和多肽蛋白质质量分析等科学领域。

质谱仪飞行管质量轴(以下简称“质量轴”)准确度对实验结果的可靠性至关重要，而其准确度会随时间推移发生偏移，因而要求实验前和实验中进行校正，影响质量轴偏移的因素有很多，主要包括电源、环境温度、湿度、真空度和仪器污染等。

为了保证质量轴的准确性，现有技术(例如SCIEX公司四级杆串联飞行时间质谱仪设备)采用试验前校正、试验中不校准的策略，该法可以避免校正液的离子抑制效应，其缺点是随着校正间隔的延长，准确度就难以保证。为此，现有技术建议每2小时或者每5个样品校正一次，以保证质量轴的准确性，但频繁校正会带来校正液消耗量较大的问题。

根据以往经验，一次实验需消耗校正液10～20ml，校正液的市售价格约为1700元/100ml，因此高分辨质谱仪的单次运行成本是非常高的。在代谢组学、过程控制等系列实验中，校正液消耗量更加巨大，运行费用占比更高已经成为共识。

而现有市售校准液有二个缺陷:

第一，质荷比为m/z144和m/z403的化合物在溶液中的稳定性差；

第二，以m/z403为母离子的二级校正存在不足，低质量段(100～600)二级质谱离子的质量误差符合要求(5ppm以内)，高质量段(600以上)的质量误差偏大，且随着分子量变大，误差逐渐变大。

发明内容

本发明公开了一种高分辨四级杆飞行时间质谱仪质量轴用校正液，该校正液的配方简单、成本低，溶液状态下稳定性高，在负离子模式下校正一级质谱质量轴的误差小于5ppm，校正二级质谱质量轴时，校正范围有大幅提升，满足现下高分辨四级杆飞行时间质谱仪进行质量轴校正的需求。

一种高分辨四级杆飞行时间质谱仪质量轴用校正液，将羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸乙酯、木犀草苷、绿原酸、甘草次酸、芍药苷、苯甲酰芍药苷和三七皂苷R₁溶解在溶剂中制备得到；

所述的溶剂选自水、甲醇、甲酸、乙腈中的至少一种；

所述校正液中，各溶质的质量份数如下:

所述校正液中各溶质的质量体积浓度为0.1～10μg/ml。

本发明通过配制浓度合适的校正液用于一级质谱质量轴的校正，并使用质荷比较大的离子为母离子，用其子离子校正二级质谱质量轴。该校正液不仅能够很好的校正一级质谱质量轴，还将二级质谱质量轴的校正范围扩大一倍以上，并且这种校正液配方简单，质量稳定，易于实施，适用于批量生产。

作为优选，所述的溶剂包括乙腈-水混合溶剂、甲酸-甲醇-水混合溶剂、甲酸-乙腈-水混合溶剂。

作为优选，所述乙腈-水混合溶剂中，乙腈与水的体积比为4:1；

所述甲酸-甲醇-水混合溶剂中，甲酸、甲醇与水的体积比为0.002:1:1；

所述甲酸-乙腈-水混合溶剂中，甲酸、乙腈与水的体积比为0.005:4:1。

作为优选，将等质量的羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸乙酯、木犀草苷、绿原酸、甘草次酸、芍药苷、苯甲酰芍药苷和三七皂苷R₁溶解在乙腈-水混合溶剂，乙腈与水的体积比为4:1；

所述校正液的总质量体积浓度为80μg/ml。

作为优选，所述校正液中，羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸乙酯、木犀草苷、绿原酸、甘草次酸、芍药苷、苯甲酰芍药苷和三七皂苷R₁的质量比为1:3:1:3:1:3:1:3；

溶剂为甲酸-甲醇-水混合溶剂，甲酸、甲醇与水的体积比为0.002:1:1；

所述校正液中，羟基苯甲酸、木犀草苷、甘草次酸和苯甲酰芍药苷的质量体积浓度均为0.833μg/ml。

对羟基苯甲酸乙酯、绿原酸、芍药苷和三七皂苷R₁的质量体积浓度均为2.5μg/ml。

作为优选，将等质量的羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸乙酯、木犀草苷、绿原酸、甘草次酸、芍药苷、苯甲酰芍药苷和三七皂苷R₁溶解在甲酸-乙腈-水混合溶剂中，甲酸、乙腈与水的体积比为0.005:4:1；

所述校正液的总质量体积浓度为8μg/ml。

本发明还公开了利用上述的校正液对高分辨四级杆飞行时间质谱仪质量轴进行校正的方法，负离子模式下进行一级质谱校正，以m/z137.02442(对羟基苯甲酸)、m/z165.05572(对羟基苯甲酸乙酯)、m/z285.04046(木犀草素)、m/z353.08782(绿原酸)、m/z469.33233(甘草次酸)、m/z525.16136(芍药苷+甲酸)、m/z629.18758(苯甲酰芍药苷+甲酸)、m/z931.52719(三七皂苷R₁)作为参比离子，校正一级质谱飞行管质量轴。

负离子模式下，进行二级质谱校正，以m/z931.52710为母离子，加上60V的碎裂能量，以m/z161.04555、m/z475.37928、m/z637.43211和m/z931.52719作为参比离子，校正二级质谱飞行管质量轴。

与现有技术相比，本发明具有如下优点:

1、配方成分易得，配置简单，成本低；

2、负离子模式下，使用该校正溶液校正一级质谱质量轴，误差小于5ppm，与市售产品的效果一致；校正二级质谱质量轴时，m/z(100～1200)范围内的误差小于5ppm，市售产品仅在m/z(100～600)范围内的误差小于5ppm，校正范围有大幅提升。

附图说明

图1为实施例3中一级负离子质量轴校正质谱图；

图2为实施例3中二级负离子质量轴校正质谱图。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明进一步说明。

实施例1

称取对羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸乙酯、木犀草素、绿原酸、甘草次酸、芍药苷、苯甲酰芍药苷和三七皂苷R₁各30mg，溶解于3L乙腈-水溶液(乙腈、水体积比为4:1)中，配制成总浓度为80μg/ml的校正液，使用CDS将校正液泵入离子源(流速0.05ml/min)，雾化电离后，进入质谱。负离子模式下，做一级校正时，分别用m/z137.02442、m/z165.05572、m/z285.04046、m/z353.08782、m/z469.33233、m/z525.16136、m/z629.18758、m/z931.52719作为参比离子，进行一级质量轴校正。m/z931.52710为母离子，加上60V的碎裂能量，以m/z161.04555、m/z475.37928、m/z637.43211、m/z931.52719为参比离子校正二级质量轴。

校正后采集数据的条件如下:色谱柱为安捷伦Eclipse Plus-C₁₈(100mm×4.6mmi.d.,1.8μm)；以0.1％甲酸溶液为流动相A，以0.1％甲酸乙腈为流动相B，线性梯度洗脱，流速为0.7ml/min；柱温为30℃；检测波长为210nm；10mg/ml人参提取物进样5μl，质谱条件Triple>

测得数据经peakview软件分析，几个典型化合物的质量误差见表1，由表1可知，一级和二级质谱的质量误差均小于5ppm，符合高分辨质谱数据的质量要求。

表1

实施例2

称取对羟基苯甲酸10mg、对羟基苯甲酸乙酯30mg、木犀草素10mg、绿原酸30mg、甘草次酸10mg、芍药苷30mg、苯甲酰芍药苷10mg和三七皂苷R₁>

分析方法同实施例1，测得数据经peakview软件分析，几个典型化合物的质量误差见表2，由表2可知，一级和二级质谱的质量误差均小于5ppm，符合高分辨质谱数据的质量要求。

表2

实施例3

称取对羟基苯甲酸10mg、对羟基苯甲酸乙酯10mg、木犀草素10mg、绿原酸10mg、甘草次酸10mg、芍药苷10mg、苯甲酰芍药苷10mg和三七皂苷R₁>

分析方法同实施例1，测得数据经peakview软件分析，几个典型化合物的质量误差见表3，由表3可知，一级和二级质谱的质量误差均小于5ppm，符合高分辨质谱数据的质量要求。

表三