一种童康片的质量检测方法

摘要

本发明公开了一种童康片的质量检测方法，童康片的原材料组成为：黄芪80.5g、白术53.5g、防风27g、山药80.5g、陈皮6.5g、牡蛎80.5g，其质量检测方法包括性状、鉴别、检查、指纹图谱测定和含量测定，其中鉴别是采用薄层色谱法对童康片中的黄芪、白术、防风、陈皮进行鉴别，指纹图谱测定是通过高效液相色谱法测定童康片中的橙皮苷成分的指纹图谱，含量测定为采用高效液相色谱法同时对童康片中的升麻素苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、5?O?甲基维斯阿米醇苷、橙皮苷进行含量测定；本发明的质量检测方法具有快速、稳定、准确等优点，本发明为童康片的生产和使用提供了一套标准的检测方法，可有效保证童康片在生产和使用过程的质量，从而保证药品疗效。

说明书

技术领域

本发明属于药物的质量检测技术领域，具体涉及一种童康片的质量检测方法。

背景技术

童康片为一种增强儿童免疫能力药物。儿童存在免疫力差、抗病力弱、消化功能低 下的疾病基础，单纯应用免疫调节剂或营养增强剂易给儿童带来其它继发性疾病，严重副 作用和不良反应，我司发明了一种增强儿童免疫能力药物(童康片)，且已获得授权，其专利 号为CN1261138C，该药物能够具有提高机体免疫能力、提高机体抗旱、耐疲劳等作用，对减 少反复呼吸道感染次数、降低发病程度与缩短病程具有良好疗效，适用于少儿体虚多汗、易 患感冒、倦怠乏力、食欲不振等症状，食用安全方便、儿童容易接受且敷用过程无副作用，该 药物已被大规模生产与使用。

然而，对于该药物的质量控制一直未建立成一套标准的、能有效保证产品质量的 检测方法，因此，为了保证该药物的用药效果，提供一套简便、可靠的质量标准非常重要。

发明内容

为了更好控制增强儿童免疫能力药物的治疗，本发明提供了一种快速、有效保证 产品质量、可以对主要药物成分进行有效控制的质量检测方法。

本发明的技术方案为：一种童康片的质量检测方法，童康片的原材料组成为：黄芪 80.5g、白术53.5g、防风27g、山药80.5g、陈皮6.5g、牡蛎80.5g，其特征在于，其质量检测方 法包括性状、鉴别、检查、指纹图谱测定和含量测定，其中鉴别是采用薄层色谱法对童康片 中的黄芪、白术、防风、陈皮进行鉴别，所述鉴别包括：

(1)薄层色谱法鉴别黄芪：取童康片适量，去糖衣，精密称取10g，加入适量硅藻土， 研细，加入甲醇300mL，加热回流20min，过滤，滤液蒸干，残渣加水50mL使溶解，用二氯甲烷 振摇萃取3次，每次50mL，弃去二氯甲烷溶液，水溶液用水饱和正丁醇振摇萃取3次，每次 50mL，合并正丁醇液，用浓氨水洗涤3次，每次50mL，分取浓氨水液备用，正丁醇液蒸干，残渣 加水10mL溶解，过D101型大孔树脂柱，以水100mL洗脱，弃去水液，再用40％乙醇80mL洗脱， 弃去洗脱液，再以70％乙醇100mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1mL溶解，作为供试品 溶液；另取黄芪对照药材粉末3g，加甲醇20mL，加热回流1h，蒸干，残渣加水30mL溶解，用水 饱和正丁醇提取3次，每次20mL，合并正丁醇液，以1％氢氧化钠溶液洗涤2次，每次30mL，弃 去碱洗液，正丁醇液再以正丁醇饱和水溶液50mL洗涤1次，弃去水溶液，正丁醇液蒸干，残渣 以甲醇1mL溶解，作为黄芪对照药材溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成1mg/mL的对照 品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液4μL、对照药材溶液4μL、对照品溶液8μL， 分别点于同一硅胶G薄层板上，以11∶8∶3的氯仿-甲醇-水的下层溶液为展开剂，展开、取出、 晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材 色谱、对照品色谱相应的位置上，日光下显相同的棕褐色斑点；波长为365nm的紫外灯下显 相同的橙黄色荧光斑点；

(2)薄层色谱法鉴别陈皮：取(1)中备用的浓氨水液，加稀盐酸调pH值至2～3，用乙 酸乙酯振摇提取3次，每次400mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2mL溶解，作为供试品 溶液；另取陈皮对照药材粉末0.3g，加甲醇10mL，加热回流20min，过滤，取滤液5mL，浓缩至 2mL，作为对照药材溶液；另取陈皮苷对照品，加甲醇制成1mg/mL的对照品溶液；照薄层色谱 法试验，吸取上述供试品溶液3μL、对照药材溶液1μL、对照品溶液7μL，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以100∶17∶10的乙酸乙酯-甲醇-水为展开剂，展开、取出、晾干，喷以5％三氯化铝 乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置波长为365nm的紫外灯下检视；供试品色谱中， 在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

(3)薄层色谱法鉴别防风：取童康片适量，除去糖衣，加适量硅藻土，研细，取10g， 置磨口锥形瓶中，加丙酮200ml，超声处理20min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解， 作为童康片供试品溶液；另取防风对照药材粉末1g，置磨口锥形瓶中，加丙酮20ml，超声处 理20min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液；另取升麻素苷对照 品、5-O-甲基维斯阿米醇苷对照，分别加甲醇制成1mg/ml的对照品溶液；照薄层色谱法试 验，吸取上述供试品溶液20μl、对照药材溶液2μl、对照品溶液1μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以4∶1的三氯甲烷-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置波长为354nm的紫外灯下 检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(4)薄层色谱法鉴别白术：取童康片适量，除去糖衣，加适量硅藻土，研细，置磨口 锥形瓶中，加5∶1的醋酸乙酯-无水乙醇混合溶液30mL，水浴加热回流1小时，放冷，过滤；滤 液加活性炭0.2g，在水浴上搅拌5min，过滤，滤液蒸干；残渣加无水乙醇0.5mL溶解，作为供 试品溶液；另取白术对照药材1g，方法同上制成对照药材溶液；照中药部颁标准规定的薄层 色谱法试验，吸取上述供试品溶液、对照药材溶液及阴性供试品溶液各10μL，分别点于同一 硅胶G薄层板上，以9∶1的甲苯-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以对二甲氨基苯甲 醛溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置波长为365nm的紫外灯下检视；供试品色谱中，在 与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

本发明所述的指纹图谱测定为通过高效液相色谱法测定童康片中的橙皮苷成分 的指纹图谱，测定步骤如下：

(1)色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基键和硅胶为填充剂；以乙腈为流动相 A，0.1％甲酸水为流动相B，按洗脱条件进行梯度洗脱，流速为1ml/min；检测波长为260nm， 柱温为25℃；理论板数按橙皮苷计算应不低于2000；

(2)参照物溶液的制备：取橙皮苷对照品，加甲醇制备成每1mL含1mg的对照品溶液 即得；

(3)供试品溶液的制备：取适量童康片，研细，取约4g，精密称定，置50ml具塞锥形 瓶中，精密加入20ml甲醇，采用加热回流提取60min，放冷，再称定重量，用纯化水补足减失 的重量，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为成品供试品溶液；

(4)测定法：分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，记 录色谱图，即得。

上述对童康片中的橙皮苷成分的测定步骤中所述的梯度洗脱条件为：

本发明所述的含量测定为采用高效液相色谱法同时对童康片中的升麻素苷、毛蕊 异黄酮葡萄糖苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、橙皮苷采用高效液相色谱法进行含量测定，测定 步骤如下：

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基键和硅胶为填充剂；流动相体系：乙腈- 0.1％甲酸水溶液；流动相A为乙腈，流动相B为0.1％甲酸水，按洗脱条件进行梯度洗脱，流 速为1ml/min，柱温25℃，检测波长为200-400nm；理论板数按橙皮苷计算应不低于2000；

对照品溶液的制备：精密称取升麻素苷标准品3.96mg、毛蕊异黄酮葡萄糖苷 2.94mg、5-O-甲基维斯阿米醇苷3.25mg、橙皮苷9.19mg置25ml容量瓶中，加甲醇溶解、定容 到刻度，作为储备液；从中吸取5ml到10ml量瓶中，加甲醇定容到刻度，作为对照品溶液1；从 对照品溶液1中吸取1ml到2ml量瓶中，加甲醇定容到刻度，作为对照品溶液2；

供试品溶液的制备：取适量童康片，研细，取约4g，精密称定，置50ml具塞锥形瓶 中，精密加入20ml甲醇，称定重量，采用加热回流方式提取60min，提取1次，放冷，再称定重 量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液；

测定法：分别精密吸取对照品溶液1、对照品溶液2与供试品溶液各10μl，注入液相 色谱仪，测定，即得。

所述升麻素苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的检测波长均为 260nm，橙皮苷的检测波长为283nm。

上述对童康片中的升麻素苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、橙皮 苷进行含量测定步骤中所述的洗脱条件为：

本发明的有益效果为：本发明的质量检测方法具有快速、稳定、准确等优点，为童 康片的生产和使用提供了一套标准的检测方法，并且该质量检测方法具有良好的重复性、 稳定性，能够更为准确地检测出童康片中多种成分的含量，可有效保证童康片在生产和使 用过程的质量，从而保证药品疗效。

附图说明

图1为本发明童康片HPLC指纹图谱及其主要色谱峰图(其中，5号峰(S)橙皮苷)。

具体实施方式

下面结合实施例和附图对本发明作进一步阐述。

实施例

【处方】黄芪80.5g白术53.5g

防风27g山药80.5g

陈皮6.5g牡蛎80.5g

【制法】以上六味，取山药、陈皮分别粉碎成细粉；黄芪、牡蛎加水煎煮二次，第一次 2h，第二次1.5h，合并煎液，滤过；白术、防风提取挥发油，药渣加水煎煮1.5h，防冷，滤过，滤 液与牡蛎及黄芪的滤液合并，浓缩成稠膏，加入陈皮细粉及2/3量的山药细粉，混合，干燥， 粉碎成细粉，加适量辅料，制粒，干燥，喷入上述挥发油(用适量乙醇溶解)，压制成1000片， 以剩余山药细粉及适量糖粉制浆包衣，即得。

【性状】本品为糖衣片，除去糖衣后，显浅棕色；气微香，味甘。

【鉴别】

(1)取本品60片，去糖衣，精密称取10g，加入适量硅藻土，研细，加入甲醇300mL，加 热回流20min，过滤，滤液蒸干，残渣加水50mL使溶解，用二氯甲烷振摇萃取3次，每次50mL， 弃去二氯甲烷溶液，水溶液用水饱和正丁醇振摇萃取3次，每次50mL，合并正丁醇液，用浓氨 水洗涤3次，每次50mL，分取浓氨水液备用，正丁醇液蒸干，残渣加水10mL溶解，过D101型大 孔树脂柱(内径1.5cm，柱高12cm)，以水100mL洗脱，弃去水液，再用40％乙醇80mL洗脱，弃去 洗脱液，再以70％乙醇100mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1mL溶解，作为供试品溶 液。另取黄芪对照药材粉末3g，加甲醇20mL，加热回流1h，蒸干，残渣加水30mL溶解，用水饱 和正丁醇提取3次，每次20mL，合并正丁醇液，以1％氢氧化钠溶液洗涤2次，每次30mL，弃去 碱洗液，正丁醇液再以正丁醇饱和水溶液50mL洗涤1次，弃去水溶液，正丁醇液蒸干，残渣以 甲醇1mL溶解，作为黄芪对照药材溶液。另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成1mg/mL的对照品 溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2015版四部通则0502)试验，吸取上述供试品溶液4μL、对 照药材溶液4μL、对照品溶液8μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水(11∶8∶3) 的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色 清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱、对照品色谱相应的位置上，日光下显相同的棕褐 色斑点；紫外灯(365nm)下显相同的橙黄色荧光斑点。

(2)取(1)中黄芪薄层鉴别项下的浓氨试液，加稀盐酸调pH值至2～3，用乙酸乙酯 振摇提取3次，每次400mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2mL溶解，作为供试品溶液。另 取陈皮对照药材粉末0.3g，加甲醇10mL，加热回流20min，过滤，取滤液5mL，浓缩至2mL，，作 为对照药材溶液。另取陈皮苷对照品，加甲醇制成1mg/mL的对照品溶液。照薄层色谱法(《中 国药典》2015版四部通则0502)试验，吸取上述供试品溶液3μL、对照药材溶液1μL、对照品溶 液7μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水(100∶17∶10)为展开剂，展开，取 出，晾干，喷以5％三氯化铝乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外灯(365nm)下检 视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

(3)取童康片50片，除去糖衣，加适量硅藻土，研细，取10g，置磨口锥形瓶中，加丙 酮200ml，超声处理20min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为童康片供试品溶 液。另取防风对照药材粉末1g，置磨口锥形瓶中，加丙酮20ml，超声处理20min，滤过，滤液蒸 干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液。另取升麻素苷对照品、5-O-甲基维斯阿米醇 苷对照，分别加甲醇制成1mg/ml的对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2015版四部通则 0502)试验，吸取上述供试品溶液20μl、对照药材溶液2μl、对照品溶液1μl，分别点于同一硅 胶GF₂₅₄薄层板上，以三氯甲烷-甲醇(4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯(254nm)下 检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

(4)取本品30片，除去糖衣，加适量硅藻土，研细，置磨口锥形瓶中，加醋酸乙酯-无 水乙醇(5∶1)混合溶液30mL，水浴加热回流1小时，放冷，过滤。滤液加活性炭0.2g，在水浴上 搅拌5min，过滤，滤液蒸干。残渣加无水乙醇0.5mL溶解，作为供试品溶液。另取白术对照药 材1g，方法同上制成对照药材溶液。照中药部颁标准规定的薄层色谱法试验，吸取上述供试 品溶液、对照药材溶液及阴性供试品溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-醋 酸乙酯(9∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以对二甲氨基苯甲醛溶液，在105℃加热至斑点 显色清晰，置紫外灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相 同颜色的荧光斑点。

【检查】应符合片剂项下有关的各项规定

【指纹图谱】照高效液相色谱法(《中国药典》2015版四部通则0512)测定橙皮苷。

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基键和硅胶为填充剂(Kromasil100-C18， 柱长250mm，柱内径4.6mm，粒径为5μm)；以乙腈为流动相A，甲酸水(0.1％甲酸∶水＝0.1∶ 1000)为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；流速为1ml/min；检测波长260nm；柱温为 25℃。理论板数按橙皮苷计算应不低于2000。

流动相洗脱程序

参照物溶液的制备：取橙皮苷对照品，加甲醇制备成每1mL含1mg的对照品溶液即 得。

供试品溶液的制备：取适量童康片，研细，取约4g，精密称定，置50ml具塞锥形瓶 中，精密加入20ml甲醇，采用加热回流提取60min，放冷，再称定重量，用纯化水补足减失的 重量，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为成品供试品溶液。

测定法：分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录75 分钟的色谱图。

如图1所示，童康片HPLC指纹图谱有12个特征峰。按中药色谱指纹图谱相似度评价 系统计算，供试品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度不得低于0.8。

【含量测定】照高效液相色谱法(《中国药典》2010版附录VID)测定升麻素苷、毛蕊 异黄酮葡萄糖苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷，橙皮苷含量。

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基键和硅胶为填充剂(Kromasil100-C18， 柱长250mm，柱内径4.6mm，粒径为5μm)；流动相体系：乙腈-0.1％甲酸水溶液；流动相A为乙 腈，流动相B为0.1％甲酸水，梯度洗脱，流速为1ml/min，柱温25℃，检测波长：二极管阵列检 测器200-400nm全波长扫描。各组分检测波长为：升麻素苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、5-O-甲基 维斯阿米醇苷的检测波长均为260nm，橙皮苷的检测波长283nm，检测器：紫外检测器DAD- 3000，进样量：10μl。理论板数按橙皮苷计算应不低于2000。

流动相洗脱程序

对照品溶液的制备：精密称取升麻素苷标准品3.96mg、毛蕊异黄酮葡萄糖苷 2.94mg、5-O-甲基维斯阿米醇苷3.25mg、橙皮苷9.19mg置25ml容量瓶中，加甲醇溶解、定容 到刻度，作为储备液。从中吸取5ml到10ml量瓶中，加甲醇定容到刻度，作为对照品溶液1；从 对照品溶液1中吸取1ml到2ml量瓶中，加甲醇定容到刻度，作为对照品溶液2。

供试品溶液的制备：取适量童康片，研细，取约4g，精密称定，置50ml具塞锥形瓶 中，精密加入20ml甲醇，称定重量，采用加热回流方式提取60min，提取1次，放冷，再称定重 量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液。

测定法：分别精密吸取对照品溶液1、对照品溶液2与供试品溶液各10μl，注入液相 色谱仪，测定，即得。

本品按干燥品计算，含升麻素苷(C₂₂H₂₈O₁₁)的含量不少于0.0415mg/片，毛蕊异黄 酮葡萄糖苷(C₂₂H₂₂O₁₀)的含量不少于0.1046mg/片，5-O-甲基维斯阿米醇苷(C₂₂H₂₈O₁₀)的含 量不少于0.0193mg/片，橙皮苷(C₂₈H₃₄O₁₅)的含量不少于3.0449mg/片。

以上所述，仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡是依据本发明的技 术实质对以上实施例所作的任何细微修改、等同替换和改进，均应包含在本发明技术方案 的保护范围内。