一种芍倍注射液的制备方法

摘要

本发明公开了一种芍倍注射液的制备方法，先将赤芍药材两次粉碎，用酸性水溶液浸泡后两次提取，然后将提取液浓缩、加醇醇沉、再浓缩，经大孔吸附树脂柱吸附得到赤芍总苷粗品，再用C18反相色谱柱、葡聚糖凝胶色谱纯化，得到芍药苷单体；然后称取芍药苷单体100g、没食子酸37.5g、柠檬酸2500g，经过配液、灌装，最后入库。本发明可以提高芍药苷的提取率，缩短赤芍总苷粗品的制备时间，减少了分离过程中的损失，提高了芍药苷产品的纯度，所得芍药苷的纯度≥98%；本发明易于操作和工业化生产，提高了经济效益和产品保障。

说明书

技术领域

本发明属于药物加工技术领域，具体涉及一种芍倍注射液的制备方法。

背景技术

芍倍注射液原名“2.5%AN注射液”、“安氏化痔液”、“安痔注射液”，具有收敛固涩，凉血止血，活血化瘀的功效，治疗各期内痔及静脉曲张型混合痔治疗中的止血、使痔核萎缩。本药处方选乌梅、五倍子、赤芍组成全方，三药配伍，乌梅为君，五倍子为臣，两药协同起收敛作用，赤芍化瘀起反佐作用，三药相辅相成共奏收敛化瘀去痔作用。

本着源于中医药，发展中医药的精神，提取三味中草药的有效成分柠檬酸、没食子酸和芍药苷直接入药，配制成注射剂，不仅保持原中药的药性作用和配伍关系，与传统中药制剂比较，有效成分高、可控性好、杂质少、刺激性小、稳定。生产芍倍注射液处方中的柠檬酸、没食子酸都可以购买到生产所需，而芍药苷购买不到符合生产要求的纯度。

目前关于芍药苷的提取主要有水提法、稀醇渗漉法、乙醇回流提取法、微波提取法、超声波提取法、CO₂超临界萃取法等，而纯化手段则采用柱层析或大孔吸附树脂分离。这些提取方法和纯化手段总体缺陷为芍药苷的杂质多，溶剂消耗量大、残留大、流程长，后期纯化困难，少部分的芍药苷在大孔吸附树脂纯化时流失，使产品的收率下降，后期的纯化方法难以达到含量98%以上的纯品。

发明内容

基于现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种芍倍注射液的制备方法，简单、高效、低能耗地制备出纯度及精度高的芍倍注射液。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种芍倍注射液的制备方法，包括以下步骤：

（1）称取赤芍药材，经一次粉碎得到颗粒度为50~300目的粗颗粒，再经二次粉碎、过筛后得到颗粒度为1250~2500目的超微粉；将超微粉置于pH=2的酸性水溶液中，超微粉与酸性水溶液的固液比为1：6kg/L，浸泡30~45分钟后采用微波超声波法进行一次提取，压滤后得到一次提取液和滤渣，向滤渣中加入pH=2的酸性水溶液进行二次提取，压滤后得二次提取液，将一次提取液和二次提取液混合均匀得到混合提取液；

（2）将步骤（1）所得的混合提取液加入浓缩罐中，在温度为55~60℃、真空度≤-0.08MPa条件下浓缩得到一次浓缩液，一次浓缩液的体积为混合提取液体积的15~17%；将一次浓缩液装入醇沉罐中并冷却，向醇沉罐中加入90~97%乙醇，直至乙醇占醇沉罐内溶液中质量分数为80%，5~10℃静置45~50小时，取上清液再倒入浓缩罐中，在温度为40℃、真空度≤-0.08Mpa条件下浓缩得到二次浓缩液，二次浓缩液的体积为混合提取液体积的5.5~6.5%；

（3）向步骤（2）所得的二次浓缩液中加入纯化水，二次浓缩液与纯化水的体积比为1：4，调节pH至5~6，然后加入至大孔吸附树脂柱，吸附6~8小时后，用纯化水冲洗4小时，再依次用5%乙醇溶液及10%乙醇溶液分别冲洗1小时后，用95%乙醇溶液洗脱，点板、收集洗脱液；然后将洗脱液减压浓缩、干燥制成干粉，得到赤芍总苷粗品；

（4）将步骤（3）所得的赤芍总苷粗品加入纯化水中，赤芍总苷粗品与水的固液比为1:10~15kg/L，采用C18反相色谱柱，乙醇和水作为流动相，梯度洗脱；再用葡聚糖凝胶色谱纯化，以甲醇洗脱，减压浓缩得到芍药苷单体；

其中，梯度洗脱的条件为：0~40min，乙醇30%；40~90min，乙醇60%，90~120min，乙醇100%，流速10mL/min，柱温为20~30℃；

（5）在温度为18~26℃、相对湿度45~65%的洁净室内，称取芍药苷单体100g、没食子酸37.5g、柠檬酸2500g，加入配液装置中；调整配液装置内的温度为40~50℃，加注射水至配液装置内药液的总重量为100kg，保持配液装置内气压、温度稳定，搅拌3~10分钟，调整配液装置内的温度为15~25℃，过滤；

（6）将步骤（5）所得产物无菌灌装成10ml/支的芍倍注射液，100度检漏、负压60KPa湿热灭菌20分钟，检验、包装、入阴凉库，即得。

优选地，步骤（5）中所述配液装置包括密闭的罐体，所述罐体呈类圆柱形且罐体的轴向中心线沿竖直方向，所述类圆柱形是圆柱形相对的两端面均为向外凸出的球冠所围成的图形；罐体上表面的中心处安装有旋转清洗球，旋转清洗球的一侧设置有人孔，从人孔处沿逆时针方向均匀间隔设置有压缩空气入口、呼吸口、一体视灯镜、进料口、备用口、纯蒸汽入口、抽真空口、爆破片口及压力表；罐体圆周侧面的上部设置有第一循环口，罐体的底部设置有第二循环口，罐体圆周侧面及底部圆周侧面及底部的内壁与外壁之间中空，并设有夹套和流道，所述夹套通过流道与第一循环口及第二循环口相连通，且夹套内流通有传热介质；罐体圆周侧面的下部设置有取样阀口、pH计及温度计，罐体底部的中心处设置有出料口，出料口的一侧安装有搅拌器；罐体的下方设置有支脚，支脚的底部安装有称重模块。

优选地，步骤（1）所述的二次粉碎是将粗颗粒与温度为0~8℃、含水量为0.5~1%的冷冻干燥空气共同注入气流式超微粉碎机进行粉碎。

优选地，步骤（1）中一次提取及二次提取采用微波超声波中药提取机，超声波功率为1~2KW，微波功率为600~1000W，一次提取及二次提取时间均为20~35分钟，二次提取时加入的酸性水溶液的体积是一次提取时酸性水溶液体积的1/2~2/3。

优选地，步骤（1）所述的酸性水溶液为稀盐酸溶液。

优选地，步骤（4）所述C18反相色谱柱以C18键合硅胶为填料，填料的粒径为5μm。

进一步，所述传热介质为蒸汽和/或冷却水。

本发明采用两次粉碎，再用酸性水溶液浸泡，可以提高芍药苷的提取率，缩短赤芍总苷粗品的制备时间，具有快速、彻底、效率高的优点；采用C18反相色谱柱及葡聚糖凝胶色谱纯化，减少了分离过程中的损失，提高了芍药苷产品的纯度，所得芍药苷的纯度≥98%；利用底部设置有称重模块的配液装置，通过控制气压和温度，使配液更快速、均匀、精确；本发明易于操作和工业化生产，提高了经济效益和产品保障。

附图说明

图1为所述配液装置的结构示意图；

图2为图1的俯视图。

具体实施方式

以下通过优选实施例对本发明进一步详细说明，但本发明的保护范围并不局限于此。

一种芍倍注射液的制备方法，包括以下步骤：

（1）称取10kg赤芍药材，经一次粉碎得到颗粒度为50~300目的粗颗粒，再将粗颗粒与温度为4℃、含水量为0.8%的冷冻干燥空气共同注入气流式超微粉碎机进行二次粉碎，过筛后得到颗粒度为1250~2500目的超微粉；将超微粉置于60L稀盐酸溶液中，稀盐酸溶液的pH=2，浸泡40分钟后，将稀盐酸溶液与超微粉一起加入微波超声波中药提取机中，调节超声波功率为1KW，微波功率为600W，进行一次提取，一次提取30分钟，压滤后得到一次提取液和滤渣，向滤渣中加入40L稀盐酸溶液中，稀盐酸溶液的pH=2，进行二次提取，二次提取30分钟，压滤后得二次提取液，将一次提取液和二次提取液混合均匀得到混合提取液；

（2）将步骤（1）所得的混合提取液加入浓缩罐中，在温度为55~60℃、真空度≤-0.08MPa条件下浓缩至16L，得到一次浓缩液；将一次浓缩液装入醇沉罐中并冷却，向醇沉罐中加入95%乙醇，直至乙醇占醇沉罐内溶液的质量分数为80%，5~10℃静置2天，取上清液再倒入浓缩罐中，在温度为40℃、真空度≤-0.08Mpa条件下浓缩至6L，得到二次浓缩液，二次浓缩液无乙醇味；

（3）向步骤（2）所得的二次浓缩液中加纯化水稀释至30L，调节pH至5~6，然后加入至大孔吸附树脂柱，吸附6小时后，用纯化水冲洗4小时，再先后分别用5%乙醇溶液及10%乙醇溶液各冲洗1小时，然后用95%乙醇溶液洗脱，点板（即采用薄层层析法与芍药苷标准品的点板结果比照）、收集洗脱液；然后将洗脱液减压浓缩、干燥制成干粉，得到赤芍总苷粗品；赤芍总苷粗品经研磨后装入棕色玻璃瓶中，以待取样检测；

（4）将步骤（3）所得的赤芍总苷粗品加入纯化水中，赤芍总苷粗品与水的固液比为1:10kg/L，采用C18反相色谱柱，乙醇和水作为流动相，梯度洗脱；再全部用葡聚糖凝胶SephadexLH-20色谱纯化，以甲醇洗脱，减压浓缩得到芍药苷单体；

其中，梯度洗脱的条件为：0~40min，乙醇30%；40~90min，乙醇60%，90~120min，乙醇100%，流速10mL/min，柱温为20~30℃；C18反相色谱柱以C18键合硅胶为填料，填料的粒径为5μm；

（5）在温度为20℃、相对湿度55%的洁净室内，A级环境下称取芍药苷单体100g、没食子酸37.5g、柠檬酸2500g，加入配液装置中；

所述配液装置包括密闭的罐体15，所述罐体15呈类圆柱形且罐体15的轴向中心线沿竖直方向，所述类圆柱形是圆柱形相对的两端面均为向外凸出的球冠所围成的图形；罐体15上表面的中心处安装有旋转清洗球17，旋转清洗球17的右侧设置有人孔1，从人孔1处沿逆时针方向均匀间隔设置有压缩空气入口2、呼吸口3、一体视灯镜4、进料口5、备用口7、纯蒸汽入口8、抽真空口9、爆破片口10及压力表11；罐体15圆周侧面的上部设置有第一循环口6，罐体15的底部设置有第二循环口20，罐体15圆周侧面及底部的内壁与外壁之间中空，并设有夹套16和流道，所述夹套16通过流道与第一循环口6及第二循环口20相连通，且夹套16内流通有传热介质，所述传热介质为蒸汽和/或冷却水；罐体15圆周侧面的下部设置有取样阀口14、pH计13及温度计12，罐体底部的中心处设置有出料口19，出料口19的一侧安装有搅拌器18；罐体15的下方设置有支脚21，支脚21的底部安装有称重模块22；

配液装置使用前后，均需从通过纯蒸汽入口8通入蒸汽灭菌；第一循环口6及第二循环口20处均连接有两个管道，两个管道分别为蒸汽流通管道及冷却水流通管道，配液时，通过从第一循环口6通入蒸汽，蒸汽在夹套16内流通，从第二循环口20流出，调整罐体15内的温度为40~50℃；然后通过称重模块22加注射水至罐体15内三种原料药及注射水的总重为100kg，保持罐体15内气压、温度稳定，搅拌3~10分钟，通过从第二循环口20通入冷却水，冷却水在夹套16内流通，从第一循环口6流出，调整罐体内的温度为20℃，过滤；

（6）将步骤（5）所得产物在B+A环境下现场监测无菌灌装成10ml/支的芍倍注射液，100度检漏、负压60KPa湿热灭菌20分钟，检验、包装、入阴凉库，即得。

将步骤（5）所得芍药苷单体采用照高效液相色谱法测定，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相用甲醇：水=3：7，检测波长为230nm；待测试样为精密称取80℃干燥至恒重的芍药苷单体，加水制成0.08g/L的芍药苷溶液；分别取20μL待测试样和空白对比样注入高效液相色谱仪，测得芍药苷纯度≥98%。

其中，按照GB/T16292-1996标准，A级要达到的洁净度等级为：静态百级，动态百级。B+A的洁净度要求为：A级（高风险操作区）要达到静态百级，动态百级，而该区域所处的背景区域为B级，即要求背景区域达到静态百级，动态万级。A级环境：空气温度为20~24℃；空气相对湿度为45%~60%；水平风速≥0.54m/s，垂直风速≥0.36m/s；高效过滤器的检漏大于99.97%；300LX＜照度≤600LX；噪声≤75db（动态测试）。B级环境：空气温度为20~24℃；空气相对湿度为45%~60%；房间换气次数≥25次/小时；相对室外压差≥10Pa，同一级别的不同区域按气流流向保持一定的压差；水平风速≥0.54m/s，垂直风速≥0.36m/s；高效过滤器的检漏大于99.97%；300LX＜照度≤600LX；噪声≤75db（动态测试）。