选择性肠球菌增菌培养基

摘要

本发明提供选择性肠球菌增菌培养基，其技术方案为：由以下组分组成：蛋白眎、胨5.0g，酵母浸出粉2.5g，牛肉膏3.0g，葡萄糖20.0g，乳糖4.0g，氯化钠5.0g，叠氮钠2.5g，牛胆盐10.0g，0.1%溴甲酚绿20%乙醇水溶液6.0ml，蒸馏水1000ml。称取蛋白眎、胨5.0g，酵母浸出粉2.5g，牛肉膏3.0g，葡萄糖20.0g，乳糖4.0g，氯化钠5.0g，叠氮钠2.5g，牛胆盐10.0g，于1000ml三角烧瓶中，量取1000ml蒸馏水于上述三角烧瓶中，加热溶化，调PH值到6.0，再加入0.1%溴甲酚绿20%乙醇水溶液6.0ml，分装50.0ml于150ml三角烧瓶中包扎后，在温度121℃下，灭菌15分钟备用。本发明有益效果：与AC肉汤培养基相比较，颜色变化更明显，更易观察结果。

说明书

技术领域：

本发明涉及微生物培养基技术领域，尤其是选择性肠球菌增菌培养基。

背景技术：

最近的研究表明，多数肠球菌可以产生细菌素，被认为是条件致病菌，可致：尿路感染，腹腔、盆腔感染，烧伤后伤口感染等，是仅次于葡萄球菌属的重要医院感染病原菌。我国近几年来报道肠球菌引起的食物中毒多起，多是由粪肠球菌及变种、屎肠球菌、鹑鸡肠球菌引起；国外有报道解糖肠球菌和类鸟肠球菌引起的食物中毒。如果来自临床标本的肠球菌量少或是食品标本的肠球菌在制作过程中受损，不易进行分离培养，而需要进行先增菌，再进行分离培养。目前现有的AC肉汤培养基和肠球菌肉汤(所有水解七叶苷阳性的培养基都变黑），其效果并不十分令人满意（图1、图2）。因此，本领域中需要一种较好的肠球菌增菌培养基。

发明内容

本发明提供选择性肠球菌增菌培养基，此培养基命名为MRCH2培养基。

其技术方案为：由以下组分组成：蛋白眎、胨5.0g，酵母浸出粉2.5g，牛肉膏3.0g，葡萄糖20.0g，乳糖4.0g，氯化钠5.0g，叠氮钠2.5g，牛胆盐10.0g，0.1%溴甲酚绿20%乙醇水溶液6.0ml，蒸馏水1000ml。

称取蛋白眎、胨5.0g，酵母浸出粉2.5g，牛肉膏3.0g，葡萄糖20.0g，乳糖4.0g，氯化钠5.0g，叠氮钠2.5g，牛胆盐10.0g，于1000ml三角烧瓶中，量取1000ml蒸馏水于上述三角烧瓶中，加热溶化，调PH值到6.0，再加入0.1%溴甲酚绿20%乙醇水溶液6.0ml，分装50.0ml于150ml三角烧瓶中包扎后，在温度121℃下，灭菌15分钟备用。

MRCH2培养基组份中的蛋白眎、胨5.0g、酵母浸出粉2.5g来源于平板计数琼脂培养基。

MRCH2培养基组份中的牛肉膏3.0g、氯化钠5.0g来源于营养肉汤培养基。

MRCH2培养基组份中的叠氮钠2.5g来源于Pficer肠球菌琼脂培养基。

MRCH2培养基组份中的牛胆盐10.0g来源于肠球菌肉汤培养基。

MRCH2培养基组份中的葡萄糖20.0g、乳糖4.0g是利用比较的方法优化得出的结果。

MRCH2培养基组份中的0.1%溴甲酚绿20%的乙醇水溶液6.0ml来源于酸碱指示剂应用指导方法。

本发明的有益效果：本发明MRCH2培养基，与AC肉汤培养基相比，颜色变化更明显，更易观察结果，适合普遍推广使用。

附图说明

图1为肠球菌在肠球菌肉汤培养基上效果图；

图2为肠球菌在AC肉汤培养基上效果图；

图3为肠球菌在MRCH1、MRCH2、MRCH3、MRCH4培养基上37℃培养96小时生长情况效果图；

图4为肠球菌在MRCH2培养基上效果图。

具体实施方式

在蛋白眎、胨5.0g，酵母浸粉2.5g，牛肉膏3.0g，氯化钠5.0g，牛胆盐10.0g，叠氮钠2.5g，0.1%溴甲酚绿20%乙醇水溶液6ml,蒸馏水1000ml中，加入葡萄糖和乳糖的量见

表一

（表一）培养基中加入葡萄糖和乳糖量值表

如此制成4种培养基，分别称作MRCH1、MRCH2、MRCH3、MRCH4培养基。调PH到6.0，分装50ml到150ml三角烧瓶，包扎灭菌121℃,15分钟备用。

自平板计数琼脂平板上取菌制成菌液，吸取菌液1ml分别接种到MRCH1、MRCH2、MRCH3、MRCH4，置37℃培养96小时，观察结果（培养96小时的结果见图3）并测定其PH值。

测定培养物的PH值应用PHSJ—4A型实验室PH计，分别测定各培养物（37℃培养96小时）的PH值。

测得各个培养物的PH值见表二

（表二）各个培养物的PH值

MRCH1MRCH2MRCH3MRCH4PH值 4.82 4.494.434.25

因为从表二不难看出MRCH1培养物的PH值是4.82，不在4.2～4.6之间，说明加入糖的量不足，所产酸不足以降到4.2～4.6。本着节约的观点，确定葡萄糖20.0g，乳糖4g。

培养基MRCH2最终调PH到6.0是根据李丽君的初始PH值对菌体生长的影响的研究结果：在PH5.0～7.5范围内肠球菌均可良好生长，PH为6.0时生长最好而确定。

肠球菌在MRCH2培养基上效果图（图4）。

实施例

菌种：（1）ATCC29212购自青岛绿谷商贸有限公司。

试剂和培养基：(1)PROTEOSEPEPTONE(蛋白眎、胨)购自MADEINENGLANDBYOXOIDLIMITEDLONDON.S.E.1；（2）酵母浸粉北京双旋微生物培养基制品厂生产；（3）牛肉浸膏上海市牛奶公司综合厂生产；（4）葡萄糖北京国华化学试剂厂生产；（5）乳糖上海化学试剂厂生产；（6）氯化钠淄博化学试剂厂生产；（7）叠氮钠未标出产地标签内容：Art.822335NatriumazidZurSyntheseNaN3MERCK-schuchardtschuchardt,8011HohenbrunnbeiMǖnchenSehrgiftigVerschlucken.EntwickeltbeiBerǖhrungsauresehrgiftigeGase；（8）牛胆盐石家庄市朗特生物制品有限公司生产。（9）营养肉汤培养基是实验室自制的；（10）AC肉汤培养基是青岛高科园海博生物技术有限公司生产；（11）平板菌落计数琼脂培

养基是山东省疾病预防控制中心齐宇预防医学技术开发公司生产；(12)肠球菌肉汤培养基是

青岛高科园海博生物技术有限公司生产；

主要仪器：（1）DHP—9270B智能型电热恒温培养箱，上海琅玕实验设备有限公司生产。

（2）YXQG02型电热式蒸汽灭菌器，山东新华医疗器械股份有限公司生产。（3）PHSJ—4A型实验室PH计，上海精密科学仪器有限公司生产。

菌种活化：取菌于营养肉汤（成分：牛肉膏3.0g，蛋白胨10g，酵母浸粉2.5g，氯化钠5g，蒸馏水1000ml）中37℃培养48小时。从中取菌划线接种PCA平板计数琼脂(成分：胰蛋白胨5.0g，酵母浸粉2.5g，葡萄糖1.0g，琼脂15.0g，蒸馏水1000ml)平板，置于37℃培养48小时。