一种治疗类风湿性关节炎炎症和骨破坏的中药组合物及其用途

摘要

本发明涉及一种治疗类风湿性关节炎炎症和骨破坏的中药组合物及其用途，所述的中药组合物由以下重量份的原料药制成：清风藤10-20份、补骨脂15-30份、骨碎补15-30份、当归9-15份、淫羊藿15-20份。本发明的中药组合物对类风湿性关节炎动物模型的足趾肿胀度有显著的抑制作用，且能明显减少类风湿性关节炎动物模型炎症关节周围骨量丢失，提高骨生物力学参数，抑制类风湿性关节炎导致的骨破坏；同时该中药组合物具备药味数少，便于制备，成本低，无毒副作用的优点。

说明书

技术领域

本发明涉及一种中药组合物，具体地说，涉及一种治疗类风湿性关节炎炎症和骨破坏的中药组合物及其用途。

背景技术

类风湿性关节炎(RA)是以对称性多关节炎为主要临床表现的异质性、系统性、自身免疫性、主要临床表现为小关节滑膜炎所致的关节肿痛，继而软骨破坏、关节间隙变窄，晚期因严重骨质破坏、吸收导致关节僵直、畸形、功能障碍的一类疾病。其属于慢性侵袭性、进行性、反复发作性、全球性疾病。在我国类风湿性关节炎的患病率为0.24％～0.50％，女性多于男性，约2～3∶1，任何年龄均可发病，以20～50岁最多，致残率较高，预后不良，目前没有很好的根治方法。

类风湿性关节炎主要表现为关节症状到关节外多系统受累。起病缓慢隐匿，出现明显关节症状前可有数周的低热，少数患者可有高热、乏力、全身不适、体重下降等症状，以后逐渐出现典型关节症状。少数则有较急剧的起病，在数天内出现多个关节症状。

关节性病变可分滑膜炎症和关节结构破坏，前者经治疗后有一定可逆性，但后者一经出现很难逆转。病情和病程有个体差异，从短暂、轻微的少关节炎到急剧进行性多关节炎均可出现，有晨僵、关节疼痛、关节肿胀、关节畸形、特殊关节、关节功能障碍等。X线平片关节病变分期：早期可见关节周围软组织肿胀影、关节端骨质疏松(Ⅰ期)；进而关节间隙变窄(Ⅱ期)；关节面出现虫蚀样改变(Ⅲ期)；晚期可见关节半脱位和关节破坏后的纤维性和骨性强直(Ⅳ期)。诊断应有骨侵袭或肯定的局限性或受累关节近旁明显脱钙。

由于本病的病因和发病机制未完全明确，目前临床上尚缺乏根治及预防本病的有效措施。减轻关节症状、延缓病情进展、防止和减少关节的破坏、保护关节功能、最大限度地提高患者的生活质量，是目前的治疗目标。

中国专利文献CN201310274512.2，公开日2013.09.25，公开了一种抑制类风湿关节炎炎症和减少骨量丢失的中药组合物及其用途，所述的中药组合物是由下列重量份的原料药制成：骨碎补10-20份、淫羊藿10-20份、黄芪15-25份、生地10-20份。中国专利文献CN201310273432.5，公开日2013.10.09，公开了一种治疗类风湿性关节炎的中药组合物及其用途，所述的中药组合物是由下列重量份的原料药制成：豨莶草25-35份、青风藤10-20份、白芍药10-20份、当归8-16份、薏仁25-35份。以上中药组合物对CIA大鼠关节炎症均具有明显抑制作用，且能明显减少CIA大鼠炎症关节周围骨量丢失，提高骨生物力学参数，因此在治疗类风湿性关节炎方面疗效确切显著。然而，研发更多的更有效的治疗药物仍然是十分必要的。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种治疗类风湿性关节炎炎症和骨破坏的中药组合物。

本发明的再一的目的是，提供所述的中药组合物的用途。

为实现上述第一个目的，本发明采取的技术方案是：

一种治疗类风湿性关节炎炎症和骨破坏的中药组合物，它是由以下重量份的原料药制成：清风藤10-20份、补骨脂15-30份、骨碎补15-30份、当归9-15份、淫羊藿15-20份。

优选地，所述的中药组合物是由以下重量份的原料药制成：清风藤12-16份、补骨脂20-25份、骨碎补20-25份、当归12-14份、淫羊藿16-18份。

更优选地，所述的中药组合物是由以下重量份的原料药制成：清风藤15份、补骨脂25份、骨碎补25份、当归12份、淫羊藿18份。

所述的中药组合物的剂型是胶囊剂、颗粒剂、片剂、合剂或糖浆剂。

为实现上述第二个目的，本发明采取的技术方案是：

如上任一所述的中药组合物在制备治疗类风湿性关节炎的药物中的用途。

如上任一所述的中药组合物在制备治疗类风湿性关节炎炎症和/或骨破坏的药物中的用途。

本发明优点在于：

1、对类风湿性关节炎动物模型的足趾肿胀度有显著的抑制作用，且能明显减少类风湿性关节炎动物模型炎症关节周围骨量丢失，提高骨生物力学参数，抑制类风湿性关节炎导致的骨破坏；

2、药味数少，便于制备，原材料丰富易得，成本低，适于推广；

3、由纯中药制成，无毒副作用，易于被患者接受。

具体实施方式

下面对本发明提供的具体实施方式作详细说明。

实施例1本发明中药组合物的制备(一)

清风藤15份、补骨脂25份、骨碎补25份、当归12份、淫羊藿18份，常规方法煎煮。

实施例2本发明中药组合物的制备(二)

清风藤10份、补骨脂30份、骨碎补15份、当归15份、淫羊藿15份，常规方法煎煮。

实施例3本发明中药组合物的制备(三)

清风藤20份、补骨脂15份、骨碎补30份、当归9份、淫羊藿20份，常规方法煎煮。

实施例4本发明中药组合物的制备(四)

清风藤10份、补骨脂15份、骨碎补30份、当归15份、淫羊藿15份，常规方法煎煮。

实施例5本发明中药组合物的制备(五)

清风藤20份、补骨脂30份、骨碎补15份、当归9份、淫羊藿20份，常规方法煎煮。

实施例6本发明中药组合物的制备(六)

清风藤16份、补骨脂20份、骨碎补25份、当归12份、淫羊藿18份，常规方法煎煮。

实施例7本发明中药组合物的制备(七)

清风藤12份、补骨脂25份、骨碎补20份、当归14份、淫羊藿16份，常规方法煎煮。

实施例8本发明中药组合物的制备(八)

清风藤12份、补骨脂20份、骨碎补20份、当归14份、淫羊藿18份，常规方法煎煮。

实施例9本发明中药组合物片剂/胶囊剂的制备

取实施例1-8任一所述的药物，加8-12倍量水，煎煮1-3小时，滤出药汁。再加10倍量水，煎煮1.5-2.5小时，滤出药汁，合并二次煎液，静置，滤取上清液，浓缩，放冷，加浓缩液2.5倍量酒精，搅拌沉淀过夜。取上清液，浓缩至稠浸膏；加入制药辅料，真空干燥，粉碎制粒，压制成片剂或填充装胶囊。

实施例10本发明中药组合物颗粒剂的制备

取实施例1-8任一所述的药物，加8-10倍量水，煎煮2.5-3.5小时，滤出药汁。再加10倍量水，煎煮2小时，滤出药汁，合并二次煎液，静置，滤取上清液，浓缩，放冷，加浓缩液2倍量酒精，搅拌沉淀过夜。取上清液，浓缩至稠浸膏；加适当制药辅料，制粒，干燥，整粒，得20g颗粒，分装10g/袋。

实施例11本发明中药组合物合剂/糖浆剂的制备

取实施例1-8任一所述的药物，加8-10倍量水，煎煮3小时，滤出药汁。再加8倍量水，煎煮2小时，滤出药汁，合并二次煎液，静置，滤取上清液，浓缩，放冷，加浓缩液2倍量酒精，搅拌沉淀过夜。取上清液，浓缩至稠浸膏；加适当制药辅料，制成合剂或糖浆剂。

实施例12本发明中药组合物治疗类风湿性关节炎炎症的动物试验

1实验材料

1.1实验动物

SPF级SD大鼠，雄性，由广东省医学实验动物中心提供，实验动物生产许可证号SCXK(粤)2013－0002，合格证号44007200007843。动物实验环境：广东省中医药工程技术研究院SPF级动物实验室，设施使用许可证号SYXK(粤)2010-0059。

1.2主要试剂

对照一：塞来昔布胶囊，PfizerPharmaceuticalsLLC，口服，0.2g/粒，一次1粒，每日2次，批号BK13CCEK079。使用时以蒸馏水配制成所需浓度，用药剂量为36mg/kg。

对照二：痹祺胶囊，天津达仁堂京万红药业有限公司，0.3g/粒，一次4粒，一日3次，批号301908。使用时以蒸馏水配制成所需浓度，用药剂量为324.0mg/kg。

对照三：骨碎补15g、淫羊藿20g、黄芪18g、地黄15g。按照常规方法制备成汤剂，生药含量为5.4g/ml。使用时直接灌胃，用药剂量为10.8g生药/kg。

对照四：豨莶草30份、青风藤15份、白芍药15份、当归12份、薏仁30份。按照常规方法制备成汤剂，生药含量为5.4g/ml。使用时直接灌胃，用药剂量为10.8g生药/kg。

对照五：豨莶草30g、青风藤15g、络石藤30g、骨碎补30g、补骨脂30g、淫羊藿20g、黄芪18g、白芍18g。按照常规方法制备成汤剂，生药含量为5.4g/ml。使用时直接灌胃，用药剂量为10.8g生药/kg。

对照六：骨碎补40g、白芍18g、仙灵脾20g、青风藤15g、黄芪18g。按照常规方法制备成汤剂，生药含量为5.4g/ml。使用时直接灌胃，用药剂量为10.8g生药/kg。

对照七：骨碎补40g、仙灵脾20g、黄芪18g。按照常规方法制备成汤剂，生药含量为5.4g/ml。使用时直接灌胃，用药剂量为10.8g生药/kg。

对照八：豨莶草30g、青风藤15g、白芍18g、当归12g、薏苡仁30g、骨碎补15g。按照常规方法制备成汤剂，生药含量为5.4g/ml。使用时直接灌胃，用药剂量为10.8g生药/kg。

本发明中药：按照实施例1方法制备成汤剂，生药含量为5.4g/ml。使用时直接灌胃，用药剂量为10.8g生药/kg。

1.3主要仪器

JJ3000动物电子秤(G&G公司)；BS224S电子天平(德国SARTORIUS)；游标卡尺(上海汇一尺业有限公司)。

2实验方法

2.1类风湿性关节炎动物模型的建立

取SPF级SD大鼠110只，雄性，按体重随机分为11组，每组10只，分别为正常对照组、模型对照组、对照一组、对照二组、对照三组、对照四组、对照五组、对照六组、对照七组、对照八组、本发明中药组。

各组大鼠造模前用游标卡尺在右后足足跖处定点测量右后足足跖厚度作为正常厚度(mm)。然后除正常对照组外，其余各组大鼠均于右侧足跖部皮下注射Ⅱ型胶原弗氏完全佐剂乳剂0.1ml(介苗浓度为10g/L的完全弗氏佐剂(CFA)：将II型胶原溶于0.1moL/L冰醋酸，置冰箱4℃过夜，使其充分溶解，然后加入等体积的CFA混匀，制成II型胶原为5g/L的乳剂。注射当日为造模第1天)，造模第8天，于鼠尾根部以相同剂量乳剂注射1次。正常对照组在相同部位注射/0.1ml灭菌液体石蜡。

2.2给药和炎症判定方法

于造模第29天，所有给药组按剂量灌胃给药，1次/天，连续4周。于未次灌胃给药后1.0h，测各组大鼠右后足趾部厚度。以给药后右后足趾部厚度减去造模前右后足趾部厚度作为类风湿性关节炎足趾肿胀度(mm)。

2.3统计学处理

采用SPSS15.0软件对实验数据进行统计学分析，数据符合正态分布，按照均数±标准差表示，若各治疗组方差齐，采用LSD-t检验进行组间的两两比较；单独两组样本均数比较时，若方差齐，采用t-text，若方差不齐，改用t'检验，P＜0.05时有统计学意义。

3实验结果

各组大鼠关节肿胀度统计结果见表1。其中，与模型对照组相比，正常对照组、对照一组、对照三组、对照六组、对照八组和本发明中药组与模型对照组的差异均有统计学意义(P<0.05)，其它各组与模型对照组差异无统计学意义(P>0.05)。本发明中药组与对照一至对照八组分别比较，差异均具有统计学意义(P<0.05)。表明本发明的中药组合物能快速发挥抑制类风湿性关节炎大鼠模型足趾肿胀度的作用。

表1各组大鼠关节肿胀度

实施例13本发明中药组合物治疗类风湿性关节炎骨破坏的动物试验

1实验材料

1.1实验动物

Wistar大鼠，雌性，7-8周龄，体重160-180g，2只/笼，分笼饲养，购买自中国科学院上海实验动物中心，饲养环境为上海交通大学医学院实验动物科学部SPF级动物房，大鼠自由饮水及进食，室温25±1℃，动物适应性饲养5天后进行实验。

1.2主要试剂

各对照用药物(具体参见实施例12的对照一至对照八)；本发明中药(具体配方参见本发明实施例1)。

牛II型胶原蛋白，购于Chondrex,Inc.公司；冰醋酸购于北京化学试剂公司；完全弗式佐剂、不完全弗式佐剂购于美国sigma公司；丙酮购于上海丹炼贸易有限公司；聚甲基丙烯酸酯购于东莞市凯杰塑胶原料有限公司；甲苯胺蓝购于上海生工。

2实验方法

2.1类风湿关节炎动物模型的建立

2.1.1牛II型胶原的乳化

(1)配制乙酸溶液：溶解无水冰醋酸于灭菌用水，配制0.05mol/L的乙酸；

(2)配制胶原溶液：向牛II型胶原中加0.05mol/L的乙酸溶液，使胶原溶液终浓度为4mg/ml，放入4℃冰箱中避光搅拌过夜；

(3)配制胶原乳剂：将4mg/ml胶原溶液与CFA等体积乳化(注射器法，冰上操作)，使胶原终浓度为2mg/ml，用于初次免疫；将4mg/ml胶原溶液与IFA等体积乳化，使胶原终浓度为2mg/ml，用于激发免疫。

2.1.2大鼠免疫方法

(1)初次免疫：用2％戊巴比妥钠溶液腹腔注射麻醉大鼠(0.3ml/只)，于每只大鼠尾根部皮下注射0.12ml胶原乳剂(含胶原240μg)；

(2)激发免疫：初次免疫后第7天于大鼠臀背部两侧各皮下注射0.03ml胶原乳剂(共含胶原120μg)。

2.1.3模型评价

(1)观察关节形态

发病大鼠肿胀关节主要出现于双下肢踝关节和足趾各关节，通过观察大鼠关节形态的变化判断发病情况。初次免疫后第12天，造模大鼠后肢踝关节及趾间关节开始出现肿胀，肿胀以踝关节为中心，肿胀部位皮肤发红甚至发紫，患肢皮肤温度较健侧增高。

(2)关节炎症评分

大鼠关节炎症程度评价采用评分法(0～4分)，分级评分及表现见表2。炎症评分≥2分即造模成功大鼠，可随机入组用于后续实验。

表2大鼠四肢关节炎症评分及表现

2.2分组情况

共分为10组，分别为灭菌水组、对照一至对照八组、本发明中药组，各组10只。

2.3给药方法

灭菌水组：灭菌用水3ml/只/天，灌胃。

对照一组：使用时以蒸馏水配制成所需浓度，用药剂量为36mg/kg/天。

对照二组：使用时以蒸馏水配制成所需浓度，用药剂量为324.0mg/kg/天。

对照三-八组、本发明中药组：均按照常规方法煎煮至含生药量2.6g/ml，4℃保存备用，每只大鼠每天3ml，分两次灌胃。

2.4疗效评价

2.4.1关节破坏程度检查方法

治疗4周后，处死大鼠取胫骨上段去除软组织，浸入丙酮中固定，行Micro-CT扫描，比较各组治疗后胫骨上段骨破坏及胫骨上段骨骺线下1～4mm间次级松质骨骨小梁变化。

2.4.2胫骨上段松质骨组织形态计量学检查方法

(1)组织标本的制备

①固定、脱脂、脱水：分别于治疗4周结束当天麻醉处死大鼠，取胫骨上1/3段，剔除软组织，浸入冷丙酮溶液中固定、脱脂、脱水，12h更换一次丙酮，连续共6次；

②浸透：首先配制浸透剂，将BPO(过氧化二苯甲酰)2g溶于MMA(甲基丙烯酸甲酯单体)30ml，然后依次加入HEMA(甲基丙烯酸羟乙酯单体)60ml、HEA(丙烯酸羟乙酯单体)10ml、正丙醇10ml，搅拌均匀后将标本浸入，放入真空干燥器内的冰浴中，真空冰浴浸透1h；

③包埋：在冰浴上将BPO0.4g溶于MMA40ml，然后依次加入HEMA60ml、HEA10ml、正丙醇10ml，最后加DMA(二甲苯胺)0.1ml，经搅拌均匀后将溶液浇注于合适模型中包埋，最后在包埋剂表面滴加一层薄薄的石蜡油，放入4℃冰箱中让其聚合；

④切片：将包埋块脱模后在硬组织切片机上切下5μm厚切片，在37℃温浴中展平，并在37℃恒温培养箱内烘干；

⑤染色与封固：甲苯胺蓝染色后封固。

(2)松质骨组织形态计量学参数计算

①硬组织切片制备完成，甲苯胺蓝染色后，置于带有专门骨组织形态计量学测量系统软件的半自动图像分析仪上，200倍光镜下，于胫骨上段骨骺线下1～4mm间次级松质骨区域内每个标本随机选取5个视野，保存待分析；

②在半自动图像分析仪上，测量每个视野的总面积即骨组织面积(Tissuearea，T.Ar)，测量每个视野下骨小梁总周长Tb.Pm(Trabecularperimeter)，骨小梁总面积Tb.Ar(Trabeculararea)；

③将测得的上述参数代入表3计算：骨小梁面积(Tb.Ar)、骨小梁宽度(Tb.Wi)、骨小梁数量(Tb.N)、骨小梁分离度(Tb.Sp)。

表3松质骨组织形态计量学静态计算参数

2.4.3大鼠左侧股骨及第五腰椎骨生物力学的检查方法

(1)治疗4周后，处死大鼠取左侧股骨全长及第五腰椎去除软组织，2小时内行骨生物力学检查，比较各组治疗后股骨及第五腰椎的生物力学的变化。

(2)处死大鼠取左侧股骨全长及第五腰椎去除软组织，修整椎体上下关节面，使上下关节面保持平行。取完标本后予以0.9％生理盐水纱布包裹标本，2小时内行骨生物力学检查，比较各组治疗后股骨及第五腰椎的生物力学的变化。测试室温控制于37℃，股骨干参数的取股骨干的中点的前后径及左右径平均值为直径，跨距为2cm，加载速率为2mm/min。股骨测试时均为同一方向，股骨头朝上，股骨小结节远端和股骨髁上分别为二点置于测试仪上，股骨干的中点为受力点。腰椎参数分别取：1、椎体前后径和左右径的平均值；2、椎体的高度；加载速率为2mm/min。股骨三点弯曲实验以股骨断裂为实验终点，腰椎压缩实验以椎体被压缩1/3为实验终点。

2.5统计学处理

采用SPSS15.0软件对实验数据进行统计学分析，数据符合正态分布，按照均数±标准差表示，若各治疗组方差齐，采用单因素的方差分析及LSD-t检验进行组间的两两比较；单独两组样本均数比较时，若方差齐，采用t-text，若方差不齐，改用t'检验，P＜0.05时有统计学意义。

3实验结果

3.1胫骨上段矢状面松质骨变化比较

药物治疗4周后，取各治疗组大鼠胫骨上段行Micro-CT扫描，得到胫骨上段矢状面图，从CT图中可以看出，灭菌水组大鼠胫骨平台前方出现塌陷，骨骺线向前倾斜，骨骺线下1～4mm间的次级松质骨骨小梁稀少凌乱，相反其它各治疗组大鼠胫骨平台均保持正常结构形态，骨骺线呈蝶形、清晰可见，骨骺线下1～4mm间的次级松质骨骨小梁数量明显多于灭菌水组，骨小梁沿竖直应力方向排列较整齐。

3.2骨组织形态计量学参数比较

治疗4周后，各治疗组骨组织切片制作完成后，甲苯胺蓝染色，置于带有专门骨组织形态计量学测量系统软件的半自动图像分析仪上，200倍光镜下，于胫骨上段骨骺线下1～4mm间次级松质骨区域选取各组视野，计算出骨小梁面积百分数(见表4)。骨小梁面积百分数是评价药物对骨量影响的最重要的客观指标。统计分析后发现，各治疗组骨小梁面积百分数均高于灭菌水组(P＜0.05)，且与其他各治疗组比较，本发明中药组骨小梁面积百分数具有统计学意义(P＜0.05)，表明本发明中药组合物具有显著抑制CIA大鼠炎症关节周围骨量丢失的能力。

表4各治疗组骨小梁面积百分数比较

组别骨小梁面积百分数/％灭菌水组0.23对照一组0.28对照二组0.29对照三组0.29对照四组0.30对照五组0.29对照六组0.31对照七组0.29对照八组0.30本发明中药组0.35

骨小梁分离度是指骨小梁之间的平均距离，也是用于描述骨小梁形态结构的重要指标。分离度越大，骨小梁之间的距离就越大，意味着骨质越疏松。从表5中可以看出，对照三、对照六、对照八以及本发明中药组骨小梁的分离度显著低于灭菌水组(P＜0.05)，其他各治疗组与灭菌水组之间骨小梁分离度无明显统计学差异。本发明中药组骨小梁的分离度明显低于其他各治疗组。

表5各治疗组骨小梁分离度比较

组别骨小梁分离度/μm灭菌水组190对照一组147对照二组151对照三组141对照四组148对照五组139对照六组134对照七组145对照八组132本发明中药组101

3.3骨生物力学参数比较

各治疗组大鼠股骨三点弯曲实验及腰椎压缩实验比较见表6。在治疗4周后，经统计分析后发现，在腰椎压缩实验中，与灭菌水组相比较，各治疗组均有统计学差异(P＜0.05)，与其他各治疗组比较，本发明中药组具有显著性差异(P＜0.05)。在股骨三点弯曲实验中，与灭菌水组相比较，各治疗组均有统计学差异(P＜0.05)，与其他各治疗组比较，本发明中药组具有显著性差异(P＜0.05)。表明本发明的中药组合物对于松质骨强度和皮质骨强度具有显著的改善作用。

表6各治疗组大鼠股骨三点弯曲实验及腰椎压缩实验比较

可见，本发明的中药组合物能明显减少CIA大鼠炎症关节周围骨量丢失的能力，提高骨生物力学参数，有效治疗类风湿性关节炎导致的骨破坏。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。