含有来自毛泡桐的香叶基黄酮作为有效成分的用于抑制神经氨酸酶活性的组合物

摘要

本发明涉及一种含有来自毛泡桐的香叶基黄酮作为有效成分的用于抑制神经氨酸酶活性的组合物，所述毛泡桐提取物及由此分离的香叶基黄酮具有有意义地抑制对病原性病毒及细菌感染和伴随感染的炎症产生起重要作用的酵的神经氨酸酶的效果，因此，所述毛泡桐提取物或由此分离的香叶基黄酮作为用于抑制神经氨酸酶活性的组合物的有效成分可以被有益地被使用。

说明书

技术领域

本发明涉及一种含有来自毛泡桐(Paulowniatomentosa)的香叶基(geranylated)黄酮的用于抑制神经氨酸酶(nuraminidase)活性的组合物。

背景技术

毛泡桐(Paulowniatomentosa)是以郁陵岛为原产地，属于在全国范围内广泛自生的泡桐属(Paulowniacese)的落叶阔叶乔木。其叶片为宽的椭圆形且大型，顶端渐尖，有白色的棉毛。其花为圆锥花序，花冠钟形，花瓣有紫色条纹。该树木在地理上广泛分布于韩国、中国、日本。在中医学上认为其树皮称为桐皮，用于淋病、挫伤等治疗，促进毛发润泽再生，并且，还用做除臭剂。

到目前为止，已知的毛泡桐成分的例子包括梓醇(catapol)、紫丁香苷(syringin)、桃叶珊瑚甙(aucubin)、松柏苷(coniferin)、类叶升麻苷(acteoside)、属于木酚素(lignan)的泡桐素(paulownin)、芝麻素(sesamin)、(+)-辣薄荷醇[(+)-piperitol]及属于三萜系化合物(triterpenoid)的乌索酸(ursolicacid)等。

在糖水解酶中，神经氨酸酶(neuraminidase)是水解在细胞表面上的醣复合物，尤其，糖蛋白(glycoprotein)的末端的唾液酸(sialicacid)的酶。神经氨酸酶(neuraminidase，NA)水解糖蛋白的组分的半乳糖与唾液酸间的缩醛键，更具体而言，选择性地水解α2-3位置和α2-6位置(Shinyaetal.Nature2006，440，435)。神经氨酸酶分布于高等真核生物(highereukaryote)、多种病原性病毒和细菌(Vimr，E.；Lichtensteiger，C.TrendsMicrobiol.2002，10，254.；Schauer，R.GlycoconjugateJ.2000，17，485.；Taylor，G.L.Curr.opin.Struct.Biol.1996，6，830)。由神经氨酸酶的唾液酸的水解对细胞-细胞信号传递及细胞-细胞因子起决定性的作用。

流感病毒是引起急性呼吸道疾病的高度传染性病毒，在全世界引起集团感染或对小儿、老年人和心肺疾病患者引起严重呼吸道症状的病毒之一种(Hien，T.T.etal.N.Eng.J.Med.，350，1179，2004)。流感病毒分类学上属于正粘病毒(Orthomyxovirus)，分为A、B、C的三种类型，其中，尤其流行性扩散的类型是A及B型。在流感病毒的情况下，感染的寄主细胞中增值的病毒体(viron)与细胞末端的糖蛋白的末端的唾液酸接合。若唾液酸和病毒体通过神经氨酸酶(neuraminidase)被水解，则病毒扩散到新的细胞。此时，如果抑制神经氨酸酶的功能，就可以防止病毒的扩散。因此，神经氨酸酶抑制剂作为抗病毒材料被使用。

另外，生物膜(biofilm)的产生是在病原性细菌感染到寄主细胞时经过的主要过程。神经氨酸酶作为具有决定性的酶对生物膜的产生起作用。因此，如果抑制神经氨酸酶的功能，就生物膜的产生也被抑制，结果能够阻断细菌的感染(Soong，G.etal.，J.Clin.Invest.2006，116，2297)。链球菌肺炎(Streptococcuspneumonia)，绿脓杆菌(Pseudomonasaeruginosa)及产气荚膜梭菌(Clostridiumperfringen)等是通过根据神经氨酸酶产生的生物膜步骤进行感染的具有代表性的病原性细菌。此外，唾液酸与免疫反应有密切关系。通常，病毒或细菌感染后，在细胞表面的糖复合物中的唾液酸通过神经氨酸酶被水解，从而细胞内的细胞因子等活化，炎症反应进行，直到败血(sepsis)。因此，神经氨酸酶抑制剂有效于病原性病毒及细菌的感染和伴随感染的炎症产生疾病的预防和治疗。

在全世界为开发流感病毒治疗剂而进行多方面的研究。作为具有代表性的流感病毒治疗剂，金刚烷胺(Amatadine)、金刚乙胺(Rimatadine)、扎那米韦(Zanamivir)、奥司他韦(Oseltamivir)等四种被美国食品和药物管理局(FDA)批准使用。但通过阻断对病毒增殖必须的细胞膜蛋白质的M2蛋白质的离子通道来妨碍病毒脱壳(uncoating)，从而起抗病毒作用的M2抑制剂的金刚烷胺(Amatadine)和金刚乙胺(Rimatadine)仅对流感病毒A性有效果，并且，被报告为在40年的使用期间中发生抗药型病毒，在神经系统及胃出现严重的副作用(Bantia，S.etal.AntiviralResearch69，39，2006)。

1999年以后，对病毒的增殖起重要作用且耐药发生率低的，稳定地存在于A及B型流感病毒的神经氨酸酶的抑制剂的扎那米韦(Zanamivir)、奥司他韦(Oseltamivir)等新药被报告为用于病毒感染治疗(Zhang，J.etal.Bioorg.Med.Chem.Lett.16，3009,2006)。然而，在扎那米韦的情况下，虽然具有高抗病毒效果，也具有生物利用度低且从肾脏快速排泄的缺点(Ryan，D.M.etal.Antimicrob.AgentsChemother.，39，2583，1995)，而奥司他韦被报告为产生引起严重呕吐症状的副作用。

到目前所开发的抗病毒呈现引起严重的副作用，其应用需要多注意。并且，疫苗的开发存在如果流行的病毒型与疫苗的病毒不一致，效果就较低的问题，因此，需要关于感染抑制效果显著，安全性良好的然物和材料作为新的流感病毒剂的开发。

由此，本发明人从毛泡桐提取物分离香叶基黄酮，确立其结构后，确定针对为病原性病毒及细菌感染和伴随感染的炎症产生起重要作用的酵的神经氨酸酶的活性，结果，产生显著的神经氨酸酶抑制活性，因此，确定将所述毛泡桐提取物或从此分离的香叶基黄酮作为用于抑制神经氨酸酶活性的组合物可有益地使用，从而完成了本发明。

发明内容

解决的技术问题

本发明的目的在于以供一种含有毛泡桐(Paulowniatomentosa)提取物或来自毛泡桐的香叶基黄酮作为有效成分的用于抑制神经氨酸酶(neuraminidase)活性的组合物。

技术方案

为了解决上述问题，本发明提供一种含有毛泡桐(Paulowniatomentosa)提取物作为有效成分的用于抑制神经氨酸酶(neuraminidase)活性的药物组合物。

并且，本发明提供一种含有由以下化学式1表示的化合物或其药学上可接受的盐作为有效成分的用于抑制神经氨酸酶活性的药物组合物：

[化学式1]

(在化学式1中，R¹是-H、-OH或C_1-3的直链或支链烷氧基，R²是-OH或C_1-3的直链或支链烷氧基，R³是-H、-OH或C_1-3的直链或支链烷氧基，R⁴是-H或-OH)

并且，本发明提供一种含有毛泡桐提取物或其级分作为有效成分的用于抑制神经氨酸酶活性的保健食品组合物。

并且，本发明提供一种用于抑制神经氨酸酶活性的保健食品组合物，其含有由所述化学式1表示的化合物或其药学上可接受的盐作为有效成分。

并且，本发明提供一种抑制神经氨酸酶活性的方法，其包括将药学上有效量的毛泡桐提取物或其级分施用给个体的步骤。

并且，本发明提供一种抑制神经氨酸酶活性的方法，其包括将药学上有效量的由以下化学式1表示的化合物或其药学上可接受的盐施用给个体的步骤：

[化学式1]

(在化学式1中，R¹是-H、-OH或C_1-3的直链或支链烷氧基，R²是-OH或C_1-3的直链或支链烷氧基，R³是-H、-OH或C_1-3的直链或支链烷氧基，R⁴是-H或-OH)

并且，本发明提供一种毛泡桐提取物或其级分的用途，用作抑制神经氨酸酶活性的药物组合物。

并且，本发明提供一种毛泡桐提取物或其级分的用途，用作改善神经氨酸酶活性的保健食品。

并且，本发明提供一种由以下化学式1表示的化合物或其药学上可接受的盐的用途，用作抑制神经氨酸酶活性的药物组合物：

[化学式1]

(在化学式1中，R¹是-H、-OH或C_1-3的直链或支链烷氧基，R²是-OH或C_1-3的直链或支链烷氧基，R³是-H、-OH或C_1-3的直链或支链烷氧基，R⁴是-H或-OH)

并且，本发明提供一种由以下化学式1表示的化合物或其药学上可接受的盐的用途，用作改善神经氨酸酶活性的保健食品：

[化学式1]

(在化学式1中，R¹是-H、-OH或C_1-3的直链或支链烷氧基，R²是-OH或C_1-3的直链或支链烷氧基，R³是-H、-OH或C_1-3的直链或支链烷氧基，R⁴是-H或-OH)

并且，本发明提供一种用于治疗病毒和细菌感染性疾病的药物组合物，其含有毛泡桐提取物或其级分作为有效成分。

并且，本发明提供一种用于改善病毒和细菌感染性疾病的保健食品组合物，其含有毛泡桐提取物或其级分作为有效成分。

并且，本发明提供一种用于治疗病毒和细菌感染性疾病的药物组合物，其含有药学上有效量的由以下化学式1表示的化合物或其药学上可接受的盐作为有效成分：

[化学式1]

(在化学式1中，R¹是-H、-OH或C_1-3的直链或支链烷氧基，R²是-OH或C_1-3的直链或支链烷氧基，R³是-H、-OH或C_1-3的直链或支链烷氧基，R⁴是-H或-OH)

并且，本发明提供一种用于改善病毒和细菌感染性疾病的保健食品组合物，其含有药学上有效量的由以下化学式1表示的化合物或其药学上可接受的盐作为有效成分：

[化学式1]

(在化学式1中，R¹是-H、-OH或C_1-3的直链或支链烷氧基，R²是-OH或C_1-3的直链或支链烷氧基，R³是-H、-OH或C_1-3的直链或支链烷氧基，R⁴是-H或-OH)

并且，本发明提供一种治疗病毒和细菌感染性疾病的方法，其含有毛泡桐提取物或其级分作为有效成分。

并且，本发明提供一种治疗病毒和细菌感染性疾病的方法，其含有药学上有效量的由以下化学式1表示的化合物或其药学上可接受的盐作为有效成分：

[化学式1]

(在化学式1中，R¹是-H、-OH或C_1-3的直链或支链烷氧基，R²是-OH或C_1-3的直链或支链烷氧基，R³是-H、-OH或C_1-3的直链或支链烷氧基，R⁴是-H或-OH)

并且，本发明提供一种毛泡桐提取物或其级分的用途，用作治疗病毒和细菌感染性疾病的药物组合物。

并且，本发明提供一种毛泡桐提取物或其级分的用途，用作改善病毒和细菌感染性疾病的保健食品。

并且，本发明提供一种由以下化学式1表示的化合物或其药学上可接受的盐的用途，用作治疗病毒和细菌感染性疾病的药物组合物：

[化学式1]

(在化学式1中，R¹是-H、-OH或C_1-3的直链或支链烷氧基，R²是-OH或C_1-3的直链或支链烷氧基，R³是-H、-OH或C_1-3的直链或支链烷氧基，R⁴是-H或-OH)

同时，本发明提供一种由以下化学式1表示的化合物或其药学上可接受的盐的用途，用作改善病毒和细菌感染性疾病的保健食品：

[化学式1]

(在化学式1中，R¹是-H、-OH或C_1-3的直链或支链烷氧基，R²是-OH或C_1-3的直链或支链烷氧基，R³是-H、-OH或C_1-3的直链或支链烷氧基，R⁴是-H或-OH)

发明的效果

根据本发明的含有毛泡桐(Paulowniatomentosa)提取物或来自毛泡桐的香叶基黄酮作为有效成分的用于抑制神经氨酸酶活性的药物组合物，所述毛泡桐提取物及来自毛泡桐的香叶基黄酮表示对病原性病毒及细菌感染和伴随感染的炎症产生起重要作用的酵的神经氨酸酶的有意义的抑制活性，因此，所述毛泡桐提取物或来自其的香叶基黄酮为了流感病毒感染的预防和治疗、用于抑制神经氨酸酶活性的组合物而可被有益地使用。

附图说明

图1为确定毛泡桐(Paulowniatomentosa)提取物有效成分的化学结构的附图。

图2为确定毛泡桐提取物有效成分(化合物1至9)的神经氨酸酶抑制活性的附图。

图3为确定毛泡桐提取物有效成分(化合物1至9)的神经氨酸酶抑制活性机制，且将整个化合物确定为可逆酶抑制剂的附图。

图4为对毛泡桐提取物有效成分(化合物1至9)的神经氨酸酶抑制活性通过Lineweaver-Burk作图进行评价的附图。

图5为表示毛泡桐提取物有效成分(化合物1)的¹H及¹³C-NMR的测量结果的附图。

图6为表示毛泡桐提取物有效成分(化合物2)的¹H及¹³C-NMR的测量结果的附图。

图7为表示毛泡桐提取物有效成分(化合物3)的¹H及¹³C-NMR的测量结果的附图。

图8为表示毛泡桐提取物有效成分(化合物4)的¹H及¹³C-NMR的测量结果的附图。

图9为表示毛泡桐提取物有效成分(化合物5)的¹H及¹³C-NMR的测量结果的附图。

图10为表示毛泡桐提取物有效成分(化合物6)的¹H及¹³C-NMR的测量结果的附图。

图11为表示毛泡桐提取物有效成分(化合物7)的¹H及¹³C-NMR的测量结果的附图。

图12为表示毛泡桐提取物有效成分(化合物8)的¹H及¹³C-NMR的测量结果的附图。

图13为表示毛泡桐提取物有效成分(化合物9)的¹H及¹³C-NMR的测量结果的附图。

具体实施方式

下面对本发明进行详细说明。

本发明提供一种含有毛泡桐(Paulowniatomentosa)提取物作为有效成分的用于抑制神经氨酸酶(nuraminidase)活性的药物组合物。

所述毛泡桐(Paulowniatomentosa)提取物的制造方法优选包括以下步骤，但不限于此：

1)通过加以毛泡桐提取溶剂来进行提取；

2)过滤步骤1)的提取物；

3)步骤2)的过滤的提取物减压浓缩后，干燥即得毛泡桐的提取物；及

4)通过有机溶剂对步骤3)的毛泡桐提取物还进行提取，得到毛泡桐级分。

在所述方法中，步骤1)的毛泡桐可以无限制地使用任意一种，例如，直接种植的毛泡桐或上市销售的毛泡桐等。所述毛泡桐可以采用其叶、茎、根或果实，而不限于此，但，根据本发明的优选实施例，最优选采用果实。

在所述方法中，所述步骤1)的提取溶剂优选采用水、醇或其混合物。作为所述醇优选采用C₁至C₂的低级醇，而作为低级醇优选采用乙醇或甲醇。作为提取方法优选采用振荡提取、索氏(Soxhlet)提取或回流提取，但不限于此。优选通过向干燥的毛泡桐份量添加所述提取溶剂1至10倍来提取，而更优选添加所述提取溶剂4至6倍。提取温度优选为20℃至100℃，更优选为20℃至40℃，最优选为室温，但不限于此。并且，提取时间优选为10至48时间，更优选为15至30时间，最优选为24时间，但不限于此。另外，提取次数优选为1至5次，更优选反复提取3至4次，最优选提取3次，但不限于此。

在所述方法中，步骤3)的减压浓缩优选采用真空减压浓缩器或真空旋转蒸发器，但不限于此。并且，干燥优选采用减压干燥、真空干燥、沸腾干燥、喷雾干燥或冷冻干燥，但不限于此。

在所述方法中，步骤4)的毛泡桐提取物优选采用减压浓缩的毛泡桐提取物的黑褐色粗提取物，但不限于此。并且，有机溶剂优选为正己烷、三氯甲烷、乙酸乙酯或丁醇，根据本发明的优选实施例，更优选为三氯甲烷，但不限于此。所述级分优选为通过在水中悬浮毛泡桐提取物后逐级采用正己烷、三氯甲烷、乙酸乙酯、丁醇及水对所述毛泡桐提取物进行系统性分级来获得的正己烷级分、三氯甲烷级分、乙酸乙酯级分、丁醇级分或水级分，但不限于此。所述级分是从所述毛泡桐提取物经分级过程1至5次，优选反复3次可获得，优选在分级后减压浓缩，但不限于此。

含有所述毛泡桐提取物作为有效成分的神经氨酸酶优选为病毒、细菌或人类来源，但不限于此。

所述病毒优选为甲型流感病毒(InfluenzaAvirussubtypeH1N1)、乙型流感病毒(InfluenzaBvirussubtypeH1N1)或丙型流感病毒(InfluenzaCvirussubtypeH1N1)，但不限于此。

所述细菌优选为产气荚膜梭菌(Clostridiumperfringens)，但不限于此。

并且，本发明提供含有通过有机溶剂对毛泡桐提取物另外进行分级而制备的级分作为有效成分的用于抑制神经氨酸酶活性的药物组合物。

根据本发明的用于抑制神经氨酸酶活性的药物组合物，所述有机溶剂可为正己烷、乙酸乙酯或正丁醇的，但不限于此。

在本发明的具体实施例中，本发明人减压浓缩毛泡桐(Paulowniatomentosa)甲醇提取物后获得黑褐色粗提取物，而采用乙酸乙酯对所述黑褐色粗提取物进行分级。并且，从所述级分分离香叶基黄酮衍生物，对其结构进行分析(图5至13)。

并且，为了确定毛泡桐提取物有效成分(化合物1至9)的神经氨酸酶抑制活性，用所述毛泡桐提取物处理细胞，通过SpectraMaxM3进行荧光分析，结果，确定从毛泡桐果实分离的香叶基黄酮(化合物1至9)浓度依赖性地抑制神经氨酸酶活性(参见表1及图2)。

并且，为了确定毛泡桐提取物有效成分(化合物1至9)的神经氨酸酶抑制活性机制，通过以下<实验例1>的结果，对根据不同浓度的基质和抑制剂反应物产生的反应以荧光值进行分析，通过Lineweaver-Burk及Dixon作图(plot)评价，结果，在酶浓度和抑制剂浓度有不同的实验中各个变化以直线形式出现，各个直线均经过y轴的同一交点，因此，确定整个化合物均为可逆酶抑制剂(参见图3)。

并且，为了确定毛泡桐提取物有效成分(化合物1至9)的神经氨酸酶抑制活性机制，通过以下<实验例1>的结果，对根据不同浓度的基质和抑制剂反应物产生的反应以荧光值进行分析，通过Lineweaver-Burk及Dixon作图(plot)评价，结果，在Lineweaver-Burk作图(plot)中根据抑制剂的浓度(1/[S])的反应速度(1/[v])直线在1/v(y轴)的一点交叉，确定Vmax没有变化且Km减少的典型的竞争性抑制剂(参见图4)。

因此，根据本发明的毛泡桐提取物或其级分产生有意义的神经氨酸酶抑制活性效果，从而，为了流感病毒感染的预防和治疗、用于抑制神经氨酸酶活性的组合物而可被有益地使用。

本发明的含有毛泡桐提取物的组合物除了所述成分之外还可包含至少一种具有与所述成分相同或近似的功能的有效成分。

本发明的组合物还可包括药学上可接受的添加剂，此时药学上可接受的添加剂可以采用淀粉、胶凝淀粉、微晶纤维素、乳糖、聚维酮、胶体二氧化硅、磷酸氢钙、乳糖、甘露醇、面筋粉(Wheatgluten)、阿拉伯胶、预胶化的淀粉、玉米淀粉、纤维素粉末、羟丙基纤维素、淀粉羟乙酸钠、巴西棕榈蜡、合成硅酸铝、硬脂酸、硬脂酸镁、硬脂酸铝、硬脂酸钙、白糖、右旋糖、山梨醇和滑石粉。根据基于100重量份的所述组合物，本发明的药学上可接受的添加剂含量优选从0.1至90重量份，但不限于此。

即，在实际临床使用时，可以通过口服或肠胃外途径给予本发明的组合物。在以药物剂型的形式使用时，可以通过与稀释剂或赋形剂，如填充剂、增量剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂以及表面活性剂等混合来制备。用于口服给予的固体剂型的实例包括片剂、药丸、粉末、颗粒、胶囊等。这些固体剂型可以通过混合北鹤虱提取物和至少一种赋形剂，例如，淀粉、碳酸钙(Calciumcarbonate)、蔗糖(Sucrose)、乳糖(Lactose)或明胶等来制备。并且，除了简单的赋形剂之外，也可以采用如硬脂酸镁、滑石等的润滑剂。用于口服给药的液体剂型为悬浮液、溶液、乳液及糖浆，除了如水和液体石蜡等常用的简单稀释剂之外，上述剂型可以包含各种赋形剂，例如，润湿剂、甜味剂、芳香剂、防腐剂等。用于肠胃外给药的剂型的实例可包括灭菌的水溶液、非水溶剂、悬浮剂、乳剂、冻干制剂及栓剂。作为非水溶剂、悬浮溶剂可以采用丙二醇(Propyleneglycol)、聚乙二醇、如橄榄油等植物油、如油酸乙酯等可注射酯等。作为栓剂的制剂可以采用硬脂酸甘油三酯(witepsol)、聚乙二醇、吐温(tween)61、可可油脂、甘油三月桂酸酯、甘油明胶等。

根据预期的用途，本发明的组合物可以口服给药或肠胃外给药，优选选择皮肤外用或腹膜内注射、直肠内注射、皮下注射、静脉注射、肌肉内注射或胸部内注射注入方式。给药量根据患者的体重、年龄、性别、健康状态、饮食、给药时间、给药方法、排泄率及疾病的重症度等而其范围广泛具有多样性。

根据本发明的组合物以药学上有效量施用。在本发明中，“药学上有效量”是指以适用于医疗治疗的合理的利益/风险比用于治疗疾病的足够的量，而有效剂量的水平可以由多种因素决定，所述因素包括患者的疾病类型、严重程度、药物活性、药物敏感性、给药时间、给药途径和排泄比率、治疗期间、与本发明的组合物同时使用的药物，以及在医药领域公知的其他因素。本发明的组合物可作为单独的治疗剂施用，或与其他治疗剂联合施用，并且还可以与以往的治疗剂依次或同时施用，也可以以单剂量或以多次分剂量施用。重要的是，考虑上述所有因素，施用能够达到最大效果而无任何副作用的最少量，而其通过本领域的技术人员可容易地确定。

具体地，根据本发明的化合物的有效量根据患者的年龄、性别及体重而可以变化，且通常每kg体重施用0.1mg至100mg，优选地，可以每天或每隔一天施用0.5mg至10mg，或分为每日1至3次。然而，由于该给药量根据给药途径、肥胖程度、性别、体重、年龄等可增加或减小，因此本发明并不限于所述给药量。

并且，本发明提供含有由以下化学式1表示的化合物或其药学上可接受的盐作为有效成分的用于抑制神经氨酸酶活性的药物组合物。

[化学式1]

(在化学式1中，R¹是-H、-OH或C_1-3的直链或支链烷氧基，R²是-OH或C_1-3的直链或支链烷氧基，R³是-H、-OH或C_1-3的直链或支链烷氧基，R⁴是-H或-OH)

所述由化学式1表示的化合物可以以药学上可接受的盐的形式使用，而作为盐优选使用通过药学上可接受的游离酸(freeacid)所形成的酸加成盐，但不限于此。

根据本发明的用于抑制神经氨酸酶活性的药物组合物，所述由化学式1表示的化合物优选从毛泡桐提取物分离，但不限于此。

所述由化学式1表示的化合物可为选自由以下化学式2至10组成的组中的任一种，但不限于此:

[化学式2]

[化学式3]

[化学式4]

[化学式5]

[化学式6]

[化学式7]

[化学式8]

[化学式9]

及

[化学式10]

根据本发明的用于抑制神经氨酸酶活性的药物组合物，所述神经氨酸酶可为甲型流感病毒(InfluenzaAvirussubtypeH1N1)，乙型流感病毒(InfluenzaBvirussubtypeH1N1)，产气荚膜梭菌(Clostridiumperfringens)或人类来源，但不限于此。

本发明的由化学式1至10表示的来自毛泡桐的香叶基黄酮产生有意义的神经氨酸酶抑制活性效果，因此，为了流感病毒感染的预防和治疗及用于抑制神经氨酸酶活性的组合物可被有益地使用。

并且，本发明提供含有毛泡桐提取物或其级分作为有效成分的用于抑制神经氨酸酶(nuraminidase)活性的保健食品。

所述级分优选为通过用有机溶剂对所述毛泡桐级分另外进行分级来制备的级分，但不限于此。

本发明的毛泡桐(Paulowniatomentosa)提取物或其级分产生有意义的神经氨酸酶抑制效果，因此，所述毛泡桐提取物可以被有益地用于抑制神经氨酸酶活性的保健食品组合物。

对所述食品的类型没有特别限制。可以加入所述物质的食品的实例包括如糖果糕点、面包、面条等各种食品类，如水、清凉饮料、果汁饮料等的饮料类，口香糖、茶、维生素制剂、调料类、功能性保健食品类等，且包括传统意义上的所有功能性保健食品。

本发明的毛泡桐提取物可按原样或者与其它食品或食品组分一起添加到食品中，并根据常规方法适当地使用，且所述有效成分的混合量可通过使用的目的(用于预防或改善)适当确定。通常，以所述食品的总重量计，所述化合物可以0.01至15重量份，优选地，以0.1至5重量份的量添加到保健食品中。而在保健饮料组合物中，以100为准，所述化合物可以0.01至5.0g，优选地，以0.01至1.0g的比率添加到保健饮料组合物中。然而，如果出于健康管理的目的而长期施用，其用量可以低于该范围。因为不存在安全问题，有效成分也可以上述范围以上使用。

在含有所示比率的上述化合物作为必需成分的液体的范围内，本发明的功能性保健饮料组合物不限于任何特定的组合物。如普通的饮料，其可以包含各种甜味剂或天然糖类作为附加组分。上述天然糖类的实例可包括普通糖，例如，如葡萄糖、果糖等单糖；如麦芽糖、蔗糖等的二糖；如糊精、环糊精等的多糖及如木糖醇、山梨糖醇、赤藓糖醇等的糖醇。作为除上面提到的之外的甜味剂，天然甜味剂(索马甜、甜叶菊提取物等)和合成的甜味剂(糖精、阿斯巴甜等)可以被有效地使用。每100毫升的本发明组合物中天然碳水化合物的含量一般为约0.1至2.0g，优选约0.1至1.0g。

本发明的功能性保健食品通过作为基底的食品的制造工程中包括添加上述的本发明的提取物或化合物的工程或作为基底的食品的制造后包括添加上述的本发明的提取物或化合物的工程来可容易获得。此时，根据需要，可以添加味道和气味矫正剂。

除了上述组分外，本发明的毛泡桐提取物或其级分可包括各种营养素、维生素、矿物质(电解质)、如合成香料和天然香料的矫味剂、着色剂和增强剂(奶酪、巧克力等)、果胶酸及其盐、海藻酸及其盐、有机酸、保护胶体增稠剂、PH调节剂、稳定剂、防腐剂、甘油、醇，用于碳酸饮料中的碳酸剂等。此外，本发明的桑黄子实体提取物或其级分可包括天然果汁和用于制造果汁饮料和蔬菜饮料的果肉。这些成分可以单独或组合使用。这些添加剂的含量并非如此重要的，但以每100重量份的本发明的毛泡桐提取物或其级分计，一般选择在约20重量份的范围。

并且，本发明提供含有所述由化学式1表示的化合物或其药学上可接受的盐作为有效成分的用于抑制神经氨酸酶活性的保健食品组合物。

本发明的所述由化学式1表示的化合物或其药学上可接受的盐产生神经氨酸酶抑制效果，因此，所述化学式1至10可以被有益地用于抑制神经氨酸酶活性的保健食品组合物。

本发明的化学式1的衍生物可以药学上可接受的盐的形式使用，作为盐可使用通过药学上可接受的游离酸(freeacid)所形成的酸加成盐。所述酸加成盐可从如盐酸、硝酸、磷酸、硫酸、氢溴酸、氢碘酸、亚硝酸或亚磷酸等无机酸类；如脂族单羧酸酯和脂族二羧酸酯、苯取代链烷酸酯、羟基链烷酸酯、链烷二酸酯、芳香族酸类、脂族磺酸和芳族磺酸等无毒的有机酸；及如乙酸、安息香酸、柠檬酸、乳酸、马来酸、葡萄糖酸、甲磺酸、4-甲苯磺酸、酒石酸、富马酸等有机酸得到。这些药学上的无毒盐类包括硫酸盐、焦硫酸盐、硫酸氢盐、亚硫酸盐、重亚硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐、磷酸氢盐、磷酸二氢盐、偏磷酸盐、焦磷酸氯盐、溴化物、碘化物、氟化物、醋酸盐、丙酸盐、癸酸盐、辛酸盐、丙烯酸盐、甲酸盐、异丁酸盐、癸酸盐、庚酸盐、苯基丙酸盐、草酸盐、丙二酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、癸二酸盐、富马酸盐、马来酸盐、丁炔-1，4-二酸盐、己烷-1，6-二酸盐、苯甲酸盐、氯苯甲酸盐、苯甲酸甲酯、二硝基苯甲酸盐、羟苯酸盐、甲氧基苯甲酸盐、邻苯二甲酸盐、对苯二酸盐、苯磺酸盐、甲苯磺酸盐、氯苯磺酸盐、二甲苯磺酸盐、苯乙酸盐、苯丙酸盐、丁酸苯酯、柠檬酸盐、乳酸盐、β-羟基丁酸盐、乙醇酸盐、苹果酸盐、酒石酸盐、甲烷磺酸盐、丙烷磺酸盐、萘-1-磺酸盐、萘-2-磺酸盐或扁桃酸盐。

本发明的酸加成盐可以通过通常的方法制造而成，例如，将化学式1的衍生物溶解于如甲醇、乙醇、丙酮、二氯甲烷、氰化甲烷等机溶剂中，添加有机酸或无机酸生成沉淀，过滤，干燥制得，或减压蒸馏溶剂和过量的酸之后干燥或在有机溶剂下结晶化制得。

另外，可以使用碱基来可制得药学上可接受的金属盐。碱金属或碱土金属盐的制造方法为，例如，将化合物溶解于过量的碱金属氢氧化物或碱土金属氢氧化物溶液中，过滤非溶解化合物后蒸发、干燥滤液而制得。此时，在制药方面，作为金属盐，制造钠、钾或钙盐为宜。并且，与此相对应的银盐是使碱金属或碱土金属盐与适当的银盐(例如，硝酸银)进行反应制得。

并且，本发明提供一种抑制神经氨酸酶活性的方法，其包括将药学上有效量的毛泡桐提取物或其级分施用给个体的步骤。

并且，本发明提供一种抑制神经氨酸酶活性的方法，其包括将药学上有效量的由以下化学式1表示的化合物或其药学上可接受的盐施用给个体的步骤：

[化学式1]

(在化学式1中，R¹是-H、-OH或C_1-3的直链或支链烷氧基，R²是-OH或C_1-3的直链或支链烷氧基，R³是-H、-OH或C_1-3的直链或支链烷氧基，R⁴是-H或-OH)

所述由化学式1表示的化合物优选选自由以下化学式2至化学式10组成的组中的任一种：

[化学式2]

[化学式3]

[化学式4]

[化学式5]

[化学式6]

[化学式7]

[化学式8]

[化学式9]

及

[化学式10]

并且，本发明提供一种毛泡桐提取物或其级分的用途，用作抑制神经氨酸酶活性的药物组合物。

并且，本发明提供一种毛泡桐提取物或其级分的用途，用作改善神经氨酸酶活性的保健食品。

并且，本发明提供一种由以下化学式1表示的化合物或其药学上可接受的盐的用途，用作抑制神经氨酸酶活性的药物组合物：

[化学式1]

(在化学式1中，R¹是-H、-OH或C_1-3的直链或支链烷氧基，R²是-OH或C_1-3的直链或支链烷氧基，R³是-H、-OH或C_1-3的直链或支链烷氧基，R⁴是-H或-OH)

所述由化学式1表示的化合物优选选自由以下化学式2至化学式10组成的组中的任一种：

[化学式2]

[化学式3]

[化学式4]

[化学式5]

[化学式6]

[化学式7]

[化学式8]

[化学式9]

及

[化学式10]

并且，本发明提供一种由以下化学式1表示的化合物或其药学上可接受的盐的用途，用作改善神经氨酸酶活性的保健食品：

[化学式1]

(在化学式1中，R¹是-H、-OH或C_1-3的直链或支链烷氧基，R²是-OH或C_1-3的直链或支链烷氧基，R³是-H、-OH或C_1-3的直链或支链烷氧基，R⁴是-H或-OH)

所述由化学式1表示的化合物优选选自由以下化学式2至化学式10组成的组中的任一种：

[化学式2]

[化学式3]

[化学式4]

[化学式5]

[化学式6]

[化学式7]

[化学式8]

[化学式9]

及

[化学式10]

并且，本发明提供一种由以下化学式1表示的化合物或其药学上可接受的盐的用途，用作改善神经氨酸酶活性的保健食品：

[化学式1]

(在化学式1中，R¹是-H、-OH或C_1-3的直链或支链烷氧基，R²是-OH或C_1-3的直链或支链烷氧基，R³是-H、-OH或C_1-3的直链或支链烷氧基，R⁴是-H或-OH)

所述由化学式1表示的化合物优选选自由以下化学式2至化学式10组成的组中的任一种：

[化学式2]

[化学式3]

[化学式4]

[化学式5]

[化学式6]

[化学式7]

[化学式8]

[化学式9]

及

[化学式10]

并且，本发明提供一种用于治疗病毒和细菌感染性疾病的药物组合物，其含有毛泡桐提取物或其级分作为有效成分。

并且，本发明提供一种用于改善病毒和细菌感染性疾病的保健食品组合物，其含有毛泡桐提取物或其级分作为有效成分。

并且，本发明提供一种用于治疗病毒和细菌感染性疾病的药物组合物，其含有药学上有效量的由以下化学式1表示的化合物或其药学上可接受的盐作为有效成分：

[化学式1]

(在化学式1中，R¹是-H、-OH或C_1-3的直链或支链烷氧基，R²是-OH或C_1-3的直链或支链烷氧基，R³是-H、-OH或C_1-3的直链或支链烷氧基，R⁴是-H或-OH)

所述由化学式1表示的化合物优选选自由以下化学式2至化学式10组成的组中的任一种：

[化学式2]

[化学式3]

[化学式4]

[化学式5]

[化学式6]

[化学式7]

[化学式8]

[化学式9]

及

[化学式10]

并且，本发明提供一种用于改善病毒和细菌感染性疾病的保健食品组合物，其含有药学上有效量的由以下化学式1表示的化合物或其药学上可接受的盐作为有效成分：

[化学式1]

(在化学式1中，R¹是-H、-OH或C_1-3的直链或支链烷氧基，R²是-OH或C_1-3的直链或支链烷氧基，R³是-H、-OH或C_1-3的直链或支链烷氧基，R⁴是-H或-OH)

所述由化学式1表示的化合物优选选自由以下化学式2至化学式10组成的组中的任一种：

[化学式2]

[化学式3]

[化学式4]

[化学式5]

[化学式6]

[化学式7]

[化学式8]

[化学式9]

及

[化学式10]

并且，本发明提供一种治疗病毒和细菌感染性疾病的方法，其含有毛泡桐提取物或其级分作为有效成分。

并且，本发明提供一种治疗病毒和细菌感染性疾病的方法，其含有药学上有效量的由以下化学式1表示的化合物或其药学上可接受的盐作为有效成分：

[化学式1]

(在化学式1中，R¹是-H、-OH或C_1-3的直链或支链烷氧基，R²是-OH或C_1-3的直链或支链烷氧基，R³是-H、-OH或C_1-3的直链或支链烷氧基，R⁴是-H或-OH)

所述由化学式1表示的化合物优选选自由以下化学式2至化学式10组成的组中的任一种：

[化学式2]

[化学式3]

[化学式4]

[化学式5]

[化学式6]

[化学式7]

[化学式8]

[化学式9]

及

[化学式10]

并且，本发明提供一种毛泡桐提取物或其级分的用途，用作治疗病毒和细菌感染性疾病的药物组合物。

并且，本发明提供一种毛泡桐提取物或其级分的用途，用作改善病毒和细菌感染性疾病的保健食品。

并且，本发明提供一种由以下化学式1表示的化合物或其药学上可接受的盐的用途，用作治疗病毒和细菌感染性疾病的药物组合物：

[化学式1]

(在化学式1中，R¹是-H、-OH或C_1-3的直链或支链烷氧基，R²是-OH或C_1-3的直链或支链烷氧基，R³是-H、-OH或C_1-3的直链或支链烷氧基，R⁴是-H或-OH)

所述由化学式1表示的化合物优选选自由以下化学式2至化学式10组成的组中的任一种：

[化学式2]

[化学式3]

[化学式4]

[化学式5]

[化学式6]

[化学式7]

[化学式8]

[化学式9]

及

[化学式10]

同时，本发明提供一种由以下化学式1表示的化合物或其药学上可接受的盐的用途，用作改善病毒和细菌感染性疾病的保健食品：

[化学式1]

(在化学式1中，R¹是-H、-OH或C_1-3的直链或支链烷氧基，R²是-OH或C_1-3的直链或支链烷氧基，R³是-H、-OH或C_1-3的直链或支链烷氧基，R⁴是-H或-OH)

所述由化学式1表示的化合物优选选自由以下化学式2至化学式10组成的组中的任一种：

[化学式2]

[化学式3]

[化学式4]

[化学式5]

[化学式6]

[化学式7]

[化学式8]

[化学式9]

及

[化学式10]

下面对本发明的实施例进行详细说明。

但，下列实施例是仅为了阐明本发明，本发明的内容并不限于实施例。

<实施例1>毛泡桐(Paulowniatomentosa)提取物的制备

为了制备毛泡桐提取物，将在背阴处干燥的毛泡桐果实(晋州、大韩民国)1㎏破碎，用甲醇在室温反复提取三次。减压浓缩通过上述过程获得的毛泡桐甲醇提取物，获得黑褐色粗提取物118g(获得率:11.8％)。

<实施例2>毛泡桐(Paulowniatomentosa)级分的制备

将所述<实施例1>的毛泡桐黑褐色粗提取物118g溶解于蒸馏水和乙酸乙酯混合溶剂后，对乙酸乙酯进行分级，通过无水Na₂SO₄干燥上述分级的乙酸乙酯，获得级分16g。

<实施例3>从毛泡桐(Paulowniatomentosa)提取物分离和提纯新颖化合物

<3-1>香叶基黄酮(geranylatedflavonoid)化合物的分离和提纯

为了从通过所述<实施例2>的方法获得的乙酸乙酯级分分离提纯黄酮，使用己烷和乙酸乙酯混合溶剂(50:11:1)进行硅胶柱层析(200-400mesh)，获得七个级分(A-E)。

使用己烷和丙酮的混合溶剂(100:11:1)对级分A(4.2g)进行硅胶柱层析，获得九个级分(A1-A9)。使用葡聚糖凝胶(LH-20,PharmaciaBiotechAB，Uppsla，Sweden)且通过80％甲醇溶剂对混合有5号和9号化合物的级分A3和A4(460mg)进行实验，分离得到5号化合物(25mg)和9号化合物(18mg)。使用三氯甲烷和丙酮混合溶剂(100:11:1)对级分B(8.9g)进行硅胶柱层析，获得十个级分(B1-B10)。使用己烷和丙酮的混合溶剂(30:15:1)对混合有4号和7号化合物的级分B4-B6(512mg)进行硅胶柱层析，分离得到4号化合物(24mg)和7号化合物(23.2mg)。使用己烷和丙酮的混合溶剂(50:11:1)对级分C(1.8g)进行硅胶柱层析，获得九个级分(C1-C9)。使用甲醇和水(4:1)的混合溶剂对混合有1号和2号化合物的级分C6-C8(362mg)进行反相色谱法(ODS-A，12nm，S-150μm)，分离得到1号化合物(42mg)和2号化合物(33.2mg)。使用己烷和丙酮的混合溶剂(50:11:1)对级分D(13.1g)进行硅胶柱层析，获得25个级分(D1-D25)。使用甲醇和水(4:1)的混合溶剂对混合有6号和8号化合物的级分D2-D10(613mg)进行反相色谱法(ODS-A，12nm，S-150μm)，分离得到6号化合物(21mg)和8号化合物(19mg)。使用己烷和丙酮的混合溶剂(50:11:1)对级分E(13.1g)进行硅胶柱层析，获得12个级分(E1-E12)。使用葡聚糖凝胶(LH-20，PharmaciaBiotechAB，Uppsla，Sweden)且通过80％甲醇溶剂对混合有3号化合物的级分E3-E5(308mg)进行实验，分离得到3号化合物(17mg)。

结果，分别分离香叶基黄酮(geranylatedflavonoid)九个化合物的3'-O-methyldiplacol(化合物1，42mg)、4'-O-methyldiplacol(2，33.2mg)、6-geranyl-3,3',5,5',7-pentahydroxy-4'-methoxyflavane(3，17mg)、3'-O-methyldiplacone(4，24mg)、4'-O-methyldiplacone(5，25mg)、6-geranyl-3',5,5',7-tetrahydroxy-4'-methoxyflavanone(6，21mg)、mimulone(7，23.2mg)、diplacone(8，19mg)及6-geranyl-4',5,7-trihydroxy-3',5'-dimethoxyflavanone(9，18mg)。

<3-2>分离的黄酮(flavonoid)的结构分析

对于所述实施例<3-1>中分离的九种黄酮化合物的结构，通过¹HNMR(500MHz)、¹³CNMR(125MHz)、COSY、HMQC、HMBC等核磁共振波谱法、质量分析器、紫外光谱仪、偏光器及圆二色谱(circulardichroism；CD)进行分析。分析的结果如以下化学式1、2、3、4、5、6、7、8、9所示。

化合物1[化学式2]

[化学式2]

化合物2[化学式3]

[化学式3]

化合物3[化学式4]

[化学式4]

化合物4[化学式5]

[化学式5]

化合物5[化学式6]

[化学式6]

化合物6[化学式7]

[化学式7]

化合物7[化学式8]

[化学式8]

化合物8[化学式9]

[化学式9]

化合物9[化学式10]

[化学式10]

<实验例1>确定神经氨酸酶(neuraminidase)活性抑制

为了确定所述<实施例3>中分离的九个黄酮(flavonoid)化合物对神经氨酸酶(neuraminidase)的抑制效果，进行荧光分析。并且，作为属于33家族的神经氨酸酶采用加水分解唾液酸残基的α28和α28糖苷键的酶。

具体地，至于所述化合物的对于神经氨酸酶(neuraminidase)的IC₅₀，通过将酶溶解到0.01U/mlNeuraminidase(EC.3.2.1.18，C.perfringens，SIGMA，N2876)，将基质溶解到混合于0.1mM乙酸缓冲液[50mMsodiumacetate(pH5.0)]中的4-methylumbelliferyl-a-D-N-acetylneuraminicacid(SIGMA，M8639)，将抑制剂溶解到甲醇中来根据浓度准备。荧光分析是通过使用SpectraMaxM3仪器观察在365nm波长下激发(excitation)，在450nm(gain40nm)波长下发光(emission)来进行。使混合酶(10μl)，基质(20μl)，抑制剂(10μl)，乙酸缓冲液(160μl)的共200μl的溶液反应而在96孔板(SPL，lifesciences，Korea)中对此进行活性分析。对根据分别不同抑制剂的浓度产生的抑制反应的初始速度通过作图(plot)来评价抑制性能。IC₅₀值由以下[数学式1]计算。

[数学式1]

$>vi=\frac{vo}{(1+\frac{\left[I\right]}{{\mathrm{IC}}_{50}})}$>

结果，如表1所示，确定香叶基黄酮(geranylatedflavonoid)(化合物1-9)对神经氨酸酶具有高抑制活性。化合物1-3、6、8表示纳米摩尔级IC₅₀值。确定抑制活性最高的化合物8的IC₅₀值为0.11±0.003即最低值，且确定其他化合物也有意义地抑制神经氨酸酶活性(表1)。并且，如图2所示，从毛泡桐(Paulowniatomentosa)果实(fruit)分离的香叶基黄酮(化合物1至9)被确定为浓度依赖性地抑制神经氨酸酶活性(图2)。

表1

化合物IC₅₀(mM)动态测量K_i(mM)抑制情况化合物11.6±0.040.9±0.02竞争性化合物21.4±0.021.3±0.03竞争性化合物30.38±0.010.020.12±竞争性化合物414.3±0.50.58.23±竞争性化合物512.9±0.46.6±0.3竞争性化合物60.19±0.0020.14±0.02竞争性化合物76.1±0.33.7±0.4竞争性化合物80.11±0.0030.004±0.001竞争性39 -->化合物938.4±0.728.7±0.4竞争性

<实验例2>神经氨酸酶(neuraminidase)抑制机制的分析

为了表明根据所述<实验例1>的结果的本发明的化合物抑制神经氨酸酶(neuraminidase)活性的机制，通过进行Lineweaver-Burk及Dixon作图来确定。

具体地，通过所述<实验例1>的结果，对根据不同浓度的基质和抑制剂反应物产生的反应以荧光的发光值进行分析。通过在20分钟出现的荧光值变化的倾斜进行数据分析，每20秒测量每个区间的荧光值变化，通过Lineweaver-Burk及Dixon作图评价。

结果，如图3所示，在酶浓度和抑制剂浓度有不同的实验中各个变化以直线形式出现，各个直线均经过y轴的同一交点，因此，确定整个化合物均为可逆酶抑制剂(参见图3)。

并且，如图4所示，确定在Lineweaver-Burk及Dixon作图中根据抑制剂的浓度(1/[S])的反应速度(1/[v])直线在1/v(y轴)的一点交叉。从而，确定为Vmax没有变化且Km减少的典型的竞争性抑制剂(图4)。

产业上的应用可能性

根据本发明的含有毛泡桐提取物或来自毛泡桐的香叶基黄酮作为有效成分的用于抑制神经氨酸酶活性的药物组合物，所述毛泡桐提取物及来自毛泡桐的香叶基黄酮表示对病原性病毒及细菌感染和伴随感染的炎症产生起重要作用的酵的神经氨酸酶的有意义的抑制活性，因此，所述毛泡桐提取物或来自其的香叶基黄酮为了流感病毒感染的预防和治疗、用于抑制神经氨酸酶活性的组合物而可被有益地使用。