乌司他丁在制备防治放/化疗引起的粘膜损伤药物中的用途

摘要

本发明属于医药领域，具体涉及乌司他丁在制备防治放/化疗引起的粘膜损伤药物中的用途。本发明提供的乌司他丁在制备防治放/化疗引起的粘膜损伤药物中的用途，经试验证明乌司他丁对化疗常用药物MTX引起的口腔粘膜损伤及放疗引起的急性放射性粘膜炎均具有显著的防治效果。

说明书

技术领域

本发明属于医药领域，具体涉及乌司他丁在制备防治放/化疗引起的粘膜损伤药物中的 用途。

背景技术

放射治疗和抗肿瘤化学药物治疗是目前肿瘤治疗的主要手段，但放射线和化疗药物在 杀伤肿瘤细胞的同时，也会对快速分裂的正常细胞产生杀伤作用。细胞增殖活跃的粘膜组 织是最易受到放射线和化疗药物损伤的组织之一，口腔粘膜、胃粘膜和肠粘膜等消化道粘 膜损伤是肿瘤患者放/化疗并发症中较为常见的几种。抗肿瘤化疗药物或放射治疗在杀伤肿 瘤细胞的同时，也会对消化道粘膜造成严重损伤，导致炎症和溃疡的发生，患者吸收能力 下降，粘膜屏障功能失调，免疫功能损伤加剧，临床表现主要有溃疡、疼痛、恶心、呕吐 和腹泻等，严重者可引发全身症状、继发感染、出血坏死性口腔溃疡和坏死性肠炎等。这 不仅给患者带来很大的痛苦，降低患者的生活质量，使住院时间延长和治疗费用增加，而 且还可因严重的粘膜反应而危及生命或迫使治疗中断，导致疗程延长，使肿瘤组织再增殖， 继而降低肿瘤的局部控制率。

目前，已有许多治疗和预防放/化疗相关的粘膜损伤的方法应用于临床，主要有细胞分 化调节因子、活性氧簇(ROS)抑制剂、质子泵抑制剂(PPIs)的应用、激光治疗和中医中 药治疗等。但上述治疗方法疗效差异性大，整体治疗效果不理想，目前临床上仍缺乏特效 的治疗手段和药物。放/化疗所致粘膜损伤严重影响肿瘤患者的生活质量和肿瘤治疗的预后， 其防治是不可忽视的临床问题，研究和开发一种对放/化疗引起的粘膜损伤具有显著防治效 果的药物是目前临床急需解决的问题。

乌司他丁(Ulinastatin)是从尿液中提取的一种能抑制多种蛋白水解酶活力的糖蛋白， 含有143个氨基酸，分子量约67000道尔顿，是一种典型的Kuniz型的蛋白酶抑制剂，具 有抑制胰蛋白酶等各种胰酶的作用，对溶酶体膜有稳定作用，同时还可抑制溶酶体酶的释 放及抑制心肌MDF(心肌抑制因子)的产生，改善休克时的循环状态。大量的临床研究表 明，乌司他丁在治疗急性胰腺炎，改善微循环，减轻手术对器官的损伤，减轻肿瘤化疗引 起肾毒性，改善肺癌病人放疗后急性期呼吸功能障碍等方面，显示出极好的疗效，具有较 强的脏器功能保护作用。

李斌等发表的题为“乌司他丁对腹部创伤患者围术期肠粘膜屏障功能的影响”的论文 公开了围手术期应用乌司他丁可能通过改善肠道粘膜通透性、减轻肠道细菌内毒素移位及 改善免疫功能等作用，对腹部创伤患者肠黏膜屏障功能具有一定的保护作用。阿布力米提 等发表的题为“乌司他丁(UTI)在胸外科围手术期减少术后并发症的作用”的论文公开了在 围手术期应用乌司他丁对开胸手术有减少肺部感染、急性肺水肿、术后肝功能障碍等术后 并发症作用。但是，到目前为止，尚未有研究发现乌司他丁用于制备防治放/化疗引起的粘 膜损伤药物中的用途。

发明内容

为了解决现有技术中缺少对放/化疗引起的粘膜损伤具有显著防治效果的药物的问题， 本发明的目的在于提供乌司他丁在制备防治放/化疗引起的粘膜损伤药物中的用途。

本发明提供了乌司他丁在制备防治放/化疗引起的粘膜损伤药物中的用途。

进一步地，所述的药物是由乌司他丁和医学上可接受的药用辅料组成的药物组合物。

进一步地，所述的药物组合物为冻干粉针剂或注射液。

进一步地，所述冻干粉针剂的药用辅料选自甘露醇、山梨醇、乳糖、右旋糖酐、甘氨 酸、水解明胶、氯化钠和葡萄糖中的一种或多种。

进一步地，所述注射液的药用辅料选自注射用水、甘露醇、氯化钠、醋酸钠、醋酸和 葡萄糖中的一种或多种。

本发明提供的乌司他丁对化疗药物MTX引起的口腔粘膜损伤具有显著的防治作用。与 rhGM-CSF组相比，乌司他丁组口腔粘膜损伤的病变率和积分率均较rhGM-CSF组要低；口 腔粘膜溃疡病变例数较MTX组要大大降低，说明本发明提供的乌司他丁对化疗引起的口腔 粘膜损伤具有显著的防治作用。

本发明提供的乌司他丁对放疗引起的粘膜损伤具有显著的治疗效果。乌司他丁对急性 放射性粘膜炎的防治作用试验结果显示，与模型对照组相比，阳性对照组和乌司他丁组大 鼠的体重均明显提高(P＜0.01)，而乌司他丁组大鼠体重的提高与阳性对照组相比具有显 著性差异(P＜0.05)；阳性对照组和乌司他丁组均可显著提高大鼠的脾指数和改善大鼠的 MDA水平(P＜0.05，P＜0.01)，且乌司他丁组的效果要显著优于阳性对照组(P＜0.05)， 说明乌司他丁具有提高免疫力和抗脂质过氧化作用；病理观察显示，乌司他丁组食道粘膜 损伤程度与模型对照组和阳性对照组的食道粘膜损伤程度相比，明显减轻；以上结果均说 明本发明提供的乌司他丁对放疗引起的粘膜损伤具有显著的治疗效果。

因此，本发明的优势在于：本发明提供了乌司他丁在医药领域的一种新应用，即乌司 他丁可以作为防治放/化疗引起的粘膜损伤的药物使用，拓宽了乌司他丁的应用范围，同时 也给广大肿瘤患者提供一种新的选择，可降低肿瘤患者放/化疗后粘膜损伤并发症的发生及 改善其生活质量，其疗效显著，毒副作用低。

具体实施方式：

以下通过具体实施方式的描述对本发明作进一步说明，但这并非是对本发明的限制， 本领域技术人员根据本发明的基本思想，可以做出各种修改或改进，但是只要不脱离本发 明的基本思想，均在本发明的范围之内。

实施例1、制备乌司他丁冻干粉针剂

取过滤灭菌后的乌司他丁水溶液10000万单位，加20g甘露醇溶解，调节pH至中性， 加注射用水至2000mL，加氯化钠调节等渗，除菌过滤，分装于1000个西林瓶中，半加塞， 无菌条件下冷冻干燥并压塞，轧盖，包装，即得乌司他丁冻干粉针剂，规格为：乌司他丁 10万单位/支。

实施例2、制备乌司他丁冻干粉针剂

取过滤灭菌后的乌司他丁水溶液10000万单位，加15g甘露醇和10g水解明胶溶解， 调节pH至中性，加注射用水至2000mL，加氯化钠调节等渗，除菌过滤，分装于1000个西 林瓶中，半加塞，无菌条件下冷冻干燥并压塞，轧盖，包装，即得乌司他丁冻干粉针剂， 规格为：乌司他丁10万单位/支。

实施例3、制备乌司他丁冻干粉针剂

取过滤灭菌后的乌司他丁水溶液10000万单位，加15g甘露醇和10g右旋糖酐溶解， 调节pH至中性，加注射用水至2000mL，加氯化钠调节等渗，除菌过滤，分装于1000个西 林瓶中，半加塞，无菌条件下冷冻干燥并压塞，轧盖，包装，即得乌司他丁冻干粉针剂， 规格为：乌司他丁10万单位/支。

实施例4、制备乌司他丁注射液

取过滤灭菌后的乌司他丁水溶液10000万单位，加20g甘露醇溶解，调节pH至中性， 加注射用水至2000mL，加氯化钠调节等渗，除菌过滤，分装于1000个西林瓶中(每瓶10 万单位乌司他丁/2mL)，即得乌司他丁注射液。

试验例一、乌司他丁对小鼠实验性口腔粘膜损伤的防治作用试验

1、试验动物：SPF级昆明小鼠120只，由中山大学实验动物中心提供，雌雄各半，体 重20～28g，6～8周龄，随机分成6组，每组20只。

2、试验材料：实施例4制备的乌司他丁注射液，用生理盐水配制成1.25万单位/mL、 2.5万单位/mL和5万单位/mL三种浓度备用；甲氨蝶呤(MTX)注射液(注册证号： H20140205，Pfizer(Perth)PtyLimited)，用生理盐水配制成1.6mg/mL备用；注射用重组人 粒细胞巨噬细胞刺激因子(rhGM-CSF)(国药准字S10980037，厦门特宝生物工程股份有 限公司)，用生理盐水配制成0.35μg/mL备用。

3、给药方案：

正常对照组：腹腔注射生理盐水0.5mL；第二天开始每天注射生理盐水0.4mL一次， 连续注射5天；

MTX组：腹腔注射1.6mg/mLMTX注射液0.5mL；第二天开始每天注射生理盐水0.4mL 一次，连续注射5天；

rhGM-CSF组：腹腔注射1.6mg/mLMTX注射液0.5mL；第二天开始每天皮下注射注射 0.35μg/mLrhGM-CSF注射液0.4mL一次，连续5天；

乌司他丁高剂量组：腹腔注射1.6mg/mLMTX注射液0.5mL；第二天开始每天尾静脉注 射5万单位/mL乌司他丁注射液0.4mL一次，连续5天；

乌司他丁中剂量组：腹腔注射1.6mg/mLMTX注射液0.5mL；第二天开始每天尾静脉注 射2.5万单位/mL乌司他丁注射液0.4mL一次，连续5天；

乌司他丁低剂量组：腹腔注射1.6mg/mLMTX注射液0.5mL；第二天开始每天尾静脉注 射1.25万单位/mL乌司他丁注射液0.4mL一次，连续5天。

4、实验方法：乌司他丁组和rhGM-CSF组于小鼠第一次注射乌司他丁或rhGM-CSF24h 后开始处死小鼠，正常对照组于小鼠注射生理盐水24h后开始处死小鼠，MTX组于小鼠注 射MTX注射液后开始处死小鼠；每天断颈处死2只小鼠，第10天后将全部小鼠处死，仔 细解剖取下舌、口腔颊部及唇部粘膜，用10％福尔马林固定备检。

5、观察方法及口腔粘膜损伤判定标准

5.1肉眼观察

口腔粘膜溃疡出现的时间、范围、颜色。

5.2光学显微镜

取下小鼠口腔粘膜组织后，在滤纸上铺平，借助放大镜取典型病变处组织，10％福尔马 林固定，石蜡包埋，5～6μ切片，HE染色，观察粘膜上皮炎性细胞的多少、有无变性、坏死、 溃疡形成以及成纤维细胞、新生血管等肉芽组织的增生。

5.3光学显微镜下口腔粘膜损伤程度评分标准

0分：口腔粘膜无炎细胞、坏死、溃疡等病变；

1分：口腔粘膜有少数炎细胞，无坏死及溃疡；

2分：口腔粘膜有较多炎细胞，无坏死及溃疡；

3分：口腔粘膜上皮固有层有大量炎细胞浸润，部分有坏死，但无溃疡，浸润的炎细胞 以中性粒细胞为主，也有淋巴细胞、浆细胞及单核细胞，中性粒细胞胞浆内颗粒丰富；

4分：口腔粘膜溃疡已形成，有坏死组织，其周围有成纤维细胞、新生毛细血管等。

6、病变率、积分率的定义

口腔粘膜损伤病变率＝(口腔粘膜炎症+溃疡)只数/取材只数*100％

口腔粘膜损伤积分率＝口腔粘膜损伤积分/(取材只数*4)*100％

7、试验结果：见表1。

表1乌司他丁对MTX致小鼠口腔粘膜损伤的作用

由表1可知，rhGM-CSF组和乌司他丁组小鼠的口腔粘膜损伤的病变率和积分率均较 MTX组降低，且乌司他丁组的效果优于rhGM-CSF组；乌司他丁组口腔粘膜溃疡病变例数 较MTX组大大降低，说明本发明提供的乌司他丁对化疗引起的口腔粘膜损伤具有显著的防 治作用。

试验例二、乌司他丁对急性放射性粘膜炎的防治作用试验

1、试验对象：SPF级SD大鼠，由中山大学实验动物中心提供，雄性，体重250～280g， 常规饲养2周，挑选体重增长正常、体质良好者进入实验，共80只大鼠。

2、试验材料：实施例4制备的乌司他丁注射液，用生理盐水配制成5万单位/mL备用； 醋酸地塞米松注射液(国药准字H51020514，成都天台山制药有限公司)，用生理盐水配 置成50μg/mL备用。

3、试验方法：

随机挑选其中20只大鼠设为正常对照组，其余60只大鼠腹腔注射戊巴比妥钠40mg/kg， 逐只麻醉后仰卧固定在照射板上，完全暴露胸部，使用6MV直线加速器照射，照射野以胸 部正中线为中心，上界至咽喉水平，下届至胃底，照射条件为：照射源与大鼠皮肤的距离 SSD为98.5cm，照射深度1.5cm，照射野2cm*5cm，照射剂量为35Gy。60只大鼠造模照 射后次日随机分为3组，每组20只，分别为模型对照组，阳性对照组和乌司他丁组。正常 对照组和模型对照组每日每只尾静脉注射生理盐水0.2mL，阳性对照组每只每日尾静脉注 射醋酸地塞米松注射液0.2mL，乌司他丁组每只每日尾静脉注射乌司他丁注射液0.2mL，连 续给药2周。末次给药24h后，各组大鼠分别称重、采血，测定超氧化物歧化酶(SOD) 值和丙二醛(MDA)值，最后腹腔注射戊巴比妥钠麻醉后将其处死，取出食道和脾脏，食 道用10％的福尔马林固定1周后，石蜡包埋、切片，HE染色，做病理观察，脾脏称重，计 算脾指数。

4、试验结果：见表2。

表2乌司他丁对急性放射性粘膜炎的作用

注：与正常对照组相比，^ΔP＜0.05，^ΔΔP＜0.01；与模型对照组相比，^*P＜0.05，^**P＜0.01； 与阳性对照组相比，^#P＜0.05。

由表2可知，与模型对照组相比，阳性对照组和乌司他丁组大鼠的体重均明显提高(P ＜0.01)，而乌司他丁组大鼠体重的提高与阳性对照组相比具有显著性差异(P＜0.05)； 阳性对照组和乌司他丁组均可显著提高大鼠的脾指数和改善大鼠的MDA水平(P＜0.05，P ＜0.01)，且乌司他丁组的效果要显著优于阳性对照组(P＜0.05)，说明乌司他丁具有提 高免疫力和抗脂质过氧化作用；病理观察显示，乌司他丁组食道粘膜损伤程度与模型对照 组和阳性对照组的食道粘膜损伤程度相比，明显减轻；以上结果均说明本发明提供的乌司 他丁对放疗引起的粘膜损伤具有显著的治疗效果。