取代的氧代吡啶衍生物及其作为因子XIA/血浆的用途

摘要

本发明涉及式(I)的取代的氧代吡啶衍生物及其制备方法，还涉及它们用于制造治疗和/或预防疾病，特别是心血管疾病，优选血栓性或血栓栓塞性疾病和水肿以及眼科疾病用的药剂的用途，其中n代表数值1或2，A代表–N(R

说明书

本发明涉及取代的氧代吡啶衍生物及其制备方法，还涉及它们用于制造治疗和/ 或预防疾病，特别是心血管疾病，优选血栓性或血栓栓塞性疾病和水肿以及眼科疾病用的 药剂的用途。

血液凝固是能有助于迅速可靠地“密封”血管壁中的缺陷的生物体保护机制。由 此，可以避免或保持最低失血。主要通过凝血系统实现血管损伤后的止血，其中触发血浆蛋 白的酶促复杂反应级联。许多凝血因子参与这一过程，各因子在活化后将各自的下一无活 性前体转化成其活性形式。在该级联结束时可溶纤维蛋白原转化成不可溶纤维蛋白，以致 形成血块。在血液凝固中，传统上区分内源性和外源性系统，它们导致最终的联合反应路 径。在此，因子Xa和IIa（凝血酶）起到关键作用：因子Xa捆绑这两种凝血路径的信号，因为其 既经由因子VIIa/组织因子（外源路径）又经由Tenase复合体（内源路径）通过因子X的转化 而形成。活化的丝氨酸蛋白酶Xa将凝血酶原裂解成凝血酶，其经由一系列反应将来自该级 联的冲动（Impuls）转导成血液凝固状态。

更近期，由于新的发现，已经修改了凝血级联的两个分区（外源和内源路径）的传 统理论：在这些模型中，通过活化因子VIIa结合到组织因子（TF）上引发凝血。所得复合体活 化因子X，其进而导致生成凝血酶，随后作为止血的损伤密封性最终产物生成血纤蛋白和血 小板活化（经由PAR-1）。与随后的扩增/蔓延阶段相比，这种第一阶段中的凝血酶生成速率 低并由于出现TFPI作为TF-FVIIa-FX复合体的抑制剂而在时间上有限。

凝血从开始过渡到扩增和蔓延的核心成分是因子XIa：在正反馈回路中，凝血酶除 因子V和因子VIII外还将因子XI活化成因子XIa，将因子IX转化成因子IXa，并经由由此生成 的因子IXa/因子VIIIa复合体促进活化因子X，因此又高度刺激凝血酶形成，这造成血栓强 烈生长和使血栓稳定。

此外，成为焦点的是，除经由组织因子激发外，还特别可以在带负电荷的表面（其 不仅包括外来细胞（例如细菌）的表面结构，还包括人工表面，如人造血管、支架和体外循 环）上激活凝血系统。在该表面上，最初将因子XII（FXII）活化成因子XIIa，其随后将附着在 细胞表面上的因子XI活化成因子XIa。这导致如上所述的凝血级联的进一步活化。此外，因 子XIIa也将结合的血浆激肽释放酶原活化成血浆激肽释放酶（PK），其一方面在增强回路 （Potentierungsschleife）中导致进一步的因子XII活化，这总体上导致增强凝血级联的开 始。此外，PK是重要的释放舒缓激肽的蛋白酶，其尤其导致提高的内皮通透性。已经描述的 另一些底物是肾素原和尿激酶原，它们的活化可能影响肾素-血管紧张素系统的调节过程 和纤维蛋白溶解。PK的活化因此是凝结过程和炎性过程之间的重要联系。

凝血系统的不受控活化或活化过程的缺陷抑制可能导致在脉管（动脉、静脉、淋巴 管）或心腔中形成局部血栓或栓塞。此外，全身高凝状态可能导致整个系统的血栓形成并在 弥散性血管内凝血的情形中最终导致消耗性凝血病。在体外血液循环系统，如血液透析过 程中以及在人造血管或人工心脏瓣膜和支架中也可能遇到血栓栓塞性并发症。

在许多心血管和代谢疾病的过程中，由于全身因素，如高脂血症、糖尿病或吸烟， 由于伴有瘀滞的血流变化，例如在心房颤动中，或由于血管壁中的病理变化，例如内皮功能 疾病或动脉粥样硬化，导致凝固和血小板活化的倾向提高。这种不想要的和过度的凝血活 化可能通过富含纤维蛋白和血小板的血栓的形成造成血栓栓塞疾病和具有威胁生命状况 的血栓性并发症。在此也可能涉及炎性过程。因此，血栓栓塞疾病在大多数工业化国家仍是 发病和死亡的最常见原因。

现有技术中已知的抗凝剂，即抑制或防止血液凝固的物质，具有各种缺点。因此， 在实践中，发现血栓性/血栓栓塞性疾病的有效治疗方法或预防非常困难并且不令人满意。

在血栓栓塞疾病的治疗和预防中，一方面使用肠胃外或皮下给药的肝素。由于更 有利的药代动力学性质，现在越来越优选的是低分子量肝素；但是，由此无法避免在肝素疗 法中遇到的下述已知缺点。例如，肝素口服低效并只有相对短的半衰期。此外，存在高出血 危险，特别可能发生脑出血和胃肠道出血，并可能发生血小板减少症、药物性脱发或骨质疏 松。低分子量肝素虽然具有较低的导致发生肝素诱导性血小板减少症的可能性；但是，它们 也只能皮下给药。这也适用于磺达肝素——一种具有长半衰期的合成制造的选择性因子Xa 抑制剂。

第二类抗凝剂是维生素K拮抗剂。这些包括例如1,3-茚满二酮，特别是如下化合 物：华法林、苯丙香豆素、双香豆素和非选择性抑制在肝中合成特定维生素K依赖性凝血因 子的各种产物的其它香豆素衍生物。由于作用机制，起效极慢（起效的潜伏期36至48小时）。 该化合物尽管可以口服给药；但是，由于高出血危险和窄治疗指数，需要对患者的复杂个体 调节和监控。此外，已经描述了其它副作用，如肠胃问题、脱发和皮肤坏死。

口服抗凝剂的更最近用于临床测验的各种阶段中或在临床应用中，并已在各种研 究中证实它们的效力。但是，服用这些药剂也会造成出血并发症，特别是在易患病患者中。 因此，关于抗血栓药剂，治疗宽度至关重要：用于凝血抑制的有效活性剂量和可能发生出血 的剂量之间的距离应尽可能大，以在最小风险状况下实现最大治疗效果。

在使用例如抗体作为因子XIa抑制剂的各种体外和体内模型中以及在因子XIa敲 除模型中，证实抗血栓作用并且少量/没有延长出血时间或扩大血量。在临床研究中，提高 的因子XIa水平与提高的事件发生率相关联。相反，因子XI缺乏（血友病C）不会造成自发性 出血并仅在手术和创伤过程中明显，但对特定血栓栓塞事件表现出保护。

此外，血浆激肽释放酶（PK）与伴随着提高血管通透性或慢性炎性病的其它疾病相 关联，如在糖尿病视网膜病变、黄斑水肿和遗传性血管水肿或慢性炎性肠道疾病的情况中 那样。糖尿病视网膜病变主要由微血管缺失造成，这造成血管的基底膜增厚和血管外周细 胞的损失，接着发生血管闭塞和视网膜缺血，其由于造成的视网膜缺氧而可能导致提高的 血管通透性并随之形成黄斑水肿，和由于存在的所有过程而使患者失明。在遗传性血管水 肿（HAE）中，生理激肽释放酶抑制剂C1-酯酶抑制剂的降低的形成造成不受控的血浆激肽释 放酶活化，以造成炎症及暴发性水肿形成和剧痛。由动物实验方法表明，对血浆激肽释放酶 的抑制抑制了提高的血管通透性，因此可以防止形成黄斑水肿和/或糖尿病视网膜病变或 改进HAE的急性症状。口服血浆激肽释放酶抑制剂也可用于HAE的预防。

借助血浆激肽释放酶生成的激肽在慢性炎性肠道疾病（CED）的进行中尤其具有支 持（tragend）作用。它们经由缓激肽受体活化的促炎作用诱发并增强疾病进行。对克罗恩病 患者的研究显示肠上皮中的激肽释放酶浓度与肠炎程度之间的相关性。在动物实验研究中 同样观察到激肽释放酶-激肽系统的活化。通过激肽释放酶抑制剂抑制缓激肽合成因此也 可用于慢性炎性肠道疾病的预防和/或治疗。

此外，对许多疾病而言，抗血栓和抗炎原理的组合对防止凝血和炎症相互增强也 特别有吸引力。

因此，本发明的一个目的是提供用于治疗人类和动物的心血管疾病，特别是血栓 性或血栓栓塞性疾病，和/或水肿疾病，和/或眼科疾病，特别是糖尿病视网膜病变和/或黄 斑水肿的新型化合物，所述化合物具有宽治疗范围。

WO2006/030032尤其描述了作为mGluR2受体的别构调节剂的取代的吡啶酮，且WO 2008/079787描述了取代的吡啶-2-酮和它们作为葡糖激酶活化剂的用途。

本发明提供下式的化合物及其盐、其溶剂合物和其盐的溶剂合物

其中

n代表数值1或2，

A代表–N(R²)-或-CH₂-，

其中

R²代表氢或C₁-C₄-烷基，

R¹代表下式的基团

其中*是与氧代吡啶环的连接点，

R⁶代表溴、氯、氟、甲基、二氟甲基、三氟甲基、甲氧基、二氟甲氧基或三氟甲氧基，

R⁷代表氢、溴、氯、氟、氰基、硝基、羟基、甲基、二氟甲基、三氟甲基、甲氧基、乙氧基、二 氟甲氧基、三氟甲氧基、乙炔基、3,3,3-三氟丙-1-炔-1-基或环丙基，

R⁸代表氢、氯或氟，

R³代表氢，

R⁴代表氢，

R⁵代表下式的基团

其中#是与氮原子的连接点，

R⁹代表羟基羰基或5元杂环基，

其中杂环基可以被1至2个彼此独立地选自氧代基、羟基、硫代基、硫烷基、甲基、二氟甲 基、三氟甲基、2-羟基羰基-1,1,2,2-四氟乙基和2-甲氧基羰基-1,1,2,2-四氟乙基的取代 基取代，

其中甲基可以被甲氧基取代基取代，

R¹⁰代表氢、氯、氟或甲基，

R¹¹和R¹²与它们相键合的碳原子一起形成5元杂环，

其中所述杂环可以被1至2个彼此独立地选自氧代基、氯、羟基、羟基羰基、甲基、二氟甲 基、三氟甲基、1,1,2,2,2-五氟乙基、2-羟基羰基-1,1,2,2-四氟乙基和2-甲氧基羰基-1,1, 2,2-四氟乙基的取代基取代，

R¹³代表氢、氯、氟、甲基或甲氧基。

本发明的化合物是式(I)的化合物及其盐、溶剂合物和盐的溶剂合物、以及式(I) 包括的并在下文中作为（一个或多个）实施例提及的化合物及其盐、溶剂合物和盐的溶剂合 物，只要在式(I)包括的并在下文中提及的化合物尚未是盐、溶剂合物和盐的溶剂合物。

本发明的化合物可以根据它们的结构以不同的立体异构形式，即以构型异构体或 任选以构象异构体（对映体和/或非对映体，包括阻转异构体的情况中的那些）的形式存在。 本发明因此包括对映体和非对映体和它们各自的混合物。可以以已知方式从对映体和/或 非对映体的此类混合物中分离出立体异构一致的成分；为此优选使用色谱法，尤其是在非 手性或手性相上的HPLC色谱法。

如果本发明的化合物可以以互变异构形式存在，则本发明包含所有互变异构形 式。

本发明还包括本发明的化合物的所有合适的同位素变体。本发明的化合物的同位 素变体在此被理解为是指本发明的化合物内的至少一个原子被具有相同原子数但原子质 量不同于自然界中通常或主要发现的原子质量的另一原子替换的化合物。可并入本发明的 化合物中的同位素的实例是氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟、氯、溴和碘的同位素，如²H（氘）、³H （氚）、¹³C、¹⁴C、¹⁵N、¹⁷O、¹⁸O、³²P、³³P、³³S、³⁴S、³⁵S、³⁶S、¹⁸F、³⁶Cl、⁸²Br、¹²³I、¹²⁴I、¹²⁹I和¹³¹I。本发明 的化合物的特定同位素变体，例如尤其是其中并入一种或多种放射性同位素的那些，可有 益于例如检查作用机制或体内的活性物质分布；由于可相对容易制备和检测，用³H或¹⁴C同 位素标记的化合物尤其适用于此。此外，同位素，例如氘的并入可由于该化合物的更大代谢 稳定性而带来特定治疗益处，例如体内半衰期的延长或所需有效剂量的降低；本发明的化 合物的此类改性因此任选也构成本发明的优选实施方案。可通过本领域技术人员已知的方 法，例如通过下文进一步描述的方法和实施例中描述的规程、通过使用各自的试剂和/或起 始化合物的相应同位素变体制备本发明的化合物的同位素变体。

在本发明中，优选的盐是本发明的化合物的生理可接受盐。但是，本发明也包括本 身不适合药物用途但可例如用于本发明的化合物的分离或提纯的盐。

本发明的化合物的生理可接受盐包括无机酸、羧酸和磺酸的酸加成盐，例如盐酸、 氢溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、苯磺酸、萘二磺酸、乙酸、三氟乙酸、丙酸、乳 酸、酒石酸、苹果酸、柠檬酸、富马酸、马来酸和苯甲酸的盐。

本发明的化合物的生理可接受盐还包括常规碱的盐，例如和优选碱金属盐（例如 钠和钾盐）、碱土金属盐（例如钙和镁盐）和衍生自氨或具有1至16个碳原子的有机胺，例如 和优选乙胺、二乙胺、三乙胺、乙基二异丙胺、单乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、二环己胺、二 甲基氨基乙醇、普鲁卡因、二苄胺、N-甲基吗啉、精氨酸、赖氨酸、乙二胺、N-甲基哌啶和胆碱 的铵盐。

溶剂合物在本发明中被描述为通过与溶剂分子配位而以固态或液态形成络合物 的本发明的化合物的那些形式。水合物是溶剂合物的一种特定形式，其中与水发生配位。

本发明另外还包括本发明的化合物的前药。术语“前药”包括本身可在生物学上有 活性或无活性但在体内停留期间转化成本发明的化合物（例如通过代谢或水解）的化合物。

在本发明中，术语“治疗”包括抑制、延迟、阻止、缓解、减弱、限制、降低、遏止、击退 或治愈疾病、病症、障碍、损伤或健康问题、此类状态的发展、过程或进行和/或此类状态的 症状。术语“疗法”在此被理解为与术语“治疗”同义。

术语“防止”、“预防”或“预防措施”在本发明中同义使用并且是指避免或降低感 染、发生、受困于或患上疾病、病症、障碍、损伤或健康问题或此类状态的发展或进行和/或 此类状态的症状的危险。

疾病、病症、疾病、损伤或健康问题的治疗或预防可以是部分或完全的。

在本发明中，除非另行规定，取代基如下定义：

烷基代表具有1至5个碳原子，优选1至3个碳原子的直链或支化的烷基，例如和优选为 甲基、乙基、正丙基、异丙基、2-甲基丙-1-基、正丁基、叔丁基和2,2-二甲基丙-1-基。

环烷基代表具有3至6个碳原子的单环环烷基，环烷基的实例和优选是环丙基、环 丁基、环戊基和环己基。

基团R⁹的定义中的5元杂环基代表具有5个环原子和最多4个选自S、O和N的杂原子 的饱和、部分不饱和或芳族单环基团，其中氮原子也可形成N-氧化物，例如和优选为噻吩 基、呋喃基、吡咯基、噻唑基、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基、吡唑基、咪唑基、三唑基和四唑 基。

基团R¹¹和R¹²的定义中的5元杂环代表具有5个环原子和最多2个选自S、O和N的杂 原子的饱和、部分不饱和或芳族单环基团，其中氮原子也可形成N-氧化物。例如和优选地， 这种5元杂环与其相连的苯基环一起代表2,3-二氢-1-苯并噻吩-5-基、1,3-二氢-2-苯并噻 吩-5-基、2,3-二氢-1-苯并呋喃-5-基、1,3-二氢-2-苯并呋喃-5-基、吲哚啉-5-基、异吲哚 啉-5-基、2,3-二氢-1H-吲唑-5-基、2,3-二氢-1H-苯并咪唑-5-基、1,3-二氢-2,1-苯并噁 唑-5-基、2,3-二氢-1,3-苯并噁唑-5-基、1,3-二氢-2,1-苯并噻唑-5-基、2,3-二氢-1,3-苯 并噻唑-5-基、1H-苯并咪唑-5-基、1H-吲唑-5-基、1,2-苯并噁唑-5-基、吲哚-5-基、异吲哚- 5-基、苯并呋喃-5-基、苯并噻吩-5-基、2,3-二氢-1-苯并噻吩-6-基、1,3-二氢-2-苯并噻 吩-6-基、2,3-二氢-1-苯并呋喃-6-基、1,3-二氢-2-苯并呋喃-6-基、吲哚啉-6-基、异吲哚 啉-6-基、2,3-二氢-1H-吲唑-6-基、2,3-二氢-1H-苯并咪唑-6-基、1,3-二氢-2,1-苯并噁 唑-6-基、2,3-二氢-1,3-苯并噁唑-6-基、1,3-二氢-2,1-苯并噻唑-6-基、2,3-二氢-1,3-苯 并噻唑-6-基、1H-苯并咪唑-6-基、1H-吲唑-6-基、1,2-苯并噁唑-6-基、吲哚-6-基、异吲哚- 6-基、苯并呋喃-6-基和苯并噻吩-6-基。

基团R³的定义中的4-至6-元氧代杂环基代表具有4至6个环原子的饱和单环基团， 其中一个环原子是氧原子，例如和优选为氧杂环丁烷基、四氢呋喃基和四氢-2H-吡喃基。

在可代表R¹的基团的式中，在其旁各自存在*的线终点不代表碳原子或CH₂基团，而 是与R¹相连的原子的键的一部分。

在可代表R⁵的基团的式中，在其旁各自存在#的线终点不代表碳原子或CH₂基团，而 是与R⁵相连的原子的键的一部分。

优选的是式(I)的化合物及其盐、其溶剂合物和其盐的溶剂合物，其中

n代表数值1或2，

A代表–N(R²)-或-CH₂-，

其中

R²代表氢或C₁-C₄-烷基，

R¹代表下式的基团

其中*是与氧代吡啶环的连接点，

R⁶代表溴、氯、氟、甲基、二氟甲基、三氟甲基、甲氧基、二氟甲氧基或三氟甲氧基，

R⁷代表氢、溴、氯、氟、氰基、硝基、羟基、甲基、二氟甲基、三氟甲基、甲氧基、二氟甲氧 基、三氟甲氧基、乙炔基、3,3,3-三氟丙-1-炔-1-基或环丙基，

R⁸代表氢、氯或氟，

R³代表氢，

R⁴代表氢，

R⁵代表下式的基团

其中#是与氮原子的连接点，

R⁹代表羟基羰基或5元杂环基，

其中杂环基可以被1至2个彼此独立地选自氧代基、羟基、甲基、二氟甲基和三氟甲基的 取代基取代，

其中甲基可以被甲氧基取代基取代，

R¹⁰代表氢、氯、氟或甲基，

R¹¹和R¹²与它们相键合的碳原子一起形成5元杂环，

其中所述杂环可以被1至2个彼此独立地选自氧代基、羟基、甲基、二氟甲基、三氟甲基 和1,1,2,2,2-五氟乙基的取代基取代，

R¹³代表氢、氯、氟或甲基。

还优选的是式(I)的化合物及其盐、其溶剂合物和其盐的溶剂合物，其中

n代表数值1或2，

A代表–N(R²)-或-CH₂-，

其中

R²代表氢或甲基，

R¹代表下式的基团

其中*是与氧代吡啶环的连接点，

R⁶代表氯，

R⁷代表氢、溴、氯、氰基、甲基、二氟甲基、三氟甲基、二氟甲氧基或三氟甲氧基，

R⁸代表氢或氟，

R³代表氢，

R⁴代表氢，

R⁵代表下式的基团

其中#是与氮原子的连接点，

R⁹代表羟基羰基、噁二唑基、吡唑基、咪唑基、三唑基或四唑基，

其中噁二唑基、吡唑基、咪唑基和三唑基可以被1至2个彼此独立地选自氧代基、羟基、 甲基和三氟甲基的取代基取代，

R¹⁰代表氢。

还优选的是式(I)的化合物及其盐、其溶剂合物和其盐的溶剂合物，其中

n代表数值1或2，

A代表-CH₂-，

R¹代表下式的基团

其中*是与氧代吡啶环的连接点，

R⁶代表氯，

R⁷代表溴或氰基，

R⁸代表氢，

R³代表氢，

R⁴代表氢，

R⁵代表下式的基团

其中#是与氮原子的连接点，

R⁹代表羟基羰基、噁二唑基、吡唑基或四唑基，

其中噁二唑基和吡唑基可以被1至2个彼此独立地选自氧代基、羟基和三氟甲基的取代 基取代，

R¹⁰代表氢。

还优选的是式(I)的化合物，其中n代表数值1。

还优选的是式(I)的化合物，其中A代表–CH₂-。

还优选的是式(I)的化合物，其中

R¹代表下式的基团

其中*是与氧代吡啶环的连接点，

R⁶代表氯，

R⁷代表溴或氰基，

R⁸代表氢。

还优选的是式(I)的化合物，其中

R¹代表下式的基团

其中*是与氧代吡啶环的连接点，

R⁶代表氯，

R⁷代表氰基或二氟甲氧基，

R⁸代表氢。

还优选的是式(I)的化合物，其中R³代表氢。

还优选的是式(I)的化合物，其中

R⁵代表下式的基团

其中#是与氮原子的连接点，

R⁹代表羟基羰基、噁二唑基、吡唑基、咪唑基、三唑基或四唑基，

其中噁二唑基、吡唑基、咪唑基和三唑基可以被1至2个彼此独立地选自氧代基、羟基、 甲基和三氟甲基的取代基取代，

R¹⁰代表氢。

还优选的是式(I)的化合物，其中

R⁵代表下式的基团

其中#是与氮原子的连接点，

R⁹代表羟基羰基、噁二唑基、吡唑基或四唑基，

其中噁二唑基和吡唑基可以被1至2个彼此独立地选自氧代基、羟基和三氟甲基的取代 基取代，

R¹⁰代表氢。

不依赖于基团的各种所述组合，在基团的各种组合或优选组合中各个说明的基团 定义也可任意地被其它组合的基团定义替代。

非常特别优选的是两种或更多种上述优选范围的组合。

本发明还提供制备式(I)的化合物或其盐、其溶剂合物或其盐的溶剂合物的方法， 其中

[A]使下式的化合物与酸反应

其中

n、A、R¹、R³、R⁴和R¹⁰具有上述含义，且

R¹⁴代表叔丁基，

以产生下式的化合物

其中

n、A、R¹、R³、R⁴和R¹⁰具有上述含义，且

R⁹代表羟基羰基，

或

[B]使下式的化合物与碱反应

其中

n、A、R¹、R³、R⁴和R¹⁰具有上述含义，且

R¹⁴代表甲基或乙基，

以产生下式的化合物

其中

n、A、R¹、R³、R⁴和R¹⁰具有上述含义，且

R⁹代表羟基羰基，

或

[C]使下式的化合物

其中

n、A、R¹和R³具有上述含义，

与下式的化合物在脱水剂存在下反应

其中

R⁴和R⁵具有上述含义，

以产生式(I)的化合物，

或

[D]使下式的化合物与氧化剂反应

其中

n、A、R¹、R³、R⁴和R⁵具有上述含义。

式(Ib)的化合物是式(I)的化合物的子集。

式(IIa)和(IIb)的化合物一起形成式(II)的化合物的群组（Menge）。

根据方法[A]的反应通常在惰性溶剂中，优选在室温至60℃的温度范围内在常压 下进行。

惰性溶剂是例如卤代烃，如二氯甲烷、三氯甲烷、四氯化碳或1,2-二氯乙烷，或醚， 如四氢呋喃或二氧杂环己烷，优选的是二氯甲烷。

酸是例如三氟乙酸或在二氧杂环己烷中的氯化氢，优选的是三氟乙酸。

根据方法[B]的反应通常在惰性溶剂中，优选在室温至溶剂回流的温度范围内在 常压下进行。

惰性溶剂是例如卤代烃，如二氯甲烷、三氯甲烷、四氯化碳或1,2-二氯乙烷，醇，如 甲醇或乙醇，醚，如二乙醚、甲基叔丁基醚、1,2-二甲氧基乙烷、二氧杂环己烷或四氢呋喃， 或其它溶剂，如二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺、乙腈或吡啶、或溶剂的混合物，或溶剂与水的 混合物，优选的是四氢呋喃和水的混合物。

碱是例如碱金属氢氧化物，如氢氧化钠、氢氧化锂或氢氧化钾，或碱金属碳酸盐， 如碳酸铯、碳酸钠或碳酸钾，或醇盐，如叔丁醇钾或叔丁醇钠，优选的是氢氧化锂。

根据方法[C]的反应通常在惰性溶剂中，任选在碱存在下，优选在0℃至室温的温 度范围内在常压下进行。

此处合适的脱水剂是例如碳二亚胺，如N,N'-二乙基-、N,N'-二丙基-、N,N'-二异 丙基-、N,N'-二环己基碳二亚胺、N-(3-二甲基氨基异丙基)-N'-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC） （任选在五氟苯酚（PFP）存在下）、N-环己基碳二亚胺-N'-丙氧基甲基-聚苯乙烯（PS-碳二亚 胺）或羰基化合物，如羰基二咪唑，或1,2-噁唑鎓化合物，如3-硫酸2-乙基-5-苯基-1,2-噁 唑鎓或高氯酸2-叔丁基-5-甲基-异噁唑鎓，或酰氨基化合物，如2-乙氧基-1-乙氧基羰基- 1,2-二氢喹啉，或丙膦酸酐，或氯甲酸异丁酯、或双-(2-氧代-3-噁唑烷基)磷酰氯或六氟磷 酸苯并三唑基氧基三(二甲基氨基)鏻或六氟磷酸O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基 脲鎓（HBTU）、四氟硼酸2-(2-氧代-1-(2H)-吡啶基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓（TPTU）、氟硼酸 (苯并三唑-1-基氧基)双二甲基氨基甲碳鎓（methylium）（TBTU）或六氟磷酸O-(7-氮杂苯并 三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓（HATU）或1-羟基苯并三唑（HOBt），或六氟磷酸苯并三 唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻（BOP）或羟基亚氨基氰基乙酸乙酯/N,N'-二异丙基碳二亚 胺或这些的混合物，优选的是HATU。

碱是例如碱金属碳酸盐，如碳酸钠或碳酸钾，或碳酸氢钠或碳酸氢钾，或有机碱， 如三烷基胺，例如三乙胺、N-甲基吗啉、N-甲基哌啶、4-二甲基氨基吡啶或二异丙基乙胺；优 选的是二异丙基乙胺。

惰性溶剂是例如卤代烃，如二氯甲烷或三氯甲烷，烃，如苯，或其它溶剂，如硝基甲 烷、二氧杂环己烷、二甲基甲酰胺、二甲亚砜或乙腈。也可以使用这些溶剂的混合物，优选的 是二甲基甲酰胺。

根据方法[D]的反应通常在惰性溶剂中，优选在室温至60℃的温度范围内在常压 下进行。

惰性溶剂是例如卤代烃，如二氯甲烷、三氯甲烷、四氯化碳或1,2-二氯乙烷，或醚， 如四氢呋喃或二氧杂环己烷，或溶剂的混合物，或溶剂与水的混合物，优选的是二氧杂环己 烷和水的混合物。

氧化剂是例如硝酸铈(IV)铵、4,5-二氯-3,6-二氧代环己-1,4-二烯-1,2-二甲腈 （DDQ）、氧化锰(IV)、高锰酸钾、溴、N-溴代琥珀酰亚胺/过氧化二苯甲酰，优选的是硝酸铈 (IV)铵。

式(IV)的化合物是已知的，可通过已知方法由相应的起始化合物合成或可以与实 施例部分中描述的方法类似地制备。

式(II)的化合物是已知的或可通过使式(III)的化合物与式(VI)的化合物在脱水 剂存在下反应制备

其中

n、A、R¹和R³具有上述含义，

其中

R⁴和R¹⁰具有上述含义，且

R¹⁴代表甲基、乙基或叔丁基。

该反应如对方法[C]所述进行。

式(VI)的化合物是已知的，可通过已知方法由相应的起始化合物合成或可以与实 施例部分中描述的方法类似地制备。

式(III)的化合物是已知的或可通过

[E]使下式的化合物与酸反应制备

其中

n、A、R¹和R³具有上述含义，且

R¹⁵代表叔丁基，

或

[F]使下式的化合物与碱反应制备

其中

n、A、R¹和R³具有上述含义，且

R¹⁵代表甲基或乙基。

式(VIIa)和(VIIb)的化合物一起形成式(VII)的化合物的群组。

根据方法[E]的反应如对方法[A]所述进行。

根据方法[F]的反应如对方法[B]所述进行。

式(VII)的化合物是已知的或可通过

[G]使下式的化合物与氧化剂反应制备

其中

n、A、R¹和R³具有上述含义，且

R¹⁵代表甲基、乙基或叔丁基，

或

[H]使式(IX)的化合物与式(X)的化合物反应制备

其中

n、A和R¹具有上述含义，

其中

R³具有上述含义，

R¹⁵代表甲基、乙基或叔丁基，且

X¹代表氯、溴、碘、甲磺酰氧基或三氟甲磺酰氧基，

或

[I]使式(XI)的化合物与式(XII)的化合物在Suzuki偶联条件下反应

其中

n、A和R³具有上述含义，

R¹⁵代表甲基、乙基或叔丁基，且

X代表(三氟甲基)磺酰氧基，

其中

R¹如上定义，且

Q代表–B(OH)₂、硼酸酯，优选硼酸频哪醇酯，或-BF₃^–K⁺。

根据方法[G]的反应如对方法[D]所述进行。

根据方法[H]的反应通常在惰性溶剂中，任选在碱存在下，优选在室温至溶剂回流 的温度范围内在常压下进行。

惰性溶剂是例如卤代烃，如二氯甲烷、三氯甲烷、四氯化碳或1,2-二氯乙烷，醇，如 甲醇或乙醇，醚，如二乙醚、甲基叔丁基醚、1,2-二甲氧基乙烷、二氧杂环己烷或四氢呋喃， 或其它溶剂，如二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺、乙腈或吡啶、或溶剂的混合物、或溶剂与水的 混合物；优选的是二甲基甲酰胺。

碱是例如碱金属氢氧化物，如氢氧化钠、氢氧化锂或氢氧化钾，或碱金属碳酸盐， 如碳酸铯、碳酸钠或碳酸钾，或叔丁醇钾或叔丁醇钠、氢化钠或这些碱的混合物或氢化钠和 溴化锂的混合物，优选的是碳酸钾或氢化钠或氢化钠和溴化锂的混合物。

根据方法[I]的反应通常在惰性溶剂中，在催化剂存在下，任选在附加试剂存在 下，任选在微波中，优选在室温至150℃的温度范围内，在常压至3巴下进行。

催化剂是例如常规用于Suzuki反应条件的钯催化剂，优选的是如下催化剂：二氯 双(三苯膦)钯、四三苯膦钯(0)、乙酸钯(II)/三环己基膦、三(二亚苄基丙酮)二钯、双(二苯 基磷烷二茂铁基)氯化钯(II)、1,3-双(2,6-二异丙基苯基)咪唑-2-亚基(1,4-萘醌)钯二聚 物、烯丙基(氯)(1,3-三均三甲苯基-1,3-二氢-2H-咪唑-2-亚基)钯、乙酸钯(II)/二环己基 (2',4',6'-三异丙基-联苯基-2-基)膦、[1,1-双(二苯基膦基)二茂铁]氯化钯(II)-单二氯 甲烷加合物或XPhos预催化剂[(2'-氨基联苯基-2-基)(氯)钯-二环己基(2',4',6'-三异 丙基联苯基-2-基)磷烷(1:1)]，优选的是四三苯膦钯(0)、[1,1-双-(二苯基膦基)二茂铁] 氯化钯(II)-单二氯甲烷加合物或XPhos预催化剂[(2'-氨基联苯基-2-基)(氯)钯-二环己 基(2',4',6'-三异丙基联苯基-2-基)磷烷(1:1)]。

附加试剂是例如乙酸钾、碳酸铯、碳酸钾或碳酸钠、叔丁醇钾、氟化铯或磷酸钾，其 中这些可以存在于水溶液中；优选的是如碳酸钾或磷酸钾水溶液之类的附加试剂。

惰性溶剂是例如醚，如二氧杂环己烷、四氢呋喃或1,2-二甲氧基乙烷，烃，如苯、二 甲苯或甲苯，或甲酰胺，如二甲基甲酰胺或二甲基乙酰胺，烷基亚砜，如二甲亚砜，或N-甲基 吡咯烷酮或乙腈，或该溶剂与醇如甲醇或乙醇和/或水的混合物；优选的是四氢呋喃、二氧 杂环己烷或乙腈。

式(X)和(XII)的化合物是已知的或可通过已知方法由相应的起始化合物合成。

式(VIII)的化合物是已知的或可如下制备

[J]使下式的化合物

其中

n和R¹具有上述含义，

与式(X)的化合物反应以产生下式的化合物

其中

n、R¹和R³具有上述含义，且

R¹⁵代表甲基、乙基或叔丁基，

或

[K]使下式的化合物

其中

n和R³具有上述含义，且

R¹⁵代表甲基、乙基或叔丁基，

与下式的化合物反应

其中

R¹具有上述含义，

以产生下式的化合物

其中

n、R¹和R³具有上述含义，且

R¹⁵代表甲基、乙基或叔丁基，

或

[L]使下式的化合物

其中

n、R¹和R³具有上述含义，

R¹⁵代表甲基、乙基或叔丁基，且

R¹⁶代表甲基或乙基，

与下式的化合物反应

其中

R²具有上述含义，

以产生下式的化合物

其中

n、R¹、R²和R³具有上述含义，且

R¹⁵代表甲基、乙基或叔丁基。

式(VIIIa)和(VIIIb)的化合物一起形成式(VIII)的化合物的群组。

根据方法[J]的反应如对方法[H]所述进行。

根据方法[K]的反应通常在惰性溶剂中，优选在室温至溶剂回流的温度范围内，优 选在60℃至80℃的温度范围内在常压下进行。

惰性溶剂是例如醚，如二氧杂环己烷或四氢呋喃，或醇，如乙醇，优选的是乙醇。

根据方法[L]的反应通常在惰性溶剂中，优选在室温至120℃，优选室温至80℃的 温度范围内在常压下进行。

惰性溶剂是例如醚，如二氧杂环己烷或四氢呋喃，或乙腈，或醇，如甲醇或乙醇，优 选的是四氢呋喃或乙腈。

式(XIV)、(XV)、(XVI)和(XVII)的化合物是已知的，可通过已知方法由相应的起始 化合物合成或可以与实施例部分中描述的方法类似地制备。

式(XIII)的化合物是已知的或可通过在第一阶段中使式(XVIII)的化合物与式 (XV)的化合物反应并任选在第二阶段中与脱水剂反应制备

其中

n具有上述含义。

第一阶段的反应通常在惰性溶剂中，优选在室温至溶剂回流的温度范围内，优选 在溶剂回流下，在常压下进行。

惰性溶剂是例如醚，如二氧杂环己烷或四氢呋喃，或醇，如乙醇，优选的是二氧杂 环己烷。

第二阶段的反应如对方法[C]所述进行。

式(XVIII)的化合物是已知的，可通过已知方法由相应的起始化合物合成或可以 与实施例部分中描述的方法类似地制备。

式(V)的化合物是已知的或可通过使式(XIX)的化合物与式(IV)的化合物在脱水 剂存在下反应制备

其中

n、A、R¹和R³具有上述含义。

该反应如对方法[C]所述进行。

式(XIX)的化合物是已知的或可通过

[M]使下式的化合物与酸反应制备

其中

n、A、R¹和R³具有上述含义，且

R¹⁵代表叔丁基，

或

[N]使下式的化合物与碱反应制备

其中

n、A、R¹和R³具有上述含义，且

R¹⁵代表甲基或乙基。

方法[M]中的反应如对方法[A]所述进行。

方法[N]中的反应如对方法[B]所述进行。

式(IX)的化合物是已知的或可通过使下式的化合物与氧化剂反应制备

其中

n、A和R¹具有上述含义。

该反应如对方法[D]所述进行。

式(XX)的化合物是已知的，可通过已知方法由相应的起始化合物合成或可以与实 施例部分中描述的方法类似地制备。

式(XI)的化合物是已知的或可通过使下式的化合物与三氟甲磺酸酐或N,N-双(三 氟甲磺酰基)苯胺反应制备

其中

n、A和R³具有上述含义，且

R¹⁵代表甲基、乙基或叔丁基。

该反应通常在惰性溶剂中，在碱存在下，优选在-78℃至室温的温度范围内，优选0 ℃下在常压下进行。

惰性溶剂是例如二氯甲烷、氯仿、四氢呋喃或二甲基甲酰胺，优选的是二氯甲烷。

碱是例如吡啶、2,6-二甲基吡啶、三乙胺、二异丙基乙基胺，优选的是2,6-二甲基 吡啶或三乙胺。

特别优选的是在2,6-二甲基吡啶存在下与三氟甲磺酸酐反应或在三乙胺存在下 与N,N-双(三氟甲磺酰基)苯胺反应。

式(XXI)的化合物是已知的，可通过已知方法由相应的起始化合物合成或可以与 实施例部分中描述的方法类似地制备。

可通过下列合成图式例示起始化合物和式(I)的化合物的制备。

图式1:

。

图式2:

。

图式3:

。

图式4:

。

本发明的化合物具有不可预见的有效药理效力谱和良好的药代动力学性质。它们 是影响丝氨酸蛋白酶因子XIa（FXIa）和/或丝氨酸蛋白酶血浆激肽释放酶（PK）的蛋白水解 活性的化合物。本发明的化合物抑制在血液凝固的活化、血小板聚集（通过减少血小板的 PAR-1活化所必需的凝血酶）和特别涉及血管通透性提高的炎性过程中起到基本作用的受 FXIa和/或PK催化的底物的酶促裂解。

它们因此适合用作人类和动物的疾病的治疗和/或预防药剂。

本发明还提供本发明的化合物用于治疗和/或预防疾病，特别是心血管疾病，优选 血栓性或血栓栓塞性疾病和/或血栓性或血栓栓塞性并发症，和/或眼科疾病，特别是糖尿 病视网膜病变或黄斑水肿，和/或炎性病，特别是与过渡血浆激肽释放酶活性相关的那些， 如遗传性血管水肿（HAE）或慢性炎性病，特别是肠的慢性炎性病，如克罗恩病的用途。

因子XIa（FXIa）是凝血中的重要酶，其可被凝血酶和因子XIIa（FXIIa）活化，因此 参与凝血的两个基本过程：其是凝血从开始过渡到扩增和蔓延的核心成分：在正反馈回路 中，凝血酶除因子V和因子VIII外还将因子XI活化成因子XIa，将因子IX转化成因子IXa，并 经由由此生成的因子IXa/因子VIIIa复合体促进活化因子X，因此又高度刺激凝血酶形成， 这造成血栓强烈生长和使血栓稳定。

此外，因子XIa是用于内源性引发凝血的重要成分：除经由组织因子（TF）激发外， 还特别可以在带负电荷的表面（其不仅包括外来细胞（例如细菌）的表面结构，还包括人工 表面，如人造血管、支架和体外循环）上激活凝血系统。在该表面上，最初将因子XII（FXII） 活化成因子XIIa（FXIIa），其随后将附着在细胞表面上的FXI活化成FXIa。这导致如上所述 的凝血级联的进一步活化。

相反，开始阶段中的凝血酶生成经由TF/因子VIIa和因子X活化以及最后凝血酶形 成（血管损伤时的生理反应）保持不受影响。这可解释为何在FXIa敲除小鼠中在给予FXIa时 没有发现出血时间延长，在兔子和其它物种中也如此。由该物质造成的这种低出血倾向在 用于人类，特别是具有提高的出血危险的患者时非常有利。

此外，在内源性活化中，因子XIIa也将血浆激肽释放酶原活化成血浆激肽释放酶 （PK），这在增强回路中尤其导致进一步的因子XII活化，这总体上导致增强表面上凝血级联 的开始。本发明的化合物的PK抑制活性因此降低经由表面活化的凝血，因此具有抗凝作用。 一个优点可在于因子XIa抑制活性和PK抑制活性的组合以实现平衡的抗血栓作用。

因此，本发明的化合物适用于治疗和/或预防可能由凝块形成引起的疾病或并发 症。

对本发明而言，“血栓性或血栓栓塞性疾病”包括在动脉和静脉血管系统中发生并 可用本发明的化合物治疗的疾病，特别是在心脏的冠状动脉中的疾病，如急性冠脉综合征 （ACS）、存在ST段抬高（STEMI）和无ST段抬高（非STEMI）的心肌梗死、稳定型心绞痛、不稳定 型心绞痛、在冠状动脉介入术如血管成形术、支架植入或主动脉冠状动脉搭桥术后的再闭 塞和再狭窄，以及导致外周动脉闭塞性疾病、肺栓塞、静脉血栓栓塞、静脉血栓形成，特别是 在下肢深静脉和肾静脉中，短暂性脑缺血发作以及血栓性中风和血栓栓塞性中风的其它脉 管中的血栓性或血栓栓塞性疾病。

凝血系统的刺激可由各种原因或相关疾病造成。尤其在外科手术、不可动 （Immobilit?t）、卧床、感染、炎症或癌症或癌症治疗的情形中，可高度活化凝血系统，并可 能发生血栓性并发症，特别是静脉血栓形成。本发明的化合物因此适用于在癌症患者的外 科手术中预防血栓形成。本发明的化合物因此还适用于预防具有活化的凝血系统的患者 中，例如在所述刺激情形中的血栓形成。

因此，本发明的化合物也适用于预防和治疗具有急性、间歇性或持续性心律失常， 例如心房颤动的患者和经受心脏复律的患者，以及具有心瓣膜疾病或具有人工心瓣膜的患 者的心源性血栓栓塞，例如脑缺血、中风和系统性血栓栓塞和缺血。

此外，本发明的化合物适用于治疗和预防弥漫性血管内凝血（DIC），其尤其在败血 症的情况下发生，但也由于手术、肿瘤疾病、烧伤或其它损伤发生并可通过微血栓形成造成 严重器官损伤。

此外，在微血管病性溶血性贫血中和在体外循环，例如血液透析、ECMO（“体外膜氧 合”）、LVAD（“左心室辅助装置”）和类似方法、AV瘘管、人造血管和人工心脏瓣膜中通过血液 与外来表面的接触发生血栓栓塞性并发症。

此外，本发明的化合物可考虑用于治疗和/或预防涉及微凝块形成或脑血管中的 纤维蛋白沉积物（其可能导致痴呆疾病，如血管性痴呆或阿尔茨海默症）的疾病。在此，凝块 可经由闭塞和通过结合其它疾病相关因子来造成该疾病。

此外，本发明的化合物特别可考虑用于治疗和/或预防除促凝血组分外，促炎组分 也起到重要作用的疾病。特别可通过本发明的化合物防止凝血和发炎的相互增强，由此决 定性地降低血栓性并发症的可能性。在这种情况下，因子XIa抑制组分（通过抑制凝血酶生 产）和PK抑制组分都有助于抗凝血和抗炎作用（例如经由缓激肽）。因此，尤其可考虑动脉粥 样硬化性血管疾病、运动系统的风湿病中的炎症、肺的炎性疾病，如肺纤维化，肾的炎性疾 病，如肾小球肾炎，肠的炎性疾病，如克罗恩病或溃疡性结肠炎，或糖尿病潜在疾病中可能 存在的疾病，如糖尿病视网膜病变或肾病的治疗和/或预防。

借助血浆激肽释放酶生成的激肽在慢性炎性肠道疾病（CED）的进行中尤其具有支 持作用。它们经由缓激肽受体活化的促炎作用诱发并增强疾病进行。对克罗恩病患者的研 究显示肠上皮中的激肽释放酶浓度与肠炎程度之间的相关性。在动物实验研究中同样观察 到激肽释放酶-激肽系统的活化。通过激肽释放酶抑制剂抑制缓激肽合成因此也可用于慢 性炎性肠道疾病的预防和/或治疗。

此外，本发明的化合物可用于抑制肿瘤生长和转移形成，以及用于预防和/或治疗 肿瘤患者，特别是经过较大型外科手术或化疗或放疗的患者的血栓栓塞性并发症，例如静 脉血栓栓塞。

此外，本发明的化合物也可考虑用于预防和/或治疗肺高压。

在本发明中，术语“肺高压”包括肺动脉高压、与左心疾病相关的肺高压、与肺部疾 病和/或缺氧相关的肺高压和归因于慢性血栓栓塞（CTEPH）的肺高压。

“肺动脉高压”包括特发性肺动脉高压（IPAH，以前也称作原发性肺高压）、家族性 肺动脉高压（FPAH）和相关性肺动脉高压（APAH），其与胶原病、先天系统性肺分流缺陷、门脉 高压、HIV感染、特定药物和药剂的摄入、与其它疾病（甲状腺疾病、糖原贮积疾病、高雪氏 病、遗传性毛细管扩张、血红蛋白病、骨髓增生疾病、脾切除）、与具有显著静脉/毛细管影响 的疾病，如肺静脉闭塞疾病和肺毛细血管瘤以及新生儿的持续性肺高压相关。

与左心疾病相关的肺高压包括患病的左心房或心室的疾病和二尖瓣或主动脉瓣 缺陷。

与肺部疾病和/或缺氧相关的肺高压包括慢性阻塞性肺病、间质性肺病、睡眠呼吸 暂停综合征、肺泡通气不足、慢性高空病和先天畸形。

归因于慢性血栓栓塞（CTEPH）的肺高压包含近端肺动脉的血栓栓塞性闭塞、远端 肺动脉的血栓栓塞性闭塞和非血栓性肺栓塞（肿瘤、寄生虫、异物）。

本发明还提供本发明的化合物用于制造治疗和/或预防与类肉瘤病、组织细胞增 生症X和淋巴管瘤病相关的肺高压用的药剂的用途。

此外，本发明的物质也可用于治疗肺和肝纤维化。

此外，本发明的化合物也适用于治疗和/或预防在传染病和/或全身炎性综合征 （SIRS）、败血性器官功能障碍、败血性器官衰竭和多器官衰竭、急性呼吸窘迫综合征 （ARDS）、急性肺损伤（ALI）、败血性休克和/或败血性器官衰竭中的弥散性血管内凝血。

在感染过程中，可能发生凝血系统的泛发性活化（“弥散性血管内凝血”或“消耗性 凝血病”，下文称作“DIC”），伴随着各种器官中的微血栓形成和继发性出血并发症。此外，可 能发生内皮损伤，随之增加血管通透性和体液和出现蛋白质渗出到血管外腔 （Extravasalraum）中。随着进一步感染，可能发生器官衰竭（例如肾衰竭、肝衰竭、呼吸衰 竭、中枢神经缺陷和心血管衰竭）或多器官衰竭。

在DIC的情况中，在受损内皮细胞的表面、异物表面或受损血管外组织的表面发生 凝血系统的大规模活化。因此，在各种器官的小血管中发生凝固，伴随着缺氧和后续器官功 能障碍。继发效应是凝血因子（例如因子X、凝血酶原和纤维蛋白原）和血小板消耗，这降低 血液的凝固能力并可能导致大出血。

仅抑制血浆激肽释放酶或还结合着抑制因子XIa的本发明的化合物也可用于治疗 和/或预防在其进程中涉及血浆激肽释放酶的疾病。除抗凝血活性外，血浆激肽释放酶是重 要的释放舒缓激肽的蛋白酶，其因此尤其导致提高的内皮通透性。该化合物因此可用于治 疗和/或预防伴随着水肿形成的疾病，如眼科疾病，特别是糖尿病视网膜病变或黄斑水肿或 遗传性血管水肿。

“眼科疾病”在本发明中特别包括如糖尿病视网膜病变、糖尿病性黄斑水肿（DME）、 黄斑水肿、与视网膜静脉闭塞相关的黄斑水肿、年龄相关性黄斑变性（AMD）、脉络膜新生血 管（CNV）、脉络膜新生血管膜（CNVM）、囊样黄斑水肿（CME）、视网膜前膜（ERM）和黄斑穿孔、近 视相关的脉络膜新生血管、血管样条纹、血管条纹、视网膜脱离、视网膜色素上皮细胞的萎 缩性变化、视网膜色素上皮细胞的肥厚性变化、视网膜静脉闭塞、脉络膜视网膜静脉闭塞、 视网膜色素变性、Stargardt病、早产儿视网膜病变、青光眼、炎性眼病，如葡萄膜炎、巩膜炎 或眼内炎、白内障、折射异常，如近视、远视或散光和圆锥角膜、前眼疾病，如作为例如角膜 炎、角膜移植或角膜成形术的后遗症的角膜新生血管、作为缺氧（例如由于过度使用隐形眼 镜）后遗症的角膜新生血管、翼状胬肉结膜、角膜下水肿和角膜内水肿之类的疾病。

本发明的化合物也适用于在基因突变导致提高的酶活性或提高的酶原水平并通 过酶活性或酶原浓度的相关试验/测量确定这些的患者中的原发性预防血栓性或血栓栓塞 性疾病和/或炎性病和/或具有提高的血管通透性的疾病。

本发明还提供本发明的化合物用于治疗和/或预防疾病，尤其是上述疾病的用途。

本发明还提供本发明的化合物用于制造治疗和/或预防疾病，尤其是上述疾病用 的药剂的用途。

本发明还提供使用治疗有效量的本发明的化合物治疗和/或预防疾病，尤其是上 述疾病的方法。

本发明还提供在使用治疗有效量的本发明的化合物治疗和/或预防疾病，尤其是 上述疾病的方法中使用的本发明的化合物。

本发明还提供包含本发明的化合物和一种或多种附加活性物质的药剂。

此外，本发明的化合物也可用于离体防止凝固，例如用于保护要移植的器官免受 由凝块形成造成的器官损伤和用于保护器官接受者免受来自移植器官的血栓栓塞，用于保 存血液和血浆产品，用于清洁/预处理导管和其它医疗辅助设备和仪器，用于涂覆体内或离 体使用的医疗辅助设备和仪器的人造表面或用于可包含因子XIa或血浆激肽释放酶的生物 样品。

本发明还提供体外防止血液凝固的方法，特别是在可含有因子XIa或血浆激肽释 放酶或这两种酶的库存血液或生物样品中，所述方法的特征在于加入抗凝血有效量的本发 明的化合物。

本发明还提供包含本发明的化合物和一种或多种附加活性物质的药剂，其特别用 于治疗和/或预防上述疾病。合适的联用活性物质的实例和优选包括：

●降脂剂，尤其是HMG-CoA（3-羟基-3-甲基戊二酰-辅酶A）还原酶抑制剂，例如洛伐他 汀（Mevacor）、辛伐他汀（Zocor）、普伐他汀（Pravachol）、氟伐地汀（Lescol）和阿托伐他汀 （Lipitor）；

●冠状动脉治疗剂/血管舒张药，尤其是ACE（血管紧张素转换酶）抑制剂，例如卡托普 利、赖诺普利、依那普利、雷米普利、西拉普利、贝那普利、福辛普利、喹那普利和培哚普利， 或AII（血管紧张素II）受体拮抗剂，例如恩布沙坦、氯沙坦、缬沙坦、伊贝沙坦、坎地沙坦、依 普罗沙坦和替米沙坦，或β-肾上腺素受体拮抗剂，例如卡维地洛、阿普洛尔、比索洛尔、醋丁 洛尔、阿替洛尔、倍他洛尔、卡替洛尔、美托洛尔、纳多洛尔、喷布洛尔、吲哚洛尔、心得安和 噻吗洛尔，或α-1-肾上腺素受体拮抗剂，例如哌唑嗪、布那唑嗪、多沙唑嗪和特拉唑嗪，或利 尿剂，例如氢氯噻嗪、呋塞米、布美他尼、吡咯他尼、托拉塞米、阿米洛利和双肼酞嗪，或钙通 道阻滞剂，例如维拉帕米和地尔硫卓，或二氢吡啶衍生物，例如硝苯地平（Adalat）和尼群地 平（Bayotensin），或硝基制剂，例如5-单硝酸异山梨醇酯、二硝酸异山梨醇酯和三硝酸甘油 酯，或导致环状单磷酸鸟苷（cGMP）增加的物质，例如可溶性鸟苷酸环化酶的刺激剂，例如利 奥西呱；

●纤溶酶原激活剂（溶栓剂/纤溶剂）和促进溶栓/纤维蛋白溶解的化合物，如纤溶酶 原激活剂抑制剂的抑制剂（PAI抑制剂）或凝血酶活化的纤维蛋白溶解抑制剂的抑制剂 （TAFI抑制剂），例如组织纤溶酶原激活剂（t-PA，例如Actilyse^?）、链激酶、瑞替普酶和尿激 酶，或导致增加的纤溶酶形成的纤溶酶原调节物质；

●抗凝活性物质（抗凝剂），例如肝素（UFH）、低分子量肝素（LMW），例如亭扎肝素、舍托 肝素、帕肝素、那屈肝素、阿地肝素、依诺肝素、瑞维肝素、达肝素、达那肝素、Semuloparin （AVE5026）、Adomiparin（M118）和EP-42675/ORG42675；

●直接凝血酶抑制剂（DTI），例如泰毕全（达比加群）、Atecegatran（AZD-0837）、DP- 4088、SSR-182289A、阿加曲班、比伐卢定和Tanogitran（BIBT-986和前药BIBT-1011）、水蛭 素；

●直接因子Xa抑制剂，例如利伐沙班、阿哌沙班、依度沙班（DU-176b）、贝曲沙班（PRT- 54021）、R-1663、Darexaban（YM-150）、奥米沙班（FXV-673/RPR-130673）、Letaxaban（TAK- 442）、雷扎沙班（DPC-906）、DX-9065a、LY-517717、Tanogitran（BIBT-986，前药：BIBT- 1011）、艾卓肝素和磺达肝素，

●血小板聚集抑制物质（血小板聚集抑制剂、凝血细胞聚集抑制剂），例如乙酰水杨酸 （例如Aspirin）、P2Y12拮抗剂，例如噻氯匹定（Ticlid）、氯吡格雷（Plavix）、普拉格雷、替卡 格雷、坎格瑞洛、依诺雷格，PAR-1拮抗剂，例如维拉帕莎，PAR-4拮抗剂、EP3拮抗剂，例如 DG041；

●血小板粘附抑制剂，如GPVI和/或GPIb拮抗剂，例如Revacept或Caplacizumab；

●纤维蛋白原受体拮抗剂（糖蛋白-IIb/IIIa拮抗剂），例如阿昔单抗、依替巴肽、替罗 非班、拉米非班、来达非班和夫雷非班；

●重组人活化蛋白C，例如Xigris或重组血栓调节蛋白；

●以及抗心律不齐剂；

●VEGF和/或PDGF信号通路的抑制剂，例如阿柏西普、雷珠单抗、贝伐单抗、KH-902、哌 加他尼、雷莫芦单抗、角鲨胺或Bevasiranib、阿帕替尼、阿西替尼、布立尼布、西地尼布、多 韦替尼、Lenvatinib、Linifanib、莫替沙尼、帕唑帕尼、瑞格非尼、索拉非尼、舒尼替尼、 Tivozanib、凡德他尼、瓦他拉尼、Vargatef和E-10030；

●血管生成素-Tie信号通路的抑制剂，例如AMG386；

●Tie2受体酪氨酸激酶的抑制剂；

●整合素信号通路的抑制剂，例如Volociximab、西仑吉肽和ALG1001；

●PI3K-Akt-mTor信号通路的抑制剂，例如XL-147、哌立福辛、MK2206、西罗莫司、西罗 莫司脂化物和依维莫司；

●皮质类固醇，例如阿奈可他、倍他米松、地塞米松、去炎松、氟轻松和醋酸氟轻松；

●ALK1-Smad1/5信号通路的抑制剂，例如ACE041；

●环氧合酶抑制剂，例如溴芬酸和奈帕芬胺；

●激肽释放酶-激肽系统的抑制剂，例如Safotibant和Ecallantide；

●鞘氨醇1-磷酸信号通路的抑制剂，例如Sonepcizumab；

●补体-C5a受体的抑制剂，例如艾库组单抗；

●5HT1a受体的抑制剂，例如坦度螺酮；

●Ras-Raf-Mek-Erk信号通路的抑制剂；MAPK信号通路的抑制剂；FGF信号通路的抑制 剂；内皮细胞增殖的抑制剂；诱导细胞凋亡的活性物质；

●由活性物质和光的作用构成的光动力疗法，该活性物质是例如维替泊芬。

“组合产品”对本发明而言不仅是指含有所有组分的剂型（所谓的固定组合）和含 有彼此分开的组分的组合包装，还是指同时或相继给药的组分，只要它们用于预防和/或治 疗相同疾病。同样可以将两种或更多种活性物质互相组合，意味着它们各自是双重或多重 组合产品。

本发明的化合物可以全身和/或局部作用。为此，它们可以以合适方式给药，例如 通过口服、肠道外、肺、鼻、舌下、舌、口腔、直肠、皮肤、透皮、结膜或经耳途径或作为植入物 或支架。

本发明的化合物可以以适合这些给药途径的给药形式给药。

适合口服给药的给药形式是根据现有技术工作并以快速和/或调控 （modifiziert）方式递送本发明的化合物并含有结晶和/或非晶和/或溶解形式的本发明的 化合物的给药形式，例如片剂（未包衣或包衣片剂，例如具有抗胃液或延迟溶出或不可溶并 控制本发明的化合物的释放的包衣）、在口腔中快速崩解的片剂或薄膜剂/圆片、薄膜剂/冻 干产物、胶囊（例如硬或软明胶胶囊）、糖衣片剂、颗粒剂、丸剂、粉剂、乳剂、混悬剂、气雾剂 或溶液剂。

肠道外给药的实现可以避开再吸收步骤（例如通过静脉内、动脉内、心脏内、脊柱 内或腰椎内）或包括再吸收（例如通过肌肉内、皮下、皮内、经皮或腹膜内）。适合肠道外给药 的给药形式包括溶液剂、混悬剂、乳剂、冻干产物或无菌粉末形式的注射和输液制剂。

适合眼外（局部）给药的是根据现有技术工作、快速和/或以调控或受控方式释放 活性物质并含有结晶和/或非晶和/或溶解形式的活性物质的给药形式，例如滴眼剂、喷雾 剂和洗剂（例如溶液剂、混悬剂、囊泡/胶体体系、乳剂、气雾剂）、用于滴眼剂、喷雾剂和洗剂 的粉剂（例如磨碎的活性物质、混合物、冻干产物、沉淀活性物质）、半固体眼制剂（例如水凝 胶、原位水凝胶、霜剂和软膏）、眼插入物（固体和半固体制剂，例如生物粘附剂、薄膜剂/圆 片、片剂、隐形眼镜）。

眼内给药包括例如玻璃体内、视网膜下、巩膜下、脉络膜内、结膜下、眼球后和眼球 下（subtenon）给药。适合眼内给药的是根据现有技术工作、快速和/或以调控或受控方式释 放活性物质并含有结晶和/或非晶和/或溶解形式的活性物质的给药形式，例如注射制剂和 注射制剂的浓缩剂（例如溶液剂、混悬剂、囊泡/胶体体系、乳剂）、注射制剂的粉剂（例如磨 碎的活性物质、混合物、冻干产物、沉淀活性物质）、注射凝胶（半固体制剂，例如水凝胶、原 位水凝胶）和植入物（固体制剂，例如可生物降解和不可生物降解的植入物、可植入泵）。

优选的是口服给药，或在眼科疾病的情况下，眼外和眼内给药。

适合其它给药途径的给药形式是例如吸入剂型（包括粉末吸入器、喷雾器）、滴鼻 剂、鼻用溶液剂或喷鼻剂；舌、舌下或口腔给药的片剂、薄膜剂/圆片或胶囊、栓剂、耳或眼制 剂、阴道胶囊、含水混悬剂（洗剂、振荡混合物）、亲脂混悬剂、软膏、霜剂、透皮治疗系统（例 如贴剂）、乳剂、糊剂、泡沫剂、扑粉剂、植入物或支架。

本发明的化合物可以转化成所提到的给药形式。这可以以本身已知的方式通过与 惰性、无毒、制药学合适的助剂的混合实现。这些助剂包括载体物质（例如微晶纤维素、乳 糖、甘露醇）、溶剂（例如液体聚乙二醇）、乳化剂和分散剂或润湿剂（例如十二烷基硫酸钠、 聚氧山梨糖醇酐油酸酯（Polyoxysorbitanoleat））、粘合剂（例如聚乙烯基吡咯烷酮）、合成 和天然聚合物（例如白蛋白）、稳定剂（例如抗氧化剂，例如抗坏血酸）、着色剂（例如无机颜 料，例如氧化铁）和味道和/或气味矫正剂。

本发明还提供包含至少一种本发明的化合物，优选以及一种或多种惰性无毒的制 药学合适的助剂的药剂，及其用于上文提到目的的用途。

在肠道外给药的情况下，通常发现有利的是，每24小时给予大约5至250毫克的量 以实现有效结果。在口服给药的情况下，该量为每24小时大约5至500毫克。

尽管如此，可能必须酌情偏离规定的量，尤其取决于体重、给药途径、个体对活性 物质的反应、制剂类型和给药时间或时间间隔。

除非另行指明，下列试验和实施例中的百分比说明为重量百分比；份数为重量份。 溶剂比、稀释比和液体/液体溶液的浓度说明各自基于体积。“w/v”说明是指“重量/体积”。 例如，“10%w/v”是指：100毫升溶液或悬浮液包含10克物质。

A)实施例

缩写:

Boc叔丁氧基羰基

ca.大约

CDI羰基二咪唑

d天，双重峰（在NMR中）

DC薄层色谱法

DCM二氯甲烷

DCI直接化学电离（在MS中）

dd双重双峰（在NMR中）

DMAP4-二甲基氨基吡啶

DMFN,N-二甲基甲酰胺

DMSO二甲亚砜

d.Th理论值的（在产量中）

eq.当量

ESI电喷雾电离（在MS中）

h小时

HATU六氟磷酸O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓

HPLC高压高效液相色谱法

HV高真空

LC-MS液相色谱法-质谱法联用

LDA二异丙基氨基锂

m多重峰（在NMR中）

min分钟

MS质谱法

NMR核磁共振谱法

quant.定量

RP反相（在HPLC中）

RT室温

R_t停留时间（在HPLC中）

s单重峰（在NMR中）

THF四氢呋喃

TFA三氟乙酸

T3P2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三磷杂环己烷2,4,6-三氧化物。

HPLC、LC/MS和GC方法:

方法1:仪器:WatersACQUITYSQDUPLCsystem；柱:WatersAcquityUPLCHSS T31.8μ50mmx1mm；洗脱液A:1升水+0.25毫升99%的甲酸，洗脱液B:1升乙腈+ 0.25毫升99%的甲酸；梯度:0.0min90%A→1.2min5%A→2.0min5%A；炉:50 ℃；流速:0.40ml/min；UV检测:208–400nm。

方法2:仪器:WatersACQUITYSQDUPLCsystem；柱:WatersAcquityUPLC HSST31.8μ50mmx1mm；洗脱液A:1升水+0.25毫升99%的甲酸，洗脱液B:1升乙腈 +0.25毫升99%的甲酸；梯度:0.0min95%A→6.0min5%A→7.5min5%A；炉: 50℃；流速:0.35ml/min；UV检测:210–400nm。

方法3:仪器:具有WatersUPLCAcquity的MicromassQuattroPremier；柱: ThermoHypersilGOLD1.9μ50mmx1mm；洗脱液A:1升水+0.5毫升50%的甲酸，洗 脱液B:1升乙腈+0.5毫升50%的甲酸；梯度:0.0min97%A→0.5min97%A→3.2 min5%A→4.0min5%A；炉:50℃；流速:0.3ml/min；UV检测:210nm。

方法4:仪器:具有WatersUPLCAcquity的MicromassQuattroPremier；柱: ThermoHypersilGOLD1.9μ50mmx1mm；洗脱液A:1升水+0.5毫升50%的甲酸，洗 脱液B:1升乙腈+0.5毫升50%的甲酸；梯度:0.0min90%A→0.1min90%A→1.5 min10%A→2.2min10%A；炉:50℃；流速:0.33ml/min；UV检测:210nm。

方法5:仪器:ThermoDFS,TraceGCUltra；柱:RestekRTX-35,15mx200 μmx0.33μm；恒定氦气流速:1.20ml/min；炉:60℃；入口:220℃；梯度:60℃,30℃/ min→300℃（保持3.33min）。

方法6:MS仪器:Waters(Micromass)QuattroMicro；HPLC仪器:Agilent 1100系列；柱:YMC-TriartC183μ50x3mm；洗脱液A:1升水+0.01摩尔碳酸铵，洗 脱液B:1升乙腈；梯度:0.0min100%A→2.75min5%A→4.5min5%A；炉:40 ℃；流速:1.25ml/min；UV检测:210nm。

方法7:MS仪器:Waters(Micromass)ZQ；HPLC仪器:Agilent1100系列；柱: AgientZORBAXExtend-C183.0mmx50mm3.5micron；洗脱液A:1升水+0.01摩尔 碳酸铵，洗脱液B:1升乙腈；梯度:0.0min98%A→0.2min98%A→3.0min5%A →4.5min5%A；炉:40℃；流速:1.75ml/min；UV检测:210nm。

微波:所用微波反应器是Emrys^TMOptimizer类型的“单模”仪器。

当本发明的化合物通过使用上述方法的制备型HPLC提纯（其中洗脱剂含有添加 剂，例如三氟乙酸、甲酸或氨）时，如果本发明的化合物含有足够碱性或酸性的官能，本发明 的化合物可以以盐形式，例如作为三氟乙酸盐、甲酸盐或铵盐出现。这样的盐可通过本领域 技术人员已知的各种方法转化成相应的游离碱或酸。

在下述本发明的合成中间体和实施例的情况下，以相应的碱或酸的盐形式描述化 合物，通过各自的制备和/或提纯方法获得的此类盐的确切化学计量组成通常是未知的。除 非更详细规定，名称和结构式上的附加词，如“盐酸盐”、“三氟乙酸盐”、“钠盐”或“xHCl”、 “xCF₃COOH”、“xNa⁺”因此在此类盐的情况中不应化学计量理解，而是仅对其中所含的成盐 组分具有描述特性。

如果合成中间体或实施例或其盐通过所述制备和/或提纯方法以化学计量组成 （如果它们具有特定类型）未知的溶剂合物，例如水合物的形式获得，这相应地适用。

起始化合物

通用方法1A:酰胺与HATU/二异丙基乙基胺的偶联

在氩气下和在室温下，将相应的胺（1.1当量）、N,N-二异丙基乙基胺（2.2当量）和HATU （1.2当量）在少量DMF中的溶液添加到相应的羧酸（1.0当量）在二甲基甲酰胺（7-15ml/ mmol）中的溶液中。在室温下搅拌该反应混合物。在添加水/乙酸乙酯和相分离后，有机相用 水和用饱和氯化钠水溶液洗涤，干燥（硫酸钠），过滤并在减压下浓缩。粗产物然后通过快速 色谱法（硅胶60，洗脱液：环己烷/乙酸乙酯混合物或二氯甲烷/甲醇混合物）或通过制备型 HPLC（ReprosilC18，水/乙腈梯度或水/甲醇梯度）提纯。

通用方法2A:借助TFA的叔丁酯皂化

在室温下，将20当量TFA添加到1.0当量相应的叔丁酯衍生物在二氯甲烷（大约7ml/ mmol）中的溶液中并在室温下搅拌1至8小时。然后将反应混合物在真空中浓缩，将残留物与 二氯甲烷共蒸发三次并在真空中干燥。粗产物然后任选通过快速色谱法（硅胶60，洗脱液： 环己烷/乙酸乙酯混合物或二氯甲烷/甲醇混合物）或通过制备型HPLC（ReprosilC18，水/ 乙腈梯度或水/甲醇梯度）提纯。

通用方法3B:借助氢氧化锂的皂化

在室温下，将3.0当量氢氧化锂添加到1.0当量相应的甲酯或乙酯在四氢呋喃/水（3:1， 大约10ml/mmol）中的溶液中。该反应混合物在室温至60℃下搅拌，然后用1N盐酸水溶液调 节至pH1。在添加水/乙酸乙酯和相分离后，水相用乙酸乙酯萃取三次。将合并的有机相干 燥（硫酸钠），过滤并在真空中浓缩。粗产物然后通过快速色谱法（硅胶60，洗脱液：环己烷/ 乙酸乙酯混合物或二氯甲烷/甲醇混合物）或通过制备型HPLC（ReprosilC18，水/乙腈梯度 或水/甲醇梯度）提纯。

实施例1.1A

3-(4-氨基苯基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮

将6.5克（29毫摩尔，4当量）二水合氯化锡(II)添加到1.5克（7.2毫摩尔）3-(4-硝基苯 基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮在75毫升乙醇中的溶液中，并在70℃下搅拌1小时。在冷却至 室温后，将反应混合物倒在冰水上并小心加入碳酸氢钠至pH8。该混合物经过滤层过滤，残 留物用乙酸乙酯洗涤。合并的滤液在真空中浓缩。残留物与二氯甲烷和甲醇搅拌，在超声浴 中处理10分钟，然后过滤。该滤液在真空中浓缩并干燥。产量：1.4克（定量）。

LC-MS[方法1]:R_t=0.44min；MS(ESIpos):m/z=178(M+H)⁺

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]=7.42(d,2H),6.51(d,2H),5.23(s, 2H),4.13(br.s,1H)。

实施例1.2A

4-硝基苯甲酰亚氨肼

在0℃下，将5.2毫升（29.8毫摩尔，3当量）N,N-二异丙基乙基胺和0.62克（80%，9.9毫摩 尔，1.0当量）一水合肼添加到2.0克（9.9毫摩尔）4-硝基苯甲酰亚氨胺（carboximidamide） 单盐酸盐在20毫升甲醇中的溶液中并在室温下搅拌64小时。然后将反应混合物添加到10% 氯化钠溶液中，并在添加乙酸乙酯和相分离后，用乙酸乙酯萃取两次。合并的有机相经硫酸 钠干燥并在真空中浓缩。产量：1.7克（理论值的93%）。

LC-MS[方法6]:R_t=1.77min；MS(ESIpos):m/z=181(M+H)⁺。

实施例1.2B

5-(4-硝基苯基)-3-(三氟甲基)-1H-1,2,4-三唑

在0℃下，将1.95克（9.3毫摩尔，1当量）三氟乙酸酐添加到1.7克（9.3毫摩尔）4-硝基苯 甲酰亚氨肼在50毫升二氯甲烷中的溶液中，随后在室温下搅拌，在20分钟后，添加50毫升乙 腈以改进反应混合物的溶解度。将反应混合物在50℃下搅拌3小时，然后在真空中浓缩。残 留物与二氯甲烷共蒸发三次并在真空中干燥。产量：2.7克（定量）。

LC-MS[方法1]:R_t=0.94min；MS(ESIpos):m/z=259(M+H)⁺。

实施例1.2C

4-[3-(三氟甲基)-1H-1,2,4-三唑-5-基]苯胺

将8.9克（39.7毫摩尔，4当量）二水合氯化锡(II)添加到2.7克（9.9毫摩尔）5-(4-硝基 苯基)-3-(三氟甲基)-1H-1,2,4-三唑在110毫升乙醇中的溶液中，并在70℃下搅拌1小时。 在冷却至室温后，将反应混合物倒在冰水上并小心加入碳酸氢钠至pH8。该混合物经过滤 层过滤，残留物用乙酸乙酯再洗涤。在相分离后，水相用乙酸乙酯洗涤两次。合并的有机相 用氯化钠水溶液洗涤，干燥（硫酸镁），过滤并在真空中浓缩。产量：1.9克（理论值的79%）。

LC-MS[方法6]:R_t=1.66min；MS(ESIpos):m/z=229(M+H)⁺。

实施例1.3A

5-(4-硝基苯基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-1-甲酸叔丁酯

在室温下，将2.7克（12.2毫摩尔，1.0当量）二碳酸二叔丁酯和1.7毫升（12.2毫摩尔， 1.0当量）三乙胺添加到2.5克（12.2毫摩尔）5-(4-硝基苯基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酮在50 毫升二氯甲烷中的溶液中，并在室温下搅拌4小时。该反应混合物用二氯甲烷和水稀释。在 相分离后，将有机相干燥（硫酸钠），过滤并在真空中浓缩。粗产物通过快速色谱法（硅胶60， 洗脱液：二氯甲烷/甲醇混合物）提纯。产量：2.2克（理论值的58%）。

LC-MS[方法1]:R_t=1.07min；MS(ESIpos):m/z=306(M+H)⁺。

实施例1.3B

5-(4-氨基苯基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-1-甲酸叔丁酯

2.2克（7.1毫摩尔）5-(4-硝基苯基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-1-甲酸叔丁酯在100 毫升乙醇中的溶液在253毫克钯（在活性炭上10%）存在下在室温和常压下氢化。该反应混合 物然后经C盐过滤，滤液在真空中浓缩并干燥。产量：1.99克（理论值的92%，纯度90%）。

LC-MS[方法7]:R_t=2.06min；MS(ESIpos):m/z=276(M+H)⁺。

实施例2.1A

3-氨基环戊-2-烯-1-酮

将27.5毫升氨水溶液（28%）添加到5.5克（43.6毫摩尔）3-乙氧基-2-环戊烯-1-酮在55 毫升乙醇中的溶液中，并在85℃下搅拌16小时。在冷却至室温后，将反应混合物在真空中浓 缩并干燥。产量：4.2克（定量）。

GC/MS[方法5]:R_t=4.78min；MS(EI):m/z=97。

实施例2.2A

N-(3-氧代环戊-1-烯-1-基)甘氨酸叔丁酯

用水分离器将6.7克（68.6毫摩尔）环戊烷-1,3-二酮、9.0克（68.6毫摩尔，1.0当量）甘 氨酸叔丁酯和1.3克（6.8毫摩尔，0.1当量）一水合4-甲苯磺酸在350毫升甲苯中的溶液在回 流下搅拌3小时。在冷却至室温后，在真空中除去甲苯。在添加水/二氯甲烷和相分离后，有 机相用水和用饱和氯化钠水溶液洗涤，干燥（硫酸钠），过滤并在真空中浓缩。残留物与环己 烷搅拌，过滤并在减压下干燥。产量：11.9克（理论值的82%）。

LC-MS[方法1]:R_t=0.58min；MS(ESIpos):m/z=212(M+H)⁺。

实施例2.3A

N-(3-氧代环己-1-烯-1-基)甘氨酸叔丁酯

用水分离器将3.0克（27.4毫摩尔）环己烷-1,3-二酮、3.6克（27.4毫摩尔，1.0当量）甘 氨酸叔丁酯和522毫克（2.74毫摩尔，0.1当量）一水合4-甲苯磺酸在150毫升甲苯中的溶液 在回流下搅拌3小时。在冷却至室温后，在真空中除去甲苯。在添加水/二氯甲烷和相分离 后，有机相用水和用饱和氯化钠水溶液洗涤，干燥（硫酸钠），过滤并在真空中浓缩。残留物 与环己烷搅拌，过滤并在真空中干燥。产量：5.1克（理论值的74%，纯度90%）。

LC-MS[方法1]:R_t=0.61min；MS(ESIpos):m/z=226(M+H)⁺

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]=7.19(br.s,1H),4.66(br.s,1H), 3.73(d,2H),2.36-2.31(m,2H),2.10-2.05(m,2H),1.84-1.77(m,2H),1.42 (s,9H)。

实施例3.1A

4-(3-氯苯基)-2-甲基-6-氧代-1,4,5,6-四氢吡啶-3-甲酸甲酯（外消旋物）

7.5克（53.4毫摩尔）3-氯苯甲醛、6.2克（53.4毫摩尔，1.0当量）乙酰乙酸甲酯、7.7克 （53.4毫摩尔，1.0当量）2,2-二甲基-1,3-二氧杂环己烷-4,6-二酮和4.3克（55.8毫摩尔， 1.05当量）乙酸铵在53毫升冰醋酸中的溶液在回流下搅拌5小时。在冷却反应混合物后，滤 出形成的沉淀物，用二乙醚洗涤并在真空中干燥。产量：5.7克（理论值的38%）。

LC-MS[方法1]:R_t=0.91min；MS(ESIpos):m/z=280(M+H)⁺。

实施例3.1B

1-(2-叔丁氧基-2-氧代乙基)-4-(3-氯苯基)-2-甲基-6-氧代-1,4,5,6-四氢吡啶-3- 甲酸甲酯（外消旋物）

在室温下在氩气下，将6.0克（31.0毫摩尔，1.2当量）溴乙酸叔丁酯和7.1克（51.6毫摩 尔，2.0当量）碳酸钾添加到7.2克（25.8毫摩尔）4-(3-氯苯基)-2-甲基-6-氧代-1,4,5,6-四 氢吡啶-3-甲酸甲酯（外消旋物）在253毫升二甲基甲酰胺中的溶液中。将反应混合物在120 ℃下搅拌整夜，并再加入2.5克（12.9毫摩尔，0.5当量）溴乙酸叔丁酯，在120℃下搅拌另外2 小时，再加入2.5克（12.9毫摩尔，0.5当量）溴乙酸叔丁酯并在120℃下再搅拌整夜。在冷却 至室温后，在真空中除去二甲基甲酰胺。在添加水/乙酸乙酯和相分离后，有机相用水和用 饱和氯化钠水溶液洗涤，干燥（硫酸钠），过滤并在真空中浓缩。粗产物然后通过快速色谱法 （硅胶-60，洗脱液：二氯甲烷-甲醇混合物）提纯。产量：3.9克（理论值的34%，纯度88%）。

LC-MS[方法1]:R_t=1.20min；MS(ESIpos):m/z=394(M+H)⁺。

实施例3.1C

[6-(溴甲基)-4-(3-氯苯基)-5-(甲氧基羰基)-2-氧代-3,4-二氢吡啶-1(2H)-基]乙酸 （外消旋物）

在冰冷却下，将1.6克（9.9毫摩尔，1.0当量）溴逐滴添加到3.9克（9.9毫摩尔）1-(2-叔 丁氧基-2-氧代乙基)-4-(3-氯苯基)-2-甲基-6-氧代-1,4,5,6-四氢吡啶-3-甲酸甲酯（外 消旋物）在79毫升二氯甲烷中的溶液中并将反应混合物在室温下搅拌60分钟。在进一步加 入二氯甲烷后，该反应混合物用饱和硫代硫酸钠水溶液洗涤，并在相分离后，将有机相干燥 （硫酸钠），过滤并在真空中浓缩。产量：3.4克（理论值的66%，纯度79%）。

LC-MS[方法1]:R_t=0.96min；MS(ESIpos):m/z=416(M+H)⁺。

实施例3.1D

[4-(3-氯苯基)-2,5-二氧代-2,3,4,5,6,7-六氢-1H-吡咯并[3,4-b]吡啶-1-基]乙酸 （外消旋物）

将12毫升氨溶液（在甲醇中7摩尔浓度）添加到1.4克（1.7毫摩尔，50%纯度）[6-(溴甲 基)-4-(3-氯苯基)-5-(甲氧基羰基)-2-氧代-3,4-二氢吡啶-1(2H)-基]乙酸（外消旋物）在 8毫升乙腈中的溶液中并在室温下搅拌30分钟。将反应混合物在真空中浓缩并将残留物与 60毫升0.5摩尔浓度的盐酸水溶液搅拌。滤出沉淀物，用水洗涤并在真空中干燥。产量：680 毫克（理论值的93%，纯度74%）。

LC-MS[方法1]:R_t=0.58min；MS(ESIpos):m/z=321(M+H)⁺。

实施例3.1E

2-[4-(3-氯苯基)-2,5-二氧代-2,3,4,5,6,7-六氢-1H-吡咯并[3,4-b]吡啶-1-基]-N- [4-(1H-四唑-5-基)苯基]乙酰胺（外消旋物）

根据通用方法1A，使500毫克（1.1毫摩尔，70%纯度）[4-(3-氯苯基)-2,5-二氧代-2,3, 4,5,6,7-六氢-1H-吡咯并[3,4-b]吡啶-1-基]乙酸（外消旋物）与211毫克（1.3毫摩尔，1.2 当量）4-(1H-四唑-5-基)苯胺反应。粗产物然后通过制备型HPLC（ReprosilC18，水/乙腈梯 度）提纯。产量：24毫克（理论值的5%）。

LC-MS[方法1]:R_t=0.75min；MS(ESIpos):m/z=464(M+H)⁺

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]=10.64(s,1H),8.01(d,2H),7.84- 7.80(m,3H),7.43(s,1H),7.37-7.28(m,3H),4.59(d,1H),4.36(d,1H), 4.12(dd,2H),3.98(d,1H),3.23(dd,1H),2.63(d,1H)。

实施例3.2A:

4-(2,5-二氯苯基)-2-甲基-6-氧代-1,4,5,6-四氢吡啶-3-甲酸甲酯（外消旋物）

将11.5克（36.3毫摩尔）2,5-二氯苯甲醛、4.2克（36.3毫摩尔，1.0当量）乙酰乙酸甲酯、 5.2克（36.3毫摩尔，1.0当量）2,2-二甲基-1,3-二氧杂环己烷-4,6-二酮和2.9克（38.1毫摩 尔，1.05当量）乙酸铵在35毫升冰醋酸中的溶液在回流下搅拌5小时。在冷却反应混合物后， 滤出形成的沉淀物，用水洗涤并在真空中干燥。产量：4.0克（理论值的33%，纯度92%）。

LC-MS[方法1]:R_t=0.95min；MS(ESIpos):m/z=314(M+H)⁺。

实施例3.2B:

1-(2-叔丁氧基-2-氧代乙基)-4-(2,5-二氯苯基)-2-甲基-6-氧代-1,4,5,6-四氢吡 啶-3-甲酸甲酯（外消旋物）

在室温下，将1.3克（6.7毫摩尔，1.4当量）溴乙酸叔丁酯和1.3克（9.5毫摩尔，2.0当量） 碳酸钾添加到1.6克（4.8毫摩尔）4-(2,5-二氯苯基)-2-甲基-6-氧代-1,4,5,6-四氢吡啶- 3-甲酸甲酯（外消旋物）在30毫升二甲基甲酰胺中的溶液中并在120℃下搅拌2小时。在冷却 至室温后，将反应混合物在真空中浓缩。在添加水/乙酸乙酯和相分离后，有机相用水和用 饱和氯化钠水溶液洗涤，干燥（硫酸钠），过滤并在真空中浓缩。产量：2.1克（定量）。

LC-MS[方法2]:R_t=1.31min；MS(ESIpos):m/z=371(M+H-叔丁基)⁺。

实施例3.2C

2-(溴甲基)-1-(2-叔丁氧基-2-氧代乙基)-4-(2,5-二氯苯基)-6-氧代-1,4,5,6-四氢 吡啶-3-甲酸甲酯（外消旋物）

在冰冷却下，将0.8克（4.9毫摩尔，1.0当量）溴逐滴添加到2.1克（4.9毫摩尔）1-(2-叔 丁氧基-2-氧代乙基)-4-(2,5-二氯苯基)-2-甲基-6-氧代-1,4,5,6-四氢吡啶-3-甲酸甲酯 （外消旋物）在40毫升二氯甲烷中的溶液中并将反应混合物在室温下搅拌60分钟。在进一步 加入二氯甲烷后，反应混合物用饱和硫代硫酸钠水溶液洗涤并将有机相干燥（硫酸钠），过 滤并在真空中浓缩。产量：2.2克（理论值的88%，纯度82%）。

LC-MS[方法2]:R_t=1.01min；MS(ESIpos):m/z=450(M+H-叔丁基)⁺。

实施例3.2D

[4-(2,5-二氯苯基)-6-甲基-2,5-二氧代-2,3,4,5,6,7-六氢-1H-吡咯并[3,4-b]吡 啶-1-基]乙酸叔丁酯（外消旋物）

将2.2毫升（4.4毫摩尔，1.5当量）甲胺溶液（在四氢呋喃中2摩尔浓度）添加到1.8克 （2.9毫摩尔，82%纯度）2-(溴甲基)-1-(2-叔丁氧基-2-氧代乙基)-4-(2,5-二氯苯基)-6-氧 代-1,4,5,6-四氢吡啶-3-甲酸甲酯（外消旋物）在70毫升四氢呋喃中的溶液中。将反应混合 物在室温下搅拌60分钟并在真空中浓缩。残留物在冰浴中与乙腈搅拌，滤出沉淀物并将母 液在真空中浓缩。粗产物然后通过快速色谱法（硅胶-60，洗脱液：二氯甲烷-甲醇混合物）提 纯。产量：0.42克（理论值的28%，纯度83%）。

LC-MS[方法2]:R_t=1.06min；MS(ESIpos):m/z=425(M+H)⁺。

实施例3.2E

[4-(2,5-二氯苯基)-6-甲基-2,5-二氧代-2,5,6,7-四氢-1H-吡咯并[3,4-b]吡啶-1- 基]乙酸叔丁酯

将1781毫克（3.25毫摩尔，5.0当量）硝酸铈(IV)铵在2.5毫升水中的溶液添加到333毫 克（0.65毫摩尔，83%纯度）[4-(2,5-二氯苯基)-6-甲基-2,5-二氧代-2,3,4,5,6,7-六氢- 1H-吡咯并[3,4-b]吡啶-1-基]乙酸叔丁酯（外消旋物）在10毫升二氧杂环己烷中的溶液中 并在50℃下搅拌7小时。在冷却至室温后，将反应混合物在真空中浓缩。在添加水/乙酸乙酯 和相分离后，有机相用水和用饱和氯化钠水溶液洗涤，干燥（硫酸钠），过滤并在真空中浓 缩。产量：301毫克（理论值的24%，纯度22%）。

LC-MS[方法2]:R_t=1.02min；MS(ESIpos):m/z=423(M+H)⁺。

实施例3.2F

[4-(2,5-二氯苯基)-6-甲基-2,5-二氧代-2,5,6,7-四氢-1H-吡咯并[3,4-b]吡啶-1- 基]乙酸

280毫克（0.66毫摩尔，22%纯度）[4-(2,5-二氯苯基)-6-甲基-2,5-二氧代-2,5,6,7-四 氢-1H-吡咯并[3,4-b]吡啶-1-基]乙酸叔丁酯根据通用方法2A用TFA皂化。产量：328毫克 （理论值的76%，纯度56%）。

LC-MS[方法1]:R_t=0.65min；MS(ESIpos):m/z=367(M+H)⁺。

实施例4.1A:

5-(2,5-二氯亚苄基)-2,2-二甲基-1,3-二氧杂环己烷-4,6-二酮

将358微升（3.6毫摩尔，0.2当量）哌啶和1.2毫升（21.0毫摩尔，1.1当量）乙酸添加到 2.75克（19.0毫摩尔）2,2-二甲基-1,3-二氧杂环己烷-4,6-二酮和5.0克（28.6毫摩尔，1.5 当量）2,5-二氯苯甲醛在250毫升甲苯中的溶液中并用水分离器在回流下搅拌5小时。在冷 却至室温后，将反应混合物在真空中浓缩，残留物与环己烷搅拌，过滤并在真空中干燥。产 量：4.94克（理论值的82%）。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]=8.40(s,1H),7.78(d,1H),7.64 (d,1H),7.59(dd,1H),1.79(s,6H)。

实施例4.1B:

[4-(2,5-二氯苯基)-2,5-二氧代-2,3,4,5,6,7-六氢-1H-环戊[b]吡啶-1-基]乙酸叔 丁酯（外消旋物）

将5.0克（23.7毫摩尔）5-(2,5-二氯亚苄基)-2,2-二甲基-1,3-二氧杂环己烷-4,6-二 酮和7.1克（23.7毫摩尔，1.0当量）N-(3-氧代环戊-1-烯-1-基)甘氨酸叔丁酯在80毫升乙醇 中的溶液在回流下搅拌30分钟。在冷却至室温后，将反应混合物在真空中浓缩。粗产物通过 快速色谱法（硅胶-60，洗脱液：环己烷-乙酸乙酯混合物）提纯。产量：7.4克（理论值的72%， 纯度94%）。

LC-MS[方法1]:R_t=1.12min；MS(ESIpos):m/z=410(M+H)⁺。

实施例4.1C

[4-(2,5-二氯苯基)-2,5-二氧代-2,3,4,5,6,7-六氢-1H-环戊[b]吡啶-1-基]乙酸（外 消旋物）

将1464毫克（2.67毫摩尔，4.0当量）硝酸铈(IV)铵在2.7毫升水中的溶液添加到274毫 克（0.67毫摩尔）[4-(2,5-二氯苯基)-2,5-二氧代-2,3,4,5,6,7-六氢-1H-环戊[b]吡啶-1- 基]乙酸叔丁酯（外消旋物）在10毫升丙酮中的溶液中并在室温下搅拌整夜。在冷却至室温 后，然后将反应混合物在真空中浓缩。在添加水/二氯甲烷和相分离后，有机相用水和用饱 和氯化钠水溶液洗涤，干燥（硫酸钠），过滤并在真空中浓缩。产量：211毫克（理论值的63%， 纯度71%）。

LC-MS[方法1]:R_t=1.08min；MS(ESIpos):m/z=354(M+H)+。

实施例4.1D

2-[4-(2,5-二氯苯基)-2,5-二氧代-2,3,4,5,6,7-六氢-1H-环戊[b]吡啶-1-基]-N- [4-(1H-四唑-5-基)苯基]乙酰胺（外消旋物）

根据通用方法1A，使211毫克（0.42毫摩尔，71%纯度）[4-(2,5-二氯苯基)-2,5-二氧代- 2,3,4,5,6,7-六氢-1H-环戊[b]吡啶-1-基]乙酸（外消旋物）与82毫克（0.51毫摩尔，1.2当 量）4-(1H-四唑-5-基)苯胺反应。产量：138毫克（理论值的58%，纯度89%）。

LC-MS[方法1]:R_t=0.87min；MS(ESIpos):m/z=497(M+H)⁺。

实施例4.2A

[4-(2,5-二氯苯基)-2,5-二氧代-2,5,6,7-四氢-1H-环戊[b]吡啶-1-基]乙酸叔丁酯

将29.2克（53.3毫摩尔，5.0当量）硝酸铈(IV)铵在46毫升水中的溶液添加到4.7克 （10.7毫摩尔，94%纯度）[4-(2,5-二氯苯基)-2,5-二氧代-2,3,4,5,6,7-六氢-1H-环戊[b] 吡啶-1-基]乙酸叔丁酯（外消旋物）在186毫升二氧杂环己烷中的溶液中并在50℃下搅拌5 小时。在冷却至室温后，将反应混合物在真空中浓缩。在添加水/二氯甲烷和相分离后，有机 相用水和用饱和氯化钠水溶液洗涤，干燥（硫酸钠），过滤并在真空中浓缩。产量：5.5克（定 量）。

LC-MS[方法1]:R_t=1.10min；MS(ESIpos):m/z=408(M+H)⁺。

实施例4.2B

[4-(2,5-二氯苯基)-2,5-二氧代-2,5,6,7-四氢-1H-环戊[b]吡啶-1-基]乙酸

2.0克（5.0毫摩尔）[4-(2,5-二氯苯基)-2,5-二氧代-2,5,6,7-四氢-1H-环戊[b]吡啶- 1-基]乙酸叔丁酯根据通用方法2A用TFA皂化。产量：1.9克（理论值的95%，纯度89%）。

LC-MS[方法1]:R_t=0.72min；MS(ESIpos):m/z=352(M+H)⁺。

实施例4.3A

4-({[4-(2,5-二氯苯基)-2,5-二氧代-2,5,6,7-四氢-1H-环戊[b]吡啶-1-基]乙酰基} 氨基)苯甲酸叔丁酯

根据通用方法1A，使119毫克（0.30毫摩尔，89%纯度）[4-(2,5-二氯苯基)-2,5-二氧代- 2,5,6,7-四氢-1H-环戊[b]吡啶-1-基]乙酸与64毫克（0.33毫摩尔，1.1当量）4-氨基苯甲酸 叔丁酯反应。产量：48毫克（理论值的29%，纯度94%）。

LC-MS[方法1]:R_t=1.14min；MS(ESIpos):m/z=527(M+H)⁺。

实施例4.4A

5-[4-({[4-(2,5-二氯苯基)-2,5-二氧代-2,5,6,7-四氢-1H-环戊[b]吡啶-1-基]乙酰 基}氨基)苯基]-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-1-甲酸叔丁酯

根据通用方法1A，使102毫克（0.25毫摩尔，86%纯度）[4-(2,5-二氯苯基)-2,5-二氧代- 2,5,6,7-四氢-1H-环戊[b]吡啶-1-基]乙酸与95毫克（0.28毫摩尔，1.1当量）5-(4-氨基苯 基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-1-甲酸叔丁酯反应。产量：53毫克（理论值的35%）。

LC-MS[方法1]:R_t=1.12min；MS(ESIpos):m/z=609(M+H)⁺。

实施例5.1A

5-(2-溴-5-氯亚苄基)-2,2-二甲基-1,3-二氧杂环己烷-4,6-二酮

将0.6毫升（6.1毫摩尔，0.2当量）哌啶和2毫升（35.1毫摩尔，1.1当量）乙酸添加到4.6 克（31.9毫摩尔）2,2-二甲基-1,3-二氧杂环己烷-4,6-二酮和10.5克（47.8毫摩尔，1.5当 量）2-溴-5-氯苯甲醛在450毫升甲苯中的溶液中并用水分离器在回流下搅拌3小时。在冷却 至室温后，将反应混合物在真空中浓缩，残留物与二乙醚搅拌，过滤并在真空中干燥。产量： 9.3克（理论值的84%）。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]=8.35(s,1H),7.78(d,1H),7.71 (d,1H),7.50(dd,1H),1.79(s,6H)。

实施例5.1B

4-(2-溴-5-氯苯基)-3,4,6,7-四氢-1H-环戊[b]吡啶-2,5-二酮（外消旋物）

在80℃下搅拌2.6克（26.9毫摩尔）3-氨基环戊-2-烯-1-酮和9.3克（26.9毫摩尔，1.0当 量）5-(2-溴-5-氯亚苄基)-2,2-二甲基-1,3-二氧杂环己烷-4,6-二酮在100毫升二氧杂环 己烷中的溶液。在3小时后，将反应混合物冷却至室温并加入3.1克（8.1毫摩尔，0.3当量） HATU和0.9毫升（5.4毫摩尔，0.2当量）N,N-二异丙基乙基胺，在室温下搅拌整夜并在真空中 浓缩。在添加水/乙酸乙酯和相分离后，将有机相干燥（硫酸钠），过滤并在真空中浓缩。粗产 物然后通过快速色谱法（硅胶-60，洗脱液：二氯甲烷-甲醇混合物）提纯。产量：4.95克（理论 值的44%，纯度81%）。

LC-MS[方法1]:R_t=0.84min；MS(ESIpos):m/z=340(M+H)⁺。

实施例5.1C

4-(2-溴-5-氯苯基)-6,7-二氢-1H-环戊[b]吡啶-2,5-二酮

将32.3克（58.9毫摩尔，5.0当量）硝酸铈(IV)铵在60毫升水中的溶液添加到4.95克 （11.8毫摩尔，81%纯度）4-(2-溴-5-氯苯基)-3,4,6,7-四氢-1H-环戊[b]吡啶-2,5-二酮（外 消旋物）在180毫升二氧杂环己烷中的溶液中并在50℃下搅拌3小时。在冷却至室温后，将反 应混合物在真空中浓缩。在添加水/二氯甲烷和相分离后，有机相用水和用饱和氯化钠水溶 液洗涤，干燥（硫酸钠），过滤并在真空中浓缩。残留物与二乙醚搅拌，过滤并在真空中干燥。 产量：3.1克（理论值的70%，纯度90%）。

LC-MS[方法3]:R_t=1.78min；MS(ESIpos):m/z=338(M+H)+.

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]=12.74(s,1H),7.69(d,1H),7.42 (dd,1H),7.36(d,1H),6.10(s,1H),3.03-2.86(m,2H),2.56-2.46(m,2H)。

实施例5.1D

[4-(2-溴-5-氯苯基)-2,5-二氧代-2,5,6,7-四氢-1H-环戊[b]吡啶-1-基]乙酸叔丁酯

将300毫克（0.80毫摩尔，90%纯度）4-(2-溴-5-氯苯基)-6,7-二氢-1H-环戊[b]吡啶-2, 5-二酮、0.14毫升（0.96毫摩尔，1.2当量）溴乙酸叔丁酯和165毫克（1.20毫摩尔）碳酸钾在 18毫升二甲基甲酰胺中的溶液在120℃下搅拌2小时。在冷却至室温后，将反应混合物在真 空中浓缩。在添加水/乙酸乙酯和相分离后，有机相用水和用饱和氯化钠水溶液洗涤，干燥 （硫酸钠），过滤并在真空中浓缩。残留物与二乙醚搅拌，过滤并在真空中干燥。产量：169毫 克（理论值的47%）。

LC-MS[方法1]:R_t=1.11min；MS(ESIpos):m/z=452(M+H)+.

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]=7.70(d,1H),7.43(dd,1H),7.40 (d,1H),6.29(s,1H),4.79(s,2H),3.07-3.01(m,2H),2.61-2.55(m,2H), 1.45(s,9H)。

实施例5.1E

[4-(2-溴-5-氯苯基)-2,5-二氧代-2,5,6,7-四氢-1H-环戊[b]吡啶-1-基]乙酸

140毫克（0.31毫摩尔）[4-(2-溴-5-氯苯基)-2,5-二氧代-2,5,6,7-四氢-1H-环戊[b] 吡啶-1-基]乙酸叔丁酯根据通用方法2A用TFA皂化。产量：90毫克（理论值的69%，纯度94%）。

LC-MS[方法1]:R_t=0.76min；MS(ESIpos):m/z=396(M+H)⁺。

实施例6.1A

5-[5-氯-2-(三氟甲基)亚苄基]-2,2-二甲基-1,3-二氧杂环己烷-4,6-二酮

将0.4毫升（4.0毫摩尔，0.2当量）哌啶和1.3毫升（23.0毫摩尔，1.1当量）乙酸添加到 3.0克（20.8毫摩尔）2,2-二甲基-1,3-二氧杂环己烷-4,6-二酮和5.0克（24.0毫摩尔，1.2当 量）5-氯-2-(三氟甲基)苯甲醛在295毫升甲苯中的溶液中并用水分离器在回流下搅拌3小 时。在冷却至室温后，将反应混合物在减压下浓缩，残留物与二乙醚搅拌，过滤并在真空下 干燥。产量：5.4克（理论值的69%，纯度89%）。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]=8.57(s,1H),7.87(d,1H),7.75 (d,1H),7.70(s,1H),1.78(s,6H)。

实施例6.1B

4-[5-氯-2-(三氟甲基)苯基]-3,4,6,7-四氢-1H-环戊[b]吡啶-2,5-二酮（外消旋物）

在80℃下搅拌1.4克（14.4毫摩尔）3-氨基环戊-2-烯-1-酮和5.4克（14.4毫摩尔）5-[5- 氯-2-(三氟甲基)亚苄基]-2,2-二甲基-1,3-二氧杂环己烷-4,6-二酮在60毫升二氧杂环己 烷中的溶液。在3小时后，将反应混合物冷却至室温并加入2.2克（5.7毫摩尔）HATU和1.0毫 升（5.7毫摩尔）N,N-二异丙基乙基胺，在室温下搅拌整夜并在真空中浓缩。在添加水/二乙 醚和相分离后，滤出形成的沉淀物，用二乙醚洗涤并在真空中干燥。将水/乙酸乙酯添加到 母液中并在相分离后，将有机相干燥（硫酸钠），过滤并在真空中浓缩。粗产物然后通过快速 色谱法（硅胶-60，洗脱液：二氯甲烷-甲醇混合物）提纯。产量：1.46克（理论值的28%，92%纯 度）和1.30克（理论值的26%，93%纯度）。

LC-MS[方法1]:R_t=0.85min；MS(ESIpos):m/z=330(M+H)⁺

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]=10.85(s,1H),7.74(d,1H),7.52 (dd,1H),7.24(d,1H),4.18(t,1H),2.98(dd,1H),2.78(dd,1H),2.67-2.60 (m,1H),2.47-2.33(m,3H)。

实施例6.1C

4-[5-氯-2-(三氟甲基)苯基]-6,7-二氢-1H-环戊[b]吡啶-2,5-二酮

将21.3克（38.9毫摩尔，5.0当量）硝酸铈(IV)铵在45毫升水中的溶液添加到2.8克（7.8 毫摩尔，93%纯度）4-[(5-氯-2-(三氟甲基)苯基)-3,4,6,7-四氢-1H-环戊[b]吡啶-2,5-二 酮（外消旋物）在130毫升二氧杂环己烷中的溶液中并在50℃下搅拌5小时。在冷却至室温 后，将反应混合物在真空中浓缩。在添加水/乙酸乙酯和相分离后，有机相用水和用饱和氯 化钠水溶液洗涤，干燥（硫酸钠），过滤并在真空中浓缩。残留物与二乙醚搅拌，过滤并在减 压下干燥。产量：1.7克（理论值的63%）。

LC-MS[方法1]:R_t=0.83min；MS(ESIpos):m/z=328(M+H)⁺

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]=12.74(s,1H),7.82(d,1H),7.70 (d,1H),7.44(s,1H),6.10(s,1H),2.98-2.92(m,2H),2.40-2.44(m,2H)。

实施例6.1D

{4-[5-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2,5-二氧代-2,5,6,7-四氢-1H-环戊[b]吡啶-1-基}乙 酸叔丁酯

将700毫克（2.1毫摩尔）4-[5-氯-2-(三氟甲基)苯基]-6,7-二氢-1H-环戊[b]吡啶-2, 5-二酮、0.36毫升（2.5毫摩尔，1.2当量）溴乙酸叔丁酯和425毫克（1.5毫摩尔）碳酸钾在15 毫升二甲基甲酰胺中的溶液在120℃下搅拌2小时。在冷却至室温后，将反应混合物在真空 中浓缩。在添加水/乙酸乙酯和相分离后，有机相用水和用饱和氯化钠水溶液洗涤，干燥（硫 酸钠），过滤并在真空中浓缩。粗产物然后通过通过快速色谱法（硅胶-60，洗脱液：环己烷- 乙酸乙酯混合物）提纯。产量：625毫克（理论值的67%）。

LC-MS[方法1]:R_t=1.11min；MS(ESIpos):m/z=442(M+H)⁺

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]=7.84(d,1H),7.72(dd,1H),7.48 (d,1H),6.30(s,1H),4.79(dd,2H),3.07-3.02(m,2H),2.59-2.55(m,2H), 1.44(s,9H)。

实施例6.1E

{4-[5-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2,5-二氧代-2,5,6,7-四氢-1H-环戊[b]吡啶-1-基}乙 酸

605毫克（1.3毫摩尔）{4-[5-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2,5-二氧代-2,5,6,7-四氢-1H- 环戊[b]吡啶-1-基}乙酸叔丁酯根据通用方法2A用TFA皂化。产量：690毫克（定量）。

LC-MS[方法1]:R_t=0.79min；MS(ESIpos):m/z=386(M+H)⁺。

实施例6.2A

5-{4-[({4-[5-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2,5-二氧代-2,5,6,7-四氢-1H-环戊[b]吡啶- 1-基}乙酰基)氨基]苯基}-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-1-甲酸叔丁酯

根据通用方法1A，使100毫克（0.4毫摩尔）{4-[5-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2,5-二氧代- 2,5,6,7-四氢-1H-环戊[b]吡啶-1-基}乙酸与83毫克（0.27毫摩尔，1.1当量）5-(4-氨基苯 基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-1-甲酸叔丁酯反应。产量：36毫克（理论值的15%，纯度 64%）。

LC-MS[方法1]:R_t=1.14min；MS(ESIpos):m/z=643(M+H)⁺。

实施例7.1A

(4-羟基-2,5-二氧代-2,5,6,7-四氢-1H-环戊[b]吡啶-1-基)乙酸叔丁酯

将1.5克（7.1毫摩尔）N-(3-氧代环戊-1-烯-1-基)甘氨酸叔丁酯和3.62克（7.81毫摩 尔）双(2,4,6-三氯苯基丙二酸酯)在20毫升二乙二醇二甲醚中的溶液在100℃下搅拌3小 时。将反应混合物冷却至室温并在减压下除去溶剂。残留物与50毫升二乙醚搅拌，并抽吸出 沉淀物，用二乙醚洗涤并在真空中干燥。产量：1.0克（理论值的49%，纯度89%）。

LC-MS[方法1]:R_t=0.86min；MS(ESIpos):m/z=280(M+H)⁺.

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]=11.17(br.s,1H),5.54(s,1H), 4.63(s,2H),2.92-2.88(m,2H),2.55-2.49(m,2H),1.42(s,9H)。

实施例7.1B

(2,5-二氧代-4-{[(三氟甲基)磺酰基]氧基}-2,5,6,7-四氢-1H-环戊[b]吡啶-1-基) 乙酸叔丁酯

在0℃下，将580微升（4.18毫摩尔，1.1当量）三乙胺添加到1.06克（3.80毫摩尔）(4-羟 基-2,5-二氧代-2,5,6,7-四氢-1H-环戊[b]吡啶-1-基)乙酸叔丁酯在21毫升二氯甲烷中的 溶液中。随后，逐份加入1.49克（4.18毫摩尔，1.1当量）N,N-双(三氟甲磺酰基)苯胺。在室温 下搅拌2天。在减压下除去溶剂且残留物通过MPLC（120克，30μm筒，50ml/min，环己烷/乙 酸乙酯梯度:10min100%环己烷，15min75%环己烷，35min66%环己烷，1min50%环己 烷，然后等度）提纯。产量：950毫克（理论值的55%，纯度90%）。

LC-MS[方法1]:R_t=1.03min；MS(ESIpos):m/z=412(M+H)⁺

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]=6.64(s,1H),4.76(s,2H),3.10- 3.07(m,2H),2.73-2.69(m,2H),1.43(s,9H)。

实施例7.1C

[4-(5-氯-2-氰基苯基)-2,5-二氧代-2,5,6,7-四氢-1H-环戊[b]吡啶-1-基)乙酸叔丁 酯

首先在用氩气吹扫并经加热的烧瓶中装入472毫克（1.15毫摩尔）(2,5-二氧代-4- {[(三氟甲基)磺酰基]氧基}-2,5,6,7-四氢-1H-环戊[b]吡啶-1-基)乙酸叔丁酯、239毫克 （1.32毫摩尔，1.15当量）5-氯-2-氰基苯基硼酸、478毫克（3.44毫摩尔，3.0当量）碳酸钾和 133毫克（0.115毫摩尔，0.1当量）四(三苯膦)钯(0)，抽空三次并用氩气吹扫。加入15毫升二 氧杂环己烷并将反应混合物在110℃下搅拌16小时。在冷却至室温后，反应混合物然后经C 盐过滤并将滤液在减压下浓缩。粗产物通过MPLC（120克，30μm筒，50ml/min，环己烷/乙酸 乙酯梯度:10min100%环己烷，15min75%环己烷，35min66%环己烷，1min50%环己 烷，然后25min等度）提纯。产量：236毫克（理论值的50%）。

LC-MS[方法1]:R_t=1.00min；MS(ESIneg):m/z=397[M+H]^-

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]=7.97(d,1H),7.74(dd,1H),7.68 (d,1H),6.49(s,1H),4.81(s,2H),3.10-3.05(m,2H),2.64-2.60(m,2H), 1.45(s,9H)。

实施例7.1D

[4-(5-氯-2-氰基苯基)-2,5-二氧代-2,5,6,7-四氢-1H-环戊[b]吡啶-1-基]乙酸

150毫克（380微摩尔）[4-(5-氯-2-氰基苯基)-2,5-二氧代-2,5,6,7-四氢-1H-环戊[b] 吡啶-1-基]乙酸叔丁酯根据通用方法2A用TFA皂化。产量：120毫克（理论值的90%）。

LC-MS[方法1]:R_t=0.65min.；MS(ESIpos):m/z=343(M+H)⁺

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]=13.4(br.s,1H),7.97(d,1H),7.74 (dd,1H),7.69(d,1H),6.49(s,1H),4.82(s,2H),3.13-3.07(m,2H),2.64- 2.59(m,2H)。

实施例7.2A

4-({[4-(5-氯-2-氰基苯基)-2,5-二氧代-2,5,6,7-四氢-1H-环戊[b]吡啶-1-基]乙酰 基}氨基)苯甲酸叔丁酯

根据通用方法1A，使90毫克（0.26毫摩尔）[4-(5-氯-2-氰基苯基)-2,5-二氧代-2,5,6, 7-四氢-1H-环戊[b]吡啶-1-基]乙酸与61毫克（0.32毫摩尔，1.2当量）4-氨基苯甲酸叔丁酯 反应。产量：55毫克（理论值的40%）。

LC-MS[方法1]:R_t=1.12min.；MS(ESIneg):m/z=516(M+H)^-

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]=10.88(s,1H),7.98(d,1H),7.89 (d,2H),7.76-7.68(m,4H),6.49(s,1H),4.97(s,2H),3.17-3.12(m,2H), 2.65-2.60(m,2H),1.54(s,9H)。

实施例7.3A

5-[4-({[4-(5-氯-2-氰基苯基)-2,5-二氧代-2,5,6,7-四氢-1H-环戊[b]吡啶-1-基] 乙酰基}氨基)苯基]-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-1-甲酸叔丁酯

根据通用方法1A使118毫克（0.296毫摩尔，86%纯度）[4-(5-氯-2-氰基苯基)-2,5-二氧 代-2,5,6,7-四氢-1H-环戊[b]吡啶-1-基]乙酸与112毫克（0.326毫摩尔，1.2当量，80%纯 度）5-(4-氨基苯基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-1-甲酸叔丁酯反应。产量：100毫克（理论 值的55%）。

LC-MS[方法1]:R_t=1.04min.；MS(ESIpos):m/z=600(M+H)⁺

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]=12.95(d,1H),10.72(s,1H),7.98 (d,1H),7.76-7.67(m,6H),6.51-6.49(m,2H),4.97(s,2H),3.17-3.13(m, 2H),2.65-2.61(m,2H),1.50(s,9H)。

实施例7.4A

(4-羟基-2,5-二氧代-5,6,7,8-四氢喹啉-1(2H)-基)乙酸叔丁酯

将2.00克（8.88毫摩尔）(3-氧代环己-1-烯-1-基)甘氨酸叔丁酯和4.52克（9.77毫摩 尔，1.1当量）双(2,4,6-三氯苯基丙二酸酯)在25毫升二乙二醇二甲基醚中的溶液在100℃ 下搅拌5小时。将反应混合物冷却至室温并在减压下除去溶剂。将残留物溶解在8毫升二氯 甲烷中并通过MPLC（120克，30μm筒，50ml/min，环己烷/乙酸乙酯梯度:10min100%环己 烷，15min75%环己烷，35min66%环己烷，1min50%环己烷，然后25min等度）提纯。产 量：720毫克（理论值的27%）。

LC-MS[方法1]:R_t=0.83min；MS(ESIpos):m/z=294(M+H)⁺

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]=12.75(br.s,1H),5.60(s,1H), 4.81(s,2H),2.92-2.87(m,2H),2.61-2.56(m,2H),2.07-1.99(m,2H),1.43 (s,9H)。

实施例7.4B

[2,5-二氧代-4-{[(三氟甲基)磺酰基]氧基}-5,6,7,8-四氢喹啉-1(2H)-基]乙酸叔丁 酯

在0℃下，将375微升（2.70毫摩尔，1.1当量）三乙胺添加到717毫克（2.44毫摩尔）(4-羟 基-2,5-二氧代-5,6,7,8-四氢喹啉-1(2H)-基乙酸叔丁酯在14毫升二氯甲烷中的溶液中。 随后，逐份加入961毫克（2.70毫摩尔，1.1当量）N,N-双(三氟甲磺酰基)苯胺并在60℃下搅 拌6天。在冷却至室温后，在减压下除去溶剂，残留物通过MPLC（120克，30μm筒，50ml/min， 环己烷/乙酸乙酯梯度:10min100%环己烷，15min75%环己烷，35min66%环己烷，1 min50%环己烷，然后等度）提纯。产量：128毫克（理论值的12%）。

LC-MS[方法1]:R_t=1.07min；MS(ESIneg):m/z=424[M+H]⁺

¹HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ[ppm]=6.55(s,1H),4.86(s,2H),2.99-2.94 (m,2H),2.54-2.45(m,2H),2.06-1.98(m,2H),1.43(s,9H)。

实施例7.4C

[4-(5-氯-2-氰基苯基)-2,5-二氧代-5,6,7,8-四氢喹啉-1(2H)-基]乙酸叔丁酯

首先在用氩气吹扫并经加热的烧瓶中装入125毫克（0.29毫摩尔）[2,5-二氧代-4- {[(三氟甲基)磺酰基]氧基}-5,6,7,8-四氢喹啉-1(2H)-基]乙酸叔丁酯、61.3毫克（0.34毫 摩尔，1.15当量）5-氯-2-氰基苯基硼酸、122毫克（0.88毫摩尔，3.0当量）碳酸钾和33.9毫克 （0.029毫摩尔，0.1当量）四(三苯膦)钯(0),抽空三次并用氩气吹扫。加入15毫升二氧杂环 己烷并将反应混合物在110℃下搅拌16小时。在冷却至室温后，反应混合物然后经C盐过滤 并将滤液在减压下浓缩。粗产物通过制备型HPLC（柱:ChromatorexC18,10μm,125*30 mm,乙腈/水+0.05%甲酸梯度:0-3min10%乙腈，至35min90%乙腈和另外3min90%乙 腈）提纯。产量：45毫克（理论值的37%）。

LC-MS[方法1]:R_t=1.05min.；MS(ESIneg):m/z=411(M+H)^-

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]=7.88(d,1H),7.63(dd,1H),7.55 (d,1H),6.36(s,1H),4.91(d,2H),3.06-2.88(m,2H),2.44-2.37(m,2H), 2.12-1.96(m,2H),1.45(s,9H)。

实施例7.4D

[4-(5-氯-2-氰基苯基)-2,5-二氧代-5,6,7,8-四氢喹啉-1(2H)-基]乙酸

44.0毫克（107微摩尔）[4-(5-氯-2-氰基苯基)-2,5-二氧代-5,6,7,8-四氢喹啉-1 (2H)-基]乙酸叔丁酯根据通用方法2A用TFA皂化。产量：38毫克（定量）。

LC-MS[方法3]:R_t=1.67min.；MS(ESIpos):m/z=357(M+H)⁺

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]=13.39(br.s,1H),7.88(d,1H), 7.63(dd,1H),7.56(d,1H),6.36(s,1H),4.97-4.86(m,2H),3.10-2.89(m, 2H),2.44-2.39(m,2H),2.10-1.97(m,2H)。

实施例7.5A

4-({[4-(5-氯-2-氰基苯基)-2,5-二氧代-5,6,7,8-四氢喹啉-1(2H)-基]乙酰基}氨 基)苯甲酸叔丁酯

根据通用方法1A，使40.0毫克（0.112毫摩尔）[4-(5-氯-2-氰基苯基)-2,5-二氧代-5, 6,7,8-四氢喹啉-1(2H)-基]乙酸与26.0毫克（0.135毫摩尔，1.2当量）4-氨基苯甲酸叔丁酯 反应。产量：16毫克（理论值的26%）。

LC-MS[方法3]:R_t=2.46min.；MS(ESIneg):m/z=531(M+H)^-

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]=10.86(s,1H),7.89(d,1H),7.88 (d,2H),7.72(d,2H),7.64(dd,1H),7.56(d,1H),6.37(s,1H),5.07(q, 2H),3.16-2.95(m,2H),2.45-2.38(m,2H),2.10-1.99(m,2H),1.54(s,9H)。

实施例

通用方法1:酰胺与羧酸的偶联

在氩气下和在室温下，将相应的胺（1.1当量）、N,N-二异丙基乙基胺（2.2当量）和HATU （1.2当量）在少量DMF中的溶液添加到相应的羧酸（1.0当量）在二甲基甲酰胺（大约12ml/ mmol）中的溶液中。在室温下搅拌该反应混合物。在添加水/乙酸乙酯和相分离后，有机相用 水和用饱和氯化钠水溶液洗涤，干燥（硫酸钠），过滤并在真空中浓缩。粗产物然后通过制备 型HPLC（ReprosilC18，水/乙腈梯度或水/甲醇梯度）提纯。

通用方法2:使用TFA皂化叔丁酯或Boc-保护的胺

在室温下，将TFA（20当量）添加到相应的叔丁酯衍生物或Boc-保护的胺（1.0当量）在二 氯甲烷（大约25ml/mmol）中的溶液中并在室温下搅拌1-8小时。随后，将反应混合物在真空 中浓缩。残留物与二氯甲烷共蒸发三次。粗产物然后通过制备RP-HPLC（洗脱液：乙腈/水梯 度或水/甲醇梯度）提纯。

通用方法3:甲酯或乙酯的皂化

在室温下，将氢氧化锂（2-4当量）添加到相应的甲酯或乙酯（1.0当量）在四氢呋喃/水 （3:1，大约15ml/mmol）混合物中的溶液中，并在室温下搅拌。然后使用盐酸水溶液（1N）将 反应混合物调节至pH1。在添加水/乙酸乙酯后，水相用乙酸乙酯萃取三次。将合并的有机 相干燥（硫酸钠），过滤并在真空中浓缩。粗产物然后通过快速色谱法（硅胶60，洗脱液：环己 烷/乙酸乙酯混合物或二氯甲烷/甲醇混合物）或通过制备型HPLC（ReprosilC18，水/乙腈 梯度或水/甲醇梯度）提纯。

实施例1

2-[4-(3-氯苯基)-2,5-二氧代-2,5,6,7-四氢-1H-吡咯并[3,4-b]吡啶-1-基]-N-[4- (1H-四唑-5-基)苯基]乙酰胺

将369毫克（0.67毫摩尔，4.0当量）硝酸铈(IV)铵在0.7毫升水中的溶液添加到78毫克 （0.17毫摩尔）2-[4-(3-氯苯基)-2,5-二氧代-2,3,4,5,6,7-六氢-1H-吡咯并[3,4-b]吡啶- 1-基]-N-[4-(1H-四唑-5-基)苯基]乙酰胺（外消旋物）在2.7毫升丙酮中的溶液中并在室温 下搅拌整夜。然后将反应混合物添加到水中，滤出沉淀物并在真空下干燥。粗产物通过制备 型HPLC（SunfireC185μm，水-甲醇梯度）提纯。产量：32毫克（理论值的41%）。

LC-MS[方法4]:R_t=0.86min；MS(ESIpos):m/z=462(M+H)⁺

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]=10.81(s,1H),8.32(s,1H),8.00 (d,2H),7.79(d,2H),7.65(s,1H),7.56-7.44(m,3H),6.42(s,1H),4.86 (s,2H),4.39(s,2H)。

实施例2

2-[4-(2,5-二氯苯基)-6-甲基-2,5-二氧代-2,5,6,7-四氢-1H-吡咯并[3,4-b]吡啶- 1-基]-N-[4-(1H-四唑-5-基)苯基]乙酰胺

根据通用方法1，使105毫克（0.16毫摩尔，56%纯度）[4-(2,5-二氯苯基)-6-甲基-2,5- 二氧代-2,5,6,7-四氢-1H-吡咯并[3,4-b]吡啶-1-基]乙酸与28毫克（0.18毫摩尔，1.1当 量）4-(1H-四唑-5-基)苯胺反应。产量：12毫克（理论值的14%）。

LC-MS[方法1]:R_t=0.79min；MS(ESIneg):m/z=510[M+H]⁺

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]=10.87(s,1H),8.02(d,2H),7.82 (d,2H),7.57(d,1H),7.53(dd,1H),7.47(d,1H),6.37(s,1H),4.89(s, 2H),4.50(s,2H),2.92(s,3H)。

实施例3

2-[4-(2,5-二氯苯基)-2,5-二氧代-2,5,6,7-四氢-1H-环戊[b]吡啶-1-基]-N-[4- (1H-四唑-5-基)苯基]乙酰胺

将443毫克（0.8毫摩尔）硝酸铈(IV)铵在0.8毫升水中的溶液添加到113毫克（0.2毫摩 尔，89%纯度）2-[4-(2,5-二氯苯基)-2,5-二氧代-2,3,4,5,6,7-六氢-1H-环戊[b]吡啶-1- 基]-N-[4-(1H-四唑-5-基)苯基]乙酰胺（外消旋物）在3毫升丙酮中的溶液中并在室温下搅 拌整夜，然后在真空中浓缩。在添加水/乙酸乙酯和相分离后，有机相用水和用饱和氯化钠 水溶液洗涤，干燥（硫酸钠），过滤并在真空中浓缩。粗产物通过制备型HPLC（Kromasil100 C18，乙腈/水+2%甲酸）提纯。产量：8毫克（理论值的8%）。

LC-MS[方法1]:R_t=0.87min；MS(ESIneg):m/z=495[M+H]⁺

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]=16.77(br.s,1H),10.88(s,1H), 8.02(d,2H),7.83(d,2H),7.56(s,1H),7.54(d,1H),7.45(d,1H),6.34 (s,1H),4.97(s,2H),3.19-3.05(m,2H),2.68-2.55(m,2H)。

实施例4

4-({[4-(2,5-二氯苯基)-2,5-二氧代-2,5,6,7-四氢-1H-环戊[b]吡啶-1-基]乙酰基} 氨基)苯甲酸

43毫克（0.08毫摩尔，94%纯度）4-({[4-(2,5-二氯苯基)-2,5-二氧代-2,5,6,7-四氢- 1H-环戊[b]吡啶-1-基]乙酰基}氨基)苯甲酸叔丁酯根据通用方法2用TFA皂化。产量：39毫 克（理论值的99%，纯度92%）。

LC-MS[方法1]:R_t=0.86min；MS(ESIneg):m/z=471[M+H]⁺

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]=10.87(s,1H),7.93(d,2H),7.72 (d,2H),7.57(d,1H),7.52(dd,1H),7.45(d,1H),6.33(s,1H),4.96(s, 2H),3.15-3.07(br.s,2H),2.63-2.(br.s,2H)。

实施例5

2-[4-(2,5-二氯苯基)-2,5-二氧代-2,5,6,7-四氢-1H-环戊[b]吡啶-1-基]-N-[4-(5- 氧代-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基)苯基]乙酰胺

根据通用方法1，使120毫克（0.29毫摩尔，86%纯度）[4-(2,5-二氯苯基)-2,5-二氧代- 2,5,6,7-四氢-1H-环戊[b]吡啶-1-基]乙酸与57毫克（0.32毫摩尔）3-(4-氨基苯基)-1,2, 4-噁二唑-5(4H)-酮反应。产量：14毫克（理论值的9%）。

LC-MS[方法1]:R_t=0.91min；MS(ESIpos):m/z=511(M+H)⁺

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]=10.76(s,1H),7.76(d,2H),7.70 (d,2H),7.56(d,1H),7.51(dd,1H),7.44(d,1H),6.33(s,1H),4.95(s, 2H),3.15-3.07(br.s,2H),2.63-2.55(br.s,2H)。

实施例6

2-[4-(2,5-二氯苯基)-2,5-二氧代-2,5,6,7-四氢-1H-环戊[b]吡啶-1-基]-N-{4-[3- (三氟甲基)-1H-1,2,4-三唑-5-基]苯基}乙酰胺

根据通用方法1，使120毫克（0.29毫摩尔，86%纯度）[4-(2,5-二氯苯基)-2,5-二氧代- 2,5,6,7-四氢-1H-环戊[b]吡啶-1-基]乙酸与77毫克（0.32毫摩尔，1.1当量）4-[3-(三氟甲 基)-1H-1,2,4-三唑-5-基]苯胺反应。产量：35毫克（理论值的21%）。

LC-MS[方法1]:R_t=1.05min；MS(ESIpos):m/z=562(M+H)⁺

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]=15.18(s,1H),10.85(s,1H),8.01 (d,2H),7.80(d,2H),7.55(d,1H),7.53(dd,1H),7.44(d,1H),6.33(s, 1H),4.97(s,2H),3.16-3.08(br.s,2H),2.64-2.56(br.s,2H)。

实施例7

2-[4-(2,5-二氯苯基)-2,5-二氧代-2,5,6,7-四氢-1H-环戊[b]吡啶-1-基]-N-[4-(5- 氧代-2,5-二氢-1H-吡唑-3-基)苯基]乙酰胺

53毫克（0.09毫摩尔）5-[4-({[4-(2,5-二氯苯基)-2,5-二氧代-2,5,6,7-四氢-1H-环 戊[b]吡啶-1-基]乙酰基}氨基)苯基]-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-1-甲酸叔丁酯根据通用 方法2用TFA皂化。产量：5毫克（理论值的11%）。

LC-MS[方法1]:R_t=0.86min；MS(ESIpos):m/z=509(M+H)⁺

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]=11.98(s,1H),10.65(s,1H),9.57 (s,1H),7.63(br.s,4H),7.57(d,1H),7.52(dd,1H),7.45(d,1H),6.33 (s,1H),5.85(br.s,1H),4.96(s,2H),3.16-3.04(br.s,2H),2.63-2.55 (br.s,2H)。

实施例8

2-[4-(2,5-二氯苯基)-2,5-二氧代-2,5,6,7-四氢-1H-环戊[b]吡啶-1-基]-N-[4- (1H-咪唑-5-基)苯基]乙酰胺

根据通用方法1，使102毫克（0.25毫摩尔，86%纯度）[4-(2,5-二氯苯基)-2,5-二氧代- 2,5,6,7-四氢-1H-环戊[b]吡啶-1-基]乙酸与44毫克（0.28毫摩尔，1.1当量）4-(1H-咪唑- 5-基)苯胺反应。产量：23毫克（理论值的18%）。

LC-MS[方法1]:R_t=0.75min；MS(ESIpos):m/z=493(M+H)⁺

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]=10.58(s,1H),7.90(br.s,1H), 7.73(d,2H),7.62(d,2H),7.59-7.55(m,2H),7.53(dd,1H),7.44(d,1H), 6.33(s,1H),4.94(s,2H),3.12(br.s,2H),2.60(br.s,2H)。

实施例9

2-[4-(2-溴-5-氯苯基)-2,5-二氧代-2,5,6,7-四氢-1H-环戊[b]吡啶-1-基]-N-[4- (1H-四唑-5-基)苯基]乙酰胺

根据通用方法1，使89毫克（0.21毫摩尔，93%纯度）[4-(2-溴-5-氯苯基)-2,5-二氧代- 2,5,6,7-四氢-1H-环戊[b]吡啶-1-基]乙酸与37毫克（0.23毫摩尔，1.1当量）4-(1H-四唑- 5-基)苯胺反应。产量：28毫克（理论值的25%）。

LC-MS[方法1]:R_t=0.83min；MS(ESIpos):m/z=539(M+H)⁺

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]=10.88(s,1H),8.02(d,2H),7.83 (d,2H),7.72(d,1H),7.44(dd,1H),7.41(d,1H),6.30(s,1H),4.97(s, 2H),3.17-3.09(br.s,2H),2.63-2.56(br.s,2H)。

实施例10

2-[4-(2-溴-5-氯苯基)-2,5-二氧代-2,5,6,7-四氢-1H-环戊[b]吡啶-1-基]-N-[4- (5-氧代-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基)苯基]乙酰胺

根据通用方法1，使90毫克（0.21毫摩尔，94%纯度）[4-(2-溴-5-氯苯基)-2,5-二氧代- 2,5,6,7-四氢-1H-环戊[b]吡啶-1-基]乙酸与45毫克（0.26毫摩尔，1.2当量）3-(4-氨基苯 基)-1,2,4-噁二唑-5(4H)-酮反应。产量：43毫克（理论值的36%）。

LC-MS[方法1]:R_t=0.92min；MS(ESIpos):m/z=555(M+H)⁺

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]=12.86(s,1H),10.90(s,1H),7.79 (s,4H),7.72(d,1H),7.44(dd,1H),7.40(d,1H),6.29(s,1H),4.97(s, 2H),3.15-3.08(br.s,2H),2.62-2.56(br.s,2H)。

实施例11

2-{4-[5-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2,5-二氧代-2,5,6,7-四氢-1H-环戊[b]吡啶-1- 基}-N-[4-(5-氧代-2,5-二氢-1H-吡唑-3-基)苯基]乙酰胺

35毫克（0.04毫摩尔，64%纯度）5-{4-[({4-[5-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2,5-二氧代-2, 5,6,7-四氢-1H-环戊[b]吡啶-1-基}乙酰基)氨基]苯基}-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-1-甲 酸叔丁酯根据通用方法2用TFA皂化。产量：34毫克（定量）。

LC-MS[方法1]:R_t=0.89min；MS(ESIpos):m/z=543(M+H)⁺

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]=11.98(s,1H),10.65(s,1H),9.57 (s,1H),7.85(d,1H),7.74(dd,1H),7.64(br.s,4H),7.49(d,1H),6.30 (s,1H),5.85(br.s,1H),4.96(q,2H),3.15-3.08(m,2H),2.60-2.56(m, 2H)。

实施例12

4-({[4-(5-氯-2-氰基苯基)-2,5-二氧代-2,5,6,7-四氢-1H-环戊[b]吡啶-1-基]乙酰 基}氨基)苯甲酸

54毫克（0.10毫摩尔）4-({[4-(5-氯-2-氰基苯基)-2,5-二氧代-2,5,6,7-四氢-1H-环 戊[b]吡啶-1-基]乙酰基}氨基)苯甲酸叔丁酯根据通用方法2用TFA皂化并通过制备型HPLC （柱:ChromatorexC18,10μm,125mmx30mm，乙腈/水梯度:0-3min10%乙腈，至35 min90%乙腈和另外3min90%乙腈）提纯。产量：27毫克（理论值的55%）。

LC-MS[方法1]:R_t=0.80min；MS(ESIpos):m/z=461(M+H)⁺

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]=12.77(br.s,1H),10.87(s,1H), 7.98(d,1H),7.92(d,2H),7.77-7.68(m,4H),6.50(s,1H),4.98(s,2H), 3.17-3.12(m,2H),2.66-2.60(m,2H)。

实施例13

2-[4-(5-氯-2-氰基苯基)-2,5-二氧代-2,5,6,7-四氢-1H-环戊[b]吡啶-1-基]-N-[4- (5-氧代-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基)苯基]乙酰胺

根据通用方法1，使90毫克（0.26毫摩尔）[4-(5-氯-2-氰基苯基)-2,5-二氧代-2,5,6, 7-四氢-1H-环戊[b]吡啶-1-基]乙酸与56毫克（0.32毫摩尔，1.2当量）3-(4-氨基苯基)-1, 2,4-噁二唑-5(4H)-酮反应并通过制备型HPLC（柱:ChromatorexC18,10μm,125mmx 30mm，乙腈/水梯度:0-3min10%乙腈，至35min90%乙腈和另外3min90%乙腈）提纯。 产量：34毫克（理论值的25%）。

LC-MS[方法1]:R_t=0.82min；MS(ESIpos):m/z=502(M+H)⁺

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]=12.87(br.s,1H),10.92(s,1H), 7.98(d,1H),7.80(br.s,4H),7.74(dd,1H),7.68(d,1H),6.49(s,1H), 4.98(br.s,2H),3.17-3.12(m,2H),2.65-2.61(m,2H)。

实施例14

2-[4-(5-氯-2-氰基苯基)-2,5-二氧代-2,5,6,7-四氢-1H-环戊[b]吡啶-1-基]-N-[4- (5-氧代-2,5-二氢-1H-吡唑-3-基)苯基]乙酰胺

93毫克（0.16毫摩尔）5-[4-({[4-(5-氯-2-氰基苯基)-2,5-二氧代-2,5,6,7-四氢-1H- 环戊[b]吡啶-1-基]乙酰基}氨基)苯基]-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-1-甲酸叔丁酯根据通 用方法2用TFA皂化并通过制备型HPLC（柱:ChromatorexC18,10μm,125mmx30mm， 乙腈/水梯度:0-3min10%乙腈，至35min90%乙腈和另外3min90%乙腈）提纯。产量：71 毫克（理论值的90%）。

LC-MS[方法1]:R_t=0.73min；MS(ESIpos):m/z=500(M+H)⁺

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]=10.57(br.s,1H),7.98(d,1H), 7.74(dd,1H),7.70(d,1H),7.52(br.s,4H),6.49(s,1H),4.96(br.s, 3H),3.18-3.12(m,2H),2.65-2.60(m,2H).2NH-共振不可见。

实施例15

4-({[4-(5-氯-2-氰基苯基)-2,5-二氧代-5,6,7,8-四氢喹啉-1(2H)-基]乙酰基}氨 基)苯甲酸

15毫克（0.03毫摩尔）4-({[4-(5-氯-2-氰基苯基)-2,5-二氧代-5,6,7,8-四氢喹啉-1 (2H)-基]乙酰基}氨基)苯甲酸叔丁酯根据通用方法2用TFA皂化并通过制备型HPLC（柱: Kromasil,C18,5μm,250mmx20mm，乙腈/水+0.05%甲酸梯度:0-3min10%乙腈，至 33min90%乙腈和另外8min90%乙腈）提纯。产量：5.6毫克（理论值的41%）。

LC-MS[方法1]:R_t=0.83min；MS(ESIneg):m/z=474(M+H)^-

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ[ppm]=12.78(br.s,1H),10.83(s,1H), 7.92(d,2H),7.89(d,1H),7.71(d,2H),7.63(dd,1H),7.56(d,1H),6.37 (s,1H),5.08(q,2H),3.15-2.94(m,2H),2.45-2.35(m,2H),2.05-2.00(m, 2H)。

实施例16

2-[4-(5-氯-2-氰基苯基)-2,5-二氧代-5,6,7,8-四氢喹啉-1(2H)-基]-N-[4-(5-氧 代-4,5-二氢-1,2,4-噁二唑-3-基)苯基]乙酰胺

根据通用方法1，使28毫克（0.08毫摩尔）[4-(5-氯-2-氰基苯基)-2,5-二氧代-5,6,7, 8-四氢喹啉-1(2H)-基]乙酸与17毫克（0.09毫摩尔，1.2当量）3-(4-氨基苯基)-1,2,4-噁二 唑-5(4H)-酮反应并通过制备型HPLC（柱:ChromatorexC18,10μm,125mmx30mm，乙 腈/水梯度:0-3min10%乙腈，至35min90%乙腈和另外3min90%乙腈）提纯。产量：18毫 克（理论值的45%）。

LC-MS[方法1]:R_t=0.88min；MS(ESIneg):m/z=516[M+H]⁺

¹H-NMR(400MHz,DMSO-_d6):δ[ppm]=12.88(br.s,1H),10.91(s,1H), 7.89(d,1H),7.79(br.S,4H),7.64(dd,1H),7.56(d,1H),6.37(s,1H), 5.09(q,2H),3.15-2.95(m,2H),2.46-2.38(m,2H),2.11-1.99(m,2H)。

B)生理效力的评估

可以在下列检测系统中证实本发明的化合物用于治疗血栓栓塞性疾病的适用性：

a)试验描述（体外）

a.1)FXIa抑制的测量

使用利用肽类因子XIa底物的反应测定人因子XIa的酶促活性的生物化学试验体系，测 定本发明的物质的因子XIa抑制。在此，因子XIa从消化因子XIa底物上解离C末端氨基甲基 香豆素（AMC），测量其荧光。在微量滴定板中进行测定。

将受试物质溶解在二甲亚砜中并在二甲亚砜中连续稀释（3000μM至0.0078μM； 该试验中的所得最终浓度：50μM至0.00013μM）。在每种情况中，将1微升稀释的物质溶液 预先置于来自Greiner的白色微量滴定板（384孔）的孔中。然后相继添加20微升测定缓冲液 （50mM的Tris/HClpH7.4；100mM的氯化钠溶液；5mM的氯化钙溶液；0.1%的牛血清白蛋 白）和20微升来自Kordia的因子XIa（在测定缓冲液中0.45nM）。在温育15分钟后，通过添加 20微升来自Bachem的溶解在测定缓冲液（在测定缓冲液中10μM）中的因子XIa底物Boc-Glu (OBzl)-Ala-Arg-AMC引发酶反应，在室温（22℃）下温育30分钟，然后测量荧光（激发：360纳 米，发射：460纳米）。将含有受试物质的试验批次的测得发射与无受试物质的对照批次（仅 二甲亚砜，而非在二甲亚砜中的受试物质）进行比较，并由浓度/效力关系计算IC₅₀值。来自 这一试验的效力数据列在下表A中：

表A

。

a.2)选择性的测定

为了证实物质对FXIa抑制的选择性，检查受试物质对其它的人丝氨酸蛋白酶，如因子 Xa、胰蛋白酶和纤溶酶的抑制。为了测定因子Xa（1.3nmol/l，来自Kordia）、胰蛋白酶（83 mU/ml，来自Sigma）和纤溶酶（0.1μg/ml，来自Kordia）的酶促活性，将这些酶溶解（50 mmol/l的Tris缓冲液[C,C,C-三(羟甲基)氨基甲烷]、100mmol/l氯化钠、0.1%BSA[牛血 清白蛋白]、5mmol/l氯化钙，pH7.4）并在二甲亚砜中用各种浓度的受试物质以及用无受 试物质的二甲亚砜温育15分钟。然后通过添加适当的底物（用于因子Xa和胰蛋白酶的5μ mol/l来自Bachem的Boc-Ile-Glu-Gly-Arg-AMC，用于纤溶酶的550μmol/l来自Bachem的 MeOSuc-Ala-Phe-Lys-AMC）引发酶促反应。在22℃下30分钟的温育时间后，测量荧光（激发： 360纳米，发射：460纳米）。将含有受试物质的试验批次的测得发射与无受试物质的对照批 次（仅二甲亚砜，而非在二甲亚砜中的受试物质）进行比较，并由浓度/效力关系计算IC₅₀值。

a.3)凝血酶生成检测（凝血酶生成图）

在人血浆（来自Octapharma的Octaplas?）中体外测定受试物质对凝血酶生成图的影 响（根据Hemker的凝血酶生成检测）。

在根据Hemker的凝血酶生成检测中，通过测量底物I-1140（Z-Gly-Gly-Arg-AMC, Bachem）的荧光的解离产物，测定凝血酶在血浆凝固中的活性。在不同浓度的受试物质或相 应溶剂存在下进行反应。为了引发该反应，使用来自Thrombinoscope的试剂（30pM或0.1 pM重组组织因子、24μM磷脂，在HEPES中）。此外，使用来自Thrombinoscope的凝血酶校正 剂，需要其酰胺分解活性以计算含有未知量的凝血酶的样品中的凝血酶活性。根据制造商 （ThrombinoscopeBV）的说明进行试验：4微升受试物质或溶剂、76微升血浆和20微升PPP试 剂或凝血酶校正剂在37℃下温育5分钟。在添加20微升在20mMHEPES、60mg/mlBSA、102 mM氯化钙中的2.5mM凝血酶底物后，经120分钟每20秒测量凝血酶生成。使用来自Thermo Electron的荧光计（FluoroskanAscent）（配有390/460nM成对滤光片和分配器）进行测 量。

使用“thrombinoscope软件”，计算并以图形呈现凝血酶生成图。计算下列参数：滞 后时间、达峰时间、峰、ETP（内源性凝血酶潜力）和启动拖尾（starttail）。

a.4)抗凝效力的测定

在人血浆和大鼠血浆中体外测定受试物质的抗凝效力。为此，使用0.11摩尔浓度柠檬 酸钠溶液作为垫底物（Vorlage），以1:9的柠檬酸钠/血液混合比取出血液。在取出血液后立 即将其充分混合并在大约4000g下离心15分钟。吸移去上清液。

使用商业试验试剂盒（来自BoehringerMannheim的Neoplastin?或来自 InstrumentationLaboratory的Hemoliance?RecombiPlastin）在不同浓度的受试物质 或相应溶剂存在下测定凝血酶原时间（PT，同义词：凝血活酶时间，快速试验）。受试化合物 在37℃下用血浆温育3分钟。然后通过添加促凝血酶原激酶引发凝血，并测定发生凝血的时 间点。测定使凝血酶原时间翻倍的受试物质浓度。

使用商业试验试剂盒（来自Roche的PTT试剂）在不同浓度的受试物质或相应溶剂 存在下测定活化部分凝血活酶时间（APTT）。受试化合物在37℃下用血浆和PTT试剂（脑磷 脂、高岭土）温育3分钟。然后通过添加25mM氯化钙引发凝血，并测定发生凝血的时间点。测 定使APTT延长50%或翻倍的受试物质浓度。

a.5)血浆激肽释放酶活性的测定

为了测定本发明的物质的血浆激肽释放酶抑制，使用利用肽类血浆激肽释放酶底物的 反应测定人血浆激肽释放酶的酶促活性的生物化学试验体系。在此，血浆激肽释放酶从消 化血浆激肽释放酶底物上解离C末端氨基甲基香豆素（AMC），测量其荧光。在微量滴定板中 进行测定。

将受试物质溶解在二甲亚砜中并在二甲亚砜中连续稀释（3000μM至0.0078μM； 该试验中的所得最终浓度：50μM至0.00013μM）。在每种情况中，将1微升稀释的物质溶液 预先置于来自Greiner的白色微量滴定板（384孔）的孔中。然后相继添加20微升测定缓冲液 （50mM的Tris/HClpH7.4；100mM的氯化钠溶液；5mM的氯化钙溶液；0.1%的牛血清白蛋 白）和20微升来自Kordia的血浆激肽释放酶（在测定缓冲液中0.6nM）。在温育15分钟后，通 过添加20微升来自Bachem的溶解在测定缓冲液（在测定缓冲液中10μM）中的底物H-Pro- Phe-Arg-AMC引发酶促反应，在室温（22℃）下温育30分钟，然后测量荧光（激发：360纳米，发 射：460纳米）。将含有受试物质的试验批次的测得发射与无受试物质的对照批次（仅二甲亚 砜，而非在二甲亚砜中的受试物质）进行比较，并由浓度/效力关系计算IC₅₀值。

a.6)内皮完整性的测定

借助对“人脐静脉细胞”（HUVEC）的体外通透性检测表征本发明的化合物的活性。使用 EOS装置（ECIS:电子细胞基质阻抗判断；AppliedBiophysicsInc；Troy,NY），可以连续 测量跨过镀在金电极上的内皮细胞单层的跨内皮电阻（TEER）的变化。在96孔传感器电极板 （96W1E,IbidiGmbH,Martinsried）上播种HUVEC。通过用激肽原、激肽释放酶原和因子 XII（各100nM）刺激，诱发形成的融合细胞单层的过高通透性。在添加上述物质前添加本发 明的化合物。该化合物的常规浓度为1x10^-10至1x10^-6M。

a.7)内皮细胞的体外通透性的测定

在另一过高通透性模型中，测定该物质对调节大分子渗透性的活性。在纤连蛋白涂覆 的Transwell过滤膜（24孔板，具有0.4μΜ聚碳酸酯膜的6.5mm插入物（Einsatz）；Costar #3413）上播种HUVEC。该过滤膜将上部与下部细胞培养室隔开，其中融合内皮细胞层在上部 细胞培养室的底上。将250克/毫升40kDaFITCDextan（Invitrogen,D1844）添加到上室 的培养基中。通过用激肽原、激肽释放酶原和因子XII（各100nM）刺激，诱发该单层的过高 通透性。每30分钟从下室中取出培养基样品并使用荧光计测定相对荧光，其作为随时间发 生的大分子渗透性变化的参数。在添加上述物质前添加本发明的化合物。该化合物的常规 浓度为1x10^-10至1x10^-6M。

b)抗血栓形成效力的测定（体内）

b.1)与兔子的耳朵出血时间组合的动脉血栓形成模型（氯化铁(II)诱发的血栓形成）

在动脉血栓形成模型中测试FXIa抑制剂的抗血栓形成活性。在此通过对兔子颈动脉中 的一个区域造成化学伤害而引发血栓形成。同时，测定耳朵出血时间。

通过甲苯噻嗪和氯胺酮（Rompun,Bayer,5mg/kg和Ketavet,Pharmacia& UpjohnGmbH,40mg/kg体重）的肌肉内给药，将接受正常饮食并具有2.2–2.5公斤体重 的雄性兔子（Crl:KBL(NZW)BR,CharlesRiver）麻醉。还通过相同制剂（弹丸：连续输注） 经右耳静脉的静脉给药辅助麻醉。

暴露出右颈动脉后，通过在不干扰血流的情况下围绕颈动脉包裹在Parafilm?条 （25mmx12mm）上的一片滤纸（10mmx10mm），造成血管损伤。该滤纸含有100微升13% 的氯化铁(II)（Sigma）水溶液。在5分钟后，移除滤纸并用0.9%氯化钠水溶液冲洗血管两次。 在损伤后30分钟，提取出颈动脉的受损区，移除可能存在的血栓材料并称重。

分别在损伤前5分钟和2小时，将受试物质经股静脉通过静脉内给药于麻醉动物或 经管饲口服给药于清醒动物。

在颈动脉损伤后2分钟测定耳朵出血时间。为此，将左耳剃毛并平行于耳朵的纵轴 切开指定的3毫米长切口（刀片种类号10-150-10,Martin,Tuttlingen,德国）。在此注意 不要破坏可见血管。使用精确称重的滤纸片以15秒为间隔吸收可能渗出的血液，不要直接 接触伤口。作为从造成切口到在滤纸上不再察觉到血液的时间点的时间段计算出血时间。 在将滤纸片称重后计算渗血体积。

c)对外渗/水肿形成和/或眼中的新生血管的有效性的测定（体内）

c.1)在激光诱导的脉络膜新生血管模型中的物质效力的试验

这一研究用于调查受试物质在激光诱导的脉络膜新生血管的大鼠模型中对降低外渗/ 水肿形成和/或脉络膜新生血管的有效性。

为此，选择没有表现出眼科疾病迹象的Brown-Norway品种的染色的 （pigmentiert）大鼠并随机分入治疗组。在0天，通过腹腔内注射（15mg/kg甲苯噻嗪和80 mg/kg氯胺酮），将动物麻醉。在滴注1滴0.5%的托吡卡胺溶液以扩张瞳孔后，使用532nm氩 激光凝固器（直径50-75μm，强度150mW，持续时间100ms）在视神经周围6个特定位置引发 脉络膜新生血管。受试物质和相应的媒介物（Vehicle）（例如PBS，等渗食盐溶液）通过口服 或腹腔内全身给药，或通过作为滴眼剂反复给药或玻璃体内注射局部给药于眼睛。在开始 研究前测定所有动物的体重，然后在研究过程中每天测定。

在第21天，使用荧光眼底照相机（例如Kowe,HRA）进行血管造影。在麻醉下和在另 一次瞳孔扩张后，皮下注射（s.c.）10%荧光素钠染料。2-10分钟后，获取眼睛背景的照片。由 2至3名盲测（verblindet）观察者评估通过荧光素渗漏表示的外渗/水肿程度并分级为0（无 外渗）至3（超出实际损伤的强着色）的严重程度。

在第23天处死动物后，取出眼睛并在室温下在4%的低聚甲醛溶液中固定1小时。在 洗涤一次后，小心剥离视网膜并使用FITC同工凝集素B4抗体将巩膜-脉络膜复合体染色，然 后平铺到显微镜载片上。使用荧光显微镜（Apotom,Zeiss）在488纳米激发波长下评估由此 获得的制品。通过使用Axiovision4.6软件的形态学分析，计算脉络膜新生血管的面积或 体积（分别以μm2和μm3计）。

c.2)在氧诱导视网膜病变模型中的物质有效性的试验

已经表明，经氧诱导的视网膜病变是用于研究病理性视网膜血管新生的有用动物模 型。这一模型基于下述观察：视网膜中的出生后早期发育过程中的高氧导致正常视网膜血 管生长的停止或延迟。当在7天高氧期后使动物回到常氧室内空气，这相当于相对缺氧，因 为视网膜中缺少确保在常氧条件下充分供应神经组织所需的正常血管。由此造成的缺血情 形导致异常的新生血管形成，这与眼病如湿性AMD中的病理生理性新生血管形成具有一些 类似性。此外，所造成的新生血管形成非常可复制、可量化并且是用于检查各种形式的视网 膜疾病的疾病机理和可能的疗法的重要参数。

此研究的目的是检查每天全身给药剂量的受试化合物在氧诱导视网膜病变模型 中对视网膜血管生长的有效性。使C57Bl/6小鼠的新生儿和它们的母亲在出生后第7天 （PD7）暴露在高氧（70%氧气）下5天。从PD12，使小鼠处于常氧条件（室内空气，21%氧气）直至 PD17。从第12天到17天，每天用受试物质或相应的媒介物治疗小鼠。在第17天，所有小鼠用 异氟烷麻醉，然后通过颈椎骨折处死。取出眼睛并固定在4%福尔马林中。在磷酸盐缓冲的食 盐溶液中洗涤后，解剖视网膜，从中产生平铺制品，用同工凝集素B4抗体染色。使用Zeiss ApoTome进行新生血管的量化。

C)药物组合物的实施例

本发明的物质可以如下转化成药物制剂：

片剂:

组成:

100毫克实施例1的化合物、50毫克乳糖（一水合物）、50毫克玉米淀粉、10毫克聚乙烯基 吡咯烷酮（PVP25）（来自BASF,德国）和2毫克硬脂酸镁。

片剂重量212毫克，直径8毫米，曲率半径12毫米。

生产:

实施例1的化合物、乳糖和淀粉的混合物用5%的PVP水溶液（质量/质量）造粒。在干燥 后，将颗粒与硬脂酸镁混合5分钟。用常规压片机压制这种混合物（关于片剂规格，见上文）。

口服混悬剂:

组成:

1000毫克实施例1的化合物、1000毫克乙醇（96%）、400毫克Rhodigel?（黄原胶）（来自 FMC,USA）和99克水。

单剂量100毫克本发明的化合物相当于10毫升口服混悬剂。

生产:

将Rhodigel悬浮在乙醇中，将实施例1的化合物添加到该悬浮液中。在搅拌的同时加入 水。搅拌大约6小时，直至Rhodigel的溶胀结束。

局部给药于眼睛的溶液剂或混悬剂（滴眼剂）:

可以通过在无菌食盐溶液中重构本发明的化合物的冻干产物来制备局部给药于眼睛 的无菌药物制剂。适用于这种溶液剂或混悬剂的防腐剂是例如在0.001至1重量%的浓度范 围内的苯扎氯铵、硫柳汞或硝酸苯汞。