一种子宫内膜脱落细胞石蜡切片的制备方法及其在子宫内膜癌筛查中的应用

摘要

本发明涉及细胞石蜡切片技术领域，具体涉及一种子宫内膜脱落细胞石蜡切片的制备方法，包括以下步骤：（1）采集子宫内膜的脱落细胞样本，并将细胞样本投入到装有保存液的保存瓶中保存；（2）摇匀保存瓶，再将保存瓶内的液体倒入到离心管内进行离心处理，除去上清液后加入缓冲液摇匀，吸取离心管内少量的无悬浮物液体，备用；（3）将促凝剂和固定剂加入到离心管内，混匀，再次进行离心处理，除去上清液后进行冷冻处理，冷冻处理完成后，提取离心管内的细胞沉渣并用滤纸包埋，经常规固定、脱水、透明和石蜡包埋处理后制得石蜡细胞块，石蜡细胞块经切片和HE染色处理后，制得石蜡切片。该制备方法步骤简单，操作方便，制得的石蜡切片的质量好。

说明书

技术领域

本发明涉及细胞石蜡切片技术领域，具体涉及一种子宫内膜脱落细胞石蜡切片的制备方法及其在子宫内膜癌筛查中的应用。

背景技术

子宫内膜癌是女性生殖道常见的恶性肿瘤之一，近年来在全球，特别是在经济发达国家，随着代谢性疾病的增加，子宫内膜癌出现了发病率升高和发病年轻化的趋势。但目前对于子宫内膜癌的早诊还没有引起人们的重视，国内对于子宫内膜癌的筛查技术还在探讨阶段。对于绝经后出血的妇女，“宫腔镜+子宫内膜活检术”被认为是诊断子宫内膜病变的金标准，但此技术受检者需做术前检查，也有一定的风险，且受配套设备、受训技术人员操作熟练程度及场地等影响，不能在广大基层医院有效铺开。

在此背景下，近几年来国内外开发了子宫内膜采集器，运用这种器材采集可以取得子宫内膜脱落细胞，操作简单便捷，妇科医师只需简单培训，在给受检者做常规妇检时就能同步取得细胞样本；受检者也无明显疼痛、出血，甚至受检者可以自己取样。

近几年国内、外有关应用子宫内膜采集器作子宫内膜细胞学筛查的研究报道逐渐增多。文献报道子宫内膜脱落细胞样本多采用手工涂片或液基细胞制片，并采用子宫内膜细胞学诊断系统作评价、诊断子宫内膜病变。对于子宫内膜脱落细胞手工涂片或液基细胞制片，其缺点都有相似之处，因为子宫内膜采集器取得的细胞样本都带有较多子宫内膜微小组织碎片，制片后都会出现成团的腺体或小组织块，细胞密集度高，堆积重叠，观察不清，而引发漏诊或过诊现象，对于一般的病理医师，甚至是经专门培训的细胞学医师，也难以准确评价子宫内膜细胞样本的生理或病理状态，这对推广普及子宫内膜癌筛查技术造成很大的障碍。

发明内容

为了克服现有技术中存在的缺点和不足，本发明的目的在于提供一种子宫内膜脱落细胞石蜡切片的制备方法，该制备方法步骤简单，操作方便，制得的石蜡切片的质量好。

本发明的另一目的在于提供一种石蜡切片在子宫内膜癌筛查领域的应用，可以为病理医师提供有效的客观指标，解决肿瘤性病变细胞学筛查的假阴性及假阳性问题；且石蜡细胞块可以连续切片、多次使用，可以检测细胞样本的多个切面，诊断精度高；石蜡切片的制片效果接近于子宫内膜组织活检，在取样时，本发明更有利于减轻对受检者的创伤，减少出血等并发症，并且检测成本相对低。

本发明的另一目的在于提供一种应用石蜡切片进行子宫内膜癌细胞学筛查的方法，该筛查方法可以为病理医师提供有效的客观指标，解决肿瘤性病变细胞学筛查的假阴性及假阳性问题；且石蜡细胞块可以连续切片、多次使用，可以检测细胞样本的多个切面，诊断精度高；石蜡切片的检测效果接近于子宫内膜组织活检，同时比手工涂片或液基细胞制片更优；在取样时，本发明更有利于减轻对受检者的创伤，减少出血等并发症，并且检测成本相对低。

本发明的目的通过下述技术方案实现：一种子宫内膜脱落细胞石蜡切片的制备方法，包括以下步骤：（1）采集子宫内膜的脱落细胞样本，并将细胞样本投入到装有保存液的保存瓶中保存；（2）摇匀保存瓶，再将保存瓶内的液体倒入到离心管内进行离心处理，除去上清液后加入缓冲液摇匀，吸取离心管内少量的无悬浮物液体，备用；（3）将促凝剂和固定剂加入到离心管内，混匀，再次进行离心处理，除去上清液后进行冷冻处理，冷冻处理完成后，提取离心管内的细胞沉渣并用滤纸包埋，经常规固定、脱水、透明和石蜡包埋处理后制得石蜡细胞块，石蜡细胞块经切片和HE染色处理后，制得石蜡切片。

本发明的制备方法步骤简单，操作方便，制得的石蜡切片质量好，制得的石蜡切片既可看到散在细胞成分，也可见到小片状的子宫内膜组织结构，包括内膜腺体和间质成分，便于辨别子宫内膜组织的病变，其石蜡切片的检测效果接近于内膜组织活检，避免了因细胞密集、重叠，观察不清等原因而引起漏诊或过诊现象的发生；且脱落细胞样本做成了石蜡细胞块，对可疑病例可重复连续切片，多切面观察，以防止遗漏诊断，诊断准确度高。

优选的，所述步骤（1）具体为：（1）使用子宫内膜采集器采集子宫内膜细胞样本，剪断采集器的采集环，将采集环及包含的细胞样本均投入到保存瓶中保存，摇晃保存瓶，使瓶内采集环上的细胞充分涮洗到保存液中，完成子宫内膜的脱落细胞样本的采集。本发明采用子宫内膜采集器采集子宫内膜细胞样本，采集方便，剪断采集环的环柄使得采集环落入保存瓶内能够确保采集到的子宫内膜成分完全落入保存瓶内，确保能够采集到足够的子宫内膜成分。

优选的，所述步骤（1）的保存液为质量浓度为4%的中性甲醛液。选用质量浓度为4%的中性甲醛液作为保存液，有利于防止细胞自溶，保持细胞活体时的原状，且便于保存细胞内的抗原性。

优选的，所述步骤（2）中的离心处理时间为8-12min，离心的转速为800-1000r/min；所述缓冲液为：PBS缓冲液，缓冲液的加入量为2-4ml。本发明先震荡处理保存瓶内的细胞成分，再通过离心设备在800-1000r/min的转速下对保存瓶内的细胞成分进行离心处理，病变细胞、细胞碎片、炎症细胞和粘液的分离效果好。

优选的，所述步骤（3）中的促凝剂为麝香草酚蛋清液，加入量为0.6-1ml，固定剂为质量浓度为4%的中性甲醛液，加入量为1-3ml，所述冷冻处理的冷冻温度为-4℃，处理时间为16-20min。麝香草酚蛋清液作为促凝剂，呈流质状，加入沉渣内，混匀，便于样本内细胞均匀分散在蛋清中，再沿着离心管壁加入4%的中性甲醛液，离心管内的蛋清变成冻胶状，之后冷冻便结成块状，故此，麝香草酚蛋清液冷冻后凝固效果更好，便于最大限度将样本转移出来，进行下一步固定、脱水。

本发明的另一目的通过下述技术方案实现：一种根据上述的制备方法制得的石蜡切片在子宫内膜癌筛查领域的应用。本发明的应用可以为病理医师提供有效的客观指标，解决肿瘤性病变细胞学筛查的假阴性及假阳性问题；且石蜡细胞块可以连续切片、多次使用，可以检测细胞样本的多个切面，诊断精度高；石蜡切片的制片效果接近于子宫内膜组织活检，在取样时，本发明更有利于减轻对受检者的创伤，减少出血等并发症，并且检测成本相对低。

本发明的另一目的通过下述技术方案实现：一种应用石蜡切片进行子宫内膜癌细胞学筛查的方法，包括上述步骤，还包括如下步骤：（4）收集子宫内膜病变筛查的病例至少300例，取所述步骤（2）中的备用无悬浮物液体，采用沉降式液基细胞学制片法制得巴氏薄片；（5）取巴氏薄片和步骤（3）制得的石蜡切片，分别以双盲法用显微镜进行观察、评估，判断细胞样本为阴性、阳性或可疑阳性；（6）将步骤（5）中的检测得到的阳性和可疑阳性细胞样本进行分组，分为阳性组和可疑阳性组；(7)根据临床病情需要建议步骤（6）中的阳性组受检者进一步作子宫内膜活检术，以子宫内膜活检或子宫手术切除的病理诊断为金标准，最终确定检测结果为阳性或阴性；对可疑阳性组中的受检者每隔3-6个月进行一次随诊、复查，并根据临床病情变化决定是否重新采集细胞样本重复上述检测，抑或进一步做子宫内膜活检术。

本发明的筛查方法可以为病理医师提供有效的客观指标，解决肿瘤性病变细胞学筛查的假阴性及假阳性问题；且石蜡细胞块可以连续切片、多次使用，可以检测细胞样本的多个切面，诊断精度高；石蜡切片的检测效果接近于子宫内膜组织活检，同时比手工涂片或液基细胞制片更优；在取样时，本发明更有利于减轻对受检者的创伤，减少出血等并发症，并且检测成本相对低。

本发明的有益效果在于：本发明的制备方法步骤简单，操作方便，制得的石蜡切片的质量好；本发明的细胞样品的采集方法操作简便，石蜡切片的制片费用低，且容易被基层医院病理科的工作人员掌握，可以大范围推广应用。

本发明的应用可以为病理医师提供有效的客观指标，解决肿瘤性病变细胞学筛查的假阴性及假阳性问题；且石蜡细胞块可以连续切片、多次使用，可以检测细胞样本的多个切面，诊断精度高；石蜡切片的制片效果接近于子宫内膜组织活检，在取样时，本发明更有利于减轻对受检者的创伤，减少出血等并发症，并且检测成本相对低。

本发明的筛查方法可以为病理医师提供有效的客观指标，解决肿瘤性病变细胞学筛查的假阴性及假阳性问题；且石蜡细胞块可以连续切片、多次使用，可以检测细胞样本的多个切面，诊断精度高；石蜡切片的检测效果接近于子宫内膜组织活检，同时比手工涂片或液基细胞制片更优；在取样时，本发明更有利于减轻对受检者的创伤，减少出血等并发症，并且检测成本相对低。

具体实施方式

为了便于本领域技术人员的理解，下面结合实施例对本发明作进一步的说明，实施方式提及的内容并非对本发明的限定。

实施例1

一种子宫内膜脱落细胞石蜡切片的制备方法，包括以下步骤：（1）采集子宫内膜的脱落细胞样本，并将细胞样本投入到装有保存液的保存瓶中保存；（2）摇匀保存瓶，再将保存瓶内的液体倒入到离心管内进行离心处理，除去上清液后加入缓冲液摇匀，吸取离心管内少量的无悬浮物液体，备用；（3）将促凝剂和固定剂加入到离心管内，混匀，再次进行离心处理，除去上清液后进行冷冻处理，冷冻处理完成后，提取离心管内的细胞沉渣并用滤纸包埋，经常规固定、脱水、透明和石蜡包埋处理后制得石蜡细胞块，石蜡细胞块经切片和HE染色处理后，制得石蜡切片。

所述步骤（1）具体为：（1）使用子宫内膜采集器采集子宫内膜细胞样本，剪断采集器的采集环，将采集环及包含的细胞样本均投入到保存瓶中保存，摇晃保存瓶，使瓶内采集环上的细胞充分涮洗到保存液中，完成子宫内膜的脱落细胞样本的采集。

所述步骤（1）的保存液为质量浓度为4%的中性甲醛液。

所述步骤（2）中的离心处理时间为8min，离心的转速为800r/min；所述缓冲液为：PBS缓冲液，缓冲液的加入量为2ml。

所述步骤（3）中的促凝剂为麝香草酚蛋清液，加入量为0.6ml，固定剂为质量浓度为4%的中性甲醛液，加入量为1ml，所述冷冻处理的冷冻温度为-4℃，处理时间为16min。

一种根据上述制备方法制得的石蜡切片在子宫内膜癌筛查领域的应用。

一种应用石蜡切片进行子宫内膜癌细胞学筛查的方法，包括上述步骤，还包括如下步骤：（4）收集子宫内膜病变筛查的病例300例，取所述步骤（2）中的备用无悬浮物液体，采用沉降式液基细胞学制片法制得巴氏薄片；（5）取巴氏薄片和步骤（3）制得的石蜡切片，分别以双盲法用显微镜进行观察、评估，判断细胞样本为阴性、阳性或可疑阳性；（6）将步骤（5）中的检测得到的阳性和可疑阳性细胞样本进行分组，分为阳性组和可疑阳性组；(7)根据临床病情需要建议步骤（6）中的阳性组受检者进一步作子宫内膜活检术，以子宫内膜活检或子宫手术切除的病理诊断为金标准，最终确定检测结果为阳性或阴性；对可疑阳性组中的受检者每隔3-6个月进行一次随诊、复查，并根据临床病情变化决定是否重新采集细胞样本重复上述检测，抑或进一步做子宫内膜活检术。

实施例2

本实施例与实施例1的区别在于：

所述步骤（2）中的离心处理时间为9min，离心的转速为850r/min；所述缓冲液为：PBS缓冲液，缓冲液的加入量为3ml。

所述步骤（3）中的促凝剂为麝香草酚蛋清液，加入量为0.7ml，固定剂为质量浓度为4%的中性甲醛液，加入量为1.5ml，所述冷冻处理的冷冻温度为-4℃，处理时间为17min。

一种应用石蜡切片进行子宫内膜癌细胞学筛查的方法，包括上述步骤，还包括如下步骤：（4）收集子宫内膜病变筛查的病例400例，取所述步骤（2）中的备用无悬浮物液体，采用沉降式液基细胞学制片法制得巴氏薄片；（5）取巴氏薄片和步骤（3）制得的石蜡切片，分别以双盲法用显微镜进行观察、评估，判断细胞样本为阴性、阳性或可疑阳性；（6）将步骤（5）中的检测得到的阳性和可疑阳性细胞样本进行分组，分为阳性组和可疑阳性组；(7)根据临床病情需要建议步骤（6）中的阳性组受检者进一步作子宫内膜活检术，以子宫内膜活检或子宫手术切除的病理诊断为金标准，最终确定检测结果为阳性或阴性；对可疑阳性组中的受检者每隔3-6个月进行一次随诊、复查，并根据临床病情变化决定是否重新采集细胞样本重复上述检测，抑或进一步做子宫内膜活检术。

实施例3

本实施例与实施例1的区别在于：

所述步骤（2）中的离心处理时间为10min，离心的转速为900r/min；所述缓冲液为：PBS缓冲液，缓冲液的加入量为3ml。

所述步骤（3）中的促凝剂为麝香草酚蛋清液，加入量为0.8ml，固定剂为质量浓度为4%的中性甲醛液，加入量为2ml，所述冷冻处理的冷冻温度为-4℃，处理时间为18min。

一种应用石蜡切片进行子宫内膜癌细胞学筛查的方法，包括上述步骤，还包括如下步骤：（4）收集子宫内膜病变筛查的病例500例，取所述步骤（2）中的备用无悬浮物液体，采用沉降式液基细胞学制片法制得巴氏薄片；（5）取巴氏薄片和步骤（3）制得的石蜡切片，分别以双盲法用显微镜进行观察、评估，判断细胞样本为阴性、阳性或可疑阳性；（6）将步骤（5）中的检测得到的阳性和可疑阳性细胞样本进行分组，分为阳性组和可疑阳性组；(7)根据临床病情需要建议步骤（6）中的阳性组受检者进一步作子宫内膜活检术，以子宫内膜活检或子宫手术切除的病理诊断为金标准，最终确定检测结果为阳性或阴性；对可疑阳性组中的受检者每隔3-6个月进行一次随诊、复查，并根据临床病情变化决定是否重新采集细胞样本重复上述检测，抑或进一步做子宫内膜活检术。

实施例4

本实施例与实施例1的区别在于：

所述步骤（2）中的离心处理时间为11min，离心的转速为950r/min；所述缓冲液为：PBS缓冲液，缓冲液的加入量为3ml。

所述步骤（3）中的促凝剂为麝香草酚蛋清液，加入量为0.9ml，固定剂为质量浓度为4%的中性甲醛液，加入量为2.5ml，所述冷冻处理的冷冻温度为-4℃，处理时间为19min。

一种应用石蜡切片进行子宫内膜癌细胞学筛查的方法，包括上述步骤，还包括如下步骤：（4）收集子宫内膜病变筛查的病例500例，取所述步骤（2）中的备用无悬浮物液体，采用沉降式液基细胞学制片法制得巴氏薄片；（5）取巴氏薄片和步骤（3）制得的石蜡切片，分别以双盲法用显微镜进行观察、评估，判断细胞样本为阴性、阳性或可疑阳性；（6）将步骤（5）中的检测得到的阳性和可疑阳性细胞样本进行分组，分为阳性组和可疑阳性组；(7)根据临床病情需要建议步骤（6）中的阳性组受检者进一步作子宫内膜活检术，以子宫内膜活检或子宫手术切除的病理诊断为金标准，最终确定检测结果为阳性或阴性；对可疑阳性组中的受检者每隔3-6个月进行一次随诊、复查，并根据临床病情变化决定是否重新采集细胞样本重复上述检测，抑或进一步做子宫内膜活检术。

实施例5

本实施例与实施例1的区别在于：

所述步骤（2）中的离心处理时间为12min，离心的转速为1000r/min；所述缓冲液为：PBS缓冲液，缓冲液的加入量为4ml。

所述步骤（3）中的促凝剂为麝香草酚蛋清液，加入量为1ml，固定剂为质量浓度为4%的中性甲醛液，加入量为3ml，所述冷冻处理的冷冻温度为-4℃，处理时间为20min。

一种应用石蜡切片进行子宫内膜癌细胞学筛查的方法，包括上述步骤，还包括如下步骤：（4）收集子宫内膜病变筛查的病例600例，取所述步骤（2）中的备用无悬浮物液体，采用沉降式液基细胞学制片法制得巴氏薄片；（5）取巴氏薄片和步骤（3）制得的石蜡切片，分别以双盲法用显微镜进行观察、评估，判断细胞样本为阴性、阳性或可疑阳性；（6）将步骤（5）中的检测得到的阳性和可疑阳性细胞样本进行分组，分为阳性组和可疑阳性组；(7)根据临床病情需要建议步骤（6）中的阳性组受检者进一步作子宫内膜活检术，以子宫内膜活检或子宫手术切除的病理诊断为金标准，最终确定检测结果为阳性或阴性；对可疑阳性组中的受检者每隔3-6个月进行一次随诊、复查，并根据临床病情变化决定是否重新采集细胞样本重复上述检测，抑或进一步做子宫内膜活检术。

上述实施例为本发明较佳的实现方案，除此之外，本发明还可以其它方式实现，在不脱离本发明构思的前提下任何显而易见的替换均在本发明的保护范围之内。