哥纳香内酯C抑制血管平滑肌细胞增殖与迁移的用途

摘要

本发明涉及通过施用治疗有效量的哥纳香内酯C，以及含有哥纳香内酯C的药物组合物、药盒和/或含有哥纳香内酯C的器械如支架等，抑制平滑肌细胞增殖和/或迁移而治疗或预防疾病状态的方法，所述疾病选自因内皮损伤、血管平滑肌细胞增生、基质沉积所致的血管壁增厚和管腔狭窄性心脑血管疾病，包括动脉粥样硬化、血管成形术后再狭窄、高血压、肺动脉高压、糖尿病血管病变引起的疾病。

说明书

技术领域

本发明属于医药领域，具体涉及哥纳香内酯C抑制血管平滑肌细胞增殖与迁移的新用途，更具体而言，本发明涉及抑制平滑肌细胞增殖和迁移的方法，包括向需要的哺乳动物施用治疗有效量的哥纳香内酯C，以及含有哥纳香内酯C的药物组合物和药盒，或者通过抑制平滑肌细胞增殖和/或迁移而治疗或预防疾病状态的方法，包括向需要的哺乳动物施用治疗有效量的哥纳香内酯C，所述疾病选自因内皮损伤、血管平滑肌细胞增生、基质沉积所致的血管壁增厚和管腔狭窄性心血管疾病，包括动脉粥样硬化、血管成形术后再狭窄、高血压、肺动脉高压、糖尿病血管病变引起的疾病。

背景技术

大花哥纳香(Goniothalamusgriffithii)是番荔枝科哥纳香属的植物。该属植物多为东南亚及我国南方省区的民间草药，常用作镇痛药和杀虫药。目前，在大花哥纳香植物中提取出多种活性成分，包括：番荔枝内酯(acetogenins),苯乙烯吡喃酮(styrylpyrones)以及生物碱(alkaloids)类化合物。大花哥纳香提取物对多种肿瘤细胞有较强的细胞毒作用。

哥纳香内酯C(GoniolactonesC)，是从哥纳香属植物景洪哥纳香(GoniothalamuscheliensisHu)根茎的95％乙醇提取物中分离得到的，其结构上属于苯乙烯吡喃酮类似物，哥纳香内酯C(GoniolactonesC)的结构如下：

苯乙烯吡喃酮具有较强的抗真菌活性和肿瘤细胞周期抑制作用，而在心脑血管系统疾病的细胞模型上鲜有此类化合物报道。

血管壁由血管内膜、中膜和外膜层组成，是组织和器官的代谢、养分供应、血压调节等重要功能维持的生理性结构。血管内膜(tunicaintima)是管壁的最内层，由内皮和内皮下层组成，是三层中最薄的一层；中膜(tunicamedia)位于内膜和外膜之间，主要由平滑肌细胞组成。一般说来，血管壁受损，通过细胞内的信号转导可引起许多原瘤基因的表达和细胞因子生成，从而使血管平滑肌细胞增殖和凋亡的平衡被打破，导致血管平滑肌细胞向内膜下迁移、并异常增殖，最终引起血管内膜增厚。

血管内膜增厚，是导致血管壁增厚和管腔狭窄性心脑血管疾病，如动脉粥样硬化性疾病、血管成形术后再狭窄、高血压、肺动脉高压、糖尿病血管病变引起的疾病的病理学基础。因此，通过寻找抗平滑肌细胞迁移和增殖达到抑制血管内膜增厚的药物，是缓解高血压血管病变，延缓终末期肾病，改善糖尿病血管病变，预防缺血性卒中和冠心病，治疗肺动脉高压和动脉样硬化性疾病的重要手段，和药物开发方向。

研究表明，血小板源性生长因子(PlateletDerivedGrowthFactor,PDGF)是重要的促有丝分裂因子，包括三种主要的二聚体结构，即PDGF-AA，PDGF-BB及PDGF-AB，能促进特定细胞群分裂增殖。当血管受到机械损伤或者其他因素刺激时，局部PDGF-BB分泌增加。后者与平滑肌细胞膜上β型PDGF受体(PDGFR)结合，促使两个受体分子形成二聚体，激活细胞内结构域酪氨酸残基自身磷酸化，并促使靶蛋白的酪氨酸残基磷酸化，从而将信号传入细胞内，经级联式放大瀑布效应调控细胞的生命活动，包括靶细胞的分裂增殖，因此阻断PDGF/PDGFR信号传导,是寻找具有抗平滑肌细胞增殖乃至抗血管重塑活性化合物的重要途径。本发明首次在阐述了哥纳香内酯C通过PDGR/PDGFR通路抑制了血管重塑关键环节——血管平滑肌细胞异常迁移和增殖，并继而抑制了血管外基质沉积，因此具有预防和或治疗血管重塑性疾病潜在活性，是哥纳香植物提取物GoniolactonesC的新用途，具有创新性和新颖性。

发明内容

本发明的目的在于提供哥纳香内酯C在制备抑制平滑肌细胞增殖和/或迁移的药物、药物组合物以及含药材料设备中的应用。

本发明一方面提供了哥纳香内酯C在制备抑制平滑肌细胞增殖和/或迁移的药物、药物组合物以及含药材料设备中的应用，包括向需要的哺乳动物施用治疗有效量的哥纳香内酯C。

进一步，所述平滑肌细胞增殖和/或迁移是包括但不限于内皮损伤、外源性物质刺激等因素引起的血管平滑肌细胞数量增加和/或位置的迁移,是导致血管壁增厚和管腔狭窄性心脑血管疾病的病理学基础。

本发明还提供了哥纳香内酯C在制备预防或治疗血管壁增厚和/或管腔狭窄性心脑血管疾病的药物、药物组合物以及含药材料设备中的应用。

进一步，所述的血管壁增厚和管腔狭窄性心脑血管疾病选自动脉粥样硬化性疾病、血管成形术后再狭窄、高血压、肺动脉高压、糖尿病血管病变引起的疾病。

更进一步，所述的动脉粥样硬化性疾病，选自因主动脉粥样硬化引起的主动脉瘤、因冠状动脉粥样硬化引起的冠状动脉狭窄或阻塞(冠状动脉粥样硬化性心脏病)、因颅脑粥样硬化引起的血管狭窄、脑供血不足或局部血栓形成或斑块破裂、碎片脱落造成脑栓塞等缺血性脑卒中和慢性脑缺血导致的血管性痴呆、因肾动脉粥样硬化引起的肾动脉血栓肾脏缺血并最终导致的肾脏衰竭、因四肢动脉粥样硬化引起的肢端血供障碍并最终发展成间歇性跛行和坏疽，及因肠系膜动脉粥样硬化引起的消化不良、肠道张力减低、便秘和腹痛。所述的糖尿病血管病变引起的疾病选自糖尿病肾病，糖尿病视网膜病变，糖尿病神经病变，糖尿病足。

本发明还涉及哥纳香内酯C的药物制剂在制备抑制平滑肌细胞增殖和/或迁移以及管壁增厚和/或管腔狭窄性心脑血管疾病的药物以及含药材料设备中的应用。所述药物制剂包括哥纳香内酯C以及药学上可接受的载体和/或辅料，所述制剂可以为片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液、滴丸、微丸、注射剂等药学上可以接受的药物制剂形式。

所述包含哥纳香内酯C的药物制剂可以利用本领域公知的方法制备得到。

本发明化合物药物组合物的给药剂量依照所要预防或治疗疾病的性质和严重程度，患者或动物的个体情况，给药途径和剂型等可以有大范围的变化。

本发明的有益效果在于：本发明通过PDGF-BB作为诱导剂，观察了哥纳香内酯C对PDGF-BB诱导的平滑肌细胞增殖、迁移、DNA合成和细胞增殖周期效应以及细胞外基质合成与释放效应，进一步阐述了哥纳香内酯能抑制PDGF-BB诱导的平滑肌细胞增殖、迁移和细胞外基质合成。通过对PDGF受体激酶活性检测，发现哥纳香内酯C能直接作用于PDGF受体，抑制其受体激酶活性，从而减少PDGF-BB诱导的平滑肌细胞增殖、迁移和基质合成，是适用于抑制血管平滑肌细胞增殖与迁移的新用途，为预防和/或治疗因平滑肌细胞增殖与迁移引起的血管壁增厚和/或管腔狭窄性心脑血管疾病提供一种高效、安全和经济的解决方法。

附图说明：

图1：哥纳香内酯C抑制血清诱导的VSMC增殖效应；

图2：哥纳香内酯C对不同生长因子诱导的VSMC增殖效应的抑制作用；

图3：哥纳香内酯C对大鼠血管平滑肌细胞DNA合成的抑制作用；

图4：哥纳香内酯C抑制PDGF-BB诱导的VSMC增殖周期；

图5：哥纳香内酯C抑制PDGF-BB诱导的大鼠血管平滑肌细胞迁移；图6：哥纳香内酯C抑制PDGF-BB诱导的粘附分子释放；

图7：哥纳香内酯C对PDGFR激酶活性的作用。

具体实施方式

下面的实施例用于进一步说明本发明，但这并不意味着对本发明的保护范围的任何限制。其中，GoniolactoneC为哥纳香内酯C。

实施例1.哥纳香内酯C抑制血清诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖

实验方法：雄性SD大鼠断头处死后，于无菌状态下迅速取出胸主动脉血管，分离其脂肪层，置于消化液(0.06％胰酶+0.06％I型胶原酶)，在孵箱中消化20-30min；取出，完全去除外膜，用镊子牵拉血管破坏其内膜，取平滑肌层，剪碎，置于培养皿内；用DMEM/F12培养基+20％FBS培养；传代时用0.125％胰酶消化；传至第二代后换培养基：DMEM+10％FBS；除非特别说明，本发明中所指平滑肌均为P3-P5代。大鼠血管平滑肌细胞(VascularSmoothMuscleCell,VSMC)以10⁴每孔的密度种于96孔板，至50％融合，撤血清继续孵育24h,随后根据实验设计，分别加入0,2.5,5,10,20和40μM的哥纳香内酯C预孵育24h后，继续加入血清至终浓度为10％，放入孵箱。24h后取出，采用结晶紫染色法，在OD590处观察各个组细胞的吸光度。对数几率图解法计算哥纳香内酯C的半数抑制浓度(IC50)。分组如下：正常对照组：未加血清与哥纳香内酯C的平滑肌细胞；模型组：血清浓度为10％的平滑肌细胞；各剂量组：与哥纳香内酯C预孵育2h后，加入血清浓度为10％。

实验结果：哥纳香内酯C呈剂量依赖性抑制血清诱导的VSMC增殖(各剂量组与模型组相比，p值均小于0.05)，40μM的哥纳香内酯C的抑制率为86％，哥纳香内酯C对血清诱导的VSMC增殖半数抑制浓度为3.94μM/L。参见附图1和表1。

表1.哥纳香内酯C抑制血清诱导的VSMC增殖效应

*代表与模型组相比有统计学意义，p<0.05

实验结果表明：哥纳香内酯对血清诱导的血管平滑肌细胞增殖，具有抑制作用。

实施例2.哥纳香内酯C抑制PDGF-BB诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖

实验方法：细胞培养方法同实施例1。大鼠血管平滑肌细胞以10⁴每孔的密度种于96孔板，至50％融合，撤血清继续孵育24h,随后根据实验设计，加入0,1.25,2.5,5,10和20μM的哥纳香内酯C预孵育24h,再分别加入不同浓度的生长因子(bFGF100ng/ml,EGF10μg/ml和PDGF-BB40ng/ml)继续孵育,24h后弃细胞上清，采用结晶紫染色法，观察各个组的OD值,并计算各剂量组的抑制率。抑制率＝1-[(模型组OD值-空白对照值)-(各剂量组OD值-空白对照值)]/[(模型组OD值-空白对照值)-(正常对照组OD值-空白对照值)]；对数几率图解法计算哥纳香内酯C的半数抑制浓度(IC50)。

实验结果：哥纳香内酯C成剂量依赖性抑制PDGF-BB诱导的平滑肌细胞增殖，其半数抑制浓度为1.82μM/L，哥纳香内酯C对bFGF和EGF诱导的平滑肌细胞增殖作用无明显的抑制作用。对于这两种生长因子诱导的平滑肌细胞增殖作用，哥纳香内酯C50％抑制率所需的浓度为PDGF-BB的10倍。实验结果见图2和表2。

表2.哥纳香内酯C对不同生长因子诱导VSMC增殖效应的抑制作用

实验结果显示：哥纳香内酯C抑制平滑肌细胞增殖效应，是依赖于生长因子类别的，即，哥纳香内酯C优先选择抑制PDGF-BB诱导的平滑肌细胞增殖，而对bFGF和EGF诱导的平滑肌细胞增殖作用无明显的抑制作用。

实施例3.哥纳香内酯C抑制PDGF-BB诱导的大鼠血管平滑肌细胞DNA合成

实验方法：细胞培养方法同实施例1。大鼠血管平滑肌细胞以10⁴每孔的密度种于96孔板，至50％融合，撤血清继续孵育24h,随后根据实验设计，加入0,0.25,0.5,1,2和4μM的哥纳香内酯C预孵育，24h后加入PDGF-BB至终浓度为40ng/ml，继续孵育24h，至实验结束前5小时，每个孔分别加入10nMBrdu(无菌处理)，继续孵育至24h,弃细胞上清，采用PBS漂洗细胞，Triton-100穿透细胞，多聚甲醛固定，BSA封闭过夜，小鼠抗Brdu一抗孵育4h,PBST漂洗，FITC-标记兔抗小鼠IgG二抗孵育等步骤，最后在荧光倒置显微镜下观察Brdu摄取阳性率(即DNA合成率)。分组如下：正常对照组：未加PDGF-BB与哥纳香内酯C的平滑肌细胞；模型组：PDGF-BB终浓度为40ng/mL的平滑肌细胞；各剂量组：与哥纳香内酯C预孵育24h后，加入PDGF-BB终浓度为40ng/mL。DNA合成率＝Brdu阳性细胞数(绿色荧光)/细胞核总数(蓝色荧光)×100％；抑制率＝1-(模型组DNA合成率-各剂量组DNA合成率)/(模型组DNA合成率-正常对照组DNA合成率)

实验结果：哥纳香内酯C呈剂量依赖性抑制PDGF-BB诱导的平滑肌细胞DNA合成。0.25μM哥纳香内酯C抑制率为31.34％(p<0.01)，0.5μM哥纳香内酯C抑制率为61.82％(p<0.01),1μM哥纳香内酯C抑制率为89.77％(p<0.01),2μM哥纳香内酯C抑制率为99.1％(p<0.01)。结果详见图3和表3。

表3.哥纳香内酯C抑制PDGF-BB诱导的DNA合成

*代表与模型组相比有统计学意义，p<0.05

**代表与模型组比有统计学意义，p<0.01

BrdU摄取是判断细胞DNA合成的经典方法。Brdu可插入正在复制的DNA双链中，并随细胞分裂稳定地带到子代细胞中。细胞经过固定和变性处理后，可用免疫学方法检测DNA中BrdU的含量，从而判断细胞的增殖能力。如同时结合其它细胞标记物(如DAPI、PI等细胞核染料)，双重染色，可判断增殖细胞的种类，增殖速度，对研究细胞动力学有重要意义。基于上述研究结果，我们进一步采用了Brdu摄取实验，对哥纳香内酯C是否具有抗PDGF-BB诱导VSMC增殖作用进一步深入阐明。研究结果显示哥纳香内酯抑制PDGF-BB诱导的平滑肌细胞增殖的作用与细胞周期相关。

实施例4.哥纳香内酯C抑制PDGF-BB诱导的大鼠血管平滑肌细胞周期

实验方法：细胞培养方法同实施例1。平滑肌细胞以5×10⁶的密度种植于100mm培养皿中，至50％融合，以无血清DMEM培养基继续培养48h。给于不同浓度哥纳香内酯C预孵育24h后给于40ng/mlPDGF-BB刺激，继续孵育48h；收集细胞上清，用0.25％胰酶消化细胞，收集细胞混悬液，，离心1000r/min×5min，弃上清。用4℃预冷的70％冷乙醇固定18h，之后调整细胞浓度为106/ml，PI染色37℃孵育30min后进行流式分析，应用ModFitLT3.0软件分析细胞周期中各期细胞所占总细胞的百分率；计算细胞增殖指数(PI)，PI＝(S+G2/M)/(G0/G1+S+G2/M)。分组如下：正常对照组：未加PDGF-BB与哥纳香内酯C的平滑肌细胞；模型组：PDGF-BB终浓度为40ng/mL的平滑肌细胞；各剂量组：与哥纳香内酯C预孵育24h后，加入PDGF-BB终浓度为40ng/mL。

流式细胞仪技术是根据细胞所处的不同时期DNA含量不同的原理，区分出处于不同时相的细胞。细胞周期由G0/G1期、S期、G2/M期组成，S期是DNA合成期，S期细胞构成比增多，反映细胞增殖活跃。细胞增殖指数是指处于S期和G2/M期细胞之和占总细胞数的比例，它反映该群细胞的增殖速度。细胞增殖指数是指处于S期和G2/M期细胞之和占总细胞数的比例，它反映该群细胞的增殖速度。增殖指数是评价细胞增殖能力的“金标准”。我们的结果显示：与正常组细胞相比，PDGF-BB诱导的平滑肌细胞G0/G1期细胞百分数明显下降，为52.33％，正常组为78.33％；相反的，PDGF-BB组G2/M期和S期细胞含量明显高于正常组，分别为14.15％和33.47％，正常对照组G2/M期和S期细胞含量分别为7.09％和14.57％；与PDGF-BB组相比，哥纳香内酯C呈剂量依赖性升高G0/G1期细胞含量同时降低G2/M和S期细胞含量，哥纳香内酯C0.25μM,0.5μM，1μM，2μM和4μM组G0/G1期细胞含量，分别为59.33％，61.37％，63.23％，66.07％和70.03％；G2/M期细胞含量分别为9.06％，5.53％，8.65％，8.04％和11.33％；S期细胞含量分别为31.63％，33.13％，27.4％，25.9％和18.67％。正常对照组和PDGF-BB组增殖指数分别为21.67％和47.67％；哥纳香内酯C0.25μM,0.5μM，1μM，2μM和4μM组与PDGF-BB组相比，增殖指数明显下降，分别为40.67％，38.63％，36.77％，33.93％和29.97％(p<0.01)。研究结果详见图4和表4。

表4.哥纳香内酯C抑制PDGF-BB诱导的VSMC增殖周期

*代表与模型组相比有统计学意义，p<0.05

**代表与模型组比有统计学意义，p<0.01

实验结果显示，哥纳香内酯C能明显抑制PDGF-BB诱导的平滑肌细胞增殖，细胞增殖指数明显下降，哥纳香内酯C能明显将细胞周期阻滞于G0/G1期。

实施例5.哥纳香内酯C抑制PDGF-BB诱导的大鼠血管平滑肌细胞迁移

实验方法：细胞培养方法同实施例1。平滑肌细胞以5×10⁴每孔的密度种于24孔培养板中，至80％融合，撤血清过夜。次日用200uL无菌枪头在孔中间划“+”字，用生理盐水洗去飘起的细胞，在倒置显微镜下拍照，并给于不同浓度哥纳香内酯C，2h后给于40ng/mlPDGF-BB刺激；12小时后在倒置显微镜下拍照。观察活细胞向无细胞区域迁移的情况，来判断细胞的迁移能力。迁移面积＝观察初始无细胞区域面积(像素)-观察终点无细胞区域面积(像素)。分组如下：正常对照组：未加PDGF-BB与哥纳香内酯C的平滑肌细胞；模型组：PDGF-BB终浓度为40ng/mL的平滑肌细胞；各剂量组：与哥纳香内酯C预孵育24h后，加入PDGF-BB终浓度为40ng/mL。

实验结果：PDGF-BB诱导12小时，明显提高了平滑肌细胞迁移能力，表现为观察初始无细胞区域面积与观察终点无细胞区域面积的变化值明显高于正常对照组，是对照组的3.12倍(p<0.01)；与PDGF-BB组相比，哥纳香内酯C能明显抑制PDGF-BB诱导的平滑肌细胞迁移，表现为观察初始无细胞区域面积与观察终点无细胞区域面积的变化值呈剂量依赖性下降，哥纳香内酯C0.25μM,0.5μM，1μM，2μM和4μM组迁移面积分别为正常对照组的2.37倍(p＝0.46)，2.48倍(p＝0.3)，1.68倍(p<0.05)，1.48倍(p<0.05)和1.34倍(p<0.05)。研究结果详见图5和表5。

表5.哥纳香内酯C抑制PDGF-BB诱导的VSMC迁移

*代表与模型组相比有统计学意义，p<0.05

**代表与模型组比有统计学意义，p<0.01

实验结果显示，在1-4μM剂量范围内，哥纳香内酯C明显抑制PDGF-BB诱导的平滑肌细胞迁移，在更低的剂量范围内，哥纳香内酯C有抑制其迁移的趋势。

实施例6.哥纳香内酯C抑制大鼠血管平滑肌细胞细胞外基质合成

实验方法：大鼠血管平滑肌细胞以10⁴每孔的密度种于96孔板至50％融合，撤血清继续孵育24h,随后根据实验设计，加入0,0.25,0.5,1,2和4μM的哥纳香内酯C预孵育，2h后加入PDGF-BB至终浓度为40ng/ml，继续孵育24h，收集细胞上清，采用ELISA法检测上清中ICAM-1和VCAM-1的浓度。结晶紫染色法，检测OD值，并将各组ICAM-1和VCAM-1浓度用OD值进行校正。分组如下：正常对照组：未加PDGF-BB与哥纳香内酯C的平滑肌细胞；模型组：PDGF-BB终浓度为40ng/mL的平滑肌细胞；各剂量组：与哥纳香内酯C预孵育2h后，加入PDGF-BB终浓度为40ng/mL。

实验结果：PDGF-BB作用24小时，明显提高了培养基上清中细胞外基质ICAM-1和VCAM-1的浓度(p值均小于0.01)，提示PDGF-BB诱导了平滑肌细胞细胞外基质的合成与释放，而哥纳香内酯C在0.25-4μM剂量范围内，明显抑制PDGF-BB诱导的ICAM-1和VCAM-1合成和释放，与PDGF-BB诱导组相比，哥纳香内酯C0.25μM组有减少ICAM-1和VCAM-1释放的趋势(p分别为0.07和0.57)；0.5μM组显著降低ICAM-1和VCAM-1释放(p值均小于0.05)；1μM组有减少ICAM-1和VCAM-1释放的趋势(p分别为0.08和0.17)；2μM组显著降低ICAM-1释放(p<0.05)同时有降低VCAM-1释放的趋势(p＝0.07)；4μM组显著减少ICAM-1和VCAM-1释放(p值均小于0.05)。研究结果详见图6和表6。

表6.哥纳香内酯C抑制PDGF-BB诱导的粘附分子释放

表格中数据代表各组OD值与正常对照组的比值，

*代表与模型组相比有统计学意义，p<0.05

**代表与模型组比有统计学意义，p<0.01

实验结果提示，哥纳香内酯C对于PDGF-BB诱导的平滑肌细胞细胞外基质的合成与释放具有抑制作用。

实施例7.哥纳香内酯C抑制PDGFR激酶活性。

实验方法：将不同浓度(0,0.25,0.5,1,2和4uM)哥纳香内酯C与重组PDGFRβ和ATPmix在室温下孵育1小时后，加入ADP-Glo反应底物，室温下继续孵育40分钟，随后加入激酶检测反应液孵育30min。采用化学发光法检测各组的发光值。

实验结果：哥纳香内酯C呈剂量依赖性抑制PDGFRβ的激酶活性，表现为PDGFRβ的受体磷酸化水平下降，在0.25-4μM范围内呈剂量依赖性抑制受体激酶活性，抑制率分别为26.14％，37.85％，56.20％，63.90％，99.8％；半数抑制浓度(IC50)为0.7626μM。研究结果详见图7和表7。

表7.哥纳香内酯C对PDGFR激酶活性的抑制作用

PDGF受体具有酪氨酸激酶活性，在受到其配体PDGF-BB的作用后，受体的酪氨酸激酶发挥其激酶作用，迅速自身磷酸化，并将此信号传递至下游信号转导通路，从而发挥其有丝分裂原作用。ADP-Glo^TMKinaseAssay的原理是利用PDGF受体自身磷酸化消耗ATP生成ADP，后者在一定条件下重新生成ATP，并通过Ultra‐Glo^TMLuciferase检测到化学发光，发光值越高，说明新生成的ATP越多，即PDGF受体磷酸化水平越高，PDGF受体激酶活性越高。本实施例的结果说明哥纳香内酯C可以直接作用于PDGF受体，抑制其激酶活性，阻断其下游信号转导通路，从而抑制PDGF-BB诱导的生物学效应。

综上所述，本发明首先以血清作为诱导剂，证实了哥纳香内酯C对血清诱导的平滑肌细胞增殖具有较强的抑制作用，通过血清中常见的三种生长因子bFGF,EGF和PDGF-BB作为诱导剂观察哥纳香内酯C对这三种诱导剂诱导的平滑肌细胞增殖作用的抑制效应，发现哥纳香内酯C选择性抑制PDGF-BB诱导的平滑肌细胞增殖；本发明进而通过PDGF-BB作为诱导剂，观察了哥纳香内酯C对PDGF-BB诱导的平滑肌细胞增殖、迁移、DNA合成和细胞增殖周期效应以及细胞外基质合成与释放效应，进一步阐述了哥纳香内酯能抑制PDGF-BB诱导的平滑肌细胞增殖、迁移和细胞外基质合成。通过对PDGF受体激酶活性检测，发现哥纳香内酯C能直接作用于PDGF受体，抑制其受体激酶活性，从而减少PDGF-BB诱导的平滑肌细胞增殖、迁移和基质合成，是适用于抑制血管平滑肌细胞增殖与迁移的新用途。