HAV病毒样颗粒的制备方法及其应用

摘要

本发明公开了含有甲肝病毒HAV5’-UTR基因的病毒样颗粒的制备方法。该病毒样颗粒是由MS2噬菌体编码外壳蛋白包裹HAV5’-UTR？RNA的一种RNA-蛋白复合体；将编码组氨酸标签序列插入MS2噬菌体编码外壳蛋白的β发夹环结构序列中，构建含有重组组氨酸标签的MS2噬菌体外壳蛋白和表达成熟酶蛋白基因的pNH-MS2his重组质粒。通过RT-RCR扩增HAV5’-UTR基因，将其克隆于pNH-MS2his中，构建原核重组表达质粒并命名为pNH-MS2his-HAV5’-UTR。将所得pNH-MS2his-HAV5’-UTR质粒转化于表达大肠杆菌BL21中进行诱导表达。采用Ni-NTA的纯化柱纯化病毒样颗粒，所得的病毒样颗粒即为含HAV5’-UTR基因的病毒样颗粒，命名为HAV5’-UTR-VLPs。本发明的HAV5’-UTR-VLPs病毒样颗粒可作为RT-PCR检测的标准品和质控品，无传染性，安全可靠、稳定性好，具有耐核糖核酸酶的特点。