一种毕赤酵母中共表达血红蛋白VHb和纤维素酶蛋白的构建方法

摘要

本发明涉及一种毕赤酵母中共表达血红蛋白VHb和纤维素酶蛋白的构建方法，具体涉及纤维素酶蛋白基因密码子优化及其与透明颤菌血红蛋白(VHb)共表达毕赤酵母体系的构建。本发明利用Gene？Designer(DNA2.0,Menlo？Park,CA,USA)软件对EG？II(GenBank？Accession？No.DQ178347.1)核苷酸序列进行密码子偏向性优化，构建了pPIC9K-eg2表达载体，并以Pichiapastoris？GS115为宿主通过电转化获得重组毕赤酵母菌株。另外，从NCBI中获得VHb(GenBank？Accession？No.M30794.1)核苷酸序列，通过人工合成基因后构建了pPICZαA-vgb表达载体，以含EG？II基因重组毕赤酵母菌株作为宿主，通过电转化获得共表达毕赤酵母菌株。通过检测表明，共表达菌株在菌浓生长与酶活方面均有提高，其中OD600值提高7.2％，酶活提高2.2％。