以亚磷酸盐作为激发子诱导辣椒系统抗病性的方法

摘要

本发明涉及以亚磷酸盐作为激发子诱导辣椒系统抗病性的方法及应用，该方法首先是进行亚磷酸盐的配制；其次，产生辣椒苗；最后是亚磷酸激发子诱导辣椒抗病防卫反应效能的检测，将配制好的亚磷酸盐以喷雾法处理上述培养好的辣椒苗，诱导处理48小时后，然后用辣椒疫霉菌游动孢子休止液接种黄化苗，3-5天后观察苗发病情况，以确定其对诱导植物抗病性的效果。上述方法可以省时省力的配制适应于田间应用的亚磷酸盐，同时对其进行抗病防卫反应激活的检测，填补了国内外辣椒抗病性研究中利用亚磷酸盐做激发子激活防卫反应增强抗病性的认识，具有重大意义。

说明书

技术领域

本发明涉及植物保护技术领域，公开了以亚磷酸盐作为激发子诱导辣椒系统抗病性的方法。

背景技术

辣椒疫病是一种世界范围内普遍发生的毁灭性真菌病害，其首先于1918年在美国新墨西哥州发现，引起辣椒疫病的辣椒疫霉菌PhytophthoracapsiciLeonian是LeonLeonian于1922年命名的，它属于植物病原卵菌。辣椒疫霉以卵孢子或厚垣孢子在土壤病残体中越冬，可以存活数月甚至更长时间，寄主范围广，主要侵染辣椒、番茄、茄子、黄瓜、南瓜等多种重要蔬菜作物。辣椒疫病露地和保护地均能发生，该病的流行致使辣椒损失严重，一般病株率为15–30％，严重时达80％以上。自1980年以来，辣椒疫病在我国蔬菜种植区域发病程度日趋加重，严重影响了蔬菜种植业的经济效益，给我国的蔬菜安全生产造成了巨大的经济损失。因此，辣椒疫霉菌受到各国植物病理学家和育种学家的高度广泛关注。近年来发现水杨酸等化学物质被植物体吸收后，能增强寄主植物的抗病性，降低病害的发生。

亚磷酸盐已经被开发成农药或肥料用于多种病害的田间防治，但其真正的防病机制研究还没有弄清楚。通过对利用亚磷酸盐激活辣椒抗病防卫反应的认识的研究，可深入了解亚磷酸盐对辣椒疫霉菌的防病机制、并以此为靶标寻找到辣椒中与该防病机制相关的抗病基因，上述研究为弄清亚磷酸盐在辣椒抗病防卫反应中的作用机制提供基础。通过解析亚磷酸盐激活的辣椒抗病防卫反应的分子机制，可以为育种专家寻找新的抗性位点，最终为有效控制疫病的爆发提出新的策略。但是目前的研究表明，亚磷酸盐在辣椒抗病防卫反应中的分子机制解析的缺失限制了我们对其防病机理的深入研究。

发明内容

本发明目的是提供以亚磷酸盐作为激发子诱导辣椒系统抗病性的方法，即以辣椒苗为实验材料，通过亚磷酸盐作为激发子处理后接种辣椒疫霉菌来检测诱导抗病效果。

本发明的利用亚磷酸盐激活辣椒抗病防卫反应的方法及应用步骤如下：

⑴亚磷酸盐的配制是将纯度＞95%亚磷酸和氢氧化钾以1：1等重使用，先用水溶解亚磷酸1g，再在其基础上溶解氢氧化钾1g，将上述溶液定容到1000mL,调配好的亚磷酸盐的pH值为6.2左右，加入占总体积分数2‰的Tween-20可直接施用；

⑵辣椒种子经体积分数为30%次氯酸钠（上海国药Cas#:7681-52-9）表面消毒后，再用灭菌蒸馏水冲洗干净，在55℃～58℃水浴锅中烫种20分钟后，将种子播种于下垫两层纱布的搪瓷拖盘中(30*50cm)，然后在28℃培养箱中黑暗避光条件下培养5-7天，直到长出细长的辣椒黄化苗，移出光照培养箱培养2-3天；

⑶亚磷酸盐激发子诱导辣椒抗病防卫反应效能的检测方法是，首先，将配制好的亚磷酸盐以喷雾法处理上述培养好的辣椒苗，诱导处理48小时后，然后将辣椒疫霉菌游动孢子休止液喷雾接种，3-5天后观察发病情况，以确定其对诱导植物抗病性的效果。

辣椒疫霉菌游动孢子休止液的制备方法为取0.3cm×0.3cm-1cm×1cm辣椒疫霉菌4块接种于V8平板上，25℃生长10天产生大量孢子囊，将上述平板4℃放置15min，然后置于25℃下30min后即得到辣椒疫霉菌游动孢子，涡旋振荡30秒即为休止液。

V8平板为10%V8培养液：100mLV8蔬菜汁加入0.2gCaCO₃后，3000转/分下离心5min，取上清液定容到1000ml，加入总体积1.5%的琼脂粉。

本发明解决了利用亚酸盐激活辣椒抗病防卫反应的问题，用上述辣椒苗为试材检测亚磷酸诱导抗病防卫反应的效果，具有实验周期短、不受外界环境条件影响、实验重复性好、接种症状表现明显、易于分级和实验观察等优点。通过解析亚磷酸盐激活的辣椒抗病防卫反应的分子机制，可以为育种专家寻找新的抗性位点，最终为有效控制疫病的爆发提出新的策略。但是目前的研究表明，亚磷酸盐在辣椒抗病防卫反应中的分机机制解析的缺失限制了我们对其防病机理的深入研究。

具体实施方式

按照亚磷酸1g：氢氧化钾1g的重量比配制好亚磷酸盐溶液1000mL，辣椒种子经消毒后诱导产生辣椒苗，最后检测亚磷酸盐激发子诱导辣椒抗病防卫反应效能。

实施例1:

按照亚磷酸1g：氢氧化钾1g的重量比配制亚磷酸盐溶液，先用水溶解亚磷酸1g，再在其基础上溶解氢氧化钾1g，将上述溶液定容到1000mL,调配好的亚磷酸盐的pH值为6.2左右，加入占总体积分数为2‰的Tween-20可直接施用；台椒106和美国西元椒种子经30%体积的次氯酸钠（上海国药Cas#:7681-52-9）表面消毒后，再用灭菌蒸馏水冲洗干净，在55℃水浴锅中烫种20分钟后，将种子播种于下垫两层纱布的搪瓷拖盘中(30*50cm)，然后在28℃培养箱中黑暗避光条件下培养5天，直到长出细长的辣椒黄化苗，移出光照培养箱培养2天；亚磷酸作为激发子诱导辣椒抗病防卫反应效能的检测方法是，首先，将配制好的亚磷酸盐以喷雾法处理上述培养好的辣椒苗，诱导处理48小时后，然后用辣椒疫霉菌游动孢子休止液（10⁷个/mL）喷雾接种辣椒苗，3天后观察苗发病情况，以确定其对诱导植物抗病性的效果，同时以喷雾清水作为对照。

辣椒疫霉菌游动孢子休止液的制备方法为取1cm×1cm辣椒疫霉菌4块接种于V8平板上，25℃生长10天产生大量孢子囊，将上述平板4℃放置15min，然后置于25℃下30min后即得到辣椒疫霉菌游动孢子，涡旋振荡30秒即为休止液。

V8平板为10%V8培养液：100mLV8蔬菜汁加入0.2gCaCO₃后，3000转/分下离心5min，取上清液定容到1000ml，加入1.5wt.%的琼脂粉。

实验结果统计分析发现亚磷酸盐诱导抗病的效果是75.67%。

实施例2

按照亚磷酸1g：氢氧化钾1g的重量比配制亚磷酸溶液，先用水溶解亚磷酸1g，再在其基础上溶解氢氧化钾1g，将上述溶液定容到1000mL,调配好的亚磷酸盐的pH值为6.2，加入占总体积分数为2‰的Tween-20可直接施用；红太阳和春辣19号种子经30%次氯酸钠表面消毒后，再用灭菌蒸馏水冲洗干净，在58℃水浴锅中烫种20分钟后，将种子播种于下垫两层纱布的搪瓷拖盘中(30*50cm)，然后在28℃培养箱中黑暗避光条件下培养7天，直到长出细长的辣椒黄化苗，移出光照培养箱培养3天；亚磷酸激发子诱导辣椒抗病防卫反应效能的检测方法是，首先，将配制好的亚磷酸盐以喷雾法处理上述培养好的辣椒苗，诱导处理48小时后，然后用辣椒疫霉菌游动孢子休止液（10⁷个/mL）接种黄化苗，4天后观察苗发病情况，以确定其对诱导植物抗病性的效果，同时以喷雾清水作为对照。

辣椒疫霉菌游动孢子休止液的制备方法为取0.3cm×0.3cm辣椒疫霉菌4块接种于V8平板上，25℃生长10天产生大量孢子囊，将上述平板4℃放置15min，然后置于25℃下30min后即得到辣椒疫霉菌游动孢子，涡旋振荡30秒即为休止液。

V8平板为10%V8培养液：100mLV8蔬菜汁加入0.2gCaCO₃后，3000转/分下离心5min，取上清液定容到1000ml，加入总体积1.5wt.%的琼脂粉。

实验结果统计分析发现亚磷酸盐诱导抗病的效果是78.53%。

上述结果表明，通过利用亚磷酸盐作为激发子激活辣椒的抗病防卫反应，能显著提高辣椒苗的抗病能力，这对推动辣椒的抗病机理研究及抗性育种研究具有重要意义。

以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。