3，5-二叔丁基水杨酸铜在制备用于治疗高转移性乳腺癌药物中的应用

摘要

本发明公开了3，5-二叔丁基水杨酸铜在制备用于治疗高转移性乳腺癌药物中的应用及3，5-二叔丁基水杨酸铜的给药剂量，本发明通过实验证明了3，5-二叔丁基水杨酸铜可抑制乳腺癌细胞的转移，浓度依赖性的抑制乳腺癌细胞侵袭。本发明对3，5-二叔丁基水杨酸铜发掘了新的医疗用途，开拓了一个新的应用领域。

说明书

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体地指一种3，5-二叔丁基水杨酸铜在制备用于治疗 高转移性乳腺癌药物中的应用。

背景技术

乳腺癌是目前全世界妇女中最常见的癌症。全球每年大约有50万人死于乳腺癌， 对妇女的生命和生活质量已经构成了严重的威胁。乳腺癌也成为了中国女性最常见的癌 症；每年中国乳腺癌新发数量和死亡数量分别占全世界的12.2％和9.6％。随着生活节奏加 快和工作压力的加重，乳腺癌患者呈现低龄化和高发的态势。目前对于乳腺癌的治疗主要 采用手术切除、化疗等方式，但对于高转移性的乳腺癌，现有的治疗手段均无法获得良好的 治疗效果。

抑制乳腺癌细胞的转移和侵袭是治疗转移性乳腺癌的关键，因此有效抑制乳腺癌 细胞转移和侵袭的药物是治疗转移性乳腺癌的希望。一种有效治疗转移性乳腺癌的新药将 会给转移性乳腺癌患者和家人带来希望，并减轻患者的痛苦，提高生活质量，另一方面还可 以减轻社会的经济负担。

申请号为201410280227.6的中国专利中公开了金属络合-(3,5-二叔丁基水杨酸) (金属为Zn、Fe、Al、Cr、Cu、Mg、Zr)作为一种常用的抗静电剂和荷电控制剂，广泛应用于除静 电领域和墨粉制造行业。现有技术中报道，微量元素Cu的某些螯合物包括3,5-二异丙基水 杨酸铜Cu²(3,5-dips)₂对肿瘤的促进和形成过程具有抑制作用，但未披露该螯合物的具体 应用，因此应用于临床需要进一步研究。

发明内容

本发明的目的就是要解决上述背景技术的不足，提供一种3，5-二叔丁基水杨酸铜 在制备用于治疗高转移性乳腺癌药物中的应用，有效抑制癌细胞的转移。

本发明的技术方案为：

3，5-二叔丁基水杨酸铜在制备用于治疗高转移性乳腺癌药物中的应用。

3，5-二叔丁基水杨酸铜的分子结构式如下式(Ⅰ)所示。

优选的，所述3，5-二叔丁基水杨酸铜的给药剂量为离体时10-25μM。

优选的，3，5-二叔丁基水杨酸铜制成的药物类型为注射剂、粉针剂、口服剂、口含 片、喷雾剂、胶囊、栓剂中的一种。

所述的3，5-二异丙基水杨酸铜可以制成治疗高转移性乳腺癌复方药物，也可以单 独制成治疗高转移性乳腺癌药物。

本发明中高转移性乳腺癌细胞是指MDA-MB-231和BT-20细胞。本发明中，通过“划 痕愈合”法检测了3，5-二叔丁基水杨酸铜对MDA-MB-231和BT-20细胞迁移能力的影响，结果 显示3，5-二叔丁基水杨酸铜对MDA-MB-231和BT-20细胞的迁移能力显示浓度依赖性的抑 制。然后，在高浓度血清诱导下，检测高转移性乳腺癌MDAMB-231细胞透过“Chamber小室”能 力的改变并给以药物处理24h后，结果显示药物在10～25M浓度内，浓度依赖性抑制MDA-MB- 231细胞侵袭能力。综合实验结果分析，确定药物3，5-二叔丁基水杨酸铜可以用于特异性预 防和治疗高转移性乳腺癌。

本发明的有益效果为：

1.对3，5-二叔丁基水杨酸铜发掘了新的医疗用途，开拓了一个新的应用领域。

2.制备3，5-二叔丁基水杨酸铜的原料3，5-二叔丁基水杨酸、铜盐来源广泛，制得 的3，5-二叔丁基水杨酸铜纯度高，能够保证工业化生产。

3.3，5-二叔丁基水杨酸铜配置成的药物可为多种剂型，如：注射剂、粉针剂、口服 剂、口含片、喷雾剂、胶囊、栓剂等。

附图说明

图1为3，5-二叔丁基水杨酸铜对MDA-MB-231和BT-20细胞的转移能力的影响

图2为3，5-二叔丁基水杨酸铜对MDA-MB-231细胞的侵袭能力的影响。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步的详细说明。

3，5-二叔丁基水杨酸铜对MDA-MB-231和BT-20细胞的转移能力的影响

1.实验材料

1.1细胞株

人乳腺癌细胞株MDA-MB-231和BT-20购自中国典型培养物保藏中心(China CenterforTypeCultureCollection，CCTCC)。

1.2药品及试剂

2.实验方法：

2.1细胞培养

人高转移性乳腺癌细胞株MDA-MB-231用含有10％FBS、青霉素100μg/ml、链霉素 100μg/ml的1640培养液于37℃，CO₂体积分数为5％的细胞培养箱内培养。

2.2“划痕愈合”法检测不同浓度药物对MDA-MB-231细胞迁移能力的影响

取对数生长期MDA-MB-231和BT-20细胞以2×10⁵个/孔的细胞密度接种于6孔培养 板中，置于细胞CO₂培养箱内培养6-8h待细胞贴壁后，用白色枪头划痕，分别加入不同浓度 的3，5-二叔丁基水杨酸铜，终浓度为10μM，25μM，对照组加同样体积(1ml)的1640培养液，继 续培养72h或96h，观察处理后迁移速率的改变，并对独立重复试验结果进行统计分析，

如图1所示，其中图A和B均为MDA-MB-231细胞，C和D均为BT-20细胞，[Cu(salH)₂(H₂O)₂]指3，5-二叔丁基水杨酸铜溶解后形成的铜盐，图中control表示对照组，10μM和25μM 表示加入3，5-二叔丁基水杨酸铜后溶液终浓度为10μM和25μM，结果显示3，5-二叔丁基水杨 酸铜抑制了MDA-MB-231和BT-20细胞迁移。

3，5-二叔丁基水杨酸铜对MDA-MB-231细胞的侵袭能力的影响

2.实验材料

1.1细胞株(上述转移能力实验)

1.2药品及试剂

2.1Transwell法检测细胞侵袭能力的改变

取对数生长期MDA-MB-231细胞以2×10⁵个/孔的细胞密度接种于6孔培养板中，置 于细胞CO₂培养箱内培养6-8h待细胞贴壁后，分别加入不同浓度的3，5-二叔丁基水杨酸铜， 终浓度为10μM,25μM，对照组加同样体积对应的培养液，继续培养24h，将细胞收集制成细 胞悬液并转1×10⁵个细胞到Transwellchamber上室中(上室为无血清培养基)，下室中加 200μl含10％FBS(胎牛血清)的培养基，继续培养22h后，弃去上室中的培养基并用棉签擦拭 确保培养基清除完全，再每孔加入100μl甲醇，孵育2min后，用5％的结晶紫溶液染色5min， 最后用PBS(磷酸缓冲液)漂洗两次。拍照计数，如图2所示，结果显示3，5-二叔丁基水杨酸铜 可以浓度依赖性的抑制MDA-MB-231细胞侵袭能力。