氨基吡啶衍生物或其药用可接受盐和包括相同活性成分的药物组合物

摘要

本发明涉及氨基吡啶衍生物或其药用可接受盐，和包括氨基吡啶衍生物或其药用可接受盐作为活性成分的药物组合物。由化学式1表示的氨基吡啶衍生物或其药用可接受盐在绒毛尿囊膜模型中具有良好的抗血管生成效果，因而其可作为药剂有效地预防或治疗血管生成相关疾病，例如黄斑变性或关节炎，所述氨基吡啶衍生物或其药用可接受盐在炎症性肠疾病模型中也具有良好的结肠炎抑制作用，因而其可作为药剂有效地预防或治疗炎症性肠疾病。在绒毛尿囊膜模型中的接种的肺癌细胞上，化学式1的氨基吡啶衍生物或其药用可接受盐抑制肿瘤引起的血管生成和肿瘤生长，也能抑制在癌症转移和侵袭中起重要作用的组织蛋白酶S的活性，因此其可作为癌生长和转移有效的抑制剂。

说明书

技术领域

本发明涉及氨基吡啶衍生物或其药用可接受盐，和用于预防或治疗 与血管生成、炎性肠疾病或癌症疾病相关疾病且包括氨基吡啶衍生物或 其药用可接受盐作为活性成分的药物组合物。

背景技术

血管生成是一过程，通过该过程新生毛细血管由已有的微血管形成。 血管生成通常可在胚胎发育、组织再生、伤口愈合和在女性的周期性生 殖系统的改变方面的黄体发育的情况下发生。在上述情况下，血管生成 的进行是被严格控制的。

成人的血管内皮细胞生长非常缓慢并且相对于其它类型的细胞并没 有相对较好地分裂。血管生成的过程通常由血管的重塑和通过血管基底 膜在蛋白酶上的降解的新的毛细血管的产生组成，所述蛋白酶受到刺激 因子的刺激，和通过血管内皮细胞的移动、增殖和分化形成管状结构。

但是，当血管生成不被自主控制，而是变得病态时，会引起疾病。 在病理情况下与血管生成相关的疾病包括血管瘤、血管纤维瘤、血管畸 形和心血管疾病，例如动脉粥样硬化、血管粘连和硬皮病。与血管生成 相关的眼科疾病包括黄斑变性、角膜移植新生血管、新生血管性青光眼、 糖尿病性视网膜病、与血管生成、黄斑变性、翼状胬肉、视网膜变性、 晶体后纤维增生症和沙眼相关的角膜疾病。慢性炎性疾病，例如关节炎、 牛皮癣、皮肤疾病，例如毛细血管扩张、化脓性肉芽肿、脂溢性皮炎、 以及痤疮，阿尔茨海默氏病和肥胖也与血管生成相关，而癌症的生长和 转移绝对依赖于血管生成(参考D'AmatoRJ等，Ophthalmology,102(9), pp1261-1262,1995；ArbiserJL,J.Am.Acad.Dermatol.，34(3)，pp486-497， 1996；O'BrienKD等，Circulation,93(4),pp672-682,1996；HanahanD等， Cell,86,pp353-364,1996)。

关节炎，其是一种具有代表性的炎症性疾病，是由自身免疫系统异 常引起的，但是由于病理进展，在关节之间的滑膜腔中的慢性炎症可诱 导血管生成，从而破坏软骨。即，通过细胞因子诱导炎症的方法，滑液 和血管内皮细胞在滑膜腔中增殖，导致血管生成，并且因此，血管翳连 接处，其是形成在软骨中的结缔组织层，从而破坏了充当垫子的软骨(参 考KochAE等，Arthritis.Rheum.,29,pp471-479,1986；StupackDG等， BrazJ.Med.Biol.Rcs.,32(5),pp578-581,1999；KochAE,Atrhritis.Rheum., 41(6),pp951-962,1998)。

许多眼科疾病包括年复一年发生在全世界数百万人中的失明是由血 管生成引起的(参考JeffreyMI等,J.Clin.Invest.,103,pp1231-1236, 1999)。由血管生成引起的具有代表性的疾病包括老年人的黄斑变性、糖 尿病视网膜病变、早产儿视网膜病变、新生血管性青光眼和与血管生成 相关的角膜疾病(AdamisAP等，Angiogenesis,3,pp9-14，1999)。特别 是，糖尿病性视网膜病变是糖尿病的并发症，最终由于在视网膜中的毛 细血管侵入玻璃体腔失明。

银屑病的特征在于发红，并且缩放皮肤也是一种在皮肤上的慢性的 增殖性疾病，但是如果不治愈，银屑病是伴有疼痛和畸形的。角质细胞 通常一个月增殖一次，而银屑病患者的角质细胞每周至少增殖一次。由 于这种快速增殖需要更多血液的供应，血管生成是积极必然要发生的 (FolkmanJ,J.Invest.Dermatol.,59,pp40-48,1972)。

特别地，在癌症的情况下，血管生成在癌细胞的生长和转移中起重 要作用。肿瘤通过血管生成接受生长和增殖必需的营养和氧气的供应。 此外，新生血管渗透进肿瘤，为转移的癌细胞进入血液循环系统提供了 机会，导致癌细胞的转移(FolkmanandTyler,CancerInvasionand metastasis,BiologicmechanismsandTherapy(S.B.Dayed.)Ravenpress, NewYork,pp94-103,1977；PolveriniPJ,Crit.Rev.Oral.Biol.Med.,6(3), pp230-247,1995)。癌症患者死亡的主要原因是转移，而转移是目前在临 床试验中使用的化疗和免疫疗法未能有助于提高癌症患者的存活率的原 因。

当看到大多数实体肿瘤的转移过程时，该过程是如下进行：在癌细 胞第一次出现的地方发生癌细胞增殖，并且一旦癌细胞肿块变大，癌细 胞脱离癌细胞肿块通过血管转移到另一个位置，并且定居在第二位置以 再次增殖细胞。在该过程中，为了通过血管转移癌细胞至另一个位置， 癌细胞的入侵必然发生。这里，为了分解细胞外基质组分，蛋白酶由癌 细胞过度表达，并且蛋白酶的实例包括基质金属蛋白酶(MMPs)、组织 蛋白酶和各种蛋白酶。

组织蛋白酶是一种溶酶体酶，其能在低PH值时分解蛋白，并且可以 分为丝氨酸蛋白酶(例如，组织蛋白酶A和G)，天冬氨酰蛋白酶(如 组织蛋白酶D和E)，和半胱氨酸蛋白酶(例如，组织蛋白酶B，C，F， H，K，L1，V，O，S，W和Z)。组织蛋白酶参与每个特定的生理过程， 也就是，组织蛋白酶可能参与在免疫系统中的抗原呈递，在键和软骨之 间的胶原周转，和神经肽和激素的处理。缺乏组织蛋白酶引起疾病的各 种症状，而组织蛋白酶的过表达也引起各种疾病。特别是，半胱氨酸组 织蛋白酶(组织蛋白酶B，F，H，K，L，V，S和Z)的过表达参与癌症 及转移是已知的(ReiserJ等.,JClinInvest.120(10),3421-31,2010)。

在大多数情况下的组织蛋白酶作为核糖体蛋白酶具有控制细胞内的 生理功能的作用。作为在细胞外分泌并执行蛋白水解功能的蛋白质，蛋 白酶S已被公开。在蜂窝核糖体中的蛋白酶S参与抗体处理或细胞凋亡， 而在细胞外分泌的蛋白酶S分解了细胞外基质成分，例如层粘连蛋白， 纤连蛋白，弹性蛋白，或胶原蛋白。根据以上功能，蛋白酶S被认为是 参与了癌细胞和血管生成的入侵的过程。

在最近的一份报告中，可以确认，与蛋白酶S在正常结肠组织中的 表达相比，蛋白酶S的表达在患有结肠直肠癌的患者结肠直肠癌组织中 显著增多了(参考GormleyJA等.,BrJCancer,105(10),1487-94,2011)。 此外，据报道称，当通过引入siRNA到肝癌细胞时减少了蛋白酶S的表 达时，它将蛋白酶S作为目标，导致减少了肝癌细胞的增殖，癌症的侵 入和血管生成((FanQ等.,BiochemBiophysResCommun,425(4),703-10, 2012)。

在乳腺癌的情况下，具有转移到淋巴结的乳腺癌的患者的预后与组 织蛋白酶D显著相关，在乳腺癌组织组织蛋白酶D中染色，而组织蛋白 酶D与具有非转移淋巴结的患者是不相关的(HenryJA等,Cancer,65(2), 265-71,1990)。在这些结果的基础上，有人认为，组织蛋白酶D在乳腺 癌的转移和癌症的侵入中起了重要作用，但是根据对同一主题的其它研 究，结果是，当乳腺癌细胞系，例如MCF7、MDA-MB-231、和 MDA-MB-435,用来进行实验性转移时，组织蛋白酶D与乳腺癌细胞的 侵入没有相关性(JohnsonMD等,CancerRes.,53(4),873-7,1993)。如在 肝癌的情况下，预计组织蛋白酶S可能对转移性乳腺癌细胞有重要作用。

此外，炎性肠道疾病(IBDs)分为两种不同的疾病，即，溃疡性结 肠炎和克罗恩病，其临床上彼此相似，但是就组织学检查结果和内窥镜 检查和免疫学方面而言彼此是不同的。将这种IBD称为一种疾病，其中 炎症细胞的激活是重要的。

肠道免疫系统的持续或不适当活化在慢性粘膜炎症的病理生理学中 起重要作用，并且更具体地，由于嗜中性白细胞，巨噬细胞，淋巴细胞 和肥大细胞的侵入，最终引起了粘膜破坏和溃疡。被侵入并活化的嗜中 性白细胞被认为是引起活性氧/氮的一种重要的原因，并且这种活性物质 可以诱导在细胞毒剂上的细胞氧化应激，例如交联的蛋白质，脂质和核 酸，从而引起上皮功能障碍和损伤。

当具有炎性疾病时，各种炎性细胞因子是从肠道的黏膜分泌的。 TNF-α以较高水平出现在大肠的管腔和在具有溃疡性结肠炎的患者的肠 上皮细胞中。根据最近的研究，TNF-α引起溃疡性肠炎的的重要作用是 已知的。英夫利昔单抗，是一种抗TNF-α抗体，已知不仅在疖子的治疗 中，还在之前没有治疗过的克罗恩病的治疗中是有效的。然而，这样的 治疗是昂贵的，并且可能在一些患者中引起副作用，例如输血反应或感 染并发症。

单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)是具有14kDa分子量C-C趋化因子 家族的一员，并且主要是调动和活化在发炎区域中的单核细胞/巨噬细 胞。MCP-1位于大肠的上皮细胞，并且已经报道，MCP-1的表达与单核 细胞侵入具有IBDs的患者的黏膜有关。与其它类型的趋化因子不同， MCP-1仅结合CCR2，并且因此作为单核细胞调动的主要调节剂， MCP-1/CCR2的结合在IBDs中起重要作用是已知的。

另外，已知白细胞介素-8(IL-8)在患有IBDs的患者的黏膜中是显 著增加的，从而促进毛细血管新生血管形成。大肠具有的炎症越严重， IL-8表达越多。此外，在啮齿类动物的模型中，已知特定于IL-8的抗体 减少肠炎症。这里，将在细胞内钙离子(Ca²⁺)中的改变视为减少IL-8 的重要因素。

作为目前可用于IBDs的治疗剂，使用了抑制前列腺素的产生的5- 氨基水杨酸(5-ASA)类药物，并且其实例是柳氮和甾体免疫抑制剂药 物。

柳氮可能引起副作用，例如饱胀，头痛，皮疹，肝脏疾病，白细胞 减少，粒细胞缺乏，或男性不育症，或不利影响。此外，目前还不清楚 柳氮是否具有对在显示改善的患者的肠的受影响部分有切口的患者中的 复发有足够的抑制效果。

类固醇免疫抑制剂是一种肾上腺皮质类固醇，并且已经承认有短期 影响。然而，不能改善其长期预后，并且由于副作用，包括诱导感染性 疾病，继发性肾上腺皮质机能不全，消化性溃疡，糖尿病，精神障碍， 以及甾体肾脏疾病，其限制是，只有在急性发作的情况下才使用类固醇 免疫抑制剂药物。

另一方面，血管生成抑制剂可以作为药物应用于与血管生成或IBDs 相关的这样的各种疾病的治疗，或作为抗肿瘤剂用于预防癌症的生长和 转移。因此，最近，通过抑制血管生成来治疗上述疾病的研究正积极进 行。

发明内容

技术问题

在这方面，本发明人已经完成本发明，通过确认具有特定结构的氨 基吡啶衍生物或氨基吡啶衍生物的药用可接受盐对血管生成具有良好的 抑制效果，对炎性肠疾病和癌症有治疗效果，对转移有抑制效果。

因此，在此提供氨基吡啶衍生物或其药用可接受盐。

因此，在此提供包括氨基吡啶衍生物或其药用可接受盐作为活性组 分的药物组合物。

技术方案

为了实现上述技术问题，提供了一种由化学式1表示的氨基吡啶衍 生物或其药用可接受盐。

[化学式1]

在化学式1中，R¹，R²和R⁴是彼此相同或不同的，并且可以是每个 是选自氢，C1-C4烷基，C1-C4烷氧基和卤素的一种，R³可以是选自C1-C4 烷氧基，苄氧基和羟基的一种，R⁵可以是选自由以下物质中选择的一种， 即从卤素，羟基，C1-C12烷氧基，苯氧基，C1-C12烷基氨基，C6-C14 芳基和C1-C4烷基中选取的一个或两个取代基取代或不取代的C1-C15 烷基；从卤素，羟基，C1-C12烷氧基，C1-C12烷基氨基和C1-C4烷基 中选取的一个或两个取代基取代或不取代的C6-C14芳基；由或者不由 C6-C14芳基取代的C2-C12链烯基；C3-C8环烷基；以及C3-C14杂环化 合物。

另外，提供包括由上面化学式1表示的氨基吡啶衍生物或其药用可 接受盐作为活性组分的药物组合物。

有益效果

根据本发明，在作为血管生成模型的鸡胚绒毛尿囊膜中，氨基吡啶 衍生物或其药用可接受盐可以通过处理一种血管生成诱导剂抑制血管生 成，例如血管内皮生长因子(VEGF)。因此，根据本发明，氨基吡啶衍 生物或其药用可接受盐作为药物用于预防或治疗与血管生成相关的疾病 是有用的，例如黄斑变性和关节炎。

此外，根据本发明，氨基吡啶衍生物或其药用可接受盐可以抑制在 炎症性肠疾病的模型中的结肠炎，因此，作为药物对于预防或治疗炎症 性肠疾病是有用的。

此外，根据本发明，氨基吡啶衍生物或其可药用的盐作为药物对于 抑制癌症的生长和转移是有用的，因为，在接种绒毛尿囊膜与肺癌细胞 后，可以抑制在肿瘤形成和肿瘤生长的血管生成，可以抑制组织蛋白酶S 的活性，其在癌症的转移和侵入中起关键作用。

附图说明

图1是根据典型的实施方式的由化学式1表示的氨基吡啶衍生物的 图。

图2是根据另一典型的实施方式的由化学式1表示的氨基吡啶衍生 物的图。

图3示出了化合物8a,8b和8g针对抑制血管生成的ID₅₀值。

图4示出了管内皮生长因子(VEGF)-诱导ROS的结果，其清除化 合物8a和8b的活性。

图5示出了VGEF-诱导ROS的结果，其通过处理具有4-羟基壬烯酸 (4-HNE)ARPE-19细胞系清除化合物8a和8b的活性，4-HNE是黄斑 变性的危险因素。

图6示出了VEGF-诱导ROS的结果，其通过处理具有血管紧张素II (AngⅡ)的ARPE-19细胞系清除化合物8a和8b的活性，AngⅡ是黄斑 变性的危险因素。

图7至10示出了通过观察氨基吡啶衍生物对在由TNBS诱导的大鼠 中的结肠炎的抑制效果得到的结果；图7示出了当从施用酰氨基吡啶衍 生物的第一天到第六天每天记录的大鼠的体重改变，图8是示出了用肉 眼观察的大肠的情况的图，图9是示出了大肠的重量的图，而图10是示 出了髓过氧化物酶(MPO)测定的图。

图11是示出了在接种绒毛尿囊膜(CAM)与A549肺癌细胞之后， 通过观察化合物8a,8b和8g在血管生成和肿瘤生成上的抑制效果的图。

图12是示出了通过观察组织蛋白酶抑制剂对MDA-MB-231乳腺癌 的抑制效果得到的结果图。

最优实施方式

本发明提供了由下面的化学式1表示的氨基吡啶衍生物或其可药用 的盐。

[化学式1]

在化学式1中，R¹，R²和R⁴是彼此相同或不同的，并且可以是选自 氢，C1-C4烷基，C1-C4烷氧基和卤素的一种，R³可以是选自C1-C4烷 氧基，苄氧基和羟基的一种，而R⁵可以是选自以下物质中的一种，即由 或者不由从卤素，羟基，C1-C12烷氧基，苯氧基，C1-C12烷基氨基， C6-C14芳基和C1-C4烷基的选取的一个或两个取代基取代的C1-C15烷 基；由或者不由从卤素，羟基，C1-C12烷氧基，C1-C12烷基氨基，或 C1-C4烷基中选取的一个或两个取代基取代的C6-C14芳基；由或者不由 C6-C14芳基取代的C2-C12链烯基；C3-C8环烷基；以及和C3-C14杂 环化合物。

另外，本发明提供了用于预防或治疗与血管生成相关的疾病的药物 组合物，且包括化学式1的氨基吡啶衍生物或其可药用的盐作为活性组 分的药物组合物。

另外，本发明提供了一种用于治疗或预防炎症性肠疾病的药物组合 物，且包括化学式1的氨基吡啶衍生物或其可药用的盐作为活性组分的 药物组合物。

另外，本发明提供了一种用于预防或治疗癌症的药物组合物，药物 组合物包括化学式1的氨基吡啶衍生物或其可药用的盐作为活性组分。

另外，本发明提供了一种用于预防或抑制癌症侵入或转移的药物组 合物，药物组合物包括化学式1的氨基吡啶衍生物或其可药用的盐作为 活性组分。

具体实施方式

以下，将对本发明进行更详细的说明。

本发明提供了由化学式1表示的氨基吡啶衍生物或其药用可接受盐。

[化学式1]

在化学式1中，R¹,R²,和R⁴可以彼此相同或彼此不同，并且可以 选自氢、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基和卤素，R³可以是选自C1-C4烷氧 基、苄氧基和羟基的一种，而R⁵可以是选自以下物质的一种，即是由或 者不由从卤素、羟基、C1-C12烷氧基、苯氧基、C1-C12烷基氨基、C6-C14 芳基和C1-C4烷基的一个或两个取代基取代的C1-C15烷基，由或者不 由从卤素、羟基、C1-C12烷氧基、C1-C12烷基氨基、和C1-C4烷基中 选取的一个或两个取代基取代的C6-C14芳基；由或者不由C6-C14芳基 取代的C2-C12链烯基；C3-C8环烷基；以及C3-C14杂环化合物。

优选地，在化学式1的氨基吡啶衍生物中，R¹,R²和R⁴可以是从氢、 C1-C4烷基、C1-C4烷氧基中选择的一种，R³可以是从苄氧基和羟基中 选择的一种，R⁵可以是从以下物质选择的一种，即C1-C15烷基，其由 或者不由卤素或C1-C4烷基取代，苯基由或者不由卤素、羟基、C1-C4 烷氧基或C1-C4烷基取代；C1-C4烷基由或者不由苯基或卤代苯基取代； 肉桂；苯氧基；C3-C8环烷基；苯并二茂；萘；以及噻吩。

更优选地，酰氨基吡啶衍生物可以选自N-(5-苄氧基-3,4,6-三甲基 吡啶-2-基)酰胺衍生物和N-(5-羟基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)酰胺衍生 物。

N-(5-苄氧基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)酰胺衍生物可以是选自由以 下物质构成的组中的一个，该组包括N-(5-苄氧基-3,4,6-三甲基吡啶-2- 基)乙酰胺，N-(5-苄氧基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)十二烷酰胺，N-(5- 苄氧基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)-4-氯丁酰胺，N-(5-苄氧基-3,4,6-三甲基 吡啶-2-基)异丁酰胺，N-(5-苄氧基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)-3-甲基丁 酰胺，N-(5-苄氧基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)棕榈酰胺，N-(5-苄氧基-3,4,6- 三甲基吡啶-2-基)环戊烷甲酰胺，N-(5-苄氧基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基) 环己烷甲酰胺，N-(5-苄氧基-3,4,6三甲基吡啶-2-基)-2-苯基乙酰胺， N-(5-苄氧基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)-3-苯基丙酰胺，N-(5-苄氧基-3-， 4,6-三甲基吡啶-2-基)苯甲酰胺，N-(5-苄氧基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基) -4-氟苯甲酰胺，N-(5-苄氧基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)-4-甲氧基苯甲酰 胺，N-(5-苄氧基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)-4-(叔丁基)苯甲酰胺，N- (5-苄氧基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-甲酰 胺，N-(5-苄氧基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)-1-萘甲酰胺，N-(5-苄氧基 -3,4,6-三甲基吡啶-2-基)噻吩-2-甲酰胺，N-(5-苄氧基-3,4,6-三甲基吡啶 -2-基)-2-乙基丁酰胺，N-(5-苄氧基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)-2-苯氧基 乙酰胺，N-(5-苄氧基-3,4,6-三甲基-2-基)-2-苯基丁酰胺，N-(5-苄氧 基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)-2,4,6-三甲基苯甲酰胺，3-苄氧基-N-(5-苄氧 基-3,4-，6-三甲基吡啶-2-基)苯甲酰胺，N-(5-苄氧基-3,4,6-三甲基吡啶 -2-基)-3,5,5-三甲基己酰胺，N-(5-苄氧基-3,4-，6-甲基吡啶-2-基)-2- (4-氯苯基)乙酰胺，N-(5-苄氧基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)-2,2-二氯乙 酰胺和N-(5-苄氧基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)肉桂酰胺。

N-(5-羟基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)酰胺衍生物可以选自由以下物 质构成的组的一个，该组包括N-(5-羟基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)乙酰 胺，N-(5-羟基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)十二烷酰胺，N-(5-羟基-3,4,6- 三甲基吡啶-2-基)-4-氯丁酰胺，N-(5-羟基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)异 丁酰胺，N-(5-羟基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)-3-甲基丁酰胺，N-(5-羟 基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)棕榈酰胺，N-(5-羟基-3,4-，6-三甲基吡啶-2- 基)环戊烷甲酰胺，N-(5-羟基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)环己烷甲酰胺， N-(5-羟基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)-2-苯基乙酰胺，N-(5-羟基-3,4,6- 三甲基吡啶-2-基)-3-苯基丙酰胺，N-(5-羟基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基) 苯甲酰胺，N-(5-羟基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)-4-氟苯甲酰胺，N-(5- 羟基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)-4-甲氧基苯甲酰胺，N-(5-羟基-3,4,6- 三甲基吡啶-2-基)-4-(叔丁基)苯甲酰胺，N-(5-羟基-3,4,6-三甲基吡 啶-2-基)苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-甲酰胺，N-(5-羟基-3,4,6-三甲基 吡啶-2-基)-1-萘酰胺，N-(5-羟基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)噻吩-2-甲酰 胺，2-乙基-N-(5-羟基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)丁酰胺，N-(5-羟基-3,4,6- 三甲基吡啶-2-基)-2-苯氧基乙酰胺，N-(5-羟基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基) -2-苯基丁酰胺，N-(5-羟基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)-2,4,6-三甲基苯甲酰 胺，3-羟基-N-(5-羟基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)苯甲酰胺，N-(5-羟基-3,4,6- 三甲基吡啶-2-基)-3,5,5-三甲基己酰胺，2-(4-氯苯基)-N-(5-羟基-3-,4,6- 三甲基吡啶-2-基)乙酰胺，2,2-二氯-N-(5-羟基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基) 乙酰胺和N-(5-羟基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)肉桂酰胺。

氨基吡啶衍生物的药用可接受盐可以是选自由以下物质构成的组的 有机酸，该组包括草酸，马来酸，富马酸，苹果酸，酒石酸，柠檬酸， 和苯甲酸的，或者可以是由无机酸产生的酸加成盐形式，其选自由盐酸、 硫酸、磷酸和氢溴酸构成的组。

根据本发明，化学式1的氨基吡啶衍生物和其药用可接受盐可以根 据反应式1表示的制备方法制备。

[反应式1]

更详细地，将亚硫酰氯和二甲基甲酰胺(DMF)加入盐酸吡哆醇， 回流搅拌，以便获得化合物1。然后，将少量锌粉加入到反应溶液中，在 其中用乙酸悬浮化合物1，回流搅拌混合溶液，以便获得化合物2。然后， 将1,3-二溴-5,5-二甲基乙内酰脲(DBDMH)加入到反应溶液，在其中用 四氢呋喃(THF)悬浮化合物2，回流搅拌混合溶液，以便获得化合物3。 然后，将K₂CO₃和苄基氯(PhCH₂Cl)加入到反应溶液，在其中化合物3 溶解于DMF中，以便获得化合物4。随后，将二苯甲酮亚胺加入到反应 溶液，该反应溶液中化合物4、NaO^tBu、三(二亚苄基丙酮)二钯(Pd₂(dba)₃)和2,2'-双(二苯基膦)-1,1'-联萘(BINAP)溶解于甲苯中， 回流搅拌混合溶液，以便获得化合物5。然后，将包含少量乙酰氯的甲醇 溶液加入到反应溶液中，在其中化合物5溶解于甲醇和THF的混合溶剂 中，回流搅拌混合溶液，以便获得化合物6。然后，依次将三乙胺和乙酰 氯依次加入到反应溶液中，在其中化合物6溶解于CH₂Cl₂中，并且搅拌 混合溶液，以便获得化合物7。此外，将Pd/C加入到反应溶液中，在其 中化合物7溶解于甲醇，并在氢气氛下搅拌混合溶液，以便获得化合物8。 可替代地，将BCl₃加入到反应溶液中，在其中化合物7溶解于CH₂Cl₂BCl₃, 以便获得化合物8。

另外，本发明提供用于预防或治疗与血管生成相关的药物组合物， 该药物组合物包括化学式1的氨基吡啶衍生物或其药用可接受盐作为活 性组分。

与血管生成有关的疾病可以是眼科疾病，选自黄斑变性、糖尿病性 视网膜病、增殖性玻璃体视网膜病变、未成熟的视网膜病变、青光眼、 变性、翼状胬肉、晶状体后纤维增生症、沙眼、排斥角膜移植、角膜溃 疡、圆锥形角膜、及眼部炎症。

与血管生成有关的疾病可以选自类风湿性关节炎、骨关节炎，化脓 性关节炎、牛皮癣、干燥(Siogren)综合征、异常切粘连、骨病、蛋白 尿、腹主动脉瘤、外伤性关节损伤导致的退行性软骨损失、神经系统脱 髓鞘、肝硬化、肾小球疾病、胚胎-胎儿膜不成熟破裂、牙周病、动脉 粥样硬化、再狭窄、中枢神经系统的炎症性疾病、阿尔茨海默氏病和皮 肤老化。

根据本发明，在作为血管生成模型鸡胚绒毛尿囊膜中，氨基吡啶衍 生物或其药用可接受的盐通过处理血管生成诱导剂抑制血管生长，例如 血管内皮生长因子(VEGF)。因此，根据本发明，氨基吡啶衍生物或其 药用可接受盐作为药物对于预防或治疗与血管生成有关的疾病是有用 的，例如黄斑变性和关节炎。

另外，本发明提供了一种用于预防或治疗IBD的药物组合物，药物 组合物包括由化学式1表示的氨基吡啶衍生物或其药用可接受盐作为活 性组分。

IBD可以选自由溃疡性大肠炎、克罗恩病、肠白塞病、出血性直肠 溃疡、和结肠袋炎组成的组。

根据本发明，在IBDs的模型中，氨基吡啶衍生物或其药用可接受盐 具有良好的结肠炎抑制作用，并且因此，作为药剂对于预防或治疗IBDs 是有用的。

另外，本发明提供了用于预防或治疗癌症疾病的药物组合物，药物 组合物包括由化学式1表示的氨基吡啶衍生物或其药用可接受盐作为活 性组分。

另外，本发明提供了一种用于预防或抑制癌症的侵入或转移的药物 组合物，药物组合物包括由化学式1表示的氨基吡啶衍生物或其药用可 接受盐作为活性组分。

癌症疾病可以是选自以下组中的一个以下组，该组由肺癌、乳腺癌、 膀胱癌、骨癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、直肠癌、咽喉癌、喉癌、食道 癌、胰腺癌、结肠癌、胃癌、舌癌、皮肤癌、脑癌、子宫癌、头或颈癌、 胆囊癌、口腔癌、结肠癌、肛门癌、中枢神经系统的肿瘤和肝癌组成。

在绒毛尿囊膜模型中的肺癌细胞的接种上，化学式1的氨基吡啶衍 生物或其药用可接受盐抑制血管生成和由肿瘤发生引起的肿瘤生长，并 且也能抑制组织蛋白酶S的活性，其在癌症的转移和侵入中起重要作用， 并且因此作为癌症生长和转移的抑制剂是有用的。

根据本发明，施用化学组合物的施用量和方法可能根据药物组合物 的制剂和用法有所不同。

根据本发明，基于药物组合物的总重量，药物组合物可以包括约0.1 至约50重量％的氨基吡啶衍生物或其药用可接受盐。

此外，根据本发明，药物组合物还可以包括适当的载体、赋形剂和 稀释剂，其通常用在药物组合物的制备中。

载体、赋形剂和稀释剂的示例包括乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、 甘露醇、木糖醇、赤藓醇、麦芽糖醇、淀粉、阿拉伯橡胶、藻酸盐、明 胶、磷酸钙、硅酸钙、纤维素、甲基纤维素、微晶纤维素、聚乙烯吡咯 烷酮、水、羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸镁和矿物 油。

根据本发明，药物组合物可以配制成口服制剂，例如粉剂、颗粒剂、 片剂、胶囊、悬浮液、乳液、糖浆和气雾剂，或者可以以外用剂，栓剂， 无菌可注射溶液的形式配制，每个根据本领域中的典型方法。

当配制时，可以使用典型的稀释剂或赋形剂，例如填充剂，补充剂、 粘合剂、润湿剂、崩解剂和表面活性剂。用于口服给药的固体口服制剂 的示例包括片剂、丸剂、粉剂、颗粒剂和胶囊，而且这些固体制剂通过 与至少一个赋形剂混合制备，例如淀粉、碳酸钙、蔗糖或乳糖或明胶。

此外，除了简单的赋形剂，可以使用润滑剂，例如硬脂酸镁和滑石。 用于口服制剂的液体口服剂示例包括悬浮液、溶液、乳剂和糖浆剂。除 了通常使用的简单的稀释剂，例如水或液体石蜡，液体制剂还可以包括 各种赋形剂，例如，润湿剂、甜味剂、芳香剂和防腐剂。用于肠胃外给 药的制剂的示例包括无菌水溶液，非水性溶剂，悬浮液，乳液，冻干制 剂和栓剂。非水溶剂和悬浮剂的示例包括丙二醇，聚乙二醇，植物油， 如橄榄油，以及可注射酯如油酸乙酯。栓剂基质的实例包括witepsol，聚 乙二醇，吐温61，可可脂，月桂精，和水溶性封片胶(glycerolgeletin)。

根据本发明，氨基吡啶衍生物或其药用可接受盐根据患者的年龄， 性别或体重可以不同，但例如，可以以约0.001至约100毫克/千克的剂 量施用至患者，优选，约0.01至约10毫克/千克，一天一次或一天多次。 此外，氨基吡啶衍生物或其药用可接受盐的剂量根据给药途径，疾病的 严重性，或患者的性别，体重或年龄增加或减少。因此，该剂量并不解 释为以任何方面限制本发明的范围。

药物组合物可以通过多种途径施用至哺乳动物，而哺乳动物的示例 包括大鼠，小鼠，牛和人。可以预期所有的给药途径，例如，药物组合 物可以通过口服，直肠或静脉，肌肉，皮下，子宫内或脑室内注射来给 药。

根据本发明，氨基吡啶衍生物或其药用可接受盐致死剂量至少为 2g/kg的50％(LC₅₀)，从而保证稳定性。因此，根据本发明，氨基吡啶 衍生物或其药用可接受盐可以应用到药物组合物。

下面，通过以下实施例和对比实施例对本发明进一步解释。然而， 应当理解的是，这些实施例例仅是用来具体阐述本公开，并且它们不限 于任何形式。

<实施例1>4,5-双(氯甲基)-2-甲基吡啶-3-醇盐酸盐(1)的制备

将30ml亚硫酰氯和0.2毫升DMF(2.583mmol)加入到5克吡哆素 盐酸盐(24.31mmol)，然后，80℃回流下搅拌混合溶液三小时。在反应 溶液冷却至室温后，加入70毫升乙醚，并且在冰浴冷却搅拌混合溶液1 小时。对沉淀的固体进行真空过滤，并且用乙醚洗涤过滤的固体，然后 进行干燥，从而得到5.5克白色固体，即，化合物1(产率：93％)。

¹H-NMR(250MHz,DMSO-d₆)δ8.42(s,1H),4.99(s,2H),4.96(s, 2H),2.63(s,3H)ppm

<实施例2>2,4,5-三甲基吡啶-3-醇(2)的制备

将8.08克(123.69mmol)锌粉末细分成50毫升乙酸悬浮液，其含 有10克(41.23mmol)的化合物1，然后，130℃回流下下搅拌混合溶液 两小时。在冷却至室温后，将反应溶液进行真空过滤。然后，使用10M 的氢氧化钠溶液调节滤液的PH值到6。用盐饱和滤液，并用EtOAc溶 液(100毫升×6)萃取。用饱和盐水洗涤EtOAc溶液，用无水MgSO₄干燥，过滤，然后，在减压下浓缩。柱色谱分离(氯仿：甲醇＝20：1) 纯化残余物，从而得到5.2克(92％)白色固体，即，化合物2。

¹H-NMR(250MHz,DMSO-d₆)δ8.49(s,1H),7.72(s,1H),2.31(s, 3H),2.12(s,3H),2.08(s,3H)ppm

<实施例3>6-溴-2,4,5-三甲基吡啶-3-醇(3)的制备

将2.5g(9.11mmol)的1,3-二溴-5,5-二甲基乙内酰脲(DBDMH)加 入到30ml含有2.5g(18.22mmol)化合物2的THF悬浮液中，然后，将 混合溶液在室温下搅拌3小时。将反应溶液浓缩后，将残留物用500ml EtOAc溶液和20ml水稀释，然后，水层用EtOAc(100mLx3)萃取。EtOAc 溶液用饱和盐水洗涤，并用无水MgSO4干燥，过滤，然后减压浓缩。残 留物通过柱层析(EtOAc：己烷＝1：4)纯化，从而得到3.22(80％)浅 黄色固体，即，化合物3。

¹H-NMR(250MHz,CHCl₃-d)δ5.56(brs,1H),2.42(s,3H),2.31(s, 3H),2.25(s,3H)ppm

<实施例4>3-(苄氧基)-6-溴-2,4,5-三甲基吡啶(4)的制备

将20.78g(150.04mmol)的K₂CO₃和5.2ml(45.12mmol)苄基氯依 次地加入到15ml含有6.5g(30.08mmol)化合物3的DMF中，且将混 合溶液在室温下搅拌12小时。将用700mlEtOAc溶液稀释反应液，然后 用水(20mLx10)洗涤。EtOAc溶液用饱和盐水洗涤，并用无水MgSO₄干燥，过滤，然后减压浓缩。残留物通过柱层析(EtOAc：己烷＝1：20) 纯化，从而得到8.9g(97％)白色固体，即，化合物4。

¹H-NMR(250MHz,CHCl₃-d)δ7.38-7.43(m,5H),4.77(s,2H),2.46 (s,3H),2.32(s,3H),2.24(s,3H)ppm

<实施例5>5-(苄氧基)-N-(二苯基亚甲基)-3,4,6三甲基吡啶-2- 胺(5)的制备

将1.73ml(9.80mmol)二苯甲酮亚胺加入到30ml含有3g(9.80mmol) 化合物4、203mg(0.20mmol)的三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(Pd₂(DBA)₃)、 249mg(0.39mmol)2,2'-双(二苯基膦)-1,1'-联萘(BINAP)和1.36g(13.71 mmol)NaO^tBu的甲苯溶液中，然后，将混合溶液在120℃回流条件下搅 拌12小时。冷却到室温后，将反应液用700mlEtOAc和10ml水稀释。 然后，EtOAc溶液用饱和盐水(30mLx5)洗涤，并用无水MgSO₄干燥， 过滤，然后减压浓缩。残留物通过柱层析(EtOAc：己烷＝1：4)纯化， 从而得到3.28g(83％)黄色固体，即，化合物5。

¹H-NMR(250MHz,CHCl₃-d)δ7.80(d,J＝7.1Hz,2H),7.17-7.48(m, 13H),4.69(s,2H),2.29(s,3H),2.03(s,3H),1.91(s,3H)ppm

<实施例6>5-(苄氧基)-3,4,6三甲基吡啶-2-胺(6)的制备

在冰浴条件下将2ml乙酰氯缓慢滴加以溶解到50ml甲醇中。将混合 液加入到含有50ml甲醇和5mlTHT的化合物5的溶液中，然后，将混 合溶液在室温下搅拌12小时。将在压力下浓缩的反应溶液用300ml EtOAc稀释，然后，用饱和碳酸氢钠溶液(20mLx4)洗涤。EtOAc溶液 用20ml饱和盐水洗涤，并用无水MgSO₄干燥，过滤，然后减压浓缩。 残留物通过柱层析(氯仿：甲醇＝20：1)纯化，从而得到992mg(83％) 浅黄色固体，即，化合物6。

¹H-NMR(250MHz,CHCl₃-d)δ7.31-7.45(m,5H),4.68(s,2H),4.25 (brs,1H),2.34(s,3H),2.16(s,3H),1.99(s,3H)ppm

<实施例7>N-(5-苄氧基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)酰胺衍生物(7a-7Z) 的制备

每种N-(5-苄氧基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)酰胺衍生物以图1所示 的下列方法制备。

<实施例7-1>N-(5-苄氧基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)乙酰胺(7a)的 制备

将0.161ml(1.155mmol)的三乙胺和0.073ml(0.990mmol)乙酰氯 依次加入5ml含有200mg(0.825mmol)化合物6的CH₂Cl₂中，然后， 将混合溶液在室温下搅拌8小时。将反应溶液用100mlCH₂Cl₂稀释，然 后，用10ml饱和碳酸氢钠水溶液洗涤两次，再用10ml水洗涤两次。CH₂Cl₂溶液用饱和盐水洗涤，并用无水MgSO₄干燥，过滤，然后减压浓缩。残 留物通过柱层析(EtOAc：己烷＝2：1)纯化，从而得到184mg(78％) 黄色固体，即，化合物7a。

¹H-NMR(250MHz,CHCl₃-d)δ8.44(brs,1H),7.30-7.45(m,5H), 4.75(s,2H),2.40(s,3H),2.23(s,3H),2.16(s,3H),2.13(s,3H)ppm

<实施例7-2>N-(5-苄氧基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)十二烷酰胺(7b) 的制备

将0.120ml(0.867mmol)的三乙胺和0.176ml(0.743mmol)十二烷 酰氯依次加入5ml含有150mg(0.619mmol)化合物6的CH₂Cl₂中，然 后，将混合溶液在室温下搅拌5小时。将反应溶液用100mlCH₂Cl₂稀释， 然后，用10ml饱和碳酸氢钠水溶液洗涤两次，再用10ml水洗涤两次。 CH₂Cl₂溶液用饱和盐水洗涤，并用无水MgSO₄干燥，过滤，然后减压浓 缩。残留物通过柱层析(EtOAc：己烷＝1：5)纯化，从而得到184mg (70％)白色固体，即，化合物7b。

¹H-NMR(250MHz,CHCl₃-d)δ7.74(brs,1H),7.35-7.46(m,5H), 4.76(s,2H),2.41(s,3H),2.35-2.40(m,2H),2.23(s,3H),2.11(s,3H), 1.65-1.77(m,2H),1.25(s,16H),0.86(t,J＝6.8Hz,3H)ppm

<实施例7-3>N-(5-苄氧基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)-4-氯丁酰胺(7c) 的制备

将0.688ml(2.475mmol)的三乙胺和1.155ml(2.887mmol)4-氯丁 酰氯依次加入100ml含有500mg(2.063mmol)化合物6的CH₂Cl₂中， 然后，将混合溶液在室温下搅拌5小时。将反应溶液用100mlCH₂Cl₂稀 释，然后，用10ml饱和碳酸氢钠水溶液洗涤两次，再用10ml水洗涤两 次。CH₂Cl₂溶液用饱和盐水洗涤，并用无水MgSO₄干燥，过滤，然后减 压浓缩。残留物通过柱层析(EtOAc：己烷＝1：1)纯化，从而得到102mg (14％)白色固体，即，化合物7c。

₁H-NMR(250MHz,CHCl₃-d)δ8.37(brs,1H),7.33-7.44(m,5H), 4.76(s,2H),3.63(t,J＝6.3Hz,2H),2.59(t,J＝7.1Hz,2H),2.41(s,3H), 2.23(s,3H),2.16(t,J＝6.8Hz,2H),2.11(s,3H)ppm

<实施例7-4>N-(5-苄氧基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)异丁酰胺(7d) 的制备

将0.161ml(1.155mmol)的三乙胺和107mg(0.990mmol)异丁酰氯 依次加入100ml含有200mg(0.825mmol)化合物6的CH₂Cl₂中，然后， 将混合溶液在室温下搅拌5小时。将反应溶液用100mlCH₂Cl₂稀释，然 后，用10ml饱和碳酸氢钠水溶液洗涤两次，再用10ml水洗涤两次。CH₂Cl₂溶液用饱和盐水洗涤，并用无水MgSO₄干燥，过滤，然后减压浓缩。残 留物通过柱层析(EtOAc：己烷＝1：3)纯化，从而得到177mg(72％) 白色固体，即，化合物7d。

¹H-NMR(250MHz,CHCl₃-d)δ8.51(brs,1H),7.34-7.47(m,5H), 4.75(s,2H),2.56-2.67(m,1H),2.41(s,3H),2.24(s,3H),2.09(s,3H),1.25 (s,3H),1.22(s,3H)ppm

<实施例7-5>N-(5-苄氧基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)-3-甲基丁酰胺 (7e)的制备

将0.161ml(1.155mmol)的三乙胺和0.124ml(0.990mmol)异戊酰 氯顺序地加入10ml含有200mg(0.825mmol)化合物6的CH₂Cl₂中，然 后，将混合溶液在室温下搅拌5小时。将反应溶液用100mlCH₂Cl₂稀释， 然后，用10ml饱和碳酸氢钠水溶液洗涤两次，再用10ml水洗涤两次。 CH₂Cl₂溶液用饱和盐水洗涤，并用无水MgSO₄干燥，过滤，然后减压浓 缩。残留物通过柱层析(EtOAc：己烷＝1：3)纯化，从而得到197mg (73％)白色固体，即，化合物7e。

¹H-NMR(250MHz,CHCl₃-d)δ8.59(brs,1H),7.31-7.45(m,5H), 4.74(s,2H),2.40(s,3H),2.24-2.25(m,6H),2.12(s,3H),1.00(d,J＝6.3Hz, 6H)ppm

<实施例7-6>N-(5-苄氧基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)棕榈酰胺(7f) 的制备

将0.161ml(1.155mmol)的三乙胺和0.123ml(0.990mmol)棕榈酰 氯依次加入10ml含有200mg(0.825mmol)化合物6的CH₂Cl₂中，然后， 将混合溶液在室温下搅拌10小时。将反应溶液用100mlCH₂Cl₂稀释，然 后，用10ml饱和碳酸氢钠水溶液洗涤两次，再用10ml水洗涤两次。CH₂Cl₂溶液用饱和盐水洗涤，并用无水MgSO₄干燥，过滤，然后减压浓缩。残 留物通过柱层析(EtOAc：己烷＝1：3)纯化，从而得到207mg(77％) 白焦糖相，即，化合物7f。

¹H-NMR(250MHz,CHCl₃-d)δ7.90(brs,1H),7.30-7.45(m,5H), 4.74(s,2H),2.40(s,3H),2.22(s,3H),2.04(s,3H),1.32(s,9H)ppm

<实施例7-7>N-(5-苄氧基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)环戊烷甲酰胺 (7g)的制备

将0.091ml(0.654mmol)的三乙胺和0.069ml(0.560mmol)环戊烷 碳酰氯顺序地加入10ml含有113mg(0.467mmol)化合物6的CH₂Cl₂中，然后，将混合溶液在室温下搅拌4小时。将反应溶液用100mlCH₂Cl₂稀释，然后，用10ml饱和碳酸氢钠水溶液洗涤两次，再用10ml水洗涤 两次。CH₂Cl₂溶液用饱和盐水洗涤，并用无水MgSO₄干燥，过滤，然后 减压浓缩。残留物通过柱层析(EtOAc：己烷＝1：3)纯化，从而得到 148mg(93％)黄色固体，即，化合物7g。

¹H-NMR(250MHz,CHCl3-d)δ8.71(brs,1H),7.34-7.45(m,5H), 4.74(s,2H),2.73-2.85(m,1H),2.40(s,3H),2.23(s,3H),2.09(s,3H), 1.55-1.90(m,8H)ppm

<实施例7-8>N-(5-苄氧基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)环己烷羧酰胺 (7h)的制备

将0.161ml(1.155mmol)的三乙胺和0.132ml(0.990mmol)环己酰 氯顺序地加入10ml含有200mg(0.825mmol)化合物6的CH₂Cl₂中，然 后，混合溶液在室温下搅拌5小时。将反应溶液用100mlCH₂Cl₂稀释， 然后，用10ml饱和碳酸氢钠水溶液洗涤两次，再用10ml水洗涤两次。 CH₂Cl₂溶液用饱和盐水洗涤，并用无水MgSO₄干燥，过滤，然后减压浓 缩。残留物通过柱层析(EtOAc：己烷＝1：1)纯化，从而得到103mg (35％)白色固体，即，化合物7h。

¹H-NMR(250MHz,CHCl₃-d)δ8.00(brs,1H),7.33-7.45(m,5H), 4.75(s,2H),2.40(s,3H),2.29-2.35(m,1H),2.23(s,3H),2.08(s,3H), 1.94-2.00(m,2H),1.78-1.81(m,2H),1.46-1.61(m,2H),1.19-1.38(m,4H) ppm

<实施例7-9>N-(5-苄氧基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)-2-苯基乙酰胺 (7i)的制备

将0.161ml(1.155mmol)的三乙胺和0.134ml(0.990mmol)苯乙酰 氯依次加入10ml含有200mg(0.825mmol)化合物6的CH₂Cl₂中，然后， 将混合溶液在室温下搅拌5小时。将反应溶液用100mlCH₂Cl₂稀释，然 后，用10ml饱和碳酸氢钠水溶液洗涤两次，再用10ml水洗涤两次。CH₂Cl₂溶液用饱和盐水洗涤，并用无水MgSO₄干燥，过滤，然后减压浓缩。残 留物通过柱层析(EtOAc：己烷＝1：1)纯化，从而得到190mg(64％) 白色固体，即，化合物7i。

¹H-NMR(250MHz,CHCl₃-d)δ8.08(brs,1H),7.26-7.44(m,10H), 4.72(s,2H),3.74(s,2H),2.36(s,3H),2.20(s,3H),2.04(s,3H)ppm

<实施例7-10>N-(5-苄氧基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)-3-苯基丙酰胺 (7j)的制备

将0.161ml(1.155mmol)的三乙胺和0.147ml(0.990mmol)苯乙酰 氯依次加入10ml含有200mg(0.825mmol)化合物6的CH₂Cl₂中，然后， 将混合溶液在室温下搅拌8小时。将反应溶液用100mlCH₂Cl₂稀释，然 后，用10ml饱和碳酸氢钠水溶液洗涤两次，再用10ml水洗涤两次。CH₂Cl₂溶液用饱和盐水洗涤，并用无水MgSO₄干燥，过滤，然后减压浓缩。残 留物通过柱层析(EtOAc：己烷＝1：3)纯化，从而得到310mg(99％) 白色固体，即，化合物7j。

¹H-NMR(250MHz,CHCl₃-d)δ8.33(brs,1H),7.14-7.44(m,10H), 4.74(s,2H),3.02(t,J＝7.2Hz,2H),2.70(t,J＝8.2Hz,2H),2.38(s,3H), 2.22(s,3H),2.03(s,3H)ppm

<实施例7-11>N-(5-苄氧基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)苯甲酰胺(7k) 的制备

将0.136ml(0.965mmol)的三乙胺和0.096ml(0.827mmol)苯甲酰 氯顺序地加入10ml含有167mg(0.689mmol)化合物6的CH₂Cl₂中，然 后，将混合溶液在室温下搅拌12小时。将反应溶液用100mlCH₂Cl₂稀释， 然后，用10ml饱和碳酸氢钠水溶液洗涤两次，再用10ml水洗涤两次。 CH₂Cl₂溶液用饱和盐水洗涤，并用无水MgSO4干燥，过滤，然后减压 浓缩。残留物通过柱层析(EtOAc：己烷＝1：5)纯化，从而得到206mg (86％)白焦糖相，即，化合物7k。

<实施例7-12>N-(5-苄氧基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)-4-氟苯甲酰胺 (7l)的制备

将0.161ml(1.155mmol)的三乙胺和0.119ml(0.990mmol)4-氟苯 甲酰氯依次加入10ml含有200mg(0.825mmol)化合物6的CH₂Cl₂中， 然后，将混合溶液在室温下搅拌5小时。将反应溶液用100mlCH₂Cl₂稀 释，然后，用10ml饱和碳酸氢钠水溶液洗涤两次，再用10ml水洗涤两 次。CH₂Cl₂溶液用饱和盐水洗涤，并用无水MgSO₄干燥，过滤，然后减 压浓缩。残留物通过柱层析(EtOAc：己烷＝1：5)纯化，从而得到218mg (72％)白色固体，即，化合物7l。

1H-NMR(250MHz,CHCl₃-d)δ8.86(brs,1H),7.93-7.98(m,2H), 7.31-7.46(m,5H),7.06-7.13(m,2H),4.76(s,2H),2.39(s,3H),2.27(s,3H), 2.17(s,3H)ppm

<实施例7-13>N-(5-苄氧基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)-4-甲氧基苯甲 酰胺(7m)的制备

将0.161ml(1.155mmol)的三乙胺和0.135ml(0.990mmol)4-甲氧 基苯甲酰氯顺序地加入10ml含有200mg(0.825mmol)化合物6的CH₂Cl₂中，然后，将混合溶液在室温下搅拌4小时。将反应溶液用100mlCH₂Cl₂稀释，然后，用10ml饱和碳酸氢钠水溶液洗涤两次，再用10ml水洗涤 两次。CH₂Cl₂溶液用饱和盐水洗涤，并用无水MgSO₄干燥，过滤，然后 减压浓缩。残留物通过柱层析(EtOAc：己烷＝1：3)纯化，从而得到 220mg(71％)白色固体，即，化合物7m。

¹H-NMR(250MHz,CHCl₃-d)δ8.61(brs,1H),7.91(dd,J＝6.8,1.9Hz, 2H),7.31-7.46(m,5H),6.91(dd,J＝6.9,1.9Hz,2H),4.75(s,2H),3.83(s, 3H),2.40(s,3H),2.26(s,3H),2.16(s,3H)ppm

<实施例7-14>N-(5-苄氧基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)-4-(叔丁基) 苯甲酰胺(7n)的制备

将0.161ml(1.155mmol)的三乙胺和0.197ml(0.990mmol)4-叔丁 基苯甲酰氯顺序地加入10ml含有200mg(0.825mmol)化合物6的CH₂Cl₂中，然后，将混合溶液在室温下搅拌3小时。将反应溶液用100mlCH₂Cl₂稀释，然后，用10ml饱和碳酸氢钠水溶液洗涤两次，再用10ml水洗涤 两次。CH₂Cl₂溶液用饱和盐水洗涤，并用无水MgSO₄干燥，过滤，然后 减压浓缩。残留物通过柱层析(EtOAc：己烷＝1：5)纯化，从而得到 218mg(66％)白色固体，即，化合物7n。

¹H-NMR(250MHz,CHCl₃-d)δ8.96(brs,1H),7.89(dd,J＝6.7,1.7Hz, 2H),7.31-7.47(m,7H),4.76(s,2H),2.40(s,3H),2.26(s,3H),2.17(s,3H), 1.32(s,9H)ppm

<实施例7-15>N-(5-苄氧基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)苯并[d][1,3] 二氧杂环戊烯-5-甲酰胺(7o)的制备

将0.161ml(1.155mmol)的三乙胺和186mg(0.990mmol)胡椒酸酰 氯(piperonyloylchloride)依次加入10ml含有200mg(0.825mmol)化 合物6的CH₂Cl₂中，然后，将混合溶液在室温下搅拌5小时。将反应溶 液用100mlCH₂Cl₂稀释，然后，用10ml饱和碳酸氢钠水溶液洗涤两次， 再用10ml水洗涤两次。CH₂Cl₂溶液用饱和盐水洗涤，并用无水MgSO₄干燥，过滤，然后减压浓缩。残留物通过柱层析(EtOAc：己烷＝1：5) 纯化，从而得到233mg(73％)白色固体，即，化合物7o。

¹H-NMR(250MHz,CHCl₃-d)δ8.86(brs,1H),7.31-7.52(m,7H), 6.80(d,J＝8.1Hz,1H),6.00(s,2H),4.75(s,2H),2.39(s,3H),2.25(s,3H), 2.14(s,3H)ppm

<实施例7-16>N-(5-苄氧基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)-1-萘甲酰胺 (7p)的制备

将0.161ml(1.155mmol)的三乙胺和0.153ml(0.990mmol)1-萘酰 氯顺序地加入10ml含有200mg(0.825mmol)化合物6的CH₂Cl₂中，然 后，将混合溶液在室温下搅拌2小时。将反应溶液用100mlCH₂Cl₂稀释， 然后，用10ml饱和碳酸氢钠水溶液洗涤两次，再用10ml水洗涤两次。 CH₂Cl₂溶液用饱和盐水洗涤，并用无水MgSO₄干燥，过滤，然后减压浓 缩。残留物通过柱层析(EtOAc：己烷＝1：5)纯化，从而得到170mg (60％)白色固体，即，化合物7p。

¹H-NMR(250MHz,CHCl₃-d)δ8.69(brs,1H),8.49-8.53(m,1H), 7.83-7.95(m,3H),7.31-7.58(m,8H),4.76(s,2H),2.35(s,3H),2.28-2.29 (m,6H)ppm

<实施例7-17>N-(5-苄氧基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)噻吩-2-甲酰胺 (7q)的制备

将0.161ml(1.155mmol)的三乙胺和0.109ml(0.990mmol)2-噻吩 碳酰氯依次加入10ml含有200mg(0.825mmol)化合物6的CH₂Cl₂中， 然后，将混合溶液在室温下搅拌5小时。将反应溶液用100mlCH₂Cl₂稀 释，然后，用10ml饱和碳酸氢钠水溶液洗涤两次，再用10ml水洗涤两 次。CH₂Cl₂溶液用饱和盐水洗涤，并用无水MgSO₄干燥，过滤，然后减 压浓缩。残留物通过柱层析(EtOAc：己烷＝1：5)纯化，从而得到188mg (64％)黄焦糖相，即，化合物7q。

¹H-NMR(250MHz,CHCl₃-d)δ7.74(dd,J＝3.7,1.0Hz,1H),7.33-7.49 (m,6H),7.05(dd,J＝4.9,3.7Hz,1H),4.76(s,2H),2.40(s,3H),2.25(s,3H), 2.18(s,3H)ppm

<实施例7-18>N-(5-苄氧基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)-2-乙基丁酰胺 (7r)的制备

将0.161ml(1.155mmol)的三乙胺和0.140ml(0.990mmol)2-乙基 丁酰氯依次加入10ml含有200mg(0.825mmol)化合物6的CH₂Cl₂中， 然后，将混合溶液在室温下搅拌3小时。将反应溶液用100mlCH₂Cl₂稀 释，然后，用10ml饱和碳酸氢钠水溶液洗涤两次，再用10ml水洗涤两 次。CH₂Cl₂溶液用饱和盐水洗涤，并用无水MgSO₄干燥，过滤，然后减 压浓缩。残留物通过柱层析(EtOAc：己烷＝1：2)纯化，从而得到215mg (76％)白色固体，即，化合物7r。

¹H-NMR(250MHz,CHCl₃-d)δ7.77(brs,1H),7.30-7.46(m,5H), 4.74(s,2H),2.40(s,3H),2.22(s,3H),2.15-2.18(m,1H),2.10(s,3H), 1.68-1.83(m,2H),1.49-1.65(m,2H),0.98(t,J＝7.4Hz,3H)ppm

<实施例7-19>N-(5-苄氧基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)-2-苯氧基乙酰 胺(7s)的制备

将0.161ml(1.155mmol)的三乙胺和0.140ml(0.990mmol)苯氧基 乙酰氯依次加入10ml含有200mg(0.825mmol)化合物6的CH₂Cl₂中， 然后，将混合溶液在室温下搅拌2小时。将反应溶液用100mlCH₂Cl₂稀 释，然后，用10ml饱和碳酸氢钠水溶液洗涤两次，再用10ml水洗涤两 次。CH₂Cl₂溶液用饱和盐水洗涤，并用无水MgSO₄干燥，过滤，然后减 压浓缩。残留物通过柱层析(EtOAc：己烷＝1：2)纯化，从而得到263mg (85％)白色固体，即，化合物7s。

¹H-NMR(250MHz,CHCl₃-d)δ8.53(brs,1H),7.29-7.47(m,7H), 6.94-7.05(m,3H),4.76(s,2H),4.64(s,2H),2.44(s,3H),2.25(s,3H),2.12 (s,3H)ppm

<实施例7-20>N-(5-苄氧基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)-2-苯基丁酰胺 (7t)的制备

将0.161ml(1.155mmol)的三乙胺和0.169ml(0.990mmol)2-苯基 丁酰氯依次加入10ml含有200mg(0.825mmol)化合物6的CH₂Cl₂中， 然后，将混合溶液在室温下搅拌5小时。将反应溶液用100mlCH₂Cl₂稀 释，然后，用10ml饱和碳酸氢钠水溶液洗涤两次，再用10ml水洗涤两 次。CH₂Cl₂溶液用饱和盐水洗涤，并用无水MgSO₄干燥，过滤，然后减 压浓缩。残留物通过柱层析(EtOAc：己烷＝1：3)纯化，从而得到248mg (77％)黄色的糖稀相，即，化合物7t。

¹H-NMR(250MHz,CHCl₃-d)δ7.90(brs,1H),7.20-7.45(m,10H), 4.72(s,2H),3.45(t,J＝7.4Hz,1H),2.34(s,3H),2.16-2.27(m,4H),1.94(s, 3H),1.74-1.89(m,1H),0.88(t,J＝7.3Hz,3H)ppm

<实施例7-21>N-(5-苄氧基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)-2,4,6-三甲基 苯甲酰胺(7u)的制备

将0.161ml(1.155mmol)的三乙胺和0.168ml(0.990mmol)2,4,6- 三甲基苯甲酰氯依次加入10ml含有200mg(0.825mmol)化合物6的 CH₂Cl₂中，然后，将混合溶液在室温下搅拌12小时。将反应溶液用100ml CH₂Cl₂稀释，然后，用10ml饱和碳酸氢钠水溶液洗涤两次，再用10ml 水洗涤两次。CH₂Cl₂溶液用饱和盐水洗涤，并用无水MgSO₄干燥，过滤， 然后减压浓缩。残留物通过柱层析(EtOAc：己烷＝1：4)纯化，从而得 到104mg(33％)白色固体，即，化合物7u。

¹H-NMR(250MHz,CHCl₃-d)δ7.56(brs,1H),7.32-7.48(m,5H), 6.85(s,2H),4.76(s,2H),2.41(s,9H),2.27(s,9H)ppm

<实施例7-22>3-苄氧基-N-(5-苄氧基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)苯甲 酰胺(7v)的制备

将0.161ml(1.155mmol)的三乙胺和260mg(0.990mmol)3-苄氧基 苯甲酰氯依次加入10ml含有200mg(0.825mmol)化合物6的CH₂Cl₂中，然后，将混合溶液在室温下搅拌3小时。将反应溶液用100mlCH₂Cl₂稀释，然后，用10ml饱和碳酸氢钠水溶液洗涤两次，再用10ml水洗涤 两次。CH₂Cl₂溶液用饱和盐水洗涤，并用无水MgSO₄干燥，过滤，然后 减压浓缩。残留物通过柱层析(EtOAc：己烷＝1：3)纯化，从而得到 276mg(74％)白色固体，即，化合物7v。

¹H-NMR(250MHz,CHCl₃-d)δ8.46(brs,1H),7.31-7.57(m,13H), 7.13(dd,J＝7.8,2.4Hz,1H),5.08(s,2H),4.75(s,2H),2.42(s,3H),2.27(s, 3H),2.17(s,3H)ppm

<实施例7-23>N-(5-苄氧基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)-3,5,5-三甲基 己酰胺(7w)的制备

将0.161ml(1.155mmol)的三乙胺和0.192ml(0.990mmol)3,5,5- 三甲基己酰氯依次加入10ml含有200mg(0.825mmol)化合物6的CH₂Cl₂中，然后，将混合溶液在室温下搅拌3小时。将反应溶液用100mlCH₂Cl₂稀释，然后，用10ml饱和碳酸氢钠水溶液洗涤两次，再用10ml水洗涤 两次。CH₂Cl₂溶液用饱和盐水洗涤，并用无水MgSO₄干燥，过滤，然后 减压浓缩。残留物通过柱层析(EtOAc：己烷＝1：2)纯化，从而得到 268mg(85％)黄色固体，即，化合物7w。

¹H-NMR(250MHz,CHCl₃-d)δ8.47(brs,1H),7.30-7.46(m,5H), 4.74(s,2H),2.35-2.48(m,4H),2.23(s,3H),2.15-2.19(m,2H),2.12(s,3H), 1.30(dd,JJ＝14.0,3.4Hz,1H),1.12(dd,JJ＝14.0,6.2Hz,1H),1.04(d, J＝6.1Hz,3H),0.90(s,9H)ppm

<实施例7-24>N-(5-苄氧基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)-2-(4-氯苯基) 乙酰胺(7x)的制备

将0.161ml(1.155mmol)的三乙胺和0.149ml(0.990mmol)4-氯苯 乙酰氯依次加入10ml含有200mg(0.825mmol)化合物6的CH₂Cl₂中， 然后，将混合溶液在室温下搅拌2小时。将反应溶液用100mlCH₂Cl₂稀 释，然后，用10ml饱和碳酸氢钠水溶液洗涤两次，再用10ml水洗涤两 次。CH₂Cl₂溶液用饱和盐水洗涤，并用无水MgSO₄干燥，过滤，然后减 压浓缩。残留物通过柱层析(EtOAc：己烷＝1：1)纯化，从而得到235mg (72％)象牙固体，即，化合物7x。

¹H-NMR(250MHz,CHCl₃-d)δ8.29(brs,1H),7.21-7.44(m,9H), 4.74(s,2H),3.68(s,2H),2.36(s,3H),2.21(s,3H),2.04(s,3H)ppm

<实施例7-25>N-(5-苄氧基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)-2,2-二氯乙酰 胺(7y)的制备

将0.161ml(1.155mmol)的三乙胺和0.097ml(0.990mmol)二氯乙 酰氯顺序地加入10ml含有200mg(0.825mmol)化合物6的CH₂Cl₂中， 然后，将混合溶液在室温下搅拌4小时。将反应溶液用100mlCH₂Cl₂稀 释，然后，用10ml饱和碳酸氢钠水溶液洗涤两次，再用10ml水洗涤两 次。CH₂Cl₂溶液用饱和盐水洗涤，并用无水MgSO₄干燥，过滤，然后减 压浓缩。残留物通过柱层析(EtOAc：己烷＝1：3)纯化，从而得到217mg (74％)白色固体，即，化合物7y。

¹H-NMR(250MHz,CHCl₃-d)δ9.53(brs,1H),7.31-7.44(m,5H), 6.10(brs,1H),4.77(s,2H),2.42(s,3H),2.25(s,3H),2.14(s,3H)ppm

<实施例7-26>N-(5-苄氧基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)肉桂酰胺(7z) 的制备

将0.161ml(1.155mmol)的三乙胺和142mg(0.833mmol)肉桂酰氯 顺序地加入10ml含有200mg(0.825mmol)化合物6的CH₂Cl₂中，然后， 将混合溶液在冰冻条件下搅拌30分钟。将反应溶液用100mlCH₂Cl₂稀释， 然后，用10ml饱和碳酸氢钠水溶液洗涤两次，再用10ml水洗涤两次。 CH₂Cl₂溶液用饱和盐水洗涤，并用无水MgSO₄干燥，过滤，然后减压浓 缩。残留物通过柱层析(EtOAc：己烷＝1：3)纯化，从而得到211mg (69％)白色固体，即，化合物7z。

¹H-NMR(250MHz,CHCl₃-d)δ8.37(brs,1H),7.72(d,J＝16Hz,1H), 7.33-7.51(m,10H),6.67(d,J＝16Hz,1H),4.77(s,2H),2.43(s,3H),2.25(s, 3H),2.17(s,3H)ppm

<实施例8>N-(5-羟基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)酰胺衍生物(8a到 8z)的制备

每种N-(5-苄氧基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)酰胺衍生物以图2所示 的下列方法制备。

<实施例8-1>N-(5-羟基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)乙酰胺(8a)的制 备

将33mg10％的Pd/C添加到5ml包含164mg(0.577mmol)化合物 7a的甲醇中，然后将混合溶液在氢气环境下室温搅拌4小时。然后，将 反应溶液过滤并在一定压力下浓缩。将残留物在甲醇中溶解，使用注射 过滤器(Advantec^TMJP050AN)过滤，然后浓缩，从而得到105mg(94％) 的浅黄色固体，即化合物8a。

¹H-NMR(250MHz,CH₃OH-d₄)δ2.30(s,3H),2.15(s,3H),2.08(s, 3H),2.05(s,3H)ppm

<实施例8-2>N-(5-羟基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)十二烷酰胺(8b) 的制备

将25mg10％Pd/C添加到5ml包含130mg(0.306mmol)化合物7b 的甲醇中，然后将混合溶液在氢气环境下室温搅拌10小时。将反应溶液 过滤，且滤液在一定压力下浓缩。将残留物在甲醇中溶解，使用注射过 滤器(Advantec^TMJP050AN)过滤，然后浓缩，从而得到77mg(75％) 的浅黄色固体，即化合物8b。

¹H-NMR(250MHz,DMSO-d₆)δ9.60(s,1H),2.28(s,3H),2.15-2.26 (m,2H),2.11(s,3H),1.94(s,3H),1.44-1.54(m,2H),1.23(s,16H),0.85(t, J＝5.5Hz,3H)ppm

<实施例8-3>N-(5-羟基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)-4-氯丁酰胺(8c) 的制备

将21mg10％Pd/C添加到5ml包含102mg(0.294mmol)化合物7c 的甲醇中，然后将混合溶液在氢气环境下室温搅拌4小时。将反应溶液 过滤，且滤液在一定压力下浓缩。将残留物在甲醇中溶解，使用注射过 滤器(Advantec^TMJP050AN)过滤，然后浓缩，从而得到75mg(99％) 的黄色固体，即化合物8c。

¹H-NMR(250MHz,CH₃OH-d₄)δ3.64(t,J＝6.3Hz,2H),2.55(t,J＝7.2 Hz,2H),2.33(s,3H),2.18(s,3H),2.12(t,J＝7.0Hz,2H),2.07(s,3H)ppm

<实施例8-4>N-(5-羟基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)异丁酰胺(8d)的 制备

将31mg10％Pd/C添加到5ml包含155mg(0.496mmol)化合物7d 的甲醇中，然后将混合溶液在氢气环境下在室温搅拌3小时。将反应溶 液过滤，且滤液在一定压力下浓缩。将残留物在甲醇中溶解，使用注射 过滤器(Advantec^TMJP050AN)过滤，然后浓缩，从而得到95mg(86％) 的白色固体，即化合物8d。

¹H-NMR(250MHz,CH₃OH-d₄)δ2.55-2.72(m,1H),2.33(s,3H),2.18 (s,3H),2.05(s,3H),1.22(s,3H),1.19(s,3H)ppm

<实施例8-5>N-(5-羟基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)-3-甲基丁酰胺(8e) 的制备

将34mg10％Pd/C添加到5ml包含170mg(0.520mmol)化合物7e 的甲醇中，然后将混合溶液在氢气环境下室温搅拌4小时。将反应溶液 过滤，且滤液在一定压力下浓缩。将残留物在甲醇中溶解，使用注射过 滤器(Advantec^TMJP050AN)过滤，然后浓缩，从而得到102mg(82％) 的白色固体，即化合物8e。

¹H-NMR(250MHz,CH₃OH-d₄)δ2.33(s,3H),2.20-2.25(m,2H),2.18 (s,3H),2.12-2.15(m,1H),2.07(s,3H),1.02(s,3H),1.00(s,3H)ppm

<实施例8-6>N-(5-羟基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)新戊酰胺(8f)的 制备

将32mg10％Pd/C添加到5ml包含160mg(0.490mmol)化合物7f 的甲醇中，然后将混合溶液在氢气环境下室温搅拌10小时。将反应溶液 过滤，且滤液在一定压力下浓缩。将残留物在甲醇中溶解，使用注射过 滤器(Advantec^TMJP050AN)过滤，然后浓缩，从而得到80mg(69％) 的白色固体，即化合物8f。

¹H-NMR(250MHz,CH₃OH-d₄)δ2.38(s,3H),2.23(s,3H),2.08(s, 3H),1.30(s,9H)ppm

<实施例8-7>N-(5-羟基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)环戊烷甲酰胺(8g) 的制备

将20mg10％Pd/C添加到5ml包含108mg(0.319mmol)化合物7g 的甲醇中，然后将混合溶液在氢气环境下在室温搅拌10小时。将反应溶 液过滤，且滤液在一定压力下浓缩。将残留物在甲醇中溶解，使用注射 过滤器(Advantec^TMJP050AN)过滤，然后浓缩，从而得到66mg(83％) 的白色固体，即化合物8g。

¹H-NMR(250MHz,CH₃OH-d₄)δ2.77-2.86(m,1H),2.33(s,3H),2.19 (s,3H),2.06(s,3H),1.61-1.96(m,8H)ppm

<实施例8-8>N-(5-羟基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)环己烷甲酰胺(8h) 的制备

将15mg10％Pd/C添加到10ml包含73mg(0.207mmol)化合物7h 的甲醇-四氢呋喃中，然后将混合溶液在氢气环境下室温搅拌4小时。将 反应溶液过滤，且滤液在一定压力下浓缩。将残留物在甲醇中溶解，使 用注射过滤器(Advantec^TMJP050AN)过滤，然后浓缩，从而得到54mg (99％)的白色固体，即化合物8h。

¹H-NMR(250MHz,DMSO-d₆)δ9.43(s,1H),2.28(s,3H),2.11(s, 3H),1.92(s,3H),1.62-1.81(m,4H),1.13-1.46(m,6H)ppm

<实施例8-9>N-(5-羟基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)-2-苯基乙酰胺(8i) 的制备

将28mg10％Pd/C添加到5ml包含141mg(0.393mmol)化合物7i 的甲醇中，然后将混合溶液在氢气环境下在室温搅拌10小时。将反应溶 液过滤，且滤液在一定压力下浓缩。将残留物在甲醇中溶解，使用注射 过滤器(Advantec^TMJP050AN)过滤，然后浓缩，从而得到37mg(35％) 的白色固体，即化合物8i。

¹H-NMR(250MHz,CH₃OH-d₄)δ7.16-7.36(m,5H),3.63(s,2H),2.29 (s,3H),2.11(s,3H),1.91(s,3H)ppm

<实施例8-10>N-(5-羟基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)-3-苯基丙酰胺(8j) 的制备

将58mg10％Pd/C添加到10ml包含291mg(0.779mmol)化合物7j 的甲醇中，然后将混合溶液在氢气环境下在室温搅拌4小时。将反应溶 液过滤，且滤液在一定压力下浓缩。将残留物在甲醇中溶解，使用注射 过滤器(Advantec^TMJP050AN)过滤，然后浓缩，从而得到186mg(84％) 的白色固体，即化合物8j。

¹H-NMR(250MHz,CH₃OH-d₄)δ7.11-7.25(m,5H),2.98(t,J＝7.3Hz, 2H),2.68(t,J＝7.9Hz,2H),2.33(s,3H),2.15(s,3H),1.89(s,3H)ppm

<实施例8-11>N-(5-羟基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)苯甲酰胺(8k) 的制备

将37mg10％Pd/C添加到10ml包含186mg(0539mmol)化合物7k 的甲醇中，然后将混合溶液在氢气环境下室温搅拌4小时。将反应溶液 过滤，且滤液在一定压力下浓缩。通过柱层析将残留物纯化(EtOAC： 己烷＝1：1)，然后将其在一定压力下压缩。将残留物再次在甲醇中溶解， 使用注射过滤器(Advantec^TMJP050AN)过滤，然后浓缩，从而得到86mg (62％)的白色固体，即化合物8k。

¹H-NMR(250MHz,CH₃OH-d₄)δ7.93-7.97(m,2H),7.44-7.59(m, 3H),2.36(s,3H),2.21(s,3H),2.13(s,3H)ppm

<实施例8-12>N-(5-羟基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)-4-氟苯甲酰胺(8l) 的制备

将38mg10％Pd/C添加到10ml包含180mg(0.493mmol)化合物7l 的甲醇中，然后将混合溶液在氢气环境下在室温搅拌10小时。将反应溶 液过滤，且滤液在一定压力下浓缩。将残留物在甲醇中溶解，使用注射 过滤器(Advantec^TMJP050AN)过滤，然后浓缩，从而得到135mg(99％) 的白色固体，即化合物8l。

¹H-NMR(250MHz,CH₃OH-d₄)δ7.99-8.05(m,2H),7.18-7.25(m, 2H),2.37(s,3H),2.22(s,3H),2.13(s,3H)ppm

<实施例8-13>N-(5-羟基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)-4-甲氧基苯甲酰 胺(8m)的制备

将40mg10％Pd/C添加到10ml包含200mg(0.531mmol)化合物7m 的甲醇中，然后将混合溶液在氢气环境下室温搅拌10小时。将反应溶液 过滤，且滤液在一定压力下浓缩。将残留物在甲醇中溶解，使用注射过 滤器(Advantec^TMJP050AN)过滤，然后浓缩，从而得到151mg(99％) 的白色固体，即化合物8m。

¹H-NMR(250MHz,CH₃OH-d₄)δ7.93-7.96(m,2H),6.99-7.03(m, 2H),3.85(s,3H),2.37(s,3H),2.23(s,3H),2.13(s,3H)ppm

<实施例8-14>N-(5-羟基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)-4-(叔丁基)苯 甲酰胺(8n)的制备

将40mg10％Pd/C添加到10ml包含205mg(0.509mmol)化合物7n 的甲醇中，然后将混合溶液在氢气环境下室温搅拌10小时。将反应溶液 过滤，且滤液在一定压力下浓缩。将残留物在甲醇中溶解，使用注射过 滤器(Advantec^TMJP050AN)过滤，然后浓缩，从而得到157mg(99％) 的白色固体，即化合物8n。

¹H-NMR(250MHz,DMSO-d₆)δ7.94(d,J＝8.3Hz,2H),7.52(d,J＝8.4 Hz,2H),2.37(s,3H),2.19(s,3H),2.03(s,3H),1.31(s,9H)ppm

<实施例8-15>N-(5-羟基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)苯并[d][1,3]二氧 杂环戊烯-5-甲酰胺(8n)的制备

将44mg10％Pd/C添加到10ml包含222mg(0.568mmol)化合物7o 的甲醇中，然后将混合溶液在氢气环境下室温搅拌10小时。将反应溶液 过滤，且滤液在一定压力下浓缩。将残留物在甲醇中溶解，使用注射过 滤器(Advantec^TMJP050AN)过滤，然后浓缩，从而得到170mg(99％) 的白色固体，即化合物8o。

¹H-NMR(250MHz,CH₃OH-d₄)δ7.55(dd,J＝8.1,1.8Hz,1H),7.40(d, J＝1.2Hz1H),6.89(d,J＝8.1Hz,1H),6.03(s,2H),2.36(s,3H),2.23(s,3H), 2.12(s,3H)ppm

<实施例8-16>N-(5-羟基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)-1-萘甲酰胺(8p) 的制备

将22mg10％Pd/C添加到5ml包含110mg(0.277mmol)化合物7p 的甲醇中，然后将混合溶液在氢气环境下室温搅拌10小时。将反应溶液 过滤，且滤液在一定压力下浓缩。将残留物在甲醇中溶解，使用注射过 滤器(Advantec^TMJP050AN)过滤，然后浓缩，从而得到104mg(99％) 的白色固体，即化合物8p。

¹H-NMR(250MHz,CH₃OH-d₄)δ8.31-8.35(m,1H),7.95-7.96(m, 1H),7.86-7.89(m,2H),7.47-7.53(m,3H),2.42(s,3H),2.25(s,3H),2.23(s, 3H)ppm

<实施例8-17>N-(5-羟基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)噻吩-2-甲酰胺 (8q)的制备

将0.91ml(0.91mmol)的1MBCl₃逐滴添加到10ml包含160mg(0.454 mmol)化合物7q和201mg(1.362mmol)五甲基苯的CH₂Cl₂中，然后 将混合溶液在冰浴条件下冷却再搅拌30分钟。将1mlCHCl₃/MeOH(9： 1)添加到反应溶液中，然后将混合液在室温下搅拌1小时。将反应溶液 在一定压力下浓缩，然后通过柱层析纯化残留物(CHCl₃：MeOH＝9：1)， 从而得到115mg(96％)的黄色固体，即化合物8q。

¹H-NMR(250MHz,DMSO-d₆)δ10.2(s,1H),8.56(s,1H),7.98(d, J＝3.1Hz,1H),7.80(d,J＝4.5Hz,1H),7.17-7.21(m,1H),2.33(s,3H),2.16 (s,3H),2.02(s,3H)ppm

<实施例8-18>2-乙基-N-(5-羟基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)丁酰胺(8r) 的制备

将30mg10％Pd/C添加到10ml包含150mg(0.441mmol)化合物7r 的甲醇中，然后将混合溶液在氢气环境下室温搅拌5小时。将反应溶液 过滤，且滤液在一定压力下浓缩。将残留物在甲醇中溶解，使用注射过 滤器(Advantec^TMJP050AN)过滤，然后浓缩，从而得到110mg(99％) 的白色固体，即化合物8r。

¹H-NMR(250MHz,DMSO-d₆)δ9.55(s,1H),2.29(s,3H),2.16-2.25 (m,1H),2.12(s,3H),1.97(s,3H),1.33-1.64(m,4H),0.90(t,J＝7.4Hz,6H) ppm

<实施例8-19>N-(5-羟基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)-2-苯氧基乙酰胺 (8s)的制备

将30mg10％Pd/C添加到10ml包含150mg(0.398mmol)化合物7s 的甲醇中，然后将混合溶液在氢气环境下室温搅拌5小时。将反应溶液 过滤，且滤液在一定压力下浓缩。将残留物在甲醇中溶解，使用注射过 滤器(Advantec^TMJP050AN)过滤，然后浓缩，从而得到120mg(99％) 的白色固体，即化合物8s。

¹H-NMR(250MHz,DMSO-d₆)δ9.79(s,1H),7.27-7.35(m,2H), 6.94-7.02(m,3H),4.66(s,2H),2.30(s,3H),2.13(s,3H),1.97(s,3H)ppm

<实施例8-20>N-(5-羟基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)-2-苯基丁酰胺(8t) 的制备

将35mg10％Pd/C添加到10ml包含176mg(0.453mmol)化合物7t 的甲醇中，然后将混合溶液在氢气环境下室温搅拌4小时。将反应溶液 过滤，且滤液在一定压力下浓缩。将残留物在甲醇中溶解，使用注射过 滤器(Advantec^TMJP050AN)过滤，然后浓缩，从而得到135mg(99％) 的黄色固体，即，化合物8t。

¹H-NMR(250MHz,DMSO-d₆)δ9.81(s,3H),8.44(s,1H),7.19-7.40 (m,5H),3.57(dd,J＝8.6,6.5Hz,1H),2.26(s,3H),2.09(s,3H),1.97-2.06 (m,1H),1.80(s,3H),1.61-1.72(m,1H),0.88(t,J＝7.3Hz,3H)ppm

<实施例8-21>N-(5-羟基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)-2,4,6-三甲基苯 甲酰胺(8u)的制备

将19mg10％Pd/C添加到10ml包含94mg(0.242mmol)化合物7u 的甲醇中，然后将混合溶液在氢气环境下在室温搅拌7小时。将反应溶 液过滤，且滤液在一定压力下浓缩。将残留物在甲醇中溶解，使用注射 过滤器(Advantec^TMJP050AN)过滤，然后浓缩，从而得到72mg(99％) 的白色固体，即化合物8u。

¹H-NMR(250MHz,DMSO-d₆)δ9.82(s,1H),6.88(s,2H),2.33(s, 9H),2.25(s,3H),2.16(s,3H),2.15(s,3H)ppm

<实施例8-22>3-羟基-N-(5-羟基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)苯甲酰胺 (8v)的制备

将30mg10％Pd/C添加到10ml包含150mg(0.33mmol)化合物7v 的甲醇中，然后将混合溶液在氢气环境下在室温搅拌3小时。将反应溶 液过滤，且滤液在一定压力下浓缩。将残留物在甲醇中溶解，使用注射 过滤器(Advantec^TMJP050AN)过滤，然后浓缩，从而得到42mg(47％) 的白色固体，即化合物8v。

¹H-NMR(250MHz,DMSO-d₆)δ10.02(s,1H),7.24-7.43(m,3H), 6.95(dd,J＝7.6,2.1Hz,1H),2.32(s,3H),2.16(s,3H),2.00(s,3H)ppm

<实施例8-23>N-(5-羟基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)-3,5,5-三甲基己 酰胺(8w)的制备

将37mg10％Pd/C添加到12ml包含186mg(0.48mmol)化合物7w 的甲醇中，然后将混合溶液在氢气环境下在室温搅拌4小时。将反应溶 液过滤，且滤液在一定压力下浓缩。将残留物在甲醇中溶解，使用注射 过滤器(Advantec^TMJP050AN)过滤，然后浓缩，从而得到130mg(93％) 的黄色固体，即化合物8w。

¹H-NMR(250MHz,DMSO-d₆)δ9.52(s,1H),2.28(s,3H),2.18-2.25 (m,1H),2.11(s,3H),2.04-2.09(m,2H),1.96(s,3H),1.31(dd,J＝13.8,3.0 Hz,1H),1.07(dd,J＝13.9,6.2Hz,1H),0.97(d,J＝6.1Hz,3H),0.89(s,9H) ppm

<实施例8-24>2-(4-氯苯基)-N-(5-羟基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基) 乙酰胺(8x)的制备

将0.66ml(0.66mmol)的1MBCl₃逐滴添加到5ml包含130mg(0.329 mmol)化合物7x和146mg(0.987mmol)五甲基苯的CH₂Cl₂中，然后 将混合溶液在冰浴冷却搅拌2小时。将1mlCHCl₃/MeOH(9：1)添加到反 应溶液中，然后将混合液在室温下搅拌1小时。将反应溶液在一定压力 下浓缩，然后通过柱层析纯化残留物(CHCl₃：MeOH＝9：1)，从而得到 94mg(94％)的白色固体，即化合物8x。

¹H-NMR(250MHz,DMSO-d₆)δ9.85(brs,1H),8.46(s,1H), 7.32-7.40(m,4H),3.59(s,2H),2.29(s,3H),2.10(s,3H),1.87(s,3H)ppm

<实施例8-25>2,2-二氯-N-(5-羟基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)乙酰胺 (8y)的制备

将0.91ml(0.91mmol)的1MBCl₃逐滴添加到7ml包含161mg(0.456 mmol)化合物7y和203mg(1.367mmol)五甲基苯的CH₂Cl₂中，然后 将混合溶液在冰浴冷却搅拌1小时。将1mlCHCl₃/MeOH(9：1)添加到反 应溶液中，然后将混合液在室温下搅拌1小时。将反应溶液在一定压力 下浓缩，然后通过柱层析纯化残留物(CHCl₃：MeOH＝9：1)，从而得到 110mg(92％)的白色固体，即化合物8y。

¹H-NMR(250MHz,DMSO-d₆)δ10.34(brs,1H),8.64(brs,1H),6.60 (s,1H),2.31(s,3H),2.14(s,3H),1.98(s,3H)ppm

<实施例8-26>N-(5-羟基-3,4,6-三甲基吡啶-2-基)肉桂酰胺(8z) 的制备

将0.75ml(0.75mmol)的1MBCl₃逐滴添加到7ml包含140mg(0.376 mmol)化合物7z和167mg(1.127mmol)五甲基苯的CH₂Cl₂中，然后将 混合溶液在冰浴冷却搅拌2小时。将1mlCHCl₃/MeOH(9：1)添加到反应 溶液中，然后将混合液在室温下搅拌1小时。将反应溶液在一定压力下 浓缩，然后通过柱层析纯化残留物(CHCl₃：MeOH＝9：1)，从而得到45mg (42％)的黄色固体，即化合物8z。

¹H-NMR(250MHz,DMSO-d₆)δ10.34(brs,1H),8.64(brs,1H),6.60 (s,1H),2.31(s,3H),2.14(s,3H),1.98(s,3H)ppm

<实验例1>通过CAM分析评价血管生成的抑制作用

为通过体内实验来确认血管生成的抑制作用，进行绒毛尿囊膜 (CAM)分析(参考NguyenM等，MicrovascularRes.，47,pp31-40,1994)。 鸡的受精卵在维持温度为37℃、相对湿度为55％的条件下培养。在培养 的第十天，使用注射针(GreenCrossMedicalCorp，韩国)在空气囊部 分制作第一小孔，然后，在受精卵平坦部分制作第二孔以在其上制作窗 口。空气通过第一孔排出，即，空气囊部分，因此CAM从受精卵的壳分 离。然后，使用砂轮(Multipro395JA,Dremel,墨西哥)来切割空气囊部 分，从而在其上制作窗口。接着，沃特曼(Whatman)过滤盘#1(沃特 曼公司，美国)经3mg/ml的醋酸可的松处理、干燥，然后通过浓度为 20ng/CAM的VEGF润湿。通过窗口将过滤盘置于血管上，然后每种根 据上述实施例制备的化合物在DMSO中溶解，并用PBS稀释，然后处理 为各种浓度。化合物经处理3天后，过滤盘置于其上的CAM部分被分离， 并用PBS洗涤。使用StemiSV6立体显微镜(CarlZeiss,德国)和Image-Pro Plus软件(MediaCybernetics；SilverSpring,MD,USA)捕获CAM部分 的图像，以测量血管的数量并分析从其得到的数据。

因此，如下面表1所示，可以确认的是，在VEGF上血管生成的增 长通过本发明的化合物(每个CAM用0.01mnol的每种化合物处理)处 理后下降。此外，大多数情况下观察到良好的血管生成抑制作用。此外， 如表3所示，CAM经每种浓度的化合物8a、8b和8g处理后计算ID₅₀， 结果如下：1.7pg/CAM(8.7fmol/CAM),5.0pg/CAM(14.9fmol/CAM), and0.9pg/CAM(3.6fmol/CAM)。

[表1]

^#:P<0.05相比于VEGF处理组。

<实验例2>测量HUVEC细胞中活性氧(ROS)清除作用

为了测量VEGF诱导的HUVEC细胞中ROS的清除作用，使用2',7'- 二氯荧光素二乙酸酯(DCF-DA)。在细胞中存在ROS的情况下，DCF-DA 被氧化成荧光的DCF，且相应地显示出绿色荧光。DCF-DA以浓度1x 10⁵分到8孔板中，每个孔中涂覆有0.2％的明胶，DCF-DA培养24小时。 同时，对化合物8a和8b预处理3小时，经VEGF诱导15分钟，然后用 PBS(pH7.4)清洗3次。然后，10μM的DCF-DA置于EBM-2培养基在暗 室中处理30分钟。然后，再次用PBS清洗DCF-DA三次，然后使用荧 光显微镜测量细胞内荧光强度。

因此，如图4所示，与细胞经过VEGF诱导的实例相比，化合物8a 和8b经过处理的实例在细胞内荧光强度显示出显著下降。

<实验例3>测量由黄斑变性风险因素诱导的ROS的清除作用

根据与实验例2相似的方式，例如4-羟基(4-HNE)或血管紧张素 II(AngII)等黄斑变性的风险因子经成人视网膜色素上皮19(ARPE-19) 细胞系处理，以便观察化合物8a和8b中ROS的清除作用。

结果如图5A和6所示，可以确认的是，与对照组相比，化合物8a 和8b经处理的实例表现出荧光强度明显的下降。

由于ROS的出现，例如4-HNE或AngⅡ的黄斑变性的风险因子引起 ARPE细胞内的细胞损伤，并最终可能导致玻璃(Bruch)膜的损伤和血 管生成，导致黄斑变性和失明。基于实验数据，可以确认的是，化合物 8a和8b强烈地抑制4-HNE和AngⅡ上ROS的生成，即，化合物8a和 8b对黄斑变性具有治疗效果。

<实验例4>在HT-29肠上皮细胞内氨基吡啶衍生物对单核肠上皮细 胞粘附的抑制作用

HT-29细胞在24孔板上以2x10个细胞/cm²的浓度培养，同时，每 种浓度的氨基吡啶化合物8a到8z在无血清、仅有1％PS补充的培养基 中预处理1小时。接着，10ng/ml的TNF-α经处理因而使反应在37℃进 行3小时。反应完成后，去除HT-29细胞的培养基，然后用PBS清洗一 次HT-29细胞。之后，经处理并与10μg/mL的BCECF-AM在37℃下反 应30分钟的U937细胞可与HT-29细胞在37℃下反应1小时。然后，为 去除未粘附到HT-29细胞上的U937细胞，将已反应的细胞用PBS清洗 两次。在细胞溶解方面，0.1M的Tris中0.1％TritonX-100可与所述细 胞在室温下反应30分钟，然后，通过使用Fluostaroptima酶标仪(BMG Labtechnologies,德国)测量其荧光对所述细胞进行量化。

因此，在下面的表2中，示出氨基吡啶化合物8a到8z对TNF-α诱 导的来自人上皮细胞(即，HT-29)和单核细胞(即，U937)粘附的抑制 作用。此处，*表示与经TNF-α处理的大鼠实例相比，P值小于0.05的 实例。如图2所示，可以确认的是，氨基吡啶化合物8a到8z抑制经TNF- α诱导肠上皮细胞和U937细胞之间的粘附。

[表2]

基于上述结果，可以确定的是，当氨基吡啶衍生物8a到8z抑制炎 症细胞的粘附时，如与炎症细胞移动和癌症侵袭密切相关的嗜中性粒细 胞和淋巴细胞，炎症反应也可被抑制。

<实验例5>使用经2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的炎症性肠疾 病模型的氨基吡啶衍生物的肠炎的抑制作用

为观察本发明的化合物对结肠炎的缓解作用，经TNBS诱导并具有 结肠炎的动物模型用于该实验。此处使用的动物为购自SamtacoBioKorea 的7到8周的SpragueDawlay品种。购买之后，在用于实验之前，用典 型固体饲料将所述动物稳定化2天。实验过程中，为动物自由地提供饲 料和水，并使动物停留在维持笼子温度大约为25±1℃且相对湿度大约为 50±10％的环境中。笼子配备有自动照明系统以调节12小时的明暗周期。

对于实验组，根据随机区组设计使用5组(即，一组对照，一组仅 施用TNBS，一组施用TNBS+300mg/kg的5-ASA组合，一组施用 TNBS+0.1mg/kg的8a和8j组合，和一组施用TNBS+1.0mg/kg的8a和 8j组合)，其中每组由6只平均重量大约为180±10g的大鼠组成。大鼠 已禁食24小时经乙醚(Et2O)麻醉，然后，使用连接有聚乙烯导管的1ml 注射器经肛门将0.8ml3％的TNBS缓慢注射进入结肠灌肠，其中，TNBS 用50％(v/v)乙醇稀释。为防止3％的TNBS从肛门泄露，将大鼠上下 翻转并静置60分钟。

对于对照组，仅媒介物(50％(v/v)乙醇)以与其他实验组制备相 同的方式注入对照组大鼠。为检测药物效果，禁食24小时后，从TNBS 治疗的第二天到第五天在某一时间一天一次为大鼠施用药物，即， 0.1mg/kg或1.0mg/kg的化合物8a和8j。对于对照实验材料，作为用于 IBDs最知名的治疗剂的柳氮磺胺吡啶的活性代谢物5-ASA用作阳性对 照组。

所有大鼠在施用TNBS的第七天被解剖。溃疡和结肠炎的可视严重 程度由没有参加实验的两名研究员评估。收获大鼠大肠后，以1cm的尺 寸切割从肛门5到6cm距离的组织，然后在组织中进行肠重量和过氧化 物酶(MPO)活化的测量，并执行活检。此外，通过使用数字质量流量 计可观察到所有实验中所用动物从禁食步骤、TNBS施用和药物施用的 重量的变化。考虑到实验室动物的管理和使用，根据岭南大学(Yeungnam University)实验动物资源的机构准则执行动物实验。

图7到10示出氨基吡啶化合物8a和8j对TNBS诱导的大鼠的结肠 炎的作用。图7示出每天记录的大鼠从施用测试物质的第一天到第六天 的重量变化，图8示出经肉眼观察的大肠情况的视图，图9是示出大肠 重量的视图，且图10是示出MPO活性测量的视图。此处，*表示与大鼠 既未经药物、也未经TNBS处理的实例相比，P值小于0.05的实例，而 且#表示与大鼠经TNBS处理的实例相比，P值小于0.05的实例。

如图7所示，在大鼠重量范围从约180g到190g、具有结肠炎并通过 使用3％TNBS引起肠道炎症的动物模型中，重量变化在某一时间定期观 察5天。基于还未经TNBS处理的大鼠的重量，可以确认的是，经媒介 物处理的对照组大鼠的重量持续增加，且经TNBS处理的组大鼠的重量 持续减少，但在第五天略有回升。然而，TNBS处理的组恢复的重量仍 然明显小于正常组中大鼠的重量。经300mg/kg5-ASA处理的阳性组中大 鼠的重量在第三天缓慢恢复，最终，阳性组中的大鼠具有比仅施用TNBS 的组中大鼠更重的重量。经TNBS处理并施用1.0mg/kg的化合物8a的 组中的大鼠与只用TNBS处理的组的大鼠相比，在第三天呈现重量上的 快速增长，从而与经5-ASA处理的组相比，最终表现出优秀的重量恢复。 在为大鼠施用1.0mg/kg化合物8j的实例中，明显的重量恢复和增长的重 量在第二天立刻显出，从而非常接近正常组中大鼠的重量。

图8示出完成5天的药物施用后获得并用肉眼观察的大肠的情况。 此处，可以观察到的是，与经媒介物处理的正常组的大鼠的大肠相比， 经TNBS处理的组中大鼠的大肠已经肿胀和发红，此外，表现出阑尾肿 胀、充血和粘连。在经5-ASA(100mg/kg)处理的阳性对照组中，可以确 定的是，与仅经TNBS处理的组相比，肉眼观察到的症状和其他器官或 红肿的大肠之间的粘连得到抑制。即，施用化合物8a和8j(1.0mg/kg) 的组表现出对肿胀和充血良好的抑制作用。

此外，图9示出获得大鼠大肠之后测量的组织重量，且可以确定的 是，与经媒介物处理的正常组相比，仅经TNBS处理的组在具有肿胀的 肠重量上有明显增加。在经5-ASA(100mg/kg)处理的阳性对照组中，可 以确定的是，肠重量与经TNBS处理的组的肠重量相比明显下降。还可 以观察到的是，在经化合物8a和8j(1.0mg/kg)处理的组中，肠重量明显 下降。

图10是表示MPO活性的图表，其中MPO是主要存在于嗜中性粒 细胞中的酶。组织中MPO的激活是入侵的嗜中性粒细胞的指标，即， MPO的激活是炎症性疾病的指标，根据炎性结肠炎和它们之间的粘连表 明肠中的损坏水平。

为测量MPO的活性，使用MPO分析。大肠组织用冷的PBS清洗， 并测量其重量。然后，为每10mg组织重量加入200μL裂解缓冲液(pH7.4, 200mMNaCl,5mMEDTA,10mMTris,10％甘油)，然后，组织均化器 (BiohomogenizerM133,BIOSPECPRODUCTSInc.USA)在均质化方面 使用30秒钟。均质化的样品进行两次离心(1500xg)，每次15分钟。由 此得到的上清液通过使用MPOELISA试剂盒(HK210,Hycult Biotechnology,荷兰)来用于测量MPO的活性。将100μL上清液加入到 96井板中以允许反应在室温下进行1小时，其中每个井涂覆有抗小鼠 MPO抗体，随后用PBS清洗三次。此处，将100μL重构示踪剂加入其 中以使反应在室温下进行1小时，随后重复清洗三次。然后，将100μL 链霉亲和素过氧化物酶缀合物加入其中以使反应在室温下进行1小时， 随后清洗。然后，将100μLTMB底物溶液加入其中以允许反应进行30 分钟。然后，将100μL静态溶液加入其中以停止反应，然后在450nm波 长测定吸光度。MPO的活性是指1μM的过氧化氢在水中在25℃一分钟 内减少的水平，也指计算为1ml大肠组织匀浆包含的MPO的量的水平。 此处，*表示与大鼠既未经药物、也未经TNBS处理的实例相比，P值小 于0.05的实例，而且#表示与大鼠经TNBS处理的实例相比，P值小于 0.05的实例。

如图10所示，可以确定的是，与对照组的MPO的活性相比，仅经 TNBS处理的组表现出MPO的活性明显增加，且施用5-ASA(100mg/kg) 的组与对照组的MPO的活性相比，表现出MPO的活性明显下降。此外， 可观察到的是，经化合物8a(1.0mg/kg)处理的组与仅经TNBS处理的 MPO的活性相比，表现出较低的MPO活性，从而与经5-ASA(100mg/kg) 处理的组相比，在大肠组织上表现出良好的抑制MPO活性的效果。

<实验例6>肿瘤引起的血管生成和肿瘤生长的抑制效果的评价

为了确认在体内实验中对血管生成的抑制作用，进行了CAM分析 (参考NguyenM等,MicrovascularRes.,47,pp31-40,1994)。将鸡受精 卵于温度为37℃、相对湿度55％的条件下培养。在培养的第9天，用皮 下注射针(GreenCrossMedicalCorp.,韩国)在气囊部位制作第一小孔， 在受精卵平整部位制作第二孔以在其上形成窗口。通过第一孔将空气排 出，即，气囊部分，相应地，从受精卵壳上分离出CAM。然后，用砂轮 (Multipro395JA,Dremel，墨西哥)将气囊部分切掉，从而在其上形成 窗口。同时将A549肺癌细胞与基底膜基质按1：1比例混合，然后分别 用化合物8a，8b和8g处理该混合物，随后以1.5×10⁶个细胞/CAM的浓 度接种。

接种5天后，将其上形成肿瘤的CAM部分分离，然后用PBS清洗。 用StemiSV6立体式显微镜(CarlZeiss，德国)和Image-ProPlus软件 (MediaCybernetics；SilverSpring,MD,美国)对CAM部分进行图像拍 摄，以测量血管数目并分析其上数据。

因此，如下面图表3和图.11所示，可以确定的是，化合物8a，8b 和8g(在各自密度下)可以抑制肿瘤形成过程中的血管生成和肿瘤生长。

[表3]

*：与媒介物处理组相比，P<0.05。

<实验例7>组织蛋白酶抑制剂对乳腺癌细胞侵袭的抑制效果的评价

为了检测在例如MDA-MB-231的转移性乳腺癌细胞侵袭过程中发挥 的重要作用的组织蛋白酶的种类，使用包括组织蛋白酶B,D,K,L和S 的抑制剂对乳腺癌细胞侵袭的抑制效果进行评价。

通过使用装配有孔径大小为8μm的孔尺寸过滤器的插入皿(BD FALCON,Bedford,美国)进行侵袭试验。插入皿(transwellinsert)上部 用20μl的基底膜基质(1mg/ml)涂覆，而其底部用30μlⅠ型胶原 (0.5mg/ml)涂覆。将MDA-MB-231细胞(5×10⁵个细胞/100μl)加入 插入室中，然后也向其加入每种抑制剂。为了减少细胞的侵袭，在底室 的每个井中加入了含有5％FBS的培养基，使其在37℃细胞培养箱中进 行反应。18小时后，通过使用棉签除去插入室中的溶液，细胞被保留， 膜底部的细胞用甲醇固定并用苏木精和伊红染色。通过显微镜观察在膜 上存在的细胞，并在200倍下选择5个视场进行细胞计数。

因此，如下面表4所示，用组织蛋白酶B抑制剂(CA-074Me)、组织 蛋白酶K抑制剂(Odanacatib)和组织蛋白酶S抑制剂(Z-FL-COCHO)处理 的MDA-MB-231细胞与未经抑制剂处理的细胞相比，表现出细胞侵袭下 降。特别地，组织蛋白酶S抑制剂处理后的MDA-MB-231细胞在抑制细 胞侵袭方面表现出最优的效果(参照图12)。因此，可以确定的是，组 织蛋白酶S在乳腺癌细胞侵袭过程中起了重要的作用。

[表4]

*：通过抑制剂减少的细胞数量百分比±标准差

#：与5％FBS处理组相比P<0.05

<实验例8>氨基吡啶衍生物对MBA-MB-231细胞侵袭的抑制效果评 价

根据实验例7中同样的方式，评价上述实例中合成的氨基吡啶衍生 物对如MDA-MB-231的乳腺癌细胞侵袭的抑制效果。在此，为了对比， 评价如6-氨基-2,4,5-三甲基-3-羟基吡啶(BJ-1101)和6-二苯胺基-2,4,5- 三甲基-3-羟基吡啶(BJ-1201)的各种氨基吡啶衍生物对如MDA-MB-231 的乳腺癌细胞侵袭的抑制作用。

[BJ-1101]

[BJ-1201]

因此，如下面表5所示，可以确定的是，例如BJ-1101和BJ-1201 的氨基吡啶衍生物对如MDA-MB-231的乳腺癌细胞的侵袭并没有抑制作 用，而化合物8l和8q对如MDA-MB-231的乳腺癌细胞的侵袭具有抑制 作用。

[表5]

*:通过化合物所减少的细胞数量百分比±标准差

#:与5％FBS处理组相比，P<0.05

<实验例9>氨基吡啶衍生物对组织蛋白酶S表达的抑制作用的评价

为了评价当上述实例中合成的氨基吡啶衍生物经MDA-MB-231细胞 处理时，所述氨基吡啶衍生物是否对组织蛋白酶S的基因表达有影响， 按如下方式进行了反转录酶-聚合酶链锁反应(RT-PCR)实验。

将本发明中的每种化合物分别经如MDA-MB-231的乳腺癌细胞(1 ×10⁵细胞/cm²)处理，然后在细胞培养箱中37℃下培养24小时。然后， 用Trizole试剂提取其全部mRNA。培养24小时后，去掉培养基，每井 中加入1ml的Trizole试剂，然后将细胞悬浮液转移到1.5mL试管中。在 每个样品中加入200μl的氯仿之后，将样品在4℃以12,000g离心15min。 取500μl上清液转移到新的试管中。每个样品加入500μl异丙醇后将样品 在4℃以12,000g离心15min。从每个样品中去除其上清液，沉淀干燥后， 用75％乙醇洗涤样品以清洗mRNA。然后，将提取出的mRNA用不含 RNA酶的水溶解，随后在55℃下加热10min。

RNA定量后，用GoScript^TM反转录系统(普洛麦格公司(Promega Corporation)，麦迪逊(Madison),威斯康辛州(WI),美国)合成cDNA。 在此，PCR实验通过使用TaKaRaTaqTM(TakarabioInc.,志贺(Shiga), 日本)进行，其中引物组组织蛋白酶S由具有SEQIDNO:1的正向引物 (顺次序：5'-GCAGTGGCACAGTTGCATAA-3')和具有SEQIDNO:2 (逆次序：5'-AGCACCACAAGAACCCATGT-3')的反向引物组成。 PCR产物进行琼脂糖电泳后，用溴化乙锭(0.5μg/ml)对PCR产物进行 染色，从而通过使用凝胶图像系统(UVP,剑桥Cambridge,英国)得到 的其图像。此处，用3-磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)对PCR产物进行定量分析。此处使用的GAPDH 引物由具有SEQIDNO:3的正向引物(顺次序：5'-GGTGAAGGTCGG AGTCAACG-3')和具有SEQIDNO:4(逆次序：5'-CAAAGTTGTCAT GGATGACC-3')的反向引物组成。

因此，如表6所示，可以确定的是，对MDA-MB-231细胞的侵袭没 有抑制作用的BJ-1101和BJ-1201对减弱组织蛋白酶S的基因表达也无 作用。另外，可以确定的是，对癌细胞侵袭抑制作用最强的化合物8q也 具有最强的减少组织蛋白酶S基因表达的作用。因此，可以确定的是， 对MDA-MB-231细胞侵袭的抑制作用和对组织蛋白酶S基因表达的抑制 作用彼此相关。

[表6]

*：基于未经化合物处理的PCR条带(对照组)，通过化合物所减 少的细胞数量百分比±标准差

<实验例10>对可以抑制乳腺癌细胞(如，MDA-MB-231)中组织蛋 白酶S表达的化合物的筛选

如前面实验例所述，可以确定的是，组织蛋白酶S在如MDA-MB-231 的乳腺癌细胞的侵袭中有着重要作用。此外，为了筛选其他可以抑制乳 腺癌细胞新陈代谢的氨基吡啶衍生物，对组织蛋白酶S基因表达的抑制 效果通过与实验例9相同的方式处理1μM的每种化合物来评价。

因此，如表7所示，化合物8a，8b，和8g对组织蛋白酶S的基因表 达具有抑制作用，也就是说，这些化合物具有50％甚至更高的抑制率。 因此，可以确定的是，这些化合物对转移性乳腺癌细胞的侵袭具有非常 良好的抑制作用。

[表7]

*：基于未经化合物处理的PCR条带(对照组)，通过化合物所减 少的细胞数量百分比±标准差

<实施例11>毒性试验

在雄性Balb/c小鼠上，化合物8a用0.5％的甲基纤维素溶液按0.5g/kg, 1g/kg,and2g/kg的剂量制成悬浮液。在此，仅通过单剂口服进行试验， 然后对小鼠的存活率和重量观察7天。

如此给药后，观察实验动物的死亡率、临床症状和体重变化。将实 验动物进行血液学和血液生化检验，并进行尸检观察腹部器官和胸部器 官是否有异常。

因此，可以确定的是，所有实验动物并没有特别的临床症状和死亡， 并且在体重、血液检测、血液生化检测和尸检方面没有发现毒性变化。

在上文，本发明中的化合物在2g/kg剂量下对小鼠没有表现出任何 有毒的变化，因此，可以确定的是，因为口服半数致死量(LD50)至少 是2g/kg，所以本发明中的化合物是安全物质。

下文中，结合制备实施例描述了包括根据本发明的化合物8a的组合 物的制备方法。但是，应当理解，这些实施例仅限于对本发明公开内容 的具体陈述，不限形式。

<制备实例1>粉剂制备

20mg化合物8a，100mg乳糖和10mg滑石粉混合，密封备用。

<制备实例2>片剂制备

20mg化合物8a，100mg玉米淀粉，100mg乳糖和2mg硬脂酸镁混 合，然后用制备片剂的常规工艺方法压成片。

<制备实例3>胶囊制备

10mg化合物8a，100mg玉米淀粉，100mg乳糖和2mg硬脂酸镁根 据常规工艺方法混合，然后将混合物装在明胶胶囊中制成胶囊。

<制备实例4>注射剂制备

10mg化合物8a和适量的注射用无菌蒸馏水和pH调节剂混合，然后 将混合物根据制备注射剂的常规工艺方法，按2mL每安培瓶准备。

<制备实例5>药膏制备

10mg化合物8a，250mgPEG-4000，650mgPEG-400，10mg白凡士 林，1.44mg甲基ρ-羟苯酸酯，0.18mg丙基ρ-羟苯酸酯，与剩余部分纯 化水混合，然后将混合物按照制备药膏的常规工艺方法制成药膏。

应当认识到，所述示例性实施方式在此仅作为思想的一种描述而不 具有限定目的。每个示例性实施方式中对其特征或功能的描述应被默认 为同样适用于其他示例性实施方式中相似的特征或功能。

当一个或多个示例性实施方式的特征以所引用图片作为描述的时 候，应当被理解为：那些在形式和细节上通过常规技术手段对其进行的 替换和变化并不脱离随附权利要求书所界定的实质和范围。