淡水鳗鱼的人工排卵及产卵诱导方法

摘要

本发明涉及淡水鳗鱼的人工排卵及产卵诱导方法，在饲养人工排卵对象的亲鱼的养殖水槽中投入用于经过规定的时间诱导雌性化的雌性化诱导物质(例如，17β-雌二醇(17β-Estradiol))，若排卵诱导时期到来，则在养殖水槽中混合属于降河性鱼类的鲻鱼的脑垂体提取物(Flathead？mull？et？Pituitary？Extracts；FPE)作为人为的排卵促进物质，从而不适用借助腹腔注射的给药方式，也促进人为的排卵。优选地，根据本发明，针对上述养殖水槽的养殖水选择性地设定淡水、半咸水及海水条件，在上述养殖水的淡水条件下，在上述养殖水槽中投入用于诱导上述淡水鳗鱼亲鱼的完全的雌性化的雌性化诱导物质，在进行对雌性化的预处理过程之后，设定上述养殖水的海水条件，来在上述养殖水中投入上述排卵诱导物质，从而可诱导上述亲鱼的排卵及产卵。

说明书

技术领域

本发明涉及淡水鳗鱼的人工排卵及产卵诱导方法，更详细地，涉及淡水 鳗鱼的人工排卵及产卵诱导方法，在淡水鳗鱼的饲养槽中依次混合适量的雌 性化诱导物质和从与淡水鳗鱼类似的属于降河性鱼类的鲻鱼中提取的排卵 诱导物质的养殖水条件下，诱导人为的排卵。

背景技术

在属于日本鳗鲡的淡水鳗鱼的情况下，在人为的饲养环境中，脑垂体的 促性腺激素(Gonadotropins；GTHs)的合成能力不足，导致生殖巢不发达 (NagahaniaandYamamoto，1973)，这种糖蛋白质性促性腺激素对于包括 鱼类在内的脊椎动物的生殖巢的形成和发达来说是必不可少的(Kumaret al.，1997；Maetal.，2004)。

因此，有关雌性淡水鳗鱼，曾介绍过如下研究结果，即，以腹腔注射的 方式反复注射作为外源性促性腺激素的一种的鲑鱼脑垂体提取物(Salmon PituitaryExtracts；SPE)，来诱导卵黄形成期结束，借助17α，20β二 羟孕酮(17α，20β-dihydroxyprogesterone(DHP))最终成熟，并诱导排 卵(YamamotoandYamauchi，1974；Ohtaetal.，1996；Adachietal.， 2003)，有关雄性淡水鳗鱼，曾介绍过如下研究结果，即，反复注射血液中 的人绒毛膜促性腺激素(HumanChorionicGonadotropin；HCG)来诱导排 精。

其中，若参照淡水鳗鱼的人工排卵诱导的研究结果，则根据鲑鱼脑垂体 提取物的给药时期，呈现基于鲑鱼脑垂体提取物的给药次数的不同差异，推 定这种结果因随着季节的对卵巢的促性腺激素反应性的差异及这种差异对 繁殖率(排卵率、受精率及孵化率)的影响而发生。

并且，为了对淡水鳗鱼亲鱼进行人工排卵诱导而反复将鲑鱼脑垂体提取 物给药的情况下，导致每个个体的给药量过多或不足，最终还影 响人为排卵的卵质。

并且，淡水鳗鱼属于降河性鱼类，鲑鱼属于溯河性鱼类，淡水鳗鱼为了 产卵而向海水移动，相反，鲑鱼为了产卵而向淡水移动，因而呈现完全相反 的生态学特性，在包括淡水鳗鱼的鱼类的情况下，种特异性并不特别强，因 而在促进包括淡水鳗鱼的鱼类的排卵时使用鲑鱼的脑垂体提取物(SPE)，但 还需要对如下方案的研究，适用具有与相应的淡水鳗鱼类似的生态学特性的 鲻鱼的脑垂体提取物，并在设定与自然环境近似的排卵及产卵条件下，促进 排卵及产卵。

发明内容

技术问题

本发明鉴于上述的现有技术而提出，其目的在于，提供淡水鳗鱼的人工 排卵及产卵诱导方法，在饲养人工排卵对象的亲鱼的养殖水槽中投入用于经 过规定的时间诱导雌性化的雌性化诱导物质(例如，17β-雌二醇)，若排卵 诱导时期到来，则在养殖水槽中混合属于降河性鱼类的鲻鱼的脑垂体提取物 (FlatheadmulletPituitaryExtracts；FPE)作为人为的排卵促进物 质，从而不适用借助腹腔注射的给药方式，也促进人为的排卵。

技术方案

为了实现上述目的，根据本发明的优选实施例，提供淡水鳗鱼的人工排 卵及产卵诱导方法，上述淡水鳗鱼的人工排卵及产卵诱导方法用于在养殖水 槽内诱导淡水鳗鱼亲鱼的人工排卵及产卵，并包括：以在上述养殖水槽中依 次设定淡水、半咸水及海水的条件的方式进行控制的步骤；在上述养殖水槽 的淡水条件下，投入用于诱导上述亲鱼的雌性化及卵巢成熟的雌性化诱导物 质，来诱导雌性化的步骤；在上述诱导雌性化的步骤之后，将上述养殖水槽 的养殖水设定为半咸水条件，来调节上述亲鱼的渗透的步骤；在上述调节上 述亲鱼的渗透的步骤之后，一边将上述养殖水槽的养殖水设定为海水条件， 一边投入在降河性鱼类中采集的排卵诱导物质来诱导上述亲鱼的排卵的步 骤；以及在投入上述排卵诱导物质的步骤之后，诱导自然产卵的步骤。

根据本发明，用于诱导人工排卵的上述排卵诱导物质从属于降河性鱼类 的鲻鱼中提取。

并且，优选地，为了上述人工排卵，在上述养殖水的盐分浓度为35％、 水温为16～17℃且比一天的周期快的周期条件下，点亮蓝色光。

更优选地，在上述人工排卵的时间点，终止上述蓝色光的照射，从而符 合上述亲鱼的自然产卵条件。

有益效果

根据上述的本发明的淡水鳗鱼的人工排卵及产卵诱导方法，在上述养殖 水槽中，为了诱导淡水鳗鱼亲鱼的性成熟及排卵而设定淡水、半咸水及海水 的条件，并任意设定光的照射周期，从而可缩短排卵时期。

尤其，为了诱导亲鱼的完全雌性化，在上述养殖水槽中一次性投入雌性 化诱导物质来作为预处理条件，之后，经由半咸水区调节渗透，之后，设定 海水条件，来在养殖水中投入从具有与相应的淡水鳗鱼亲鱼类似的生态学回 游特性的鲻鱼中提取的人工排卵诱导物质，从而在摆脱借助直接注射的方法 的状态下，诱导人工排卵及产卵，来可极力抑制上述亲鱼的压力性卵质的退 化。

附图说明

图1为表示用于适用本发明的淡水鳗鱼的排卵诱导方法的养殖水槽装 置的图。

图2为用于说明本发明的淡水鳗鱼的人工排卵及产卵诱导方法的说明 过程中所参照的卵发生的形态特性的图。

附图标记的说明

10：养殖水槽14：遮光膜

16：条件设定部18：控制部

20：控制数据存储部22：计时部

24：加温部26：加热器驱动部

28：冷却部30：光源

具体实施方式

以下，参照附图对本发明进行详细的说明。

首先，根据本发明的优选实施例，在饲养淡水鳗鱼亲鱼(例如，雌性) 的养殖水槽(养殖水为淡水)中，经过规定的时间，将用于经过规定的时间 雌性化的雌性化诱导物质(例如，17β-雌二醇)进行给药。

即，在养殖产淡水鳗鱼的情况下，由于不明确的理由，雄性化的事例很 多，因而为了确保雌性的亲鱼，需要用于诱导亲鱼的雌性化的过程作为预处 理过程，因而经过规定的时间(例如，3～6周)使雌性化诱导物质混合于 养殖水槽的养殖水中。

对此，根据本发明，为了确保上述人为的排卵诱导对象的亲鱼，能够以 在饲料中投入雌性化诱导物质的方式进行供食。

在根据上述的预处理过程确保雌性的亲鱼的状态下，使亲鱼在半咸水区 条件下停留规定的时间，为了半咸水区条件，在相应的养殖水中以一天5psu 的方式逐渐增加海水，来通过渗透调节过程适用于海水。

相应的淡水鳗鱼亲鱼完全适应作为养殖水的海水之后，为了向作为养殖 水的海水进行人为的排卵诱导，针对1kg的养殖水，以按日期逐渐增加的方 式混合20～120mg的鲻鱼的脑垂体提取物(FlatheadmulletPituitary Extracts；FPE)。

其中，根据本发明，在用于上述的人为的排卵诱导的过程中，进行调节， 使得上述养殖水的温度从20±0.5℃降温至16～17℃，并使上述养殖水的温 度在从淡水至半咸水及海水的步骤中，逐渐上升至35％，从而控制成与自 然淡水鳗鱼的产卵条件类似的条件。

并且，优选地，从投入上述雌性化诱导物质的时间点开始到诱导上述人 为的排卵的期间，在相应的养殖水槽中设置光源，来在遮蔽太阳光的状态下， 以使光源的点灯周期比一天的周期快的方式进行切换(例如，8～10小时)， 并在这种切换过程中，在15天的周期完全熄灯，从而诱导自然产卵。

图1为用于适用本发明的淡水鳗鱼的排卵诱导方法的养殖水槽装置，这 种养殖水槽装置具有电子控制淡水/半咸水/海水条件，控制水温，并控制光 源的点灯周期的功能。

即，参照附图，附图标记“10”为由透明的合成树脂或玻璃材料制备而 成的、用于收容淡水鳗鱼亲鱼的养殖水槽，这种养殖水槽10的下端被支撑 件稳定地支撑，在养殖水槽10的上侧设置有用于遮蔽自然光的遮光膜14。

作为附图标记“16”的条件设定部用于根据本发明设定向上述养殖水槽 10供水的养殖水的温度变动周期，并设定后述的光的周期性照射条件，这 种条件设定部16包括：上下方式的水温设定按钮16a，用于设定上述养殖 水的温度变动周期；以及上下方式的光条件设定按钮16b，用于设定上述光 的周期性的照射条件。

作为附图标记“18”的控制部用于整体控制相应的养殖装置，并根据上 述条件设定部16的水温设定按钮16a和上述光条件设定按钮16b中设定的 温度变动周期及光照射周期，控制养殖水的温度变化及光照射周期。

上述控制部18与控制数据存储部20相连接，并与计时部22相连接， 上述控制数据存储部20用于存储上述条件设定部16的水温设定按钮16a和 上述光条件设定按钮16b中设定的温度变动周期数据及光照射周期数据，上 述计时部22用于提供计时数据，以便可控制上述养殖水的温度变化及光照 射周期。

并且，在作为附图标记“24”的加温部内置有加热器26a，用于根据上 述温度变动条件向上述养殖水槽10提供高温的养殖水，这种加热器26a借 助由上述控制部18控制激活的加热器驱动部26来起到用于加热养殖水温度 的功能。

作为附图标记“28”的冷却部起到根据上述温度变动条件向上述养殖水 槽10供给低温的养殖水的、供给已冷却的养殖水的功能。

并且，优选地，例如，配置于上述遮光膜14的下侧的光源30适用发光 二极管(LED)灯，来可使具有特定波长(即，400～500nm)的蓝色光发光， 这种光源30随着上述控制部18的控制，由照明驱动部32控制点灯/熄灯， 对这种光源30的正下方位置的照度在150～2001ux范围内。

并且，根据本发明，优选地，在上述养殖水槽10的内部设置有水温检 测传感器(省略图示)，上述水温检测传感器用于检测养殖水的当前温度来 向上述控制部18提供。

对适用于上述的结构的本发明的淡水鳗鱼的排卵及产卵诱导方法进行 说明。

首先，针对上述养殖水槽10，借助上述条件设定部16的水温设定按钮 16a来将养殖水设定为淡水条件，将初始温度设定为20℃，以在经过进行作 为预处理过程的雌性化诱导的期间(例如，3～6周)逐渐上升至26℃的方 式设定条件，并将上述光源30的点灯周期设定为10小时，来借助上述控制 部18进行控制，并在上述养殖水槽10中收容体长(或2.5～3年生)为30～ 40cm的自然产或养殖产亲鱼。

在这种状态下，在向上述养殖水槽10供水的养殖水中，经过规定的时 间，将雌性化诱导物质(例如，17β-雌二醇)进行给药来进行用于雌性化 的预处理过程。

根据本发明，在进行上述的预处理过程的期间包括以经过1天2～3次 的方式供给投入有生长激素的饲料来促进生长速度的步骤。

通过上述的预处理过程，针对相应的淡水鳗鱼亲鱼，以周知的方式确认 雌性化诱导，从而若处于雌性化诱导结束的状态，则转到用于排卵及产卵的 过程。

即，在用于人工排卵及产卵的过程中，借助上述条件设定部16的水温 设定按钮16a来将养殖水设定为半咸水条件，将初始温度设定为20℃，并 将上述光源30的点灯周期设定为8～9小时，来借助上述控制部18进行控 制。

因此，上述控制部18为了针对上述养殖水槽10设定半咸水区条件，向 上述养殖水供给海水(在这种情况下，向上述冷却部28供给盐水(或单独 供给盐水))，来在上述养殖水中，以一天5psu的方式逐渐增加盐分，从而 通过大致七天的渗透调节过程适用于海水。

然后，在上述养殖水槽10中，终止淡水的供给来设定为海水条件，并 最终使盐分浓度达到35％，并且，设定上述养殖水的温度使该温度在进行 排卵及产卵诱导过程的期间从20±0.5℃逐渐加温至16～17℃，从而进行控 制。

并且，为了诱导排卵，在上述养殖水中，针对1kg的上述养殖水，以按 根据上述光源30的点灯周期的日期逐渐增加的方式混合20～120mg的鲻鱼 的脑垂体提取物来诱导排卵。

并且，向上述养殖水槽10供给充分的氧，并终止饲料的供给。

其中，针对上述鲻鱼的脑垂体提取物，适用由鳗鱼林格液均质化的提取 液来诱导人为的性成熟，并在每个规定的时间(例如，5天)，通过测定增 体量(WG％，体重增加量(WeightGain)＝[(最终体重(finalbodyweight) －初始体重(initialbodyweight))]/初始体重×100)来确定成熟度。

在上述的排卵诱导过程中，在养殖水中混合上述鲻鱼的脑垂体提取物来 供给的过程中，在从外观上腹部饱满的亲鱼中，在卵成熟状态充分的情况下， 以在上述养殖水中进行自然排卵的方式用二羟孕酮(5～10μg/g体重浓度) 混合，或向个体以2μg/g体重浓度注射二羟孕酮来诱导排卵。

其中，根据本发明，据淡水鳗鱼在每月的最末一天前后产卵的报告，上 述控制部18进行控制，从而在上述光源30的点灯周期相当于每月的末一天 的时间点前后维持完全熄灯的状态。

另一方面，针对雄性亲鱼，按雌性鳗鱼的排卵时期注射高浓度的人绒毛 膜促性腺激素(1000IU/g体重)，来分别以1：2的比例在水槽中收容雌性 和雄性来诱导自然产卵及受精。

有关通过上述的过程自然产卵及受精的受精卵，用配管连接上述养殖水 槽10和集卵槽(省略图示)来收集浮性卵，从而在孵化槽(省略图示)中 供给微量的氧的状态下，诱导孵化。

图2为用于说明本发明的淡水鳗鱼的人工排卵及产卵诱导方法的说明 过程中所参照的卵发生的形态特性的图。

即，图2的“A”部分作为淡水鳗鱼亲鱼的卵黄及胚胎发生的步骤，呈 现在受精经过一小时时，在动物极侧的胚盘中开始分割的状态，图2的“B” 部分呈现受精经过约1小时30分钟的时间点的以4个细胞周期(卵径 1.39±0.07mm)进行的状态，在图2的“C”部分中观察到在受精经过3小 时的时间点以16个细胞周期进行的状态。

并且，参照图2的“D”部分，观察到在受精经过5小时时，受精卵由 1个大型油滴和2～3个中小型油滴构成，并向囊胚期进行的状态，参照图2 的“E”部分，观察到随着受精经过8小时，进入原肠胚期，在受精经过14 小时的时间点，向原肠胚中期进行，且在中心的1个大型油滴的周边有15 个以上小型油滴。

参照图2的“F”部分，观察到随着受精经过21小时，开始形成胚体， 在受精经过24小时之后，油滴融合为一个，并形成12～15个肌节的状态。

并且，参照图2的“G”部分，观察到在受精经过27小时时，形成眼泡， 并在眼泡后部中观察到耳泡，在受精30小时之后，在头部的下侧部分中观 察到心脏形成，并在心脏中观察到包围卵黄前方的血管，此时的肌节观察为 24～30个。

参照图2的“H”部分，若受精后经过33小时，则观察到28～35个肌 节，且尾部从卵黄分离而具有尾巴的形态，并观察到心脏的搏动，参照图2 的“I”部分，观察到受精38小时之后，与激烈的移动一同，通过卵膜突出， 并开始孵化，孵化之后的前期柳叶鳗(Pre-leptocephalus)仔鱼处于全长 稍弯曲约3mm程度的状态，肌节为40～44个，在约1小时之后，观察到身 体处于水平状态。

另一方面，本发明并不局限于上述的例，在不脱离发明的技术要旨及要 点的范围下，可进行多种变更及变形实施。

即，针对上述养殖水槽10，可单独附加盐水罐，来在上述控制部18的 控制下，以调节盐水的浓度的状态向上述养殖水槽10供给盐水。