化合物1,3-二油酸-2-亚油酸甘油酯、制剂、制备方法及其应用

摘要

本发明涉及一种具有式(Ⅰ)结构的化合物，即1,3-二油酸-2-亚油酸甘油酯，本发明还包括以薏苡仁粉为原料经过薏苡仁油的制备、1,3-二油酸-2-亚油酸甘油酯的初步分离、二次分离得到本发明化合物的方法，本发明还涉及含有1,3-二油酸-2-亚油酸甘油酯的药物制剂，其制备方法，以及上述化合物及制剂可作为抗肿瘤药物的应用。

说明书

技术领域

本发明涉及有机化学和药学领域，具体而言，本发明涉及化合物1,3-二油酸-2-亚油酸 甘油酯、制剂、制备方法及其在抗肿瘤药物中的应用。

背景技术

薏苡仁是禾本科薏苡属植物薏苡Coixlacryma-jobiL.varma-yuen(Roman.)Stapf的成熟 干燥种仁，为利水渗湿药，很久以来为药食两用品种。现代研究发现薏苡仁具有镇痛抗炎、 免疫调节、抗溃疡、降血脂和减肥等药理作用。近年来，国内外学者通过TLC、HPLC-MS、 GC等方法对薏苡仁的化学成分进行了研究，发现其主要的活性成分包括酯类、不饱和脂肪酸 类、糖类及内酰胺类等。其中，酯类是首先被发现的具有抗肿瘤活性的成分，也是报道最多 最受关注的化学成分，在中国临床上已经得到普遍应用的康莱特注射液的有效成分便是提自 薏苡仁中的酯类。杨玲等[食品科学,2001,22(5):59-62]研究表明，薏苡仁油脂中甘油三酯的 摩尔百分比在87.64％-97.66％之间，其次为甘油一酯、甘油二酯和脂肪酸酯。同时，进一步研 究表明，薏苡仁油甘油三酯中，相对含量不低于3％的的成分多达8种，如三亚油酸甘油酯(1)、 二亚油酸油酸甘油酯(2)、棕榈酸二亚油酸甘油酯(3)、亚油酸二油酸甘油酯(4)、棕榈 酸亚油酸油酸甘油酯(5)、二棕榈酸亚油酸甘油酯(6)、三油酸甘油酯(7)和棕榈酸二油 酸甘油酯，约占甘油三酯总量的90％以上。由此可见，薏苡仁油脂成分的复杂性，这必然会 使实际生产过程中的质量控制和临床用药安全面临很大的挑战。

因此，开发一种安全、有效、可控的治疗肿瘤的药物即成为本发明关注的热点。本发明 对上述薏苡仁油甘油三酯成分之一——亚油酸二油酸甘油酯进行了分离，首次制备得到了一 种具有式(Ⅰ)结构的化合物，即1,3-二油酸-2-亚油酸甘油酯，目前尚未见关于此化合物及 其药物制剂用于治疗肿瘤的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种具有式(Ⅰ)结构化合物，即1,3-二油酸-2-亚油酸甘油酯：

本发明的又一目的在于提供一种含有式(Ⅰ)结构化合物的药物组合物，其还可含有 药学上可接受的载体。

本发明的目的还在于提供一种具有式(Ⅰ)结构化合物的制备方法，其包括如下步骤：

(1)薏苡仁油的制备；

(2)1,3-二油酸-2-亚油酸甘油酯的初步分离；

(3)1,3-二油酸-2-亚油酸甘油酯的二次分离。

其中，

步骤(1)中薏苡仁油的制备方法为：

取水分≤10％的薏苡仁粉碎成10～300目，采用超临界流体萃取，分离得到薏苡仁粗油； 加入薏苡仁粗油重量40％～58％的石油醚，及适量碱溶液碱炼，分液后取有机相，加入中 性氧化铝和/或高岭土，过滤，150～180℃减压回收溶剂，干热灭菌，冷却过滤，得薏苡仁 油。

优选的，

所述超临界流体萃取溶媒为二氧化碳，萃取温度30～60℃，萃取压力19～24Mpa，分 离温度30～60℃，分离压力6～15Mpa，二氧化碳流量10～5000L/h，连续萃取1～4h；

所述碱溶液可以为0.5％～3％的氢氧化钾、氢氧化钠的水溶液；

所述加入中性氧化铝和/或高岭土的过程为：首先加入薏苡仁粗油重量3％～8％的活化 中性氧化铝过滤，滤液加热至40～50℃，又加入薏苡仁粗油重量2％～6％经活化的高岭土 过滤，减压除溶剂，再加入薏苡仁粗油重量8％～12％活化中性氧化铝过滤即可。

更优选的，

取水分≤10％的薏苡仁粉碎成10～300目，采用超临界二氧化碳萃取装置萃取，将薏苡 仁粉装入萃取釜，加热二氧化碳预热器、萃取釜和分离柱，使萃取温度达到30～60℃，分 离温度达到30～60℃，升高压力，使萃取压力达到19～24Mpa，分离压力达到6～15Mpa， 萃取薏苡仁油后的超临界二氧化碳流体进入解析釜解析循环，解析釜可根据需要设一至多 个，控制解析温度30～60℃，解析压力2～6Mpa，整个循环保持二氧化碳流量10～5000L/h， 连续萃取1～4h，自分离柱下端分离得到薏苡仁粗油；

将上述薏苡仁粗油加入油重量40％～58％的石油醚，再加入适量的2％NaOH溶液碱 炼，分液后取有机相用纯化水进行水洗，取水洗后有机相加适量丙酮破乳后，取上层油溶 液，加入粗油重量3％～8％的活化中性氧化铝过滤，取滤液加热到40～50℃后，加入粗油 重量2％～6％经活化的高岭土过滤，滤液减压回收溶剂后，再加粗油重量8％～12％活化中 性氧化铝过滤得油，过滤后的油再经150～180℃减压干热灭菌1～3h，冷却后经≤0.2μm微 孔滤膜过滤，得薏苡仁油。

其中，

步骤(2)中1,3-二油酸-2-亚油酸甘油酯的初步分离方法为：

采用Gilson制备型高效液相色谱仪和蒸发光散射检测器联用；制备型色谱柱为Agilent ZorbaxSB-C18(250mm×21.2mm,7μm)；流动相为流动相A(乙腈)和流动相B(四氢呋 喃：乙腈＝1:1)，采用梯度条件洗脱：流动相B：0～27min，50％→60％，27～35min，60％→90％， 35～45min，90％→100％；流速：18ml/min。进样体积为200～300μl；收集响应设置：peak levelmin＝30mV；

供试品配制：用流动相B配制成0.1g/ml的薏苡仁油溶液；

收集保留时间约为16min前后的色谱峰流分，低温减压抽干溶剂。

其中，

步骤(3)中1,3-二油酸-2-亚油酸甘油酯的二次分离方法为：

一次制备条件为：Agilent1100分析型高效液相色谱仪，DAD检测器，，色谱柱：Venusil XBPC18(L)(10*250mm，5μm，)，流动相，乙腈：四氢呋喃＝75:25，流速：4mL/min； 检测波长：205nm；供试品配制：取1,3-二油酸-2-亚油酸甘油酯的初步分离样品，加入适 量正己烷，超声促溶后备用，进样量：60μl，收集保留时间约为19min的色谱峰流分，将 此流分氮吹浓缩；

二次制备条件为：色谱柱，VenusilCA(10*250mm，5μm，)，流动相，正己烷： 乙醇＝95:5，紫外检测波长：205nm，流速：4mL/min；供试品配制：取一次制备的流分样 品若干，加入适量正己烷，超声促溶后备用；进样量：60μl，收集保留时间约为2.5min～5 min的色谱峰，氮吹浓缩、低温冻存。

本发明化合物经过理化性质、质谱、核磁、紫外和红外光谱的鉴定，确证了其结构， 具体如下：

1.实验仪器

高效液相色谱仪：Agilent1100(DAD,ELSD)(美国安捷伦公司)；

核磁共振波谱仪：BRUKERAVANCE500MHz(美国布鲁克公司)；

质谱仪：MacromassGCT飞行时间质谱(TOF)(美国沃特世公司)；

FinniganTRACEDSQ-MS(美国热电公司)；

液相质谱联用仪：FinniganLCQadvantageMAX(美国热电公司)；

红外光谱仪：Nicolet6700(美国热电公司)；

旋光仪：JascoP-1030(日本JASCO公司)。

2.实验方法

HPLC：取纯品20mg于1ml二氯甲烷溶液中，Agilent1100HPLC，色谱柱：Agilent ZorbaxSB-C18(250mm×4.6mm，i.d.5μm)，二氯甲烷-乙腈(35:65，v/v)为流动相，进 样量10μl。

LC-MS：按液相条件，在FinniganLCQadvantageMAX上以APCI正离子模式测定。

IR：将所得纯品分别涂膜于溴化钾晶体表面，在红外光谱仪Nicolet6700上测定。

HR-EI与Qu.-EI：取所得纯品5μg，涂于进样池中，于MacromassGCT飞行时间质谱 (TOF)上，以SourceTemp:200℃；SampleTemp:400℃；DIRECT，70eV测定。同样以 SourceTemp：250℃；SampleTemp：250℃；DIRECT，70eV条件在FinniganTRACE DSQ-MS上测定。

NMR：将所得纯品取30～40mg，置于核磁管中，加0.5ml氘代氯仿(CDCl₃)，注入高 纯氩气，在氩气保护下用酒精喷灯将核磁管熔融密闭，于BRUKER500M核磁共振波谱仪 上测定¹H-NMR，¹³C-NMR，HSQC，HMBC。

比旋光度：取纯品适量溶于1.50ml氯仿中，摇匀，于JASCOP-1030上测定。

3.谱图解析

室温下，本发明化合物为淡黄色油状液体。

HR-EI-MS：m/z＝882.7678(理论值＝882.7676，C₅₇H₁₀₂O₆)，不饱和度＝7(见图1)。

APCI-MS：883.4为[M+H]⁺信号，同时出现[M+H-亚油酸]⁺＝603.3和[M+H-油酸]⁺＝601.2 碎片信号，推断其有油酸及亚油酸2种酰链(见图2)。

IR(KBrflim)：1747，1163，1097；2925，2855，723；3007，1655cm^-1(见图3)。

¹H-NMR：δ5.27(m,1H)，4.30(dd,J＝4.29Hz,J＝11.9Hz,2H)，4.15(,dd，J＝5.9Hz，J＝ 11.9Hz，2H)，2.33(m,6H)，2.77(t，2H)，5.36(m，8H)，0.88(m，9H)(见图4)。

¹³C-NMR：δ14.10，14.14，22.60，22.71，24.86，24.90，25.65，27.2，27.22，27.24， 29.07，29.79，31.55，31.93，34.05，34.21，62.12，68.89，127.90，128.10，129.73， 130.00，130.03，130.24，172.87，173.29(见图5)。

本发明还包括，含有本发明化合物的药物组合物。

本发明的药物组合物，优选的是单位剂量的药物制剂形式，其可含有本发明的药物活 性物质0.1mg-1000mg，其余为药学上可接受的载体，药学上可接受的载体以重量计可以 是制剂总重量的0.01％-99.99％。

本发明的药物组合物，可以是任何可服用的药物形式：如普通片剂、糖衣片剂、薄 膜衣片剂、肠溶衣片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、 丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、栓剂、软膏剂、硬膏剂、霜 剂、喷雾剂、滴剂、贴剂等。

优选的，本发明的组合物为口服制剂或注射剂。

本发明的目的还在于提供一种药物制剂，含有至少一种活性成分以及一种或几种药学上 可接受的载体，其中所述活性成分含有1,3-二油酸-2-亚油酸甘油酯，结构如式(Ⅰ)。

所述药学上可接受的载体包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、乳化剂、粘 合剂、润滑剂、吸收促进剂、表面活性剂、崩解剂、润滑剂、稳定剂等，必要时还可以加 入香味剂、甜味剂、防腐剂及着色剂等。

具体的，所述药学上可接受的载体可以选自：甘露醇、山梨醇、焦亚硫酸钠、亚硫酸 氢钠、硫代硫酸钠、盐酸半胱氨酸、巯基乙酸、蛋氨酸、大豆磷脂、维生素C、维生素E、 EDTA二钠、EDTA钙钠，一价碱金属的碳酸盐、醋酸盐、磷酸盐或其水溶液、盐酸、醋酸、 硫酸、磷酸、氨基酸、氯化钠、氯化钾、乳酸钠、羟苯乙酯溶液、苯甲酸、山梨酸钾、醋 酸氯己定、木糖醇、麦芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘 露糖醇、硅衍生物、纤维素及其衍生物、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、吐温80、 琼脂、碳酸钙、碳酸氢钙、表面活性剂、聚乙二醇、环糊精、β-环糊精、磷脂类材料、高岭 土、滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁等。

优选的，

本发明所述药物制剂可以是口服固体制剂、口服液体制剂或注射剂。

其中，

所述口服固体制剂选自胶囊剂、片剂、滴丸、颗粒剂、浓缩丸中的一种；

所述口服液体制剂选自水性或油性悬浮液、溶液、乳剂、糖浆剂或酏剂，或是一种在 使用前可用水或其它适宜的载体复配的干燥产品；

所述注射剂选自注射液、冻干粉针剂和水针剂中的一种。

其中，

本发明所述药物制剂优选为注射剂，包括如下成分：

上述注射剂的制备方法包括如下步骤：

称取处方配制量的注射用大豆磷脂或可供注射用大豆磷脂，加适量的注射用水后，用 高剪切分散乳化机分散至无块状及颗粒状固体，加入按配方量称取的注射用甘油或可供注 射用甘油，并加注射用水至规定量，搅拌均匀备用；

另称取1,3-二油酸-2-亚油酸甘油酯，将称取的甘油酯与水相分别加热至60～70℃后，置 高压均质机进行高压乳化，乳化时均质机低压为5～12MPa，高压为25～50MPa，再循环均 质3～6遍，至2μm以下颗粒应不少于95％，5μm以上颗粒不得检出，必要时用NaOH或 HCl调节pH至4.8～8.5，优选6.8～7.0，最优选为6.8；

将制得均匀乳剂氮气加压通过≤3μm的微孔滤芯过滤器过滤，充氮灌装灭菌，冷却即 得。

其中，

本发明所述药物制剂优选为胶囊剂，包括如下成分：

1,3-二油酸-2-亚油酸甘油酯200-800g

抗氧化剂和/或乳化剂0.20-0.60g

制成1000粒。

上述胶囊剂的制备方法包括如下步骤：

胶液配制：按重量比为1:0.6～1.2:0.3～0.8:0.0001～0.01称取适量明胶、纯化水、甘油和 防腐剂；依次将甘油、纯化水、防腐剂加入化胶罐内，加热至70℃～90℃后，再加入明胶不 断搅拌、抽真空，直至明胶完全溶解，将胶液过滤，在56℃～62℃下存放，备用；

药液配制：将配方量的1,3-二油酸-2-亚油酸甘油酯、抗氧化剂和/或乳化剂加入配料罐 内，不断搅拌，直至混合均匀；

压胶囊：根据胶囊大小选择合适的压丸模具，在15℃～30℃、相对湿度<35％条件下进 行压丸定型后干燥，剔除大小丸，再用95％药用乙醇洗丸后，继续干燥至含水量小于12％， 目检剔除不合格胶囊，印字，包装即得。

其中，

所述防腐剂选自10％羟苯乙酯溶液、苯甲酸、山梨酸钾或醋酸氯己定中的一种；

所述抗氧化剂为维生素E，乳化剂为吐温80。

本发明通过药效实验表明，1,3-二油酸-2-亚油酸甘油酯及其药物制剂对7种人肿瘤细胞 株均有不同程度的抑制作用，可作为治疗肿瘤疾病药物。

因此，本发明的又一目的在于提供具有式(Ⅰ)结构的化合物及其药物制剂在制备抗 肿瘤药物中的应用，尤其是在治疗人胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、肝癌、肺癌、胃癌或结肠 癌中的应用。

以下通过实验数据说明本发明所述化合物及其制剂在抗肿瘤方面的有益效果。

1、实验目的

在体外用MTT法测定本发明人化合物对7种人肿瘤细胞株的抑制作用。

2、实验材料及配制

(1)细胞株：PANC-1(人胰腺癌细胞)、SKOV3(人卵巢癌细胞)、MCF-7(人乳腺癌细胞)、 SMMC-7721(人肝癌细胞)、A549(人肺癌细胞)、BGC-823(人胃癌细胞)、COLO205(人 结肠癌细胞)。上述细胞株由上海医药工业研究药理评价研究中心保存，传代维持。

(2)DMEM完全培养基：添加10％新生牛血清(GIBCOBRL)、双抗；

(3)0.25％胰蛋白酶溶液(Trypsin)：购自Invitrogen公司，-20℃保存。

(4)磷酸缓冲液(PBS)：NaCl8g，KCl0.2g，Na₂HPO₄1.15g，KH₂PO₄0.2g，溶于1L 双蒸水，121℃高压消毒20min，4℃保存。

(5)MTT(AMRESCO)溶液：用PBS配成5mg/ml溶液。

(6)溶解液：每100ml去离子双蒸水含SDS10g，异丁醇5ml，浓盐酸0.1ml。

3、实验方法

本发明化合物对上述细胞株的抑制作用通过MTT法测得。具体步骤如下：

(1)细胞培养：①将细胞从液氮中取出，在37℃水浴中迅速解冻，细胞在无菌操作台中移 入10ml无菌离心管中加6ml细胞培养基，1000转/分离心5分钟。弃去上清液，沉淀中加 入5～6ml细胞培养基，滴管吹打使其悬浮后移入细胞培养瓶中，置37℃细胞培养箱内。② 次日，自培养箱中取出细胞，弃去细胞瓶中细胞培养基，加入5～6ml细胞培养基，置37℃ 细胞培养箱内。③隔日，自培养箱中取出细胞，弃去细胞瓶中细胞培养基，加入PBS(pH7.4) 2～3ml晃动清洗，倒掉PBS溶液后再重复一次清洗。在培养瓶中加入3～5滴0.25％胰蛋白 酶溶液晃动均匀，加盖置于37℃细胞培养箱内3分钟左右，于显微镜下观察发现细胞自培 养瓶壁上脱离，加细胞培养基2ml，滴管吹打使细胞完全脱离瓶壁后，分别移入2个干净 培养瓶中，加入细胞培养基5～6ml吹打均匀，置于37℃细胞培养箱内。④隔日，重复③步 骤。在整个培养过程中，贴壁细胞不允许生长过密，悬浮细胞始终保持对数生长期。

(2)样品及对照品制备：称取适量本发明化合物样品溶解于DMSO中，得到浓度为100mg/ml 的溶液。再用PBS作梯度稀释，得到浓度10mg/ml、5000μg/ml、2500μg/ml、1250μg/ml、 625μg/ml、312.5μg/ml的稀释样品。

(3)将稀释好的样品加入平底96孔板中，每孔10μl，每点作两个平行测试。将DMSO相 应作梯度稀释后加入板中，作为对照。

(4)取处于对数生长期的细胞，细胞经胰酶消化并洗涤后悬浮于含10％小牛血清的培养基 中，经苔盼蓝染色排除法计活细胞数，并调节细胞悬浮液密度至2×10⁵细胞/ml。

(5)将加入细胞的平底96孔板在37℃、5％CO₂细胞培养箱中培养48小时。

(6)每孔中加入20μl5mg/mlMTT溶液，继续在培养箱中保温3～4小时。

(7)每孔加入100μl溶解液，继续在培养箱中保温过夜，使生成的甲臢晶体充分溶解。测 定570nm光吸收值。

(8)根据光吸收值计算各样品浓度组的细胞生长抑制率，计算公式如下：

(1－实验孔平均光吸收值/对照孔平均光吸收值)×100％

4、实验结果

表1.不同浓度的本发明化合物对7种细胞株的生长抑制率(％)

表2.本发明化合物在体外对7种细胞株的IC₅₀(μg/ml)

5、结论

实验结果表明，不同浓度的本发明化合物及其制剂，对上述7种癌细胞株均具有显著 的抑制作用，可作为抗肿瘤药物应用。并且，由于本发明所述药物制剂中活性成分组成简 单、含量明确，因此临床用药更为安全，给药剂量较小，生产过程质量可控。避免了现有 技术中直接以提取出的薏苡仁油入药时，成分复杂所带来的较多副作用等缺陷。

附图说明

图11,3-二油酸-2-亚油酸甘油酯的EI质谱图。

图21,3-二油酸-2-亚油酸甘油酯的APCI质谱图。

图31,3-二油酸-2-亚油酸甘油酯的红外光谱图。

图41,3-二油酸-2-亚油酸甘油酯的¹H-NMR谱图。

图51,3-二油酸-2-亚油酸甘油酯的¹³C-NMR谱图。

图61,3-二油酸-2-亚油酸甘油酯的HSQC谱图。

图71,3-二油酸-2-亚油酸甘油酯的HMBC谱图。

具体实施方式

以下通过实施例进一步说明本发明，但不作为对本发明的限制。

实施例1薏苡仁油的制备

取水分≤10％的薏苡仁1000g粉碎成10目，采用超临界二氧化碳萃取，萃取温度40℃， 萃取压力20Mpa，分离温度30℃，分离压力6Mpa，二氧化碳流量50L/h，连续萃取2h， 分离得到薏苡仁粗油；加入薏苡仁粗油重量40％的石油醚和0.5％的氢氧化钾的水溶液碱 炼；分液后取有机相，首先加入油重3％的活化中性氧化铝过滤，滤液加热至40℃，又加入 油重2％经活化的高岭土过滤，减压除溶剂，再加入油重8％活化中性氧化铝，过滤，180 ℃减压干热灭菌，冷却过滤，得薏苡仁油；

实施例2薏苡仁油的制备

取水分≤10％的薏苡仁1000g粉碎成100目，采用超临界二氧化碳萃取，萃取温度50 ℃，萃取压力22Mpa，分离温度40℃，分离压力8Mpa，二氧化碳流量500L/h，连续萃取 3h，分离得到薏苡仁粗油；加入薏苡仁粗油重量46％的石油醚和1％的氢氧化钠的水溶液 碱炼；分液后取有机相，首先加入油重5％的活化中性氧化铝过滤，滤液加热至50℃，又加 入油重4％经活化的高岭土过滤，减压除溶剂，再加入油重10％活化中性氧化铝，过滤，150 ℃减压干热灭菌，冷却过滤，得薏苡仁油；

实施例3薏苡仁油的制备

取水分≤10％的薏苡仁1000g粉碎成200目，采用超临界二氧化碳萃取，萃取温度60 ℃，萃取压力24Mpa，分离温度50℃，分离压力10Mpa，二氧化碳流量1500L/h，连续萃 取1.5h，分离得到薏苡仁粗油；加入薏苡仁粗油重量50％的石油醚，及2％的氢氧化钾的 水溶液碱炼；分液后取有机相，首先加入油重6％的活化中性氧化铝过滤，滤液加热至45 ℃，又加入油重5％经活化的高岭土过滤，减压除溶剂，再加入油重10％活化中性氧化铝， 过滤，160℃减压干热灭菌，冷却过滤，得薏苡仁油；

实施例4薏苡仁油的制备

取水分≤10％的薏苡仁1000g粉碎成100目，采用超临界二氧化碳萃取装置萃取，将薏 苡仁粉装入萃取釜，加热二氧化碳预热器、萃取釜和分离柱，使萃取温度达到60℃，萃取 压力24Mpa，分离温度达到60℃，分离压力15Mpa，萃取薏苡仁油后的超临界二氧化碳 流体进入解析釜解析循环，解析釜可根据需要设5个，控制解析温度50℃，解析压力6Mpa， 整个循环保持二氧化碳流量3000L/h，连续萃取4h，自分离柱下端分离得到薏苡仁粗油；

将上述薏苡仁粗油加入油重量58％的石油醚，再加入适量的2％NaOH溶液碱炼，分 液后取有机相用纯化水进行水洗，取水洗后有机相加适量丙酮破乳后，取上层油溶液，加 入油重8％的活化中性氧化铝过滤，取滤液加热到46℃后，加入油重6％经活化的高岭土 过滤，滤液减压回收溶剂后，再加油重12％活化中性氧化铝过滤得油，过滤后的油再经170 ℃减压干热灭菌2h，冷却后经≤0.2μm微孔滤膜过滤，得薏苡仁油。

实施例5薏苡仁油的制备

取水分≤10％的薏苡仁1000g粉碎成300目，采用超临界二氧化碳萃取装置萃取，将薏 苡仁粉装入萃取釜，加热二氧化碳预热器、萃取釜和分离柱，使萃取温度达到50℃，萃取 压力20Mpa，分离温度达到45℃，分离压力12Mpa，萃取薏苡仁油后的超临界二氧化碳 流体进入解析釜解析循环，解析釜可根据需要设3个，控制解析温度45℃，解析压力5Mpa， 整个循环保持二氧化碳流量2000L/h，连续萃取3h，自分离柱下端分离得到薏苡仁粗油；

将上述薏苡仁粗油加入油重量48％的石油醚，再加入适量的2％NaOH溶液碱炼，分 液后取有机相用纯化水进行水洗，取水洗后有机相加适量丙酮破乳后，取上层油溶液，加 入油重6％的活化中性氧化铝过滤，取滤液加热到42℃后，加入油重4％经活化的高岭土 过滤，滤液减压回收溶剂后，再加油重9％活化中性氧化铝过滤得油，过滤后的油再经165 ℃减压干热灭菌3h，冷却后经≤0.2μm微孔滤膜过滤，得薏苡仁油。

实施例61,3-二油酸-2-亚油酸甘油酯的初步分离

采用Gilson制备型高效液相色谱仪和蒸发光散射检测器联用；制备型色谱柱为Agilent ZorbaxSB-C18(250mm×21.2mm,7μm)；流动相为流动相A(乙腈)和流动相B(四氢呋 喃：乙腈＝1:1)，采用梯度条件洗脱：流动相B：0～27min，50％→60％，27～35min，60％→90％， 35～45min，90％→100％；流速：18ml/min，进样体积为200～300μl；收集响应设置：peak levelmin＝30mV；

供试品配制：用流动相B配制成0.1g/ml的薏苡仁油溶液；

收集保留时间约为16.0min色谱峰流分，低温减压抽干溶剂，得1,3-二油酸-2-亚油酸 甘油酯粗品。

实施例71,3-二油酸-2-亚油酸甘油酯的二次分离

一次制备条件为：Agilent1100分析型高效液相色谱仪，DAD检测器，，色谱柱：Venusil XBPC18(L)(10*250mm，5μm，)，流动相，乙腈：四氢呋喃＝75:25，流速：4mL/min； 检测波长：205nm；供试品配制：取薏苡仁油四号色谱峰组分若干，加入适量正己烷，超 声促溶后备用，进样量：60μl，收集保留时间约为19min的色谱峰流分，将此流分氮吹浓 缩；

二次制备条件为：色谱柱，VenusilCA(10*250mm，5μm，)，流动相，正己烷： 乙醇＝95:5，紫外检测波长：205nm，流速：4mL/min；供试品配制：取一次制备的流分样 品若干，加入适量正己烷，超声促溶后备用；进样量：60μl，收集保留时间约为2.5min～5 min的色谱峰，氮吹浓缩、低温冻存，即得1,3-二油酸-2-亚油酸甘油酯。

实施例81,3-二油酸-2-亚油酸甘油酯注射液的制备

处方：

工艺：

称取处方配制量的注射用大豆磷脂，加适量的注射用水后，用高剪切分散乳化机分散 至无块状及颗粒状固体，加入按配方量称取的注射用甘油，并加注射用水至规定量，搅拌 均匀备用；

另称取1,3-二油酸-2-亚油酸甘油酯，将称取的油酯与水相分别加热至65℃后，置高压 均质机进行高压乳化，乳化时均质机低压为8MPa，高压为30MPa，再循环均质4遍，至 2μm以下颗粒应不少于95％，5μm以上颗粒不得检出,必要时用NaOH或HCl调节pH至 6.8；

将制得均匀乳剂氮气加压通过≤3μm的微孔滤芯过滤器过滤，充氮灌装灭菌，冷却即 得。

实施例91,3-二油酸-2-亚油酸甘油酯胶囊剂的制备

处方：

1,3-二油酸-2-亚油酸甘油酯500g

维生素E0.40g

制成1000粒

工艺：

胶液配制：按重量比为1:0.9:0.6:0.005称取适量明胶、纯化水、甘油和山梨酸钾；依 次将甘油、纯化水、山梨酸钾加入化胶罐内，加热至80℃后，再加入明胶不断搅拌、抽真 空，直至明胶完全溶解，将胶液过滤，在56-62℃下存放，备用；

药液配制：将配方量的1,3-二油酸-2-亚油酸甘油酯、维生素E加入配料罐内，不断搅 拌，直至混合均匀；

压胶囊：根据胶囊大小选择合适的压丸模具，在15℃、相对湿度<35％条件下进行压丸 定型后干燥，剔除大小丸，再用95％药用乙醇洗丸后，继续干燥至含水量小于12％，目检 剔除不合格胶囊，印字，包装即得。

实施例101,3-二油酸-2-亚油酸甘油酯注射液的制备

处方：

工艺：

称取处方配制量的注射用大豆磷脂，加适量的注射用水后，用高剪切分散乳化机分散 至无块状及颗粒状固体，加入按配方量称取的注射用甘油，并加注射用水至规定量，搅拌 均匀备用；

另称取1,3-二油酸-2-亚油酸甘油酯，将称取的油酯与水相分别加热至60℃后，置高压 均质机进行高压乳化，乳化时均质机低压为5MPa，高压为35MPa，再循环均质6遍，至 2μm以下颗粒应不少于95％，5μm以上颗粒不得检出，必要时用NaOH或HCl调节pH至 4.8；

将制得均匀乳剂氮气加压通过≤3μm的微孔滤芯过滤器过滤，充氮灌装灭菌，冷却即 得。

实施例111,3-二油酸-2-亚油酸甘油酯注射液的制备

处方：

工艺：

称取处方配制量的注射用大豆磷脂，加适量的注射用水后，用高剪切分散乳化机分散 至无块状及颗粒状固体，加入按配方量称取的注射用甘油，并加注射用水至规定量，搅拌 均匀备用；

另称取1,3-二油酸-2-亚油酸甘油酯，将称取的油酯与水相分别加热至70℃后，置高压 均质机进行高压乳化，乳化时均质机低压为11MPa，高压为45MPa，再循环均质3遍，至 2μm以下颗粒应不少于95％，5μm以上颗粒不得检出，必要时用NaOH或HCl调节pH至 8.5；

将制得均匀乳剂氮气加压通过≤3μm的微孔滤芯过滤器过滤，充氮灌装灭菌，冷却即 得。

实施例121,3-二油酸-2-亚油酸甘油酯注射液的制备

处方：

工艺：

称取处方配制量的注射用大豆磷脂，加适量的注射用水后，用高剪切分散乳化机分散 至无块状及颗粒状固体，加入按配方量称取的注射用甘油，并加注射用水至规定量，搅拌 均匀备用；

另称取1,3-二油酸-2-亚油酸甘油酯，将称取的油酯与水相分别加热至68℃后，置高压 均质机进行高压乳化，乳化时均质机低压为9MPa，高压为40MPa，再循环均质5遍，至 2μm以下颗粒应不少于95％，5μm以上颗粒不得检出，必要时用NaOH或HCl调节pH至 7.2；

将制得均匀乳剂氮气加压通过≤3μm的微孔滤芯过滤器过滤，充氮灌装灭菌，冷却即 得。

实施例131,3-二油酸-2-亚油酸甘油酯胶囊剂的制备

处方：

1,3-二油酸-2-亚油酸甘油酯200g

维生素E0.20g

制成1000粒

工艺：

胶液配制：按重量比为1:1.2:0.8:0.01称取适量明胶、纯化水、甘油和10％羟苯乙酯 溶液；依次将甘油、纯化水、10％羟苯乙酯溶液加入化胶罐内，加热至70℃后，再加入明 胶不断搅拌、抽真空，直至明胶完全溶解，将胶液过滤，在60℃下存放，备用；

药液配制：将配方量的1,3-二油酸-2-亚油酸甘油酯、维生素E加入配料罐内，不断搅 拌，直至混合均匀；

压胶囊：根据胶囊大小选择合适的压丸模具，在30℃、相对湿度<35％条件下进行压丸 定型后干燥，剔除大小丸，再用95％药用乙醇洗丸后，继续干燥至含水量小于12％，目检 剔除不合格胶囊，印字，包装即得。

实施例141,3-二油酸-2-亚油酸甘油酯胶囊剂的制备

处方：

1,3-二油酸-2-亚油酸甘油酯800g

吐温800.60g

制成1000粒

工艺：

胶液配制：按重量比为1:1.2:0.8:0.01称取适量明胶、纯化水、甘油和苯甲酸；依次将 甘油、纯化水、苯甲酸加入化胶罐内，加热至90℃后，再加入明胶不断搅拌、抽真空，直 至明胶完全溶解，将胶液过滤，在56℃下存放，备用；

药液配制：将配方量的1,3-二油酸-2-亚油酸甘油酯、吐温80加入配料罐内，不断搅拌， 直至混合均匀；

压胶囊：根据胶囊大小选择合适的压丸模具，在25℃、相对湿度<35％条件下进行压丸 定型后干燥，剔除大小丸，再用95％药用乙醇洗丸后，继续干燥至含水量小于12％，目检 剔除不合格胶囊，印字，包装即得。

实施例151,3-二油酸-2-亚油酸甘油酯胶囊剂的制备

1,3-二油酸-2-亚油酸甘油酯600g

吐温800.3g

制成1000粒

工艺：

胶液配制：按重量比为1:1.0:0.5:0.008称取适量明胶、纯化水、甘油和醋酸氯己定； 依次将甘油、纯化水、醋酸氯己定加入化胶罐内，加热至85℃后，再加入明胶不断搅拌、 抽真空，直至明胶完全溶解，将胶液过滤，在62℃下存放，备用；

药液配制：将配方量的1,3-二油酸-2-亚油酸甘油酯、吐温80加入配料罐内，不断搅拌， 直至混合均匀；

压胶囊：根据胶囊大小选择合适的压丸模具，在28℃、相对湿度<35％条件下进行压丸 定型后干燥，剔除大小丸，再用95％药用乙醇洗丸后，继续干燥至含水量小于12％，目检 剔除不合格胶囊，印字，包装即得。