抑制根结线虫二龄幼虫和卵的堆肥提取液的制备及防治方法

摘要

本发明提供一种抑制根结线虫二龄幼虫和卵的堆肥提取液的制备及防治方法，包括：步骤A：堆肥化处理：田间收集废弃的玉米秸秆并将其粉碎于塑料桶中，一边加入粉碎的玉米秸秆，一边加水搅拌均匀，使玉米秸秆充分湿润，再将桶内的玉米秸秆压紧，并充满整个塑料桶；步骤B：加盖密封，常温下进行厌氧发酵，期间未进行氧分和水分的补充；步骤C：提取液的制备，将获得提取液置于冰箱中保存备用，并以此作为原液进行试验。本发明不但解决了生产后大量农业废弃物秸秆的处理问题，而且还提供一种新的用于防治植物根结线虫病的方法，用于解决目前防治蔬菜根结线虫病的化学杀线剂所带来的环境污染、食品不安全等一系列问题。

说明书

技术领域

本发明属于根结线虫防治领域，具体涉及一种利用农业废弃物堆肥获得的提取液 防治蔬菜根结线虫及其防治方法。

背景技术

蔬菜根结线虫病害是生产上重要的土传病害，该病害寄主范围广泛，尤其以茄科、 葫芦科等植物发病较普遍。近年来随着产业结构的调整，蔬菜保护地的种植面积不断 扩大。由于设施内土壤条件、栽培和管理措施等的特殊性，使得根结线虫发病程度远 重于大田。据估计，中国因线虫病害对蔬菜危害的损失已达到30亿以上。

目前防治根结线虫病害的方法有农业防治、物理防治、化学防治、选育抗性品种 和生物防治，但都存在一定的弊端。由于人们普遍追求产量和利润，因此农业防治如 水旱轮作的方法很难实施。物理防治如种子消毒和土壤消毒虽有一定效果但不够彻底， 且有些物理消毒成本太高，不易推广。化学防治是目前生产上应用较多的方法，但长 期使用会造成根结线虫抗药性增强，且杀线剂多高毒高残留，对人类的生命安全有潜 在的威胁。抗线虫基因多来自野生或半野生种属而且常与不良的农艺性状连锁，选育 工作比较困难。且一个地区连续种植一个抗病品种之后，抗性会逐渐消失。目前生物 防治研究较多的是生防菌，并且筛选到很多防治根结线虫效果好的菌株，但生防菌的 效果不稳定，不易在土壤中定植，这给生防菌的推广使用带来挑战。

根结线虫的生活史：卵在卵囊中孵化成一龄幼虫，然后进行一次蜕变成二龄幼虫。 二龄幼虫侵入寄主根系，逐渐发育为三龄幼虫、四龄幼虫，最终发育为成虫。因此能 否抑制卵孵化成幼虫和毒杀二龄幼虫以防止其侵入寄主根系成为评估某些防治方法是 否有效的指标。

农作物秸秆自然界中数量巨大且具有多种用途的可再生有机质资源。它是农作物 的主要副产品。玉米在我国种植面积广，产生大量的玉米秸秆，但秸秆利用价值不高， 大量作物秸秆废弃物产生后往往被集中焚烧，造成严重的空气污染，同时又带来安全 隐患。虽然生产上推广秸秆还田，但纤维素不能有效分解并融入土壤中，秸秆难以吸 收利用。而简单埋入土里的大量秸秆，如果短时间内无法被利用，反而滋生大量病虫， 对农业生产造成严重危害。

发明内容

基于此，随着生活质量的提高，人们越来越青睐绿色无污染的蔬菜。因此，寻找 一种高效环保、操作简便、成本低廉的防治根结线虫的新方法，是很有必要的。

本发明公开一种农业废弃物提取液的制备方法，以及获得的提取液对根结线虫二 龄幼虫的毒杀作用效果和抑制卵的孵化效果。提高秸秆的利用效率，改善农村环境， 并提供一种防治根结线虫的新材料和新方法。具体方法如下：

步骤A:堆肥化处理:田间收集废弃的玉米秸秆并将其粉碎，置于空塑料桶中， 一边加入粉碎的玉米秸秆，一边加水搅拌均匀，使玉米秸秆充分湿润，再将桶内的玉 米秸秆压紧，并充满整个塑料桶；

步骤B:加双层盖密封，常温下进行厌氧发酵，期间未进行氧分和水分的补充；

步骤C:提取液的制备，包括以下几个步骤：

步骤a：取腐熟的玉米秸秆堆肥于塑料桶中，之后加入水，充分搅拌均匀，使堆 肥完全浸没于水中，然后加双层盖密封，室温下进行提取；

步骤b：提取后将密封盖打开，再次搅拌均匀后，通过纱布过滤即得到玉米秸秆 堆肥的提取液，将获得提取液置于冰箱中保存备用，并以此作为原液进行试验。

优选的，所述步骤a中，提取的时间为7天。

优选的，所述步骤b中，所述纱布采用四层。

优选的，所述步骤b中，保存备用的温度为4℃。

本发明的一个目的是提供一种新的用于防治植物根结线虫病的方法，用于解决目 前防治蔬菜根结线虫病的化学杀线剂所带来的环境污染、食品不安全等一系列问题。 本发明的另一目的是解决生产后大量农业废弃物秸秆的处理问题。

本发明还提供一种采用玉米秸秆堆肥提取液为原液进行对二龄幼虫毒杀效果的测 定方法，包括以下几个步骤：

步骤A:取所制备的玉米秸秆提取液原液加入青霉素瓶中，然后加入无菌水，最后 加入根结线虫二龄幼虫的悬浮液，使每个小瓶含120-180条的二龄幼虫和3ml的液体， 即得到2倍稀释液；

步骤B:每个处理设四个重复，以无菌水作对照；将不同处理放置于25±0.2℃恒 温培养箱中，并于24h、48h和72h后分别取不同处理的线虫悬浮液镜检，统计死亡数， 计算死亡率和校正死亡率；公式为：死亡率(％)＝死亡线虫数/处理线虫数×100，校 正死亡率(％)＝(处理死亡率-对照死亡率)/(1﹣对照死亡率)×100。

本发明还提供一种采用玉米秸秆堆肥提取液为原液进行对根结线虫卵的孵化的测 定方法，包括以下几个步骤：

步骤A:取玉米秸秆堆肥提取液加入24孔板中，然后加入无菌水，最后加入卵悬浮 液，使每孔含40-60的卵，即得到稀释液；

步骤B:每个处理设四个重复，以无菌水作对照；用封口胶封好，并记录处理当天每孔 总卵数和已孵化的二龄幼虫数，置于25±0.2℃恒温箱中，记录孵化的二龄幼虫数，计 算孵化率，公式为：孵化率(％)＝(孵化二龄幼虫数﹣初始二龄幼虫数)/卵的初始量 ×100。

本发明提供一种采用玉米秸秆堆肥提取液为原液进行盆栽实验方法，包括以下几 个步骤：

步骤A:采用病土接种法接种，将带有线虫的土壤进行混匀处理，然后装入的塑料花盆 中；移栽前淋灌5倍提取液200±50ml，将健康长势一致的番茄苗移栽，每个处理4 个重复，每盆3株；

步骤B:移栽后每7天浇一次提取液，每盆200±50ml，共三次；

步骤C:施提取液前用贝曼漏斗法调查初始虫口密度，调查土壤线虫虫口密度；计算各 处理的虫口减退率和虫口防效,公式为：虫口减退率＝(处理前虫口数﹣处理后虫口数) /处理前虫口数×100，虫口防效＝(处理后虫口减退率±对照虫口减退率)/(100±对 照虫口减退率)×100。

本发明不但解决了生产后大量农业废弃物秸秆的处理问题，而且还提供一种新的 用于防治植物根结线虫病的方法，用于解决目前防治蔬菜根结线虫病的化学杀线剂所 带来的环境污染、食品不安全等一系列问题。

具体实施方式

下面对本发明的较优的实施例作进一步的详细说明：

实施例1

步骤(1)：田间收集废弃的玉米秸秆并将其粉碎，取30kg(高43cm，直径32cm) 的空塑料桶，一边加入粉碎的玉米秸秆，一边加水搅拌均匀，使玉米秸秆充分湿润， 达到用手紧握有少量水分渗出的状态，最后将桶内的玉米秸秆压紧，并充满整个塑料 桶；此时共装入2kg玉米秸秆和6kg水。

步骤(2)：加双层盖密封，常温下进行厌氧发酵，期间未进行氧分和水分的补充， 5个月后获得发酵产物。

步骤(3)：提取液的制备

步骤a：取腐熟的玉米秸秆堆肥0.5kg，置于空塑料桶中，之后加入1kg的水， 充分搅拌均匀，使堆肥完全浸没于水中，然后加双层盖密封，室温下进行提取。

步骤b：提取7天后将密封盖打开，再次搅拌均匀后，通过四层纱布过滤即得到 玉米秸秆堆肥的提取液，将获得提取液置于4℃冰箱中保存备用，并以此作为原液进行 试验。

效果测定：

步骤(1)：以实施例1获得的玉米秸秆堆肥提取液为原液进行对二龄幼虫毒杀效 果的测定，具体方法为：取玉米秸秆提取液原液1.5ml加入青霉素小瓶中，然后加入 1.2ml的无菌水，最后加入0.3ml的根结线虫二龄幼虫的悬浮液，使每个小瓶含150 条左右的二龄幼虫和3ml的液体，即得到2倍稀释液。每个处理设四个重复，以无菌 水作对照。将不同处理放置于25℃恒温培养箱中，并于24h、48h和72h后分别取1ml 不同处理的线虫悬浮液镜检，统计死亡数，计算死亡率和校正死亡率。

死亡率(％)＝死亡线虫数/处理线虫数×100

校正死亡率(％)＝(处理死亡率-对照死亡率)/(1﹣对照死亡率)×100

统计结果如表1所示：

表1：玉米秸秆2倍稀释液对番茄根结线虫二龄幼虫的抑制作用

注：J2表示根结线虫二龄幼虫

由表1可以看出将玉米堆肥提取液稀释2倍后在24h二龄幼虫的校正死亡率达到 68.71％，48h和72h根结线虫二龄幼虫的校正死亡率分别为71.03％和82.27％，说明该 提取液对二龄幼虫有较好的毒杀作用。

(2)以获得的玉米秸秆堆肥提取液为原液进行对根结线虫卵的孵化进行测定，具 体方法为：取玉米秸秆堆肥提取液1ml加入24孔板中，然后加入0.9ml的无菌水，最 后加入0.1ml的卵悬浮液，使每孔含50粒左右的卵和2ml的液体，即得到2倍稀释液。 每个处理设四个重复，以无菌水作对照。用封口胶封好，并记录处理当天每孔总卵数 和已孵化的二龄幼虫数，置于25℃恒温箱中，第7天记录孵化的二龄幼虫数，计算孵 化率。

孵化率(％)＝(孵化二龄幼虫数﹣初始二龄幼虫数)/卵的初始量×100

结果如表2

表2：玉米秸秆2倍稀释液对番茄根结线虫卵的抑制作用

由表2可以看出7天后无菌水处理的卵的孵化率为31.11％。而2倍稀释条件下的 玉米秸秆堆肥提取液的孵化率仅为4.05％，说明其能较好的抑制卵孵化。

实施例2

步骤(1)：田间收集废弃的玉米秸秆并将其粉碎，取30kg(高43cm，直径32cm) 的空塑料桶，一边加入粉碎的玉米秸秆，一边加水搅拌均匀，使玉米秸秆充分湿润， 达到用手紧握有少量水分渗出的状态，最后将桶内的玉米秸秆压紧，并充满整个塑料 桶；此时共装入2kg玉米秸秆和6kg水。

步骤(2)：加双层盖密封，常温下进行厌氧发酵，期间未进行氧分和水分的补充， 5个月后获得发酵产物。

步骤(3)提取液的制备：取腐熟的玉米秸秆堆肥1kg，置于空塑料桶中，之后加 入5kg的水，充分搅拌均匀，使堆肥完全浸没于水中，然后加双层盖密封，室温下进 行提取。提取7天后将密封盖打开，再次搅拌均匀后，过滤即获得玉米秸秆堆肥5倍 提取液。

盆栽试验

采用病土接种法接种，将带有线虫的土壤进行混匀处理，然后装入高27cm，直径 36cm的塑料花盆中。移栽前淋灌5倍提取液200ml，空白对照淋灌等量的清水。一周 后将健康长势一致的番茄苗移栽，每个处理4个重复，每盆3株。常规管理，浇水， 适时喷药，防止其它病虫干扰。移栽后每7天浇一次提取液，每盆200ml，共三次，空 白对照淋灌等量的清水。施提取液前用贝曼漏斗法调查初始虫口密度，35天和70天后 分别调查土壤线虫虫口密度。计算各处理的虫口减退率和虫口防效。

虫口减退率＝(处理前虫口数﹣处理后虫口数)/处理前虫口数×100

虫口防效＝(处理后虫口减退率±对照虫口减退率)/(100±对照虫口减退率)× 100

表3玉米秸秆5倍提取液对番茄盆栽的防治效果

由表3可以看出玉米秸秆堆肥5倍提取液在35d和70d的虫口防效分别为81.74％ 和74.72％，能很好地抑制根结线虫的数量。

以获得的堆肥提取液为原液分别进行对二龄幼虫的毒杀试验和对卵的抑制作用试 验。试验发现2倍稀释条件下的玉米秸秆提取液在24h、48h和72h的对根结线虫二龄 幼虫的校正死亡率分别为68.71％、71.03％、82.27％；7天后的孵化率为4.05％，而对照 的孵化率为31.11％。盆栽35d和70d的虫口防效分别为81.74％和74.72％。由此可以看 出，玉米秸秆提取液对根结线虫二龄幼虫和卵都有较好的效果。

以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定 本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说， 在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本 发明的保护范围。