轮虫标本的短期固定保存方法和长期固定保存方法

摘要

本发明公开了一种轮虫标本的短期固定保存方法和长期固定保存方法，短期固定保存方法包括：(1)将轮虫的活体样品置于水中进行热处理；(2)将热处理后的轮虫取出，然后进行保存；长期固定保存方法包括：(1)将轮虫的活体样品置于水中进行热处理，然后冷却；(2)将甲醛加入至所述轮虫样品中以对冷却后的轮虫标本进行保存。通过这两种方法制备的轮虫标本体貌变化小，便于测量体长体宽和鉴别种类。

说明书

技术领域

本发明涉及轮虫的保存，具体地，涉及一种被甲不发达、常规方法固定 后易收缩变形的轮虫标本及其短期固定保存方法和长期固定保存方法。

背景技术

轮虫是一类微小的多细胞动物，体长一般在50μm～2000μm之间，具有 种类繁多、食性多样和繁殖速率快的特点，广泛分布于自然界的各类水体中， 是浮游生物的重要组成部分。在野外生态学研究中，自然水体中的轮虫群落 的物种丰富度和多样性指数等对水质变化较为敏感，常被用来评价水体富营 养化和受污程度。在室内生态学研究中，某些轮虫(如晶囊轮虫)常以小型 轮虫作为食物，如此同时，这些小型轮虫在捕食压力下形成了反捕食对策， 由于轮虫具备繁殖速率快和世代时间短等特征，轮虫间的捕食与反捕食的对 策为研究物种的种间关系、协同进化和微进化提供了便利。

轮虫样品的野外采集与物种鉴定、轮虫个体形态的度量是研究轮虫群落 和种群生态学的基础和前提。目前，主要以4％的福尔马林溶液或者10％的 乙醇溶液作为固定剂来处理轮虫样品，以达到保存轮虫样品的目的。但对于 一些被甲无或者被甲不发达的轮虫而言，这种方法固定后的个体极易发生形 态变化，它们常出现头冠和(或)足缩入体内、躯干部蜷曲和体长减小等身 体变形的现象，既不利于人们根据其外部形态结构特征鉴别种类，也影响了 有关其外形生物学特征研究结果的准确性。

发明内容

本发明的目的是提供一种被甲不发达、常规方法固定后易收缩变形的轮 虫标本及其短期固定保存方法和长期固定保存方法，通过这两种方法制备的 轮虫标本与轮虫活体相比体貌变化小，便于测量体长、体宽和种类的鉴别。

为了实现上述目的，本发明提供了一种轮虫的短期固定保存方法，该短 期固定保存方法包括：

(1)将轮虫的活体样品置于水中进行热处理；

(2)将热处理后的轮虫样品取出，然后进行保存。

本发明还提供了一种轮虫的长期固定保存方法，该长期固定保存方法包 括：

(1)将轮虫的活体样品置于水中进行热处理，然后冷却；

(2)将甲醛加入至所述轮虫样品中以对冷却后的轮虫标本进行保存。

本发明还提供了一种轮虫标本，该轮虫标本是通过上述方法制备而成 的。

通过上述技术方案，本发明提供了一种轮虫标本及其短期固定保存方法 和长期固定保存方法。其中，短期固定保存方法直接通过热水处理轮虫活体 以达到短期固定保存(阴暗条件下可以保存2-3天，4℃的冰箱环境中可以 保存7天)的目的；长期固定保存方法首先通过热水处理轮虫活体，然后再 用福尔马林稀释溶液浸泡便可达到长期固定保存的效果。在上述两种固定保 存方法中得到的轮虫标本均可以保持轮虫活体的原有体型(轮虫标本与轮虫 活体之间的显著性差异P值均＜0.05)，特别是未发生头冠和/或足等缩入体 内、躯干部蜷曲和体长变短等体貌变形，以便于人们在显微镜下准确测定体 长和体宽，鉴别其种类。

本发明的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。

附图说明

附图是用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与 下面的具体实施方式一起用于解释本发明，但并不构成对本发明的限制。在 附图中：

图1是实施例1中制得的轮虫标本放大40倍的个体形态图；

图2是对比例1中制得的轮虫标本放大40倍的个体形态图；

图3是对比例2中制得的轮虫标本放大40倍的个体形态图；

图4是轮虫活体、实施例1中轮虫标本和对比例1-2中轮虫标本的体长 统计图；

图5是轮虫活体、实施例1中轮虫标本和对比例1-2中轮虫标本的体宽 统计图；

图6是实施例6中制得的轮虫标本放大40倍的个体形态图；

图7是轮虫活体、实施例6中轮虫标本和对比例1-2中轮虫标本的体长 统计图；

图8是轮虫活体、实施例6中轮虫标本和对比例1-2中轮虫标本的体宽 统计图。

具体实施方式

以下对本发明的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描 述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。

本发明提供了一种轮虫的短期固定保存方法，该短期固定保存方法包 括：

(1)将活体轮虫样品置于水中进行热处理；

(2)将热处理后的轮虫样品取出，然后进行保存。

在上述短期固定保存方法中，热处理的温度和时间均可以在宽的范围内 选择，为了使制得的轮虫标本不发生变形，优选地，热处理至少满足以下条 件：热处理的温度为70-90℃，热处理的时间为2min-5min。

同时，保存温度也可以在宽的范围内选择，为了使轮虫标本不发生变形， 优选地，保存至少满足条件：保存温度为1-40℃。

本发明还提供了一种轮虫的长期固定保存方法，该长期固定保存方法包 括：

(1)将轮虫的活体样品置于水中进行热处理，然后冷却；

(2)将甲醛加入至所述轮虫样品中以对冷却后的轮虫标本进行保存。

在上述长期固定保存方法中，热处理的温度和时间可以在宽的范围内选 择，为了使制得的轮虫标本不发生变形且可以长期保存，优选地，热处理至 少满足以下条件：热处理的温度为70-90℃，热处理的时间为2min-5min。

同时，冷却温度和时间可以在宽的范围内选择，为了防止向热处理后的 轮虫中直接加入甲醛时使轮虫发生变形，优选地，冷却至少满足以下条件： 冷却温度为1-25℃，冷却时间为20-40min。

同样地，甲醛的含量可以在宽的范围内选择，为了使轮虫标本可以长期 的保存，优选地，以甲醛与水的总体积为基准，所述甲醛的含量为3-5体积 ％。

当然，甲醛可以是纯甲醛，也可以是甲醛水溶液，并且，甲醛水溶液中 甲醛的浓度也可以在宽的范围内选择，为了使轮虫标本可以长期的保存，优 选地，甲醛通过甲醛水溶液提供，且甲醛水溶液中甲醛的浓度为37-40重量 ％。

同时，保存温度也可以在宽的范围内选择，了使轮虫标本可以长期的保 存，优选地，保存温度为1-40℃

在上述保存方法中，活体轮虫可以在宽的范围内选择，可以是晶囊轮虫 或巨腕轮虫，也可以是聚花轮虫或胶鞘轮虫或疣毛轮虫，为了能够长期保存 和便于测量，优选地，活体轮虫选自晶囊轮虫、巨腕轮虫、聚花轮虫或疣毛 轮虫。

本发明还提供了一种轮虫标本，该轮虫标本是通过上述方法制备而成 的。

以下将通过实施例对本发明进行详细描述。以下实施例中，活体轮虫和 轮虫标本的个体形态通过OlympusBH-2型显微镜和MC-D500U(T2)型电 子目镜(江西凤凰光学公司)显微拍照设备测得，轮虫标本的体长和体宽通 过OlympusBH-2型显微镜和MC-D500U(T2)型电子目镜(江西凤凰光学 公司)显微拍照设备测得，轮虫标本的体长和体宽的显著性差异通过方差分 析法和多重比较法测得。

实施例1

(1)在25℃下，用25号浮游生物网过滤自然水体得到活体晶囊轮虫；

(2)将活体晶囊轮虫置于80℃的热水中热处理3min；

(3)将热处理后的轮虫取出，置于25℃的阴暗处保存得到轮虫标本。

实施例2

按照实施例1的方法进行，所不同的是在步骤(3)中，将热处理后的 轮虫置于1℃的冰箱中保存。

实施例3

按照实施例1的方法进行，所不同的是在步骤(3)中，将热处理后的 轮虫置于40℃的阴暗环境中保存。

实施例4

按照实施例1的方法进行，所不同的是在步骤(2)中，热处理的温度 改为70℃，热处理的时间改为5min。

实施例5

按照实施例1的方法进行，所不同的是在步骤(2)中，热处理的温度 改为90℃，热处理的时间改为2min。

对比例1

(1)在25℃下，用25号浮游生物网过滤自然水体得到活体晶囊轮虫；

(2)将活体晶囊轮虫置于4体积％的甲醛溶液中浸泡并置于25℃的阴 暗处保存。

对比例2

(1)在25℃下，用25号浮游生物网过滤自然水体得到活体晶囊轮虫；

(2)将活体晶囊轮虫置于10体积％的乙醇溶液中浸泡并置于25℃的阴 暗处保存。

检测例1

通过OlympusBH-2型显微镜和MC-D500U(T2)型电子目镜(江西凤 凰光学公司)显微拍照设备测得检测实施例1、对比例1和2中晶囊轮虫标 本的个体形态(见图1-3)，并统计晶囊轮虫标本的体长和体宽(见图4-5)， 然后根据体长和体宽计算相应的收缩率(见表1)和显著性差异。

相对于图2和图3，由图1可知实施例1中制得的轮虫标本可以保持轮 虫活体的原有体型，特别是未发生头冠未缩入体内、躯干部蜷曲和体长变短 等体貌变形。

由图4和图5可知，相对于轮虫活体而言，实施例1中制得的轮虫标本 的体长和体宽均未发生显著性变化(轮虫标本与轮虫活体之间的显著性差异 P值均＜0.05)，而对比例1和2制得的轮虫标本体长和体宽均发生了显著性 变化。在此基础上，由表1可知，相对于轮虫活体而言，实施例1中制得的 轮虫标本的收缩率仅为2.7％，而对比例1制得的轮虫标本体的收缩率为 73.8％，对比例2制得的轮虫标本体的收缩率为22.6％，从而进一步说明了 本发明提供的短期保存方法制得的虫标本体能够保持轮虫活体的原有体型。

通过同样的方法进行检测，得知实施例2-5中制得轮虫标本的个体形态、 体长、体宽、显著性差异和收缩率均与实施例1制得轮虫标本的个体形态、 体长、体宽、显著性差异和收缩率保持一致。

另外，通过显微装置观察，实施例1、3、4和5中的轮虫标本能够保存 3天不变形，而实施例2中的轮虫标本能够保存7天不变。

表1

实施例1 对比例1 对比例2 轮虫总数/个 73 84 62 收缩状的轮虫数/个 2 62 14 收缩率(％) 2.7 73.8 22.6

实施例6

(1)在25℃下，用25号浮游生物网过滤自然水体得到活体晶囊轮虫；

(2)将活活体晶囊轮虫置于80℃的热水中热处理3min；

(3)将热处理后的轮虫样品冷却30min至20℃；

(4)将甲醛浓度为38重量％的甲醛水溶液加入至冷却后的轮虫样品与 水的混合物中以使得甲醛的浓度稀释至4体积％，然后在25℃的阴暗处保存。

实施例7

按照实施例1的方法进行，所不同的是，在步骤(2)中，冷却温度改 为1℃，冷却时间改为40min。

实施例8

按照实施例1的方法进行，所不同的是，在步骤(2)中，冷却温度改 为25℃，冷却时间改为20min。

实施例9

按照实施例1的方法进行，所不同的是，在步骤(1)中，热处理的温 度改为70℃，热处理的时间改为5min。

实施例10

按照实施例1的方法进行，所不同的是，在步骤(1)中，热处理的温 度改为90℃，热处理的时间改为2min。

实施例11

按照实施例1的方法进行，所不同的是，在步骤(3)中，改为在1℃的 冰箱中保存。

实施例12

按照实施例1的方法进行，所不同的是，在步骤(3)中，改为在40℃ 的阴暗处保存。

检测例2

通过OlympusBH-2型显微镜和MC-D500U(T2)型电子目镜(江西凤 凰光学公司)显微拍照设备测得检测实施例6中晶囊轮虫标本的个体形态(见 图6)，并统计晶囊轮虫标本的体长和体宽(见图7-8)，然后根据体长和体 宽计算相应的收缩率(见表2)和显著性差异。

相对于图2和图3，由图6可知实施例6中制得的轮虫标本可以保持轮 虫活体的原有体型，特别是未发生头冠等缩入体内、躯干部蜷曲和体长变短 等体貌变形。

由图7和图8可知，相对于轮虫活体而言，实施例6中制得的轮虫标本 的体长和体宽均未发生显著性变化(轮虫标本与轮虫活体之间的显著性差异 P值均＜0.05)。在此基础上，由表2可知，相对于轮虫活体而言，实施例6 中制得的轮虫标本的收缩率仅为2.9％而对比例1制得的轮虫标本体的收缩 率为73.6％，对比例2制得的轮虫标本体的收缩率为22.6％，从而进一步说 明了本发明提供的长期保存方法制得的虫标本体也能够保持轮虫活体的原 有体型。

通过同样的方法进行检测，得知实施例7-12中制得轮虫标本的个体形 态、体长、体宽、显著性差异和收缩率均与实施例6制得轮虫标本的个体形 态、体长、体宽、显著性差异和收缩率保持一致。

表2

实施例6 对比例1 对比例2 轮虫总数/个 204 84 62 收缩状的轮虫数/个 6 62 14 收缩率(％) 2.9 73.8 22.6

检测例3

将实施例6制得的轮虫标本置于25℃的阴暗处30天后，通过MC-D500U (T2)型电子目镜(江西凤凰光学公司)显微拍照设备观察轮虫标本的个体 形态，结果与图6基本保持一致，进而说明本发明提供的长期保存方法能够 保证轮虫标本长期保存。

以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实 施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方 案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。

另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特 征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必 要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。

此外，本发明的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其 不违背本发明的思想，其同样应当视为本发明所公开的内容。