一种用气相色谱仪检测薄荷素油滴丸中薄荷脑含量的方法

摘要

本发明属于药物质量测定方法技术领域，具体为一种用气相色谱仪检测薄荷素油滴丸中薄荷脑含量的方法，包括制备薄荷脑对照品溶液、制备供试品溶液、吸取薄荷脑对照品溶液，注入气相色谱仪，测定峰面积，绘制标准曲线，得到标准曲线回归方程；再吸取供试品溶液，注入气相色谱仪测定，记录色谱图，用外标法计算薄荷脑的含量；或用步骤（3）中的标准曲线回归方程计算出薄荷脑的含量；其中气相色谱仪中以聚乙二醇20000为固定相的毛细管柱；分流比10-20：1；柱温初始温度50-115℃，保持4-5分钟，以每分钟1.5-4℃的速率升温至200℃，保持2-3分钟；进样口温度230℃；检测器温度230℃；载气流量1-2ml/min。

说明书

技术领域

本发明属于药物质量测定方法技术领域，具体为一种用气相色谱仪检测薄荷素油滴丸中薄荷脑含量的方法。

背景技术

薄荷素油滴丸中主要成分为薄荷素油，薄荷素油主要成份为薄荷脑(menthol)，因此含量测定选择以薄荷脑为测定指标。通过对薄荷素油滴丸中薄荷脑含量的测定，能够有效的控制其质量，保证临床用药的有效性和安全性。薄荷脑，是一种白色条状或柱状结晶，为单萜类成分, 沸点较低,易挥发，难溶于水，易溶于乙醇、酯等，制成水溶型制剂存在一定的困难。

检测薄荷素油滴丸中薄荷脑含量，常用检测方法是使用内标法对其含量进行测定，操作过程较复杂，并且还需要使用内标物，成本高。

现在有人运用气相色谱仪来进行原料成份的检测与分析，气相色谱仪是一种多组份混合物的分离、分析工具，它是以气体为流动相，采用冲洗法的柱色谱技术。当多组份的分析物质进入到色谱柱时，由于各组分在色谱柱中的气相和固定液液相间的分配系数不同，因此各组份在色谱柱的运行速度也就不同，经过一定的柱长后，顺序离开色谱柱进入检测器，经检测后转换为电信号送至数据处理工作站，从而完成了对被测物质的定性定量分析。

但采用气相色谱法建立含量测定方法，标准操作步骤不仅仅是仪器的开机、关机等简单的确操作步骤。不同原料种类具有不同的关键测定参数，不同的关键测定参数会得到不同的检测结果。

目前还没有关于用气相色谱仪检测薄荷素油滴丸中薄荷脑含量的相关报道。因此，是否可以用气相色谱仪检测薄荷素油滴丸中薄荷脑含量？如何在测定过程中选择适合薄荷脑含量的测定参数？并且如何使选取目标峰的分离度、对称性、理论塔板数均能都达到药典要求的条件？等等。这些问题目前则是未知，需要去探索。

发明内容

为了解决以上技术问题，本发明提供一种用气相色谱仪检测薄荷素油滴丸中薄荷脑含量的方法，此方法操作简单，重复性高，稳定性好，检测成本低。

解决以上技术问题的一种用气相色谱仪检测薄荷素油滴丸中薄荷脑含量的方法，其特征在于：包括以下步骤：

（1）制备薄荷脑对照品溶液：制备薄荷脑对照品溶液：取薄荷脑对照品，称定，加乙醇制成；具体为取薄荷脑对照品，精密称定，加无水乙醇制成每1ml含0.2-0.52mg薄荷脑的溶液，即得。

（2）制备供试品溶液：取供试品，称定置量瓶中，加水和乙醇，过滤即得；

具体为取供试品，精密称定，置量瓶中，加水，超声处理使溶散，加入无水乙醇，超声处理4-5分钟，放冷，加无水乙醇至所需刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

（3）吸取不同体积的A、B、C、D和E薄荷脑对照品溶液，注入气相色谱仪，测定峰面积，以进样量为横坐标，以峰面积值为纵坐标，进行线性回归计算，绘制标准曲线，得到标准曲线回归方程，Y=nX+4e-13，X为进样量，Y为峰面积，n为斜率，4E-13为4*10^-13的科学计数；

（4）吸取供试品溶液，注入气相色谱仪，测定，记录色谱图，用外标法计算薄荷脑的含量；或根据步骤（3）中的标准曲线回归方程计算出薄荷脑的含量；

其中，本发明的优化方案中，所述气相色谱仪中以聚乙二醇20000为固定相的毛细管柱；分流进样，分流比10-20：1；柱温为程序升温，初始温度50-115℃，保持4-5分钟，以每分钟1.5-4℃的速率升温至200℃，保持2-3分钟；进样口温度230℃；检测器温度230℃；载气流量1-2ml/min。

还有优化方案中，所述超声处理中超声功率200W，频率40kHz。

所述毛细管柱柱长为30m，内径为0.53mm，膜厚度为1μm。

所述分流比为10：1，分流比为10:1的色谱峰峰形最为对称，分离度最好，塔板数最高。

所述载气流量2ml/min的色谱峰峰形最为对称，分离度最好。

所述柱温为程序升温：初始温度80-115℃，保持4-5分钟，以每分钟3-4℃的速率升温至200℃，保持3分钟；进样口温度230℃。

进一步优化方案中，所述柱温为程序升温：初始温度115℃，保持5分钟，以每分钟4℃的速率升温至200℃，保持3分钟；进样口温度230℃。

所述检测方法中按薄荷脑峰计算，理论板塔数不低于50000。

本发明的检测过程中每次吸取供试品溶液量为1μ1。

为了简化操作流程，本发明中采用外标法对薄荷素油滴丸进行含量测定，通过对薄荷素油滴丸中薄荷脑含量的测定，有效的控制其质量，保证临床用药的有效性和安全性。

薄荷脑为单萜类成分, 沸点较低,采用气相色谱法建立含量测定方法。其中柱温、载气流速、分流比为关键参数。柱温，载气流速不同出峰时间、目标峰的对称性、分离度、理论塔板数不同；分流比不同，进入仪器的样品量不同，分流比大，进入仪器的样品量大，分流比小，进入仪器的样品量小。

气相色谱仪要求进行仪器的样品各成分均具有挥发性，在选择溶剂时优先选择具有挥发性，毒性小的溶剂，经过多种溶剂的对比，最终选择无水乙醇作为提取溶剂。

本发明中的检测方法的理论板数为157833、分离度位1.52、重复性为1%和拖尾因子为1.03，均达到《中国药典》2010年版一部附录Ⅵ D  高效液相色谱法中的规定。

附图说明

图1为本发明中实施例5的胆舒滴丸标准曲线图

图2-1，2-2，2-3为本发明中专属性考察色谱图

图中R是相关系数，X为进样量，Y为峰面积，n为斜率，4E-13为4*10^-13的科学计数

具体实施方式

以下通过实例对本发明作进一步的说明，其中：

所用实验仪器为Agilent 78090B气相色谱仪；色谱柱：HP-INNOWAX毛细管柱（30m*0.53mm*1μm）；万分之一天平（赛多利斯 BS110S）、KQ－250B型超声清洗器（昆山超声电子有限公司）。

所用试剂及试药：水为超纯水，无水乙醇为分析纯。

薄荷脑为中国药品生物制品检定所110728-200506；

胆舒滴丸：四川新绿色药业科技发展股份有限公司，批号为1312001，312002，1312003，140501，140502，140503，150401，150402，150403。

实施例1

一种用气相色谱仪检测薄荷素油滴丸中薄荷脑含量的方法，包括以下步骤：

（1）制备对照品溶液：取薄荷脑对照品，精密称定，加无水乙醇制成每1ml含0.2mg的溶液，即得。

（2）制备供试品溶液：取本品5丸，精密称定，置50ml量瓶中，加水4ml，超声处理使溶散，加入无水乙醇30ml，超声处理（功率200W，频率40kHz）5分钟，放冷，加无水乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

 胆舒滴丸的基质为聚乙二醇6000，在水或乙醇中易溶，薄荷素油与乙醇、氯仿或乙醚能任意混合，同时在测定过程当中大量进水样对毛细管柱损伤比较大，因此确定本发明中胆舒滴丸图谱供试品溶液的制备方法。

（3）分别精密吸取薄荷脑对照品溶液（0.52mg/ml）0.2μl 、0.5μl、0.8μl、1μl、1.5μl，注入气相色谱仪，测定峰面积，以进样量为横坐标，以峰面积值为纵坐标进行线性回归计算，绘制标准曲线，得到标准曲线回归方程，Y=nX+4e-13，X（μg）为进样量，Y为峰面积，n为斜率，4E-13为4*10^-13的科学计数；

气相色谱仪中以聚乙二醇20000为固定相的毛细管柱(柱长为30m，内径为0.53mm，膜厚度为1μm)；柱温为程序升温：初始温度50℃，保持5分钟，以每分钟1.5℃的速率升温至200℃，保持3分钟；进样口温度230℃；检测器温度230℃；分流进样，分流比10：1；载气流量1.5ml/min；理论板数按薄荷脑峰计算应不低于50 000。

（4）精密吸取供试品溶液各1μ1，注入气相色谱仪，测定，记录色谱图，用外标法计算薄荷脑的含量；或根据步骤（3）中的标准曲线回归方程计算出薄荷脑的含量。

实施例2

一种用气相色谱仪检测薄荷素油滴丸中薄荷脑含量的方法，其它内容如实施例1，其中：

   制备对照品溶液：取薄荷脑对照品，精密称定，加无水乙醇制成每1ml含0.52mg的溶液，即得。

气相色谱仪中以聚乙二醇20000为固定相的毛细管柱(柱长为30m，内径为0.53mm，膜厚度为1μm)；柱温为程序升温：初始温度60℃，保持4分钟，以每分钟3℃的速率升温至200℃，保持3分钟；进样口温度230℃；检测器温度230℃；分流进样，分流比20：1；载气流量2ml/min；理论板数按薄荷脑峰计算应不低于50000。

实施例3

一种用气相色谱仪检测薄荷素油滴丸中薄荷脑含量的方法，其它内容如实施例1，其中：

气相色谱仪中以聚乙二醇20000为固定相的毛细管柱(柱长为30m，内径为0.53mm，膜厚度为1μm)；柱温为程序升温：初始温度80℃，保持4分钟，以每分钟3.5℃的速率升温至200℃，保持2分钟；进样口温度230℃；检测器温度230℃；分流进样，分流比15：1；载气流量1ml/min；理论板数按薄荷脑峰计算应不低于50000。

实施例4

一种用气相色谱仪检测薄荷素油滴丸中薄荷脑含量的方法，其它内容如实施例1，其中气相色谱仪中以聚乙二醇20000为固定相的毛细管柱(柱长为30m，内径为0.53mm，膜厚度为1μm)；柱温为程序升温：初始温度100℃，保持5分钟，以每分钟2.5℃的速率升温至200℃，保持3分钟；进样口温度230℃；检测器温度230℃；分流进样，分流比12：1；载气流量2ml/min；理论板数按薄荷脑峰计算应不低于50000。

实施例5

一种用气相色谱仪检测薄荷素油滴丸中薄荷脑含量的方法，其它内容如实施例1，

制备对照品溶液：取薄荷脑对照品，精密称定，加无水乙醇制成每1ml含0.52mg的溶液，即得。

其中气相色谱仪中以聚乙二醇20000为固定相的毛细管柱(柱长为30m，内径为0.53mm，膜厚度为1μm)；柱温为程序升温：初始温度115℃，保持5分钟，以每分钟4℃的速率升温至200℃，保持3分钟；进样口温度230℃；检测器温度230℃；分流进样，分流比10：1；载气流量2ml/min；理论板数按薄荷脑峰计算应不低于50000。

标准曲线回归方程为：Y=1.827.3X+4E-13,图中R是相关系数，用来度量线性相关性的程度，越接近1越说明线性相关性越好。

结果如表1和图1：

表1  薄荷脑标准曲线结果表

结果表明：薄荷脑进样量在0.1~0.75μg范围内，进样量与峰面积值呈良好的线性关系。

试验一：不同柱温及升温程序对含量测定的影响

以实施例5为实验组，设立对照组1、2和3，具体如下：

对照组1：其它内容如实施例5，柱温初始温度80℃，保持5分钟，以每分钟10℃的速率升温至115℃，保持5分钟，以每分钟4℃的速率升温至200℃，保持3分钟；进样口温度230℃；检测器温度230℃；

对照组2：其它内容如实施例5，柱温初始温度50℃，保持5分钟，以每分钟1.5℃的速率升温至135℃，再以每分钟30℃的速率升温至200℃；进样口温度230℃；检测器温度230℃。

对照组3：其它内容如实施例5，柱温初始温度60℃，保持4分钟，以每分钟1.5℃的速率升温至130℃，再以每分钟20℃的速率升温至200℃；进样口温度250℃；检测器温度250℃。

    结果如表2：

   表2  色谱条件选择结果

结果显示：实验组中的薄荷脑峰分离度、对称因子、塔板数均达到中国药典要求，且运行时间相对较短，所以本发明中的柱温效果好。

试验二：溶液稳定性实验

操作步骤如实施例5，取已制备好的供试品溶液，分别于0、2、6、12、18、24小时进样，记录薄荷脑峰面积，计算RSD，结果见表3。

表3  稳定性试验结果

以上结果表明∶在本实验条件下，样品供试液在24小时内稳定性良好。

试验三：本发明中的检测方法的专属性考察

按实施例5中的方法制备供试品溶液及缺薄荷素油阴性溶液（不含薄荷素油），结果阴性溶液色谱图对待测峰的测定无干扰，表明该方法专属性好。见图2-1，2-2，2-3。

试验四：进样精密度实验

操作步骤如实施例5，精密吸取薄荷脑对照品溶液（薄荷脑0.52mg/ml）1μl，连续进样6次，记录峰面积，计算RSD，结果见表4。

表4进样精密度试验结果表

结果表明本发明中的检测方法进样精密度良好。

试验五：中间精密度实验

操作步骤如实施例5，取同一批供试品（批号：1312001），分别由A、B两人，在不同时间，各处理三份样品，用同一台设备按含量测定方法测定本品薄荷脑的含量，计算RSD。结果见表5。

薄荷脑中间精密度结果表

结果表明：本发明中的检测方法中间精密度良好。

试验六：重复性试验

操作步骤如实施例5，取本品（批号：1312001）粉末5丸，共6份，置具塞锥形瓶中，按照拟定的方法制备和测定，结果见表6。

表6 薄荷脑重复性试验结果

结果表明∶本发明中的检测重复性良好。

试验七：加样回收率实验

操作步骤如实施例5，取已知含量的样品（批号：1312001，薄荷脑的含量1.95mg/丸，）3丸，共6份，精密称定，分别精密加入薄荷脑对照品溶液（0.52mg/ml）10ml，按拟定的方法制备并测定，计算回收率，结果见表7。计算公式如

下：

表7  薄荷脑回收率试验结果

结果表明∶本发明中的检测方法准确度良好。

本发明中的检测方法，在现有仪器条件下，简化操作流程，用外标法对薄荷脑进行测定，结果外表法在最终与用传统方法的内标法检测在检查结果上无差异。本发明中用气相色谱仪检测薄荷脑含量，为全自动进样，进样体积重现性很好，不用内标法也具有很好的分析精密度，且操作简单，成本低，重复性，稳定性高。