舞茸提取物在制备抗抑郁症药物中的用途

摘要

本发明“舞茸提取物在制备抗抑郁症药物中的用途”属于制药领域，其特征在于，将舞茸提取物生物药效活性成分用于制备抗抑郁症的药剂，该药物可用于治疗或预防抑郁症，具有显著的抗抑郁效果、不仅效果强、而且未见常规抗抑郁药物的毒、副作用，如诱发癫痫、共济失调等缺点，因此，可作为优良的抗抑郁症的候选药物。

说明书

技术领域

本发明涉及制药领域，特别涉及舞茸提取物在抗抑郁症中的用途。

背景技术

抑郁症已成为现代社会的常见病和多发病，其发病率还在不断升高。病症以情绪低落、兴趣减退、思维迟缓、以及言语与动作减少为特征，重症抑郁有厌世或自杀的念头。这类疾病对患者及其家属造成的痛苦，以及对社会造成的损失，是许多其他疾病所无法比拟的。根据世界卫生组织(WHO)发表的报告，情感障碍目前已成为世界第四大疾患，全球的抑郁症患者已达3.4亿人。目前抑郁症在中国发病率大约为4％。中国至少有2600万人患有抑郁症，抑郁症在中国造成的总经济负担达到622亿元人民币。美国估计有1700万人患有抑郁症,300万人患躁郁症，每年治疗情感障碍的费用高达440亿美元(冠心病为430亿美元)。在过去对情感障碍研究的40年中，特别引人注目的是其发病率和死亡率高，据报道自杀率高达10％以上，中国每年有25万人自杀。

目前主要使用的药物是五羟色胺再摄取抑制剂等,使用这类药物起效慢,作用谱窄，副作用大，停药后易复发。目前，抗抑郁治疗领域急需起效快，副作用小，更为有效的治疗药物。

目前的抗抑郁药物及其弱点：当前的抗抑郁药大致可分为三类：即单胺氧化酶抑制剂、三环类抗抑郁剂及杂环类抗抑郁剂。现有的抗抑郁药物远远不能满足病人的需求，其不足之处大主要集中表现为起效慢、抗抑郁谱窄、副作用大、易复发等。开发起效快、抗抑郁谱广泛、毒副作用较小的新药，在这个领域是非常迫切的需要，将带来巨大的经济回报。

本发明所述的抗抑郁症药的制备涉及到舞茸提取物，这种成分是来自于一种真菌舞茸(maitake)，又名灰树花：别名又称贝叶多孔菌、云蕈、千佛菌、栗子蘑、莲花菇。拉丁学名为Griflola frondosa(Dick.Fr.)S.F.Gray)。灰树花在分类地位上隶属于属于真菌界、担子菌亚门(Basidiomycotina)、层菌纲(Hgmenomycetes)、无隔担子菌亚纲(Holobasidiomyceidae)、非褶菌目(Aphyllophrales)、多孔菌科(Polyporaceae)、树花菌属(Grigola),是一种大型食、药两用真菌，原产于北美，在日本东北部也有发现。灰树花(舞茸)作为一个真菌物种，最早由意大利人发现，因此，舞茸是以意大利人命名的。

目前舞茸的提取物已制备成药物，包括舞茸地复仙，英文名为maitake d-fraction(或舞茸D-fraction)，是从舞茸中提取的蛋白多糖体，这种成分可有效提高人体免疫力，有效控制肿瘤细胞生长，防止肿瘤的转移和复发，减轻化疗副作用。在多个国家已为治疗癌症通过了临床试验。

舞茸中含有以β-(1-6)结合为主链β-(1-3)结合为侧链的葡聚糖，和以β-(1-3)结合为主链β-(1-6)结合为侧链的活性葡聚糖，实验证明这些活性葡聚糖可通过活化免疫功能而显著抑制肿瘤的生长。舞茸提取物包括舞茸多糖,舞茸多糖的结构如图1所示。

日本学者最早进行舞茸提取物的研究。Ohno等从舞茸子实体中提取得到一种具有抗肿瘤活性的多糖Grifolan(GRN)，证实,其结构为每隔3个糖基的C₆上具有一个链的β-1,3-葡聚糖,分子量约为500000，如图1所示。接着Ohno研究了这种多糖的构象，发现其在固体状态下表现为两种构象，即天然型和螺旋型。提取得到的多糖为天然型，而剧烈条件下为螺旋型，两种构象的多糖均具有显著的抗肿瘤活性。

我国也己开展对舞茸提取物的研究，从舞茸子实体和菌丝体中分别提取得到子实体多糖F-D和菌丝体多搪M-D；F-D和M-D都是含蛋白质的蛋白聚糖，均存在日-1,3和p-1,6糖昔键，F-D由岩藻糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖组成，M-D由鼠李糖、岩藻糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖组成。

我国就是最早利用真菌治病的国家，真菌具有很高的药用价值，野生的舞茸(灰树花)呈淡灰色，在我国北方长在柿树、板栗树、榆树的根部周围，所以在我国北方又称为栗蘑，我国科学家从舞茸中也曾发现可以高效抗癌的物质舞茸提取物，研究表明其抗癌活性比化疗药物丝裂霉素还高35％，是灵芝的16.5倍！

美国国家癌症研究院早在1992年证实，舞茸的萃取物有抵抗艾滋病病毒的功效。日本的难波宏彰博士除在实验中发现舞茸对乳腺癌、肺癌、肝癌也有疗效；还可改善肿瘤的化学疗法带来的种种不良反应，如缺乏食欲、呕吐、恶心、头发脱落以及白细胞减少等等；此外，研究还证实舞茸的提取物—舞茸地复仙有助于控制血糖、抑制脂肪细胞堆积、降低血压、增强免疫力的功效。1986年，日本神户药科大学难波宏彰教授在日本药学杂志上发表了关于舞茸提取物—D(Maitake-D)的研究报告。报告指出：舞茸多糖有A、B、C、D四种，它们都有抗癌作用，但D组分的效果最好。舞茸多糖的单独应用抑瘤率为86.6％(1.0mg/kg体重)，和国际上通用的化疗药物丝裂霉素的药效对比实验则舞茸提取物单独给药，抑瘤率80％，丝裂霉素单独给药，抑瘤率45％，而二者合并给药，抑瘤率98％。该方法，在美国、加拿大日本、已经作为临床抗癌的首选方法，被称为“第四种癌症治疗法”。

经美国、日本对多糖的免疫特性研究。包括众多临床实验研究发现，舞茸提取物可有效激活人体免疫系统，活化免疫细胞，如NK细胞，抗毒T细胞，吞噬细胞等，活化吞噬细胞、自然杀手细胞等免疫细胞，诱导白细胞介素，干扰素-γ，肿瘤坏死因子-α等细胞因子的分泌。与免疫治疗药物(干扰2)有协同作用，从而可以达到抑制肿瘤细胞生长，诱导癌细胞凋亡的功效。

今天，在世界上已经有美国、日本、加拿大和中国等二十多个国家的3000多名肿瘤医生应用并验证了舞茸提取物的临床疗效，舞茸提取物也被欧美等西方国家作为肿瘤治疗的一线临床用药。但是经过广泛的文献查询，应用舞茸提取物治疗抑郁症者尚未见有文献报道。

发明内容

本发明提供舞茸提取物作为抗抑郁症药物及用它制备而得的抗抑郁症药物。这种药物具有抗抑郁效果显著、副作用小等优点，技术方案如下：

舞茸提取物在制备抗抑郁症药物中的用途，其特征在于，所述抗抑郁症药物的药效活性成分为舞茸提取物。

舞茸提取物在制备抗抑郁症药物中的用途，其特征在于，所述抗抑郁症药物的药效活性成分包括舞茸提取物。

所述抗抑郁症药物是指预防或治疗抑郁症的药物。

所述抗抑郁症药物的剂型为片剂、胶囊、溶液、悬浮液、注射液或滴注液。

一种抗抑郁症的药物，其特征在于：其药效活性成分包括舞茸提取物。

所述抗抑郁症是指预防或治疗抑郁症。

其剂型为片剂、胶囊、溶液、悬浮液、注射液或滴注液。

所述药物，还包括制药学上可接受的辅助成分。

所述药物，还包括有与舞茸提取物或其衍生物配合使用时对治疗抑郁症有积极作用的药物成分，或使舞茸提取物稳定性提高的成分。

一种抗抑郁症的方法，其特征在于：向受试者按时提供治疗有效剂量的药剂，所述药剂的药效成分包括舞茸提取物。

上述方法，所述按时提供治疗有效剂量的药剂指每天0.5mg～1000mg舞茸提取物/kg体重，给药方式为口服、滴注或注射；给药对象为哺乳动物，所述哺乳动物包括人。

所述给药剂量为每天注射舞茸提取物低剂量(5mg/kg)、中剂量(8mg/kg)和舞茸提取物高剂量(12.5mg/kg)，本发明发明人发现舞茸提取物对哺乳动物具有显著的抗抑郁效果。经实验研究发现，在哺乳动物小鼠实验中，舞茸提取物具有明显的且较强的抗抑郁症效果，且抗抑郁效果可以持续产生。抑郁症患者普遍主诉有炎性疼痛症状，如头痛，胃痛，背痛等等。舞茸提取物在抗抑郁的同时，还能改善病人的炎性症状。许多肿瘤疾病患者经化疗、放疗治疗后，并发抑郁症，舞茸提取物可同时起到抗肿瘤和抗抑郁的作用。因此舞茸提取物能够综合性地改善抑郁症病人的各种症状，包括精神抑郁症状、疼痛、炎症等等。它的抗抑郁效果在动物模型中显著、快速、并且持久。目前使用的抗抑郁药物见效很慢，一般需要几个星期。亟待发展快速见效的抗抑郁药物。

本发明所采用的舞茸提取物，可商购获得，包括舞茸地复仙(maitake d-fraction)，平均分子量是100万，它的结构图如图1所示，是从真菌多孔菌科，树花菌属，灰树花(Griflolafrondosa)中分离出的多糖化合物中的一种，能长期被人类服用，它的毒副作用至今未见报道，在试验过程未见常规抗抑郁药物的镇定、诱发癫痫、共济失调等缺点。具有成为快速的、高效的、无毒副作用的抗抑郁新药的潜力，具有很强的工业实用性和巨大的商业价值。

本发明采用的药物筛选试验为：小鼠强迫游泳和悬尾试验，是常用的两种动物行为绝望抑郁症模型试验，能较好保证筛选结果的可靠性。

小鼠强迫游泳试验已用于很多抗抑郁药物的筛选试验。而且大多数有临床治疗作用的抗抑郁药也被证实在强迫游泳试验中能有效地减少不动时间。所谓不动是指“动物在水中停止挣扎，或呈漂浮状态，仅露出鼻孔保持呼吸，仅有细小的肢体运动，以保持头部浮在水面”。在测试前给拟筛选的药物。由于动物在强迫状态下游泳使动物不能逃出恶劣环境，导致动物行为绝望。此种模型方法简便，可靠，已广泛用于抗抑郁药剂的筛选和评价。

小鼠悬尾试验是小鼠在悬尾状态下不再挣扎，呈现特有的安静不动状态，抗抑郁药可明显缩短不动状态的持续时间。测试时，将小鼠尾部用夹子固定、倒悬。勿使小鼠尾部扭曲折叠。计录不动时间。不动指标为：“动物除呼吸外所有肢体均不动”。悬尾试验对各种抗抑郁药均很敏感，而且避免了游泳试验中温度和动物运动功能障碍的干扰,因而在用一些鼠种筛选抗抑郁药物时,可以有效地验证和补充强迫游泳实验的结果。

本发明提供的舞茸提取物作为抗抑郁症药物的用途，不限于如图1所示结构式的舞茸提取物在制备抗抑郁症中的用途，将舞茸提取物制备成舞茸提取物的盐、酯或其与糖所成的甙是本领域技术人员所具备的常规实验技能，舞茸提取物的盐、酯或其与糖所成的甙与舞茸提取物具有相似的药效作用是本领域技术人员可以合理预料的，因此本发明还请求保护舞茸提取物的盐、酯或其与糖所成的甙在制备抗抑郁症药物中的用途。

本发明提供的舞茸提取物制备抗抑郁症药物的用途，所制备而得的抗抑郁症药物，可以基于制药领域的技术人员的常识而加入不影响药物药效的辅助成分，如载体、赋型剂等。由于该药物通过口服、注射、皮下包埋等方式均可见效，因此，剂型可以是多样的。

本发明提供的抗抑郁症药物还可以是混合有其它与舞茸提取物或其衍生物配合使用对治疗抑郁症有积极作用的药物成分。

由于舞茸提取物稳定性不强，本领域技术人员可以加入稳定剂，只要不影响舞茸提取物药效的发挥，所得的抗抑郁症药物均在本发明要求保护的范围内。

本发明所提供的抗抑郁症药物，所述抗抑郁症包括预防和治疗两个阶段。

在专利法允许的范围内，本发明还要求保护舞茸提取物在抗抑郁症治疗中的用途，在动物模型试验中稳定达到抗抑郁治疗效果的剂量范围是每天注射舞茸提取物中剂量(8mg/kg)和舞茸提取物高剂量(12.5mg/kg)。

由于经典抑郁动物模型中的动物不动时间的缩短可能是由于药物的中枢兴奋性的作用所引起，为了鉴别舞茸提取物是否会增加动物活动性的作用，本发明还同时进行了小鼠开野实验(Open field test)，以检验小鼠的自主活动性，避免中枢兴奋药的干扰。经验证结果表明，各剂量舞茸提取物对小鼠自主活动均无显著影响，故可排除其假阳性结果的可能性，证明药物抗抑郁作用是可靠的。

附图说明

图1.舞茸地复仙的化学结构式；

图2.小鼠悬尾实验处理三天后60分钟结果：

竖坐标：悬尾实验小鼠不动时间(％对照),

横坐标：从左到有依次为：舞茸提取物对照(0.9％生理盐水)，舞茸提取物低(5mg/kg)，舞茸提取物中(8mg/kg)、舞茸提取物高(12.5mg/kg)，丙咪嗪对照组(15mg/kg)；

图3.小鼠强迫游泳实验处理三天后60分钟结果，

竖坐标：强迫游泳实验小鼠不动时间(％对照)；

横坐标：从左到有依次为：舞茸提取物对照(0.9％生理盐水)，舞茸提取物低(5mg/kg)，舞茸提取物中(8mg/kg)、舞茸提取物高(12.5mg/kg)，丙咪嗪对照组(15mg/kg)；

图4.开野实验总距离结果－处理四天1小时后，

竖坐标：总距离(米)；

横坐标：从左到有依次为：舞茸提取物对照(0.9％生理盐水)，舞茸提取物低(5mg/kg)，舞茸提取物中(8mg/kg)、舞茸提取物高(12.5mg/kg)，丙咪嗪对照组(15mg/kg)；

图5.开野实验中间距离结果－处理四天1小时后，

竖坐标：中间距离(米)；

横坐标：从左到有依次为：舞茸提取物对照(0.9％生理盐水)，舞茸提取物低(5mg/kg)，舞茸提取物中(8mg/kg)、舞茸提取物高(12.5mg/kg)，丙咪嗪对照组(15mg/kg)。

具体实施方案

以下实施方案仅用于详细说明和证明本发明所发现的舞茸提取物在抗抑郁症中的新用途，而不用来限制本发明。

实施例

Ⅰ试验材料与方法

一、实验动物详细信息

1.动物品种品系：小鼠，CD-1(ICR)

2.等级：SPF级

3.动物规格：购买初始周龄和体重(5周龄：20-22g)

正式实验周龄和体重(7周龄：30-39g)

4.性别：雄性

5.质量检测单位：北京维通利华实验动物技术有限公司

6.用途：科学研究

7.出售单位：北京维通利华实验动物技术有限公司

8.许可证号：SCXK(京)2012—0001

二、实验动物饲养条件

1.实验动物2014年7月15日从北京首都机场发航空早航班(8：10起飞)，下午13：30到昆明长水机场货流中心。包车从云南大学到昆明长水机场货流中心接取实验动物到云南大学生物馆东楼301室动物饲养房，让小鼠在原装盒子里休息2小时后分笼饲养。

2.每笼4只小鼠饲养，饮水和取食自由。

3.小鼠饮用蒸馏水(实验室设备自制)，小鼠食用的饲料来自于昆明医科大学动物实验部。

4.每天12小时的Light/dark循环，早上9：00开灯，晚上21：00关灯。

5.室温23℃饲养。

6.每隔两天给小鼠更换垫料，让小鼠有一个舒适的居住环境。

7.小鼠在新的饲养环境中适应一周后开始正式实验。

三、舞茸精滴剂详细信息

舞茸精滴剂：购买于中国总代理杭州正树保健食品有限公司，具体参数如下

配料：植物甘油、水、舞茸提取物(30％舞茸D-fraction)；

生产日期：2013年5月31日；

保质期：三年；

厂址：美国新泽西；

生产企业：美国麦克健康食品公司。

四、醇法沉淀舞茸提取物：

1.用阿拉伯数字顺次标记10个1.5毫升的离心管，然后空管称重并作记录；

2.每个1.5毫升离心管，取200ul舞茸精滴剂，加600ul 95％乙醇，而后在室温放置2小时后，可以清楚的观察到1.5毫升离心管底部有沉淀发生。

3.用高速冷冻离心机，12000转、4℃离心1小时，可以清楚观察到离心管底部有沉淀析出，从离心机中取出1.5毫升离心管后将上清液移至另一管中。

4.把1.5毫升离心管和底部剩下的沉淀在37度恒温箱放置一小时。

5.从恒温箱中取出1.5毫升离心管在室温风干，称重。用减重法求得舞茸提取物量。

6.每个1.5毫升离心管中约有10mg的舞茸提取物。

方法引用：以3倍体积95％的乙醇进行醇沉，用丙酮、乙醚分别洗涤，用真空冷冻干燥机冻干得到舞茸提取物样品。

五、小鼠注射用的不同浓度的舞茸提取物所需浓度配置方法：

1.减重法求得10个1.5毫升的离心管中共有108.4mg舞茸提取物，然后在每个1.5毫升的离心管中加入200ul的0.9％的生理盐水(从医院购买的用于注射用的0.9％的生理盐水)来溶解离心管底部风干的沉淀，然后用200ul移液枪依次从10个1.5毫升的离心管中把彻底溶解后的溶液转移到一个无菌的7ml的离心管中，再加入2ml的0.9％的生理盐水稀释(共加入了4ml的0.9％的生理盐水)。最终舞茸提取物溶液的浓度为108.4mg/4ml＝27.1mg/ml。

2.舞茸提取物不同剂量稀释倍数如下：

按上述稀释倍数把舞茸提取物分装在1.5毫升的离心管中，用锡箔纸包住整个1.5毫升的离心管，再用封口膜封好管口后放置于-80℃冰箱冻存，每天注射前按需拿出来解冻，然后按计算好的稀释比例加入0.9％的生理盐水稀释成所需要的注射剂量，震荡混匀后即可注射使用。

4.丙咪嗪所需剂量稀释倍数如下：

先称取粉末状的丙咪嗪30mg放置于无菌的7ml的离心管中，然后加入2ml的0.9％的生理盐水溶解(最终丙咪嗪溶液的浓度为30mg/2ml＝15mg/ml)，震荡混匀后按稀释倍数分装在1.5毫升的离心管中，用锡箔纸包住整个1.5毫升的离心管，在用封口膜封好管口后放置于-80℃冰箱冻存，每天注射前按需取出来解冻，然后按计算好的稀释比例加入0.9％的生理盐水稀释成所需要的注射剂量，震荡混匀后即可注射使用。

五、行为学实验操作：

1.让小鼠在我们新的饲养环境条件中适应一周后开始实验(我所购买的这批小鼠当时是5周龄的，所以在我们新的饲养环境中饲养了2周后开始正式实验)；

2.从2014年7月30日开始实验，上午10点之前先配好药品和准备好实验所需要的器材，每天都在上午10：00时开始小鼠称重和注射；

3.实验安排

4.强迫游泳条件：室温：23℃、水温：24℃、湿度：62—67％、每做两组换一次水。

5.实验结果：

舞茸提取物不同剂量处理CD-1小鼠后的行为学实验结果：

1)舞茸提取物(8个重复)处理三天后60分钟后悬尾实验结果，如图2所示。

2)舞茸提取物(8个重复)处理三天后60分钟后强迫游泳试验结果，如图3所示。

实验结果分析：

从舞茸提取物(8个重复)处理三天后60分钟后悬尾实验结果的柱状图(图2)可以看出舞茸提取物低剂量(5mg/kg)较0.9％的生理盐水相比显示出显著性的抗抑郁样的效果(P＝0.0267，P<0.05)、舞茸提取物中剂量(8mg/kg)较0.9％的生理盐水相比显示出显著性的抗抑郁样的效果(P＝0.0355，P<0.05)以及舞茸提取物高剂量(12.5mg/kg)较0.9％的生理盐水相比显示出显著性的抗抑郁样的效果(P＝0.0246，P<0.05)。(如图2所示)

从舞茸提取物(8个重复)处理三天后60分钟后强迫游泳实验结果的柱状图(图3)可以看出舞茸提取物中剂量(8mg/kg)较0.9％的生理盐水相比显示出极显著性的抗抑郁样的效果(P＝0.0065，P<0.01)；舞茸提取物高剂量(12.5mg/kg)较0.9％的生理盐水相比也显示出显著性的抗抑郁样的效果(P＝0.0115，P<0.05)。(如上图3所示)

3)舞茸提取物(8个重复)处理四天后60分钟后旷野实验总框距离结果，如图4所示。

4)舞茸提取物(8个重复)处理四天后60分钟后旷野实验中间框距离结果，如图5所示。

实验结果分析：

从舞茸提取物(8个重复)处理四天后60分钟后旷野实验总框距离结果的柱状图(图4)可以看出舞茸提取物低剂量(5mg/kg)、舞茸提取物中剂量(8mg/kg)、舞茸提取物高剂量(12.5mg/kg)较0.9％的生理盐水相比没有显著性差(P>0.05)，该结果表明了不是由于药物(舞茸提取物)的中枢兴奋性作用引起小鼠不动时间的缩短。(如上图4所示)

从舞茸提取物(8个重复)处理四天后60分钟后旷野实验中间距离结果的柱状图(图5)可以看出舞茸提取物低剂量(5mg/kg)、舞茸提取物中剂量(8mg/kg)、舞茸提取物高剂量(12.5mg/kg)较0.9％的生理盐水相比没有显著性差(P>0.05)，该结果进一步表明了不是由于药物(舞茸提取物)的中枢兴奋性作用引起小鼠不动时间的缩短。(如上图5所示)

本发明的另一些实施例中，采用直接提取的舞茸提取物：舞茸子实体的细粉，用纯净热水提取，料水比为1:30。最佳工艺条件为：pH6.5～7.0，在98℃浸提3小时后浓缩而得。小鼠实验中，获得了与图2-4所示的几乎完全一样的结果。