大鲵粘液在制备软组织填充材料中的应用

摘要

本发明公开了大鲵粘液在制备软组织填充材料中的应用，利用大鲵粘液的粘合性能，能够在生理盐水中形成凝胶状，并且具有可降解和生物相容性好的优点，可作为软组织填充的植入材料，用于填充软组织损伤或病变造成的空腔和缺损部位，并且该填充剂来源于大鲵粘液，为天然组分，安全性好，具有较好的应用前景。

说明书

技术领域

本发明属于生物材料领域，具体涉及大鲵粘液在制备软组织填充材料中的应用。

背景技术

大鲵俗称娃娃鱼，隶属于两栖纲有尾目隐腮鲵科，包括2属3种，即大鲵属和隐腮鲵属， 其中大鲵属又可分为日本大鲵和中国大鲵，是世界现存最大、最珍贵的两栖动物，已被联合 国列入濒危物种保护名录，是国家二类保护水生野生动物。大鲵肉质细嫩、味道鲜美，含有 优质蛋白质、丰富的氨基酸和微量元素，营养价值极高，被誉为“水中人参”和“软黄金”。 当大鲵皮肤受到外界刺激时，可分泌大量白色乳状的、具有特殊气味的粘液，经研究发现分 泌的粘液中主要成分为水(83-86％)、蛋白质(12％)，含有少量的多糖(0.48％)，具有抗菌、 抗氧化和抗肿瘤等功效，目前主要应用于化妆品领域。由于大鲵粘液的产量非常充足，可重 复大量采集，其利用率低。因此，亟待对大鲵粘液的附加产品进一步开发，提高大鲵的综合 价值。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的之一在于提供了大鲵粘液在制备软组织填充材料中的应用，开 发了大鲵粘液的新用途，并为软组织填充材料提供了新的材料。

1、大鲵粘液在制备软组织填充材料中的应用。

优选的，所述软组织为肌肉、脂肪、血管或内脏。

优选的，所述内脏为肠。

优选的，所述软组织填充材料的制备方法为将大鲵粘液冷冻成固体，然后冷冻真空干燥去 除水分，再将干燥的大鲵粘液粉碎，灭菌，即得；

或将大鲵粘液于温度不高于37℃的条件下真空干燥，再将干燥的大鲵粘液粉碎，灭菌， 即得。

优选的，所述冷冻的条件是在温度不高于-20℃下冷冻。

优选的，所述冷冻的条件是在温度为-80℃～-20℃下冷冻。

优选的，所述冷冻真空干燥的条件是在温度小于-50℃、真空度小于20Pa条件下冷冻干 燥至少48小时。

优选的，所述粉碎为超微粉碎至粒径为300～1000目。

优选的，所述灭菌为2～5×10⁴Gy剂量的60Coγ射线照射灭菌。

本发明的有益效果在于：本发明公开了大鲵粘液在制备软组织填充材料中的应用，该填 充材料来源于大鲵粘液，成分天然，安全性好，能够用作软组织填充材料，如肌肉、脂肪、 血管或内脏填充或堵孔，并且生物相容性好、无炎症反应，可降解、植入后无需取出，在临 床上具有广泛的应用前景。

附图说明

为了使本发明的目的、技术方案和有益效果更加清楚，本发明提供如下附图：

图1为检测埋植部位的炎症反应结果(A：表面观察；B：埋植部位切开)。

具体实施方式

下面将结合附图，对本发明的优选实施例进行详细的描述。实施例中未注明具体条件的 实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。

大鲵粘液的采集采用皮肤直接刮檫法：具体为将鲜活大鲵用清水清洗体表，去除蜕皮等 杂质，然后置于干燥盒子中，用扁平物刮取大鲵体表，直至大鲵体表分泌大量乳白色粘液， 刮取搜集到培养皿中，使培养皿中粘液厚度约1cm。大鲵粘液的采集也可以采用现有的电刺 激法或乙醚麻醉法采集，具体方法见公开号为104223121A和104206502A的中国专利。

实施例1

利用大鲵粘液制备软组织填充材料的方法，包括如下步骤：将收集大鲵粘液的培养皿置 -80℃过夜使其冷冻成固体，然后用真空冷冻干燥机在真空度为19pa、温度为-50℃下冷冻真 空干燥48小时；再将冻干的大鲵粘液捣碎后置低温超微粉碎机粉碎至300目，最后以5×10⁴Gy 剂量60Coγ射线照射灭菌，得软组织填充材料，无菌包装备用。其中低温粉碎的温度低于37℃ 即可，加入液氮超微粉碎效果最佳。

实施例2

利用大鲵粘液制备软组织填充材料的方法，包括如下步骤：将收集大鲵粘液的培养皿置 -20℃过夜使其冷冻成固体，然后用真空冷冻干燥机在真空度为10pa、温度为-70℃下冷冻真 空干燥56小时；再将冻干的大鲵粘液捣碎后置低温超微粉碎机粉碎至500目，最后以2×10⁴Gy 剂量60Coγ射线照射灭菌，得软组织填充材料，无菌包装备用。其中低温粉碎的温度低于37℃ 即可，加入液氮超微粉碎效果最佳。

实施例3

利用大鲵粘液制备软组织填充材料的方法，包括如下步骤：将收集大鲵粘液的培养皿直 接置真空干燥箱中，在37℃真空下干燥48h，再将干燥的大鲵粘液捣碎后置低温超微粉碎机 粉碎至1000目，最后以2×10⁴Gy剂量60Coγ射线照射灭菌，得软组织填充材料，无菌包装 备用。其中低温粉碎的温度低于37℃即可，加入液氮超微粉碎效果最佳。

实施例4

利用大鲵粘液制备软组织填充材料的方法，包括如下步骤：将收集大鲵粘液的培养皿直 接置真空干燥箱中，在20℃真空下干燥48h，再将干燥的大鲵粘液捣碎后置低温超微粉碎机 粉碎至800目，最后以2×10⁴Gy剂量60Coγ射线照射灭菌，得软组织填充材料，无菌包装备 用。其中低温粉碎的温度低于37℃即可，加入液氮超微粉碎效果最佳。

实施例5

对大鲵粘液制备的软组织填充材料进行体内降解和生物相容性试验，具体如下：取软组 织填充材料50mg置于生理50ml生理盐水中，搅拌使其成凝胶状，然后取KM小鼠6只，将 凝胶状液体置于切口内皮下，并远离切口，最后将切口缝合。7天后取样检测埋植部位的炎 症反应，结果如图1所示。结果显示，粘合剂在埋植部位无炎症反应。再检测埋植部位的降 解情况，结果如表1所示。

表1、埋植7天降解率

小鼠编号 粘液埋植量(g) 粘液剩余量(g) 降解率 1 0.2017 0.0646 68％ 2 0.1864 0.0869 53.4％ 3 0.1965 0.0933 52.5％ 4 0.2144 0.1067 50.23％ 5 0.2005 0.0880 56.11％ 6 0.1950 0.0910 53.33％

结果显示，大鲵粘液制成的粘合剂在7天的降解率在50.23％-68％之间。

实施例6

大鲵粘液制成软组织填充材料的生理性管道填充试验，具体为：剪取大鼠小肠一段，长 8公分，排出小肠内容物，一端结扎，另一端插入注射针头后结扎，使注射针头与注射器连 通。然后在肠壁上用另一注射针头扎一小孔，并将该段有小孔的小肠浸入装满水的烧杯中， 用注射器推入空气，使小肠自然充盈，此时小孔处由于漏气有气泡产生。确定小肠有小孔后， 将小肠从水中取出，并在小孔部位撒上少许实施例1～4制备的软组织填充材料，并涂抹均匀。 1分钟后，再将该小肠浸入装满水的烧杯中，用注射器推入空气，使小肠自然充盈。结果显 示，此时没有气泡从小肠中漏出。结果表明，本发明实施例1～4制备的软组织填充材料可用 于生理性管道的填塞补漏，能够用于包括肠瘘、血管洞、气管洞等填充。

最后说明的是，以上优选实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管通过上述 优选实施例已经对本发明进行了详细的描述，但本领域技术人员应当理解，可以在形式上和 细节上对其作出各种各样的改变，而不偏离本发明权利要求书所限定的范围。