朴莫伐明在制备防治缺血性脑血管病药物中的应用

摘要

本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及朴莫伐明在制备防治缺血性脑血管病药物中的应用。本研究发现，Sonic hedgehog激动剂朴莫伐明具有防治缺血性脑血管病的药理作用。本发明经小鼠局灶性脑缺血模型的药理试验，结果表明，朴莫伐明能显著降低小鼠脑缺血再灌注引起的脑损伤面积，并显著改善小鼠缺血后的神经行为。朴莫伐明分子量小，易于通透血脑屏障，脑保护作用强。因此，本发明提供的朴莫伐明具有在制备防治缺血性脑血管病药物中良好的应用前景。

说明书

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及朴莫伐明（purmorphamine）在制备防治缺血性脑血管病药物中的应用。

背景技术

缺血性脑血管疾病（缺血性脑卒中），是由于脑部供血障碍引起脑组织相应区域缺血、低氧，造成脑组织破坏所出现一系列生化代谢异常，生理功能丧失、病理形态变化改变等的疾病，是一种在脑组织上受到多层次、多方面损害的疾病。包括：短暂性脑缺血发作、脑栓塞、脑血栓形成、分水岭脑梗死、腔隙性脑梗死等，是临床最常见的脑血管疾病之一。随着我国社会人口老龄化的趋势，缺血性脑血管病导致的各类问题亦日趋严重。缺血性脑血管病是世界上发病率、死亡率、致残率最高的疾病之一，极大威胁着人类、特别是老年人的健康和生活质量，已经成为全球社会健康资源的巨大负担。脑缺血的临床治疗目标是恢复供血、供氧，抑制缺血部位的炎症反应及维持神经元的结构和功能的完整性。临床上，一般用溶栓治疗来解除栓塞，以建立缺血区域血流再灌注。对于缺血引起的脑组织损伤尚缺少有效治疗药物。因此，寻找新型有效的脑缺血治疗药物是目前研究热点。

朴莫伐明是嘌呤衍生物，Sonic hedgehog（音猬因子，SHH）激动剂，能直接结合并激活Sonic hedgehog信号通路的7次跨膜Smo受体。朴莫伐明可促进人类和小鼠骨髓间充质祖细胞向成骨细胞的分化；可显著增加人纹状体NSC细胞系（STROC05）的神经元分化、减少。迄今为止，尚未见朴莫伐明用于脑血管疾病的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供朴莫伐明的新用途。

本发明提供了朴莫伐明在制备防治缺血性脑血管病药物中的应用。

所述缺血性脑血管病包括脑中风、脑血栓形成、脑栓塞、脑梗塞、短暂性脑缺血发作或腔隙性脑梗塞、脑动脉硬化或者糖尿病脑血管并发症。

所述药物的剂型包括口服剂和注射剂，可以通过常规方法制备成片剂、胶囊剂或注射剂。

所述朴莫伐明的每日有效剂量为0.01-0.2mg/kg体重，该剂量是根据实验中小鼠用量折算至人体用量得到。

本发明的有益效果在于首次发现和证实了朴莫伐明能够有效的防治缺血性脑血管病，其起效迅速（24h内即产生明显效果），可显著改善脑缺血再灌注损伤小鼠的神经行为，同时也能显著的减少脑缺血再灌注损伤小鼠侧脑组织的梗塞面积。

具体实施方式

实施例1

朴莫伐明（purmorphamine，（P-环己基-N-[4-（吗啉）苯基]-2-（1-奈基）-9H-嘌啉）），广东八加一医药有限公司提供，纯度大于99%。

结构式如下：

实施例2朴莫伐明用于治疗缺血性脑血管病的动物实验

小鼠线栓法制作局灶性脑缺血模型的药理实验是验证药物具有防治缺血性脑血管病作用常用的动物实验（Yin XM,Luo Y,Cao G,Bai L,Pei W,Kuharsky DK,Chen J.Bid-mediated mitochondrialpathway is critical to ischemic neuronal apoptosis and focal cerebralischemia.JBiol Chem.2002Nov1;277(44):42074-81.），因此用其验证purmorphamine对实验性动物脑缺血的保护作用。

1、动物

C57/6BL小鼠，雄性，体重20～24g，每组10只/笼群养，共分8组。购于上海斯莱克实验动物有限责任公司，实验动物质量许可证号：SCXK（沪）2007-0005，饲养于清洁级动物房，喂养条件包括标准饲料，自来水，室温保持在（24±2）℃，湿度50-60%，每日光照与黑暗时间各12h。

2、药物

将实验小鼠进行分组：

朴莫伐明低剂量组：给予朴莫伐明0.5mg/kg。

朴莫伐明中剂量组：给予朴莫伐明1.0mg/kg。

朴莫伐明高剂量组：给予朴莫伐明2.0mg/kg。

空白组：给予与药物实验组等量的生理盐水进行假手术。

模型组：给予与药物实验组等量的生理盐水进行脑缺血再灌注手术。

3、实验方法

将小鼠用10%水合氯醛腹腔注射麻醉，颈正中切口，分离、结扎右侧颈总动脉近心端、颈外动脉及其分支动脉。分离右侧颈内动脉，沿颈内动脉向下分离翼颚动脉，根部结扎该分枝。在颈内动脉近端备线、远端放置动脉夹，颈总动脉分叉处切口，插入4-0尼龙线，栓线进入颈内动脉，入颅至大脑前动脉，阻断大脑中动脉所有血流来源。撤掉动脉夹，扎紧备线，外留1cm长线头，缝合皮肤。缺血同时腹腔注射朴莫伐明，缺血2小时后再灌注。假手术组除不插线外，其余步骤同上。

（1）朴莫伐明对小鼠脑缺血再灌注模型行为学评分的影响

取再灌注24h后存活鼠，观察小鼠行为变化，进行行为评分。参考ZeaLonga的评分标准：0分，正常，无神经损伤症状；1分，不能完全伸展对侧前爪；2分，向外侧转圈；3分，向对侧倾倒；4分，不能自发行走，意识丧失。实验结果表明：空白对照组，模型组，药物低剂量组，药物中剂量组，药物高剂量组的行为学评分依次为：0±0；2.9±0.74；1.9±0.83；1.8±0.45；1.7±0.76。行为学评分上显示朴莫伐明可显著改善脑缺血再灌注损伤小鼠的行为学，且有一定的剂量依赖关系。该实验表明朴莫伐明对小鼠脑缺血再灌注损伤引起的脑梗塞有显著保护作用，具体实验数据见表1。

表1朴莫伐明对小鼠脑缺血再灌注后的行为学评分的影响（±SD）

与空白组相比，^##P<0.01；与模型组相比，^*P<0.05,^**P<0.01。

（2）朴莫伐明对小鼠脑缺血再灌注模型脑梗塞面积的影响

取再灌注24h后存活鼠，麻醉后快速断头取鼠大脑。在前连合平面切下厚约2mm冠状脑片，立刻置于2%TTC溶液中，37℃孵育30分钟。梗塞区呈现白色，非梗塞区呈现红色。用求积仪（C63图象分析系统）测出各区面积，并计算梗塞区占整个冠面的百分比(%)。结果表明：模型组的脑梗塞面积（％）为36.2±6.1，低剂量组的脑梗塞面积（％）为24.8±5.7，中剂量组的脑梗塞面积（％）为20.4±6.6，高剂量组的脑梗塞面积（％）为17.2±5.4。各剂量组侧脑组织梗塞面积明显小于模型组，与模型组相比有显著性差异（P<0.01）。即当给予朴莫伐明时，对小鼠脑缺血再灌注损伤引起的脑梗塞有显著保护作用。具体实验数据见表2。

表2朴莫伐明对小鼠脑缺血再灌注后的脑梗塞面积的影响（x±s）

与空白组相比，^##P<0.01；与模型组相比，^**P<0.01。

以上详细描述了本发明的较佳具体实施例。应当理解，本领域的普通技术人员无需创造性劳动就可以根据本发明的构思作出诸多修改和变化。因此，凡本技术领域中技术人员依本发明的构思在现有技术的基础上通过逻辑分析、推理或者有限的实验可以得到的技术方案，皆应在由权利要求书所确定的保护范围内。